Меню Рубрики

Анализ на антитела к гриппу

Острые респираторные инфекции являются наиболее распространенными заболеваниями в современном мире. Ежегодно люди сталкиваются с эпидемиями гриппа, которые поражают до 15% населения. А учитывая высокую изменчивость вирусов, приходится постоянно совершенствовать методы лабораторной диагностики. Поэтому анализы при гриппе представляют собой актуальный вопрос, требующий подробного рассмотрения.

Грипп – это высоко заразное инфекционное заболевание вирусной природы. Он поражает преимущественно верхние отделы респираторного тракта, но могут вовлекаться также бронхи и легкие. Возбудителем выступают вирусы нескольких серотипов: A, B, C. Первый обладает наибольшей изменчивостью, поскольку содержит на своей поверхности 3 вида гемагглютинина (H) и 2 варианта нейраминидазы (N). Это ферменты, которые отвечают за цитопатическое действие возбудителя. На самом деле таких модификаций гораздо больше, просто остальные преимущественно вызывают болезнь у животных. В настоящее время причиной инфекции становятся два вируса гриппа A: H1N1 (калифорнийский) H3N2 (гонконгский).

Вирус передается человеку воздушно-капельным путем и поселяется на эпителии дыхательных путей. Инкубационный период гриппа короткий – от нескольких часов до пары дней. Как правило, болезнь протекает в легкой форме, с момента контакта с заболевшим до выздоровления проходит до 7 суток. Основными симптомами респираторной инфекции становятся:

  • Высокая лихорадка.
  • Сухой кашель.
  • Боли в горле.
  • Заложенность носа.
  • Головные боли.
  • Ломота в теле, мышцах и суставах.
  • Одутловатость и покраснение лица.
  • Инъекция сосудов склеры.

Но у ряда пациентов болезнь протекает в тяжелой форме. В основном это касается детей, беременных и лиц с сопутствующей патологией. У них вероятна сильная интоксикация и осложнения: пневмонии, гломерулонефрит, нейропатии, шок, отек легких и головного мозга. Поэтому крайне важное значение отводится своевременной лабораторной диагностике гриппа.

Безусловно, анализ на грипп необходим тем, у кого после клинического обследования врач предполагает указанную инфекцию. Это могут быть различные ОРВИ с синдромом интоксикации. Схожие черты с гриппом есть у таких инфекций:

  • Аденовирусная.
  • Респираторно-синцитиальная.
  • Риновирусная.
  • Парагрипп.
  • Корь.

В дифференциальной диагностике могут нуждаться также случаи микоплазменной пневмонии, а также других заболеваний с продромальным периодом: брюшной и сыпной тиф, лептоспироз, вирусные гепатиты. Но основная сфера назначения анализов – гриппоподобные состояния. Это позволяет не только выявить возбудителя, но и установить его серотипы.

Анализы на вирус гриппа показаны пациентам, у которых есть соответствующие клинические симптомы.

Перед проведением анализа врач детально оценивает клинические данные и состояние пациента. По результатам осмотра выдается направление в лабораторию (например, Инвитро). Существует несколько видов лабораторных исследований, необходимых при подозрении на грипп. К ним относятся:

  • Общий анализ крови.
  • Экспресс-тесты.
  • Посев на культуру клеток.
  • Серологический анализ.
  • Молекулярно-генетический метод.

Каждое исследование имеет свои особенности, преимущества и недостатки. Но решение о том, какие анализы проводить, принимается врачом. Он также скажет, как следует подготовиться к взятию биоматериала. Пациенту лишь следует выполнять рекомендации специалиста.

Изменения в организме, происходящие при инфицировании вирусом, можно определить по общему (клиническому) анализу крови. Он не позволяет идентифицировать возбудителя, но дает косвенные подсказки о его воздействии на организм и позволяет установить степень тяжести болезни. Исследование проводится натощак. Берется кровь из пальца путем прокалывания стерильным скарификатором и набирания в стеклянный капилляр. Далее подсчитываются форменные элементы (лейко-, эритро- и тромбоциты), содержание гемоглобина, определяется СОЭ и цветной показатель.

Относительно новым и развивающимся направлением диагностики гриппа считаются экспресс-тесты. Они основаны на иммунохроматографическом определении антигенов (вирусных частиц). На тест-полоску нанесены стандартные антитела к вирусам гриппа A и B, меченые специальным красителем. Он становится виден только при наличии в образце антигенов возбудителя, то есть образовании специфических иммунных комплексов.

Сначала необходимо взять биоматериал – мазок слизи из носа. Пациента просят запрокинуть голову назад. Стерильный тупфер вводят в ноздрю и, оборачивая его там, касаются стенок ходов. Это не очень приятно, из-за щекотания в носу могут слезиться глаза. Поэтому у детей чаще используют назальные смывы – физиологический раствор вводят в ноздрю со шприца и отсасывают слизь. Затем материал помещают в специальный флакон с жидкостью-реагентом, взбалтывая его для хорошего перемешивания. Несколько капель наносят на тест-полоску в специальное окошко. Так делается и экспресс-анализ на свиной грипп (калифорнийский).

Материал, полученный от пациента (мазки или смывы), для идентификации вируса засевается на клеточную культуру: слой фибробластов куриного эмбриона (чаще всего), почек обезьян, собак или крупного рогатого скота. Образцы инкубируют в термостатах при температуре человеческого тела. Вирус вызывает цитопатическое действие, проявляющееся в разрушении клеточного слоя. Если такая реакция произошла, то материал переносят на другую среду для определения гемагглютинирующих свойств. Для дальнейшего изучения антигенной структуры и типирования вируса выполняют реакцию с гриппозными диагностикумами.

Средой для культивирования вирусов гриппа выступает клеточная культура. При посеве можно выявить признаки повреждающего действия возбудителя, а дальнейший анализ позволит его идентифицировать.

Наиболее распространено серологическое исследование при гриппе. Оно основано на определении антител к вирусу в организме пациента. Это можно сделать в любой современной лаборатории (Инвитро, Синэво и пр.). Для анализа следует сдавать венозную кровь по общепринятым правилам с 5–7 дня болезни. Затем ее центрифугируют, отделяя форменные элементы от сыворотки. Последнюю используют в различных реакциях:

  • Торможения гемагглютинации (РТГА).
  • Связывания комплемента (РСК).
  • Нейтрализации (РН).
  • Иммуноферментного анализа (ИФА).

Чаще всего приходится анализировать кровь, взятую двукратно с интервалом 7–10 суток. Это позволяет оценить титр антител в динамике. Каждый из методов имеет определенную методику выполнения, но принцип один и тот же: иммуноглобулины сыворотки связываются со стандартными антигенами, образуя комплекс. Последний идентифицируется при помощи других реагентов (красителей, ферментов). Но учитывая образование антител в организме лишь со второй недели болезни, серологический анализ крови при гриппе имеет в основном ретроспективное значение.

С помощью метода полимеразной цепной реакции можно не только выявить вирус гриппа, но и произвести его типирование, т. е. идентификацию. Для этого сначала берут мазок (смывы) из носа. Затем материал смешивают со специальным реагентом, содержащим праймер и ферменты, помещая его в аппарат для амплификации. В нем происходит многократное копирование вирусной РНК и фотохроматографическая детекция. Молекулярно-генетическое исследование позволяет выявить очень малые количества возбудителя и провести дифференциальную диагностику. А благодаря усовершенствованной методике – ПЦР в реальном времени – удается минимизировать сроки выполнения анализа.

Сроки проведения исследований различны – от 10 минут (экспресс-тест) до 48 часов (культуральный метод, ПЦР). Иногда при гриппе анализы требуют дальнейшего подтверждения более специфичными и чувствительными методиками, что приводит к замедлению диагностики. А полученные результаты должны интерпретироваться лишь специалистом.

В первые сутки болезни в крови отмечается лейкоцитоз со сдвигом формулы влево. Увеличивается число палочкоядерных нейтрофилов и юных. Далее уровень лейкоцитов при гриппе заметно снижается, что сохраняется в течение всего периода, вплоть до выздоровления. Отмечается относительный лимфоцитоз, СОЭ остается в пределах нормальных значений. Любая лаборатория может сделать такой анализ, а не только Инвитро.

Наиболее быстрый анализ может дать лишь качественный результат в отношении вирусов A или B. После нанесения материала на тест-системе появляется две полоски: одна контрольная, а другая говорит о выявлении возбудителя. Цвет красителя может отличаться, в зависимости от производителя. Если же выявлена лишь контрольная линия, то тест считается отрицательным. При положительном результате необходимо обязательное дообследование, поэтому пациенту придется еще сдать анализ на свиной (или другой) грипп.

Результат экспресс-теста оценивается уже спустя 10 минут после нанесения в него материала. Как его интерпретировать, указано в инструкции по применению.

Когда после заражения культуры клеток в ней выявляются признаки цитопатического действия, это свидетельствует о наличии вируса в исследуемом материале. Возбудитель гриппа вызывает разрушение биологического слоя. А при пересевании на другую среду наблюдается гемагглютинация – слипание эритроцитов под воздействием ферментов вируса.

Серологическая диагностика производится так называемым методом парных сывороток. Антитела к вирусу, независимо от технологии их идентификации, должны не просто присутствовать у больного гриппом, но и нарастать в динамике. Диагностическим титром считается увеличение уровня иммуноглобулинов в 4 и более раз с интервалом в 7–10 дней.

Результат полимеразной цепной реакции может быть представлен в качественном, полуколичественном или количественном виде. Последний вариант наиболее предпочтителен, поскольку указывает на степень вирусной нагрузки и вполне годится для оценки тяжести состояния пациента. Но и простое указание на выявление в образце биоматериала РНК возбудителя несомненно подтверждает диагноз. Это наиболее точный и чувствительный метод диагностики гриппа.

Каждый пациент хочет, чтобы результаты его исследований были достоверными. Поэтому вопрос о том, где сдать анализ, является очень актуальным. Следует отметить, что качество диагностики зависит от многих моментов: подготовки персонала, наличия оборудования и материалов, соблюдения правил взятия биоматериала, его транспортировки и хранения. В крупных лабораториях с развитой сетью (например, таких, как Инвитро) соблюдены и контролируются все ключевые аспекты. В выборе места, где можно сдать мазок из носа или кровь, однозначно поможет врач с учетом собственного опыта.

Важную роль при гриппе играют лабораторные методы исследования. Для постановки диагноза необходимо выявить сам вирус и определить его вид, в чем помогут различные анализы. Одни из них идентифицируют возбудителя, а другие указывают на косвенные признаки его присутствия. Но что именно сдавать в конкретном случае, подскажет лишь врач.

источник

Лабораторная диагностика, изучающая разные биоматериалы человека, позволяет ответить на многие вопросы. Исследования назначаются во время болезни и после выздоровления. Полученные результаты могут дать ясную картину определенного заболевания. Важно знать, как правильно сдать анализ на грипп. Соблюдение установленных правил поможет избежать получения неверных результатов. Соответственно, вовремя будет получена правильная медицинская помощь.

То, какие анализы сдают при гриппе всегда решает врач. Доктор оценивает состояние пациента, выслушивает его жалобы. Далее, производится осмотр: прослушивание дыхания, оценка состояния зева и температуры. После этого принимается решение о проведение диагностики определенного вида.

При вирусной инфекции вам могут назначать исследование крови. Чаще сдается общий анализ, но могут потребоваться также и другие виды. Заболевшему полагается диагностика состава мочи. Практически никогда не сдают кал при вирусной инфекции, если таковая не сопровождается диареей и расстройством пищеварительной функции. Редко, но все же могут назначаться мазки из зева и носа. Многие пациенты задаются вопросом: можно ли определить патологию путем исследования антител? Рассмотрим каждый вид исследования более подробно.

Грипп характеризуется как инфекционное заболевание, передающиеся по воздуху и через слюну. Заразиться гриппом можно на улице и в целом — где угодно. Не столь опасна сама патология, сколько ее осложнения. Перед началом лечения нужно обязательно определить характер заболевания и узнать, о вирусе или бактерии идет речь. Поможет это сделать анализ крови на грипп. Материал для исследования может браться из пальца или вены. Последний метод практикуется сейчас гораздо чаще.

Общий анализ крови при гриппе следует сдавать натощак. Если забор материала назначен на утренние часы, то нужно отказаться от завтрака. Накануне отдайте предпочтение легкому ужину до 3-4 часа до сна. Несколько суток перед этим стоит придерживаться определенной диеты:

  • исключите жирную пищу;
  • воздержитесь от алкоголя;
  • не употребляйте много сладкого.

Спросите у лечащего врача, каких правила стоит соблюсти еще. Наверняка, специалист порекомендует вам сохранять спокойствие и хорошо выспаться.

Недосып и стрессовые ситуации могут косвенно повлиять на определенные показатели крови.

Можно ли определить грипп по анализу крови? С этим вопросом часто заболевшие обращаются к врачу. Оказывается, можно. Если вы сдадите материал сразу после заражения, то можно увидеть повышение уровня лейкоцитов. У взрослых пациентов они переваливают за 8*10^9 л. Обнаруживается сдвиг лейкоцитарной формулы влево. Анализ крови при гриппе у взрослых показывает большое содержание нейтрофилов: палочкоядерных и юных.

Далеко не каждый человек имеет возможность сдать материал для исследования сразу после заражения. Дело в том, что заболевший еще сам не осознает всей тяжести и опасности патологии. Поэтому за медицинской помощью люди обращаются обычно только со 2-3 суток, когда наступает пик болезни.

Если в первые сутки анализ крови при гриппе у ребенка и взрослого человека показывает выраженный лейкоцитоз, то уже на следующий день картина кардинально меняется. Количество выделяемых лейкоцитов резко снижается, что проявляется лейкопенией. Уровень этого показателя достигает отметки 4*10^9 л. Анализ крови при гриппе показатели имеет примерно следующие:

  • Эритроциты повышены из-за обезвоживания организма, которое вызвано интоксикацией и высокой температурой. Особенно заметен этот факт у детей. Уровень эритроцитов находится на отметке более 5*10^12 л.
  • Гемоглобин, как показывает кровь при гриппе, может оставаться нормальным, повышаться или понижаться. Все зависит от индивидуального течения инфекции. Нормальные значения этого показателя от 110 до 165 г/л. При обезвоживании они более высокие, а анемия, вызванная ОРВИ показывает низкие значения гемоглобина.
  • СОЭ при гриппе у ребенка и взрослого обычно растет. Но также оно может оставаться в пределах нормальных значений, которые находятся в промежутке от 1 до 15 мм/ч.
  • Лимфоциты отвечают за иммунитет, они борются с инфекцией. Совершенно нормально, что общий анализ крови при гриппе показатели этого пункта определяет выше нормы: более 2*109 л.

Большая часть показателей при острой респираторной инфекции остается стандартной: тромбоциты, эозинофилы, гематокрит и другие. Если обнаруживается их смещение в определенную сторону, то можно подозревать осложнение. Тогда врач обязательно обращает внимание на дополнительные признаки болезни.

Анализ мочи при гриппе назначается далеко не всегда. Более важно врачу определить показатели крови. Но раз уж пациент направляется в лабораторию, то пусть уж сдаст и этот материал для исследования. При первых признаках острой вирусной инфекции показатели мочи остаются в пределах нормальны значений. Они могут незначительно меняться на пике заболевания или при бактериальном осложнении.

Важно знать, как собрать мочу для анализ на грипп на дому. Ведь от этого напрямую зависит полученный результат.

Для исследования мочи вам необходимо собрать утреннюю порцию, если другие условия не были заявлены специалистом. Забор материала может осуществляться также днем или вечером. Важно, чтобы мочевой пузырь перед этим не опустошался от 3 до 5 часов. Для сбора урины используйте стерильную посуду. Грязные баночки могут спровоцировать плохой результат. Предварительно проведите туалет половых органов. Женщинам не рекомендуется сдавать мочу во время менструации. Мужчинам следует сутки перед этим воздержаться от половых сношений.

За день до сбора материала для анализа на грипп нужно скорректировать свое питание. Исключите жирную, соленую, перченую пищу. Откажитесь от алкоголя и диуретических чаев. Если вы принимаете мочегонные средства по причине других болезней, то обязательно оповестите врача.

Исследование мочи (анализ на вирус гриппа) обычно показывает стандартные результаты. В полученном бланке вы можете увидеть следующие значения:

  • цвет желтый, прозрачный, специфический нерезкий запах;
  • кислотность находится в диапазоне от 4 до 7 рН;
  • кетоновые тела, билирубин и глюкоза – отсутствуют;
  • белка обычно нет, но в разгар болезни этот показатель может повышаться до 1 грамма;
  • эритроциты не обнаруживаются (повышение этого значения говорит об осложнении, возникшем в почках);
  • лейкоциты в поле зрения до 5 единиц не насторожат врача;
  • цилиндры, соли, бактерии и грибы не обнаруживаются (их присутствие свидетельствует о дополнительной инфекции).

Нельзя рассматривать каждый показатель в отдельности. Необходимо обращать внимание на общую картину.

Взятие мазков на грипп и ОРВИ обычно не осуществляется. Такие исследования проводятся в научных институтах. Они призваны установить тот или иной штамм во время эпидемии. Техника проведения такой диагностики следующая:

  1. мазок на грипп берется из носа заболевшего человека;
  2. полученная слизь обрабатывается специальными красителями и реагентами;
  3. материал подсвечивается и исследуется при помощи микроскопа;
  4. выносится результат, на основании которого подтверждается или опровергается диагноз.

Данное исследование признается достаточно дорогостоящим и трудоемким. При этом его результаты не играют особой роли в выборе тактики лечения. Провести диагностику можно и самостоятельно. Сдать анализ на грипп (мазок) в домашних условиях вам помогут специальные экспресс-тесты. Правдивость результата при это составляет от 40 до 80%. Часто пациенты не соблюдают правила, предусмотренные инструкцией, что приводит к получению недостоверного показателя.

Как определить грипп по анализу крови – вы уже знаете. Зачастую эта патология осложняется бактериальными инфекциями. Наиболее часто пациенты сталкиваются со следующими заболеваниями:

  • бронхит, трахеит, пневмония;
  • синусит, отит, менингит;
  • фарингит, ларингит, круп;
  • миозит, миокардит;
  • пиелонефрит;
  • поражения нервной системы.

Нередко во время вирусной инфекции лабораторное исследование назначается несколько раз. Такой подход дает возможность оценить, улучшается состояние пациента или, напротив, становится хуже. Если анализ крови после гриппа показывает постепенное увеличение лейкоцитов, нейтрофилов, а также скорости оседания эритроцитов, то в организме есть бактериальная инфекция. Нужно направить все силы на ее поиски.

Если анализы при гриппе у ребенка показывают осложнение, то, вероятно, это воспаление нижних отделов дыхательных путей. Внимательно проследите за жалобами маленького пациента. Навязчивый кашель должен вас насторожить. Жалобы на головную и суставную боль могут говорить о развивающемся гайморите или артрите. При появлении слизистых выделений из носа бактериального характера целесообразно сдать посев.

Анализ крови на вирус гриппа может включать в себя определение антител. Это исследование достаточно результативное, но к нему прибегают очень редко. Почему – попробуем разобраться.

Какой анализ крови показывает грипп? Диагностировать это заболевание можно путем определения количества иммуноглобулина М. Данный показатель появляется в организме человека с первого дня заболевания, постепенно растет. Исследовать иммуноглобулины G нет никакого смысла. Они показывают те вирусные инфекции, которые были когда-то давно перенесены человеком. Подобный анализ крови на грипп на дому сделать невозможно. Это исследование производится только в лаборатории. Почему же его практически никогда не назначают? Ведь так просто было бы определить, какой именно штамм поразил пациента.

Чтобы получить достоверный результат диагностики, необходимо сдать кровь на антитела дважды. Перерыв в исследовании составляет от 5 до 10 суток (чаще 7). Если первый материал будет взят в 1-3 день болезни, то повторно отправиться с лабораторию вам нужно на 8-13 день. Обычно к этому времени организм человека восстанавливается самостоятельно или при помощи банальных противовирусных средств. Получается, что исследование было проведено зря, толка от него нет.

Несмотря на доказанную бесполезность исследования, оно обязательно проводится при тяжелых эпидемиях, когда возникает подозрение на птичий, свиной или подобного рода грипп.

Лабораторные исследования на сегодняшний день могут выявить массу отклонений, которые возникают в организме человека при разного рода заболеваниях. Тронное место в анализах на вирус гриппа занимает ОАК. Эта диагностика позволяет быстро и без особого труда поставить верный диагноз. Как показывает статистика, взрослые пациенты гораздо реже появляются в лаборатории для проведения анализа. Дело в том, что многие пытаются вылечить гриппозное состояние самостоятельно. Неправильная терапия, в свою очередь, приводит к осложнению, которое также можно установить путем нехитрых манипуляций.

Детский общий анализ крови при гриппе сдается совместно с исследованием мочи. Несмотря на то, что показатели последнего материала практически не меняются при простуде, общая клиническая картина может дать врачу новые сведения о болезни. Если вам или вашему ребенку назначили сдать кровь, мочу или мазок — нельзя отказываться. Своим отречением от медицинских манипуляций вы лишаете врача возможности назначить вам правильное лечение, которое бы смогло улучшить самочувствие уже через несколько дней.

Читайте также:  Я переболела сифилисом сдала анализы антитела

источник

Грипп, начавшийся в этом сезоне, опасен серьезными осложнениями, поэтому очень важно как можно раньше поставить точный диагноз, чтобы назначить адекватное лечение. И тем более важно отличить грипп от других респираторных инфекций.

В этом сезоне основным эпидемическим штаммом является пандемический вирус гриппа А/H1N1pdm09 «свиного» происхождения.

Также возможно заражение вирусом гриппа B и А/H3N2, а также инфицирование одним из 13 возбудителей ОРВИ, вызывающих гриппоподобные симптомы.

Каждый из вирусов имеет свои особенности, и заболевание требует индивидуального подхода к лечению. Грипп, вызванный вирусом A/H3N2 тяжело переносят дети до 5 лет, пожилые люди, лица с хроническими заболеваниями бронхо-легочной и сердечно-сосудистой системы. «Свиной грипп» тяжело переносят люди среднего возраста, чаще с хроническими заболеваниями сердечно-сосудистой системы, ожирением, сахарным диабетом, бронхиальной астмой и беременные женщины. При эпидемии гриппа 2009 года, вызванной «свиным» штаммом А/H1N1pdm09 летальный исход чаще наблюдался у лиц в возрасте от 30 до 67 лет, причем в 21% случаев в начале заболевания температура не поднималась выше 38оС и около 10% не имели каких-либо хронических заболеваний.

Инфицирование детей до 2х лет респираторно-синцитиальным вирусом, вирусами парагриппа и бокавирусом может привести к тяжелым состояниям, требующим госпитализации — крупу и бронхо-обструктивному синдрому. Респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус, вирусы гриппа и аденовирусы могут вызвать бронхиты и пневмонию преимущественно у детей до 5 лет.

Каким возбудителем инфицирован человек, может сказать только лабораторная диагностика, по клинической картине, к сожалению, это сделать невозможно.

Лабораторный анализ на определение гриппа и других возбудителей респираторной инфекции даёт возможность назначить адекватное лечение, точно определить прогноз, не допустить характерных для каждого возбудителя осложнений и в ряде случаев избежать необоснованной антибиотикотерапии.

Сдать анализ на вирус гриппа и другие возбудители респираторных инфекций можно в Центре Молекулярной диагностики (CMD) ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. Диагностические тесты позволяют выявить возбудителей гриппа, ОРВИ, микоплазменной и хламидийной инфекций, коклюша и других острых респираторных заболеваний в течение одного дня. Целесообразно сдавать анализ на выявление гриппа и возбудителей ОРВИ при подозрении на вирусную инфекцию в первые — вторые сутки заболевания, когда возбудитель содержится в максимальном количестве. Помните, что точный диагноз — правильное лечение!

Молекулярно-генетические методы, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР), способны обнаружить геном возбудителя в мазке из носоглотки заболевшего.

ПЦР — быстрый прямой метод диагностики, обнаруживающий специфичные участки генома микробов, то есть отличающие их друг от друга. Именно поэтому метод ПЦР по сути является экспресс-анализом на грипп и другие респираторные инфекции.

ПЦР увеличивает в миллиард раз количество этих участков за счет работы фермента ДНК-полимеразы, достраивающего цепи ДНК после присоединения к специфическим участкам коротких молекул олигонуклеотидов — праймеров. В процессе достраивания цепей ДНК происходит разрушение ДНК-полимеразой меченой флуоресцентными красителями молекулы – олигонуклеотидного зонда, также специфично отжигающегося на участке ДНК искомого возбудителя, и преграждающего путь движущегося фермента.

Чем больше возбудителя было в образце клинического материала пациента, тем раньше приборы будут фиксировать увеличение над пороговым значением уровня флуоресценции в процессе реакции. Анализ проводится с детекцией в режиме реального времени. Если в образце нет возбудителя, повышение уровня флуоресценции не происходит. В процессе разработки тестов они обязательно проверяются на специфичность, то есть отсутствие перекреста с другими вирусами и бактериями.

источник

Как распознать грипп, и чем он отличается от острого респираторного заболевания или острой респираторной вирусной инфекции. Эти болезни имеют общие признаки на начальной стадии заболевания, но отличаются друг от друга, так как причиной являются разные возбудители.

  • Общее в том, что от момента заражения до первых проявлений недуга проходит один — три дня;
  • еще сутки — трое длятся симптомы интоксикации и аллергии на вирусы;
  • а сама болезнь начинается с высокой температуры, и первыми ее признаками являются ринит, фарингит и конъюнктивит.

Характерным признаком ОРВИ, острой респираторной инфекции, является постепенное начало:

  • подъем температуры, вплоть до 38-39 °С, все зависит от возбудителя;
  • острый ринит – из носа обильно выделяется прозрачная слизь, которую часто сопровождает слезотечение;
  • в горле появляются першение и боль, голос делается сиплым,
  • возникает сухой кашель;
  • больной ощущает симптомы общей интоксикации:
    ломоту в мышцах, слабость, озноб, головную боль и отсутствие аппетита.

Всем известно,что антибактериальная терапия не действует на вирусы, поэтому назначать антибиотики при ОРВИ нет смысла.

Грипп – это эпидемия новых мутированных штаммов вируса, которые в короткие сроки способны поразить огромное количество людей.

  • Основной пик заболевания преимущественно выпадает на зимний сезон.
  • Зараженные вирусом часто считают болезнь неопасной и пытаются лечиться самостоятельно. Но делать это категорически запрещено.

Так, статистические данные говорят о том, что, из-за попустительского отношения к собственному здоровью и отсутствию необходимой вакцинации, каждый год в мире от гриппа умирает до 500 тысяч человек.

  • Основным источником инфекции считается заболевший вирусом человек.
  • Главный путь распространения инфекции – воздушно-капельный.
  • Выделение возбудителя гриппа обычно заканчивается спустя неделю после заражения.
  • Но бывают исключения, например, в случае вирусной пневмонии больной остается потенциально опасным в течение 2-3 недель.
  • Очень важно ежегодно проводить массовую вакцинацию населения.
  • И соблюдать в период вспышки гриппа противоэпидемические правила: своевременную изоляцию больных от здоровых.

Наиболее распространенными штаммами гриппа являются:

Одни из самых опасных возбудителей заболевания.

  • Быстро и легко передаются от заразившегося к здоровому человеку, причем поразить могут даже животных.
  • Подобный тип гриппа постоянно мутирует и становится более устойчивым к медикаментам.

Название штамма вируса, который в 2009 году стал причиной целой пандемии.

  • По клинической картине схож со штаммом А, но при этом тяжелые осложнения всегда дает именно на легкие.

Особенность данного типа в том, что смертность составляет примерно 70% всех случаев.

  • И вирус также продолжает изменяться, приобретая более высокую устойчивость к лекарственным препаратам.

Данная группа представляет меньшую угрозу для жизни человека, но все же продолжает оставаться опасной. Заболевание легче переносится, и вирус практически не мутирует.

Случаи заражения единичные, причем чаще всего заболевание протекает в легкой, бессимптомной форме. Эпидемии в этом случае бывают редко.

Врачи настоятельно рекомендуют не пытаться лечиться в домашних условиях без квалифицированной помощи. Заболевание гриппом обычно протекает в острой форме, поэтому к первым симптомам можно отнести следующие:

  • Молниеносное начало болезни.
  • Высокую температуру до 40°С, лихорадку;
  • Боль в мышцах и суставах;
  • Озноб и сильную слабость;
  • Головокружения и мигрень;
  • Тошноту, рвоту;
  • Отсутствие аппетита.
  • Жидкий стул, чаще у детей.

Болезнь может протекать в различных формах, которые отличаются своей клинической картиной:

  1. Легкая – редкие головные боли, слабость, температура до 38°С, сниженный аппетит.
  2. Среднетяжелая – температура повышается до 39°С, появляются признаки катарального синдрома (отек и воспаление слизистых, насморк, першение в горле и сухой кашель).
  3. Тяжелая – выраженные симптомы интоксикации: лихорадка, озноб, тошнота, температура тела — 40°С.
  4. Гипертоксическая – редкая и наиболее опасная форма. Развивается стремительно. В первые часы заболевания возникают симптомы катарального синдрома, после – геморрагического (кровотечения из носа, гиперемия лица, тошнота и рвота), респираторного и энцефалического.

Проявления любого из штаммов гриппа остаются индивидуальными. Все зависит от иммунитета человека. Осложнения возможны у людей с хроническими нарушениями работы легких, сердца или кровеносной системы. Может присоединиться и бактериальная инфекция.

На вирусы, как и на бактерии, организм человека реагирует одинаково, вырабатывая антитела.

  • Определить возбудителя заболевания вирусной инфекции можно по результатам анализов крови.
  • Характеристика крови у больного и здорового человека отличается по основным показателям.
  • Любые отклонения от нормы являются следствием определенных нарушений в организме.
  • Специалист легко поймёт, что явилось истинной причиной этих отклонений.

Основные показатели общего анализа крови– СОЭ, уровень лейкоцитов и лимфоцитов:

  • При вирусной инфекции СОЭ повышен.
  • Лейкоциты могут быть повышены, но чаще всего они понижены (в том числе и нейтрофилы).
  • При гриппе, вирусном гепатите, кори, краснухе, свинке, брюшном тифе обязательно лейкоциты ниже нормы.
  • Но при вирусной инфекции обязательно прослеживается увеличение числа лимфоцитов, а также может наблюдаться повышение моноцитов, поэтому нужно комплексно оценивать результат общего анализа крови.

Анализ крови на ПЦР (полимеразная цепная реакция) позволяет выявить в организме человека инфекции, которые были вызваны вирусами или возбудителями бактериальной природы.

  • ПЦР — диагностика очень точная и быстрая, используется для уточнения вируса или бактерии, которые вызвали заболевание.
  • ПЦР — анализ позволяет выявить конкретных возбудителей многих болезней, в том числе и таких респираторных инфекций, как:
  • аденовирусы,
  • вирусы штаммов гриппа А и В,
  • РНК вируса гриппа А, А/HINI/CA/ свиного гриппа
  • Результат проведенного исследования всегда однозначен: либо отрицателен, либо положителен.

ИФА — Иммуноферментный анализ крови на антитела и иммуноглобулины — иммунограмма.

  • ИФА — дополнительный метод диагностики, позволяющий определить острое инфекционное заболевание, отличить от хронического.
  • Выполняется после обнаружения возбудителя болезни методом ПЦР.
  • Высокая скорость проведения диагностики позволяет выявить инфекцию на самых ранних стадиях.

В настоящее время разработаны простые экспресс — тесты на выявление вируса гриппа. Экспресс — тесты предназначены для домашнего применения. Их можно купить в любой аптеке, и всегда иметь в домашней аптечке. Пользоваться ими очень легко.

  • Самый эффективный способ не заболеть гриппом – это поддерживать собственный иммунитет в тонусе круглый год.
  • Основным медицинским методом профилактики является массовая вакцинация.
  • Специалисты научных институтов ежегодно создают новые вакцины против вируса.
  • Вирус гриппа постоянно мутирует, поэтому каждый год разрабатывается вакцина против нового штамма, эпидемию которого ожидают.
  • Вакцинацию обычно проводят в октябре, ноябре, за 2-3 месяца до начала сезона эпидемии.

источник

Какова роль вступивших в силу 29 марта поправок в закон в арбитраже и в каком направлении будет развиваться система третейского разбирательства дальше, читайте в интервью с вице-президентом ТПП РФ.

Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с ЗАО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.

Программа, разработана совместно с ЗАО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.

Обзор документа

Методические указания МУ 3.1.3490-17 «Изучение популяционного иммунитета к гриппу у населения Российской Федерации» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 27 октября 2017 г.)

Методические указания МУ 3.1.3490-17
«Изучение популяционного иммунитета к гриппу у населения Российской Федерации»
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 27 октября 2017 г.)

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок и организацию проведения серологического мониторинга в рамках эпидемиологического надзора за гриппом для достижения следующих целей:

— прогнозирование эпидемиологической ситуации путем оценки состояния коллективного иммунитета к актуальным и ранее циркулировавшим антигенным вариантам возбудителей гриппа в предэпидемический период;

— мониторинг за циркуляцией возбудителей гриппа с помощью обнаружения специфических антител к различным антигенным вариантам вирусов гриппа в сыворотках крови в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);

— объективная оценка эффективности специфической профилактики гриппа.

1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический надзор, центров гигиены и эпидемиологии, научно-исследовательских и лечебно-профилактических организаций.

2.1. Проведение серологического мониторинга с целью изучения популяционного иммунитета к гриппу является обязательным элементом эпидемиологического надзора, поскольку эпидемиологическое благополучие населения в отношении гриппа определяется состоянием популяционного иммунитета к актуальным штаммам возбудителей.

2.2. Серологические исследования также важны для ретроспективного анализа вспышек, которые могут иметь место в учреждениях закрытого типа, школах, больницах, геронтологических учреждениях.

2.3. В методических указаниях представлен общий методический подход, порядок организации и проведения лабораторных исследований по оценке популяционного иммунитета к гриппу. Особое внимание уделено описанию формирования репрезентативных групп населения для изучения популяционного иммунитета в зависимости от преследуемой цели, обработке результатов и их интерпретации.

2.4. Методические указания разработаны с целью установки единых требований к порядку сбора, хранения, транспортировке образцов сыворотки крови в ходе серомониторинга гриппа в Российской Федерации, оценке результатов исследований, а также проведению экспертизы и оценки качества иммунопрофилактики гриппа объективными методами.

2.5. Методические указания предназначены для применения в организациях и учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, в лечебно-профилактических и других организациях, обеспечивающих выполнение противоэпидемических мероприятий.

2.6. Информация о состоянии популяционного иммунитета необходима для разработки прогноза развития эпидемиологической ситуации, а также планирования мероприятий по вакцинопрофилактике гриппа.

2.7. Перечень задач, решаемых в рамках изучения популяционного иммунитета к гриппу:

— оценка состояния популяционного иммунитета к различным антигенным вариантам актуальных вирусов гриппа в группах населения различного возраста в предэпидемический период для разработки прогноза заболеваемости и планирования профилактических мероприятий;

— выявление в предэпидемический период групп риска заболевания гриппом среди населения и территорий риска высокой заболеваемости;

— оценка состояния популяционного иммунитета в сравнительном аспекте постэпидемического и предэпидемического периодов с целью определения этиологии эпидемии гриппа и истинной заболеваемости;

— мониторинг вирусов гриппа животных у лиц, контактирующих с животными с помощью серологических методов;

— объективная оценка эффективности иммунизации населения в регионах;

— оценка эффективности вакцин против гриппа.

2.8. Проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета оформляется постановлением Главного государственного санитарного врача по субъекту Российской Федерации, в котором по согласованию с органами управления здравоохранением определяются территории, время (график), контингенты и численность групп населения, подлежащих обследованию, определяются лаборатории для проведения исследований, а также лица, ответственные за организацию и проведение этой работы. В развитие постановления Главного государственного санитарного врача по субъекту Российской Федерации издается приказ органа управления здравоохранением субъекта Российской Федерации.

2.9. Проведение серологического мониторинга ежегодно включается в планы работы территориальных органов Роспотребнадзора, центров гигиены и эпидемиологии и научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора и организаций здравоохранения.

3.1. Коллективный иммунитет популяции является лимитирующим фактором в отношении распространения различных антигенных вариантов вируса гриппа А и В. В этой связи исследование популяционного иммунитета может быть полезным для прогноза возникновения эпидемий, выявления особенностей эпидемического процесса, а также широко используется с целью оценки средств специфической профилактики при их разработке и использовании.

3.2. Оценка состояния популяционного иммунитета может проводиться с целью прогнозирования возникновения эпидемического подъема гриппа. Высокий уровень популяционного иммунитета к определенному антигенному варианту гемагглютинина на протяжении 2 лет подряд указывает на возможность исчезновения из циркуляции этих антигенных вариантов вируса. Низкий уровень популяционного иммунитета к определенному антигенному варианту гемагглютинина в предэпидемический период может служить предвестником эпидемического подъема гриппа, вызванного данным вариантом вируса гриппа. Помимо этого низкий уровень популяционного иммунитета в течение длительного периода к ранее циркулировавшему антигенному варианту вируса гриппа может служить настораживающим прогностическим признаком, указывающим на возможность эпидемической циркуляции близкого антигенного варианта вируса гриппа в будущем.

3.3. Наряду с другими тестами оценка состояния популяционного иммунитета по окончании эпидемии гриппа может служить дополнительным критерием оценки этиологии прошедшей эпидемии гриппа.

3.4. Особое значение имеют сероэпидемиологические исследования, направленные на определение у людей антител к вирусам гриппа животных, таких как высокопатогенный вирус гриппа A (H5N1), поскольку обнаружение антител к вирусу гриппа с пандемическим потенциалом у людей, не контактировавших с птицей, будет косвенно свидетельствовать о приобретении вирусами способности передаваться от человека к человеку. Такие исследования наряду с ПЦР-исследованиями позволили бы выяснить, какова доля бессимптомных случаев инфицирования людей вирусами гриппа животных.

3.5. С целью оценки эффективности вакцинации исследуется популяционный иммунитет до и после вакцинации. С целью оценки эффективности вакцин против гриппа исследуется иммунитет в целевых группах, которым рекомендована исследуемая вакцина.

3.6. Поскольку доказана корреляция между титром антител в сыворотке крови к определенному антигенному варианту гемагглютинина (НА) вирусов гриппа, определенным в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и наличием защиты против инфицирования вирусом гриппа, имеющим данный антигенный вариант гемагглютинина, это исследование успешно используется для оценки коллективного иммунитета к гриппу. Уровень антител (или титр, определяемый в РТГА при последовательных двукратных разведениях сыворотки), при котором доля зараженных лиц (infection rate) падает в 2 раза по сравнению с наблюдаемой у лиц, не имеющих гомологичных антител, считают защитным 50% титром. Определенные опытным путем показатели 50% защитного титра различаются для вирусов гриппа разных субтипов и людей разного возраста, тем не менее, защитным считают титр 1:40, однако, некоторые исследователи считают, что для детей этот показатель должен составлять 1:80.

3.7. Низким титром считают значение , промежуточным (или средним) от 1:40 до 1:80, высоким . Среди лиц, имеющих антитела к гомологичному вирусу гриппа в среднем или высоком титре после перенесенной ране инфекции, заразиться при контакте с возбудителем могут 9%, среди лиц, приобретших антитела в таком же титре в результате вакцинации — 23%, тогда как среди лиц, не имеющих антител, инфицируются 80%.

4.1. Мониторинг состояния коллективного иммунитета к вирусам гриппа предусматривает серологическое обследование на каждой территории различных групп населения, при этом в одной пробе сыворотки крови определяют максимальный спектр антител к различным антигенным вариантам разных субтипов вирусов гриппа (эпидемическим вирусам гриппа человека: A/H1N1, A/H3N2, B/Yamagata и B/Victoria, высокопатогенным вирусам гриппа животных и пандемическим вирусам гриппа).

4.2. Отбор контингентов для обследования начинается с определения территорий. Границы территории определяются сферой обслуживания той или иной организацией здравоохранения. Это может быть отдельный организованный коллектив детей и взрослых, врачебный участок, населенный пункт, приписанный к фельдшерско-акушерскому пункту, территория обслуживания одной поликлиники, фермерское хозяйство.

4.3. Серологический мониторинг целесообразно проводить в первую очередь на крупных административных территориях субъектов Российской Федерации (в городах, районных центрах). Каждый сезон в обследование должны включаться разные районы и поликлиники города (районного центра). Периодичность их обследования должна составлять 6-7 лет (по графику).

4.5. Сбор образцов сыворотки крови осуществляется при условии анонимности методом случайной выборки у людей разных возрастных групп и с различным прививочным анамнезом в отношении гриппа. Перед проведением серологического обследования отобранных лиц медицинские работники должны провести разъяснительную работу, в том числе с родителями обследуемых детей, о целях проверки у них напряженности иммунитета к гриппу. По результатам серологического обследования детей в различных возрастных группах оценивается качество прививок, проводимых в организованных коллективах.

4.6. В зависимости от преследуемой цели исследования сбор сывороток производят от определенных контингентов людей в определенные сроки с соблюдением правил сбора, транспортирования и хранения собранных проб (Приложение 1 к методическим указаниям). Следует учитывать, что сыворотки не подлежат повторному размораживанию-замораживанию, поэтому при необходимости их многократного использования сыворотки следует предварительно аликвотировать.

4.7. Для осуществления серологического мониторинга гриппа на территории Российской Федерации используется РТГА (Приложение 2 к методическим указаниям). Для проведения РТГА должны использоваться зарегистрированные в Российской Федерации диагностикумы.

Читайте также:  Зачем делать анализ на антитела

4.8. Результаты серологического обследования контингентов фиксируются в рабочих журналах лабораторий (таблицы 1-3 в Приложении 6 к методическим указаниям) с указанием населенного пункта, организации, обследуемого и титра антител.

4.9. Динамическое слежение за состоянием иммунитета населения к гриппу, позволяет оценить потенциальную уязвимость населения и своевременно корректировать противоэпидемические мероприятия. При выявлении на какой-либо территории снижения уровня популяционного иммунитета в той или иной возрастной группе, принимаются управленческие решения, направленные на увеличение уровня иммунной прослойки среди населения с учетом того, какой штамм представляет наибольшую эпидемическую опасность. Особое значение имеют сероэпидемиологические исследования высокопатогенных вирусов гриппа животных (например: A/H5N1, А/H7N9), поскольку значимое повышение количества людей, имеющих антитела к вирусу гриппа с пандемическим потенциалом и профессионально не контактирующих с животными, будет свидетельствовать о появлении варианта вируса, способного передаваться от человека к человеку.

5.1. Изучение коллективного иммунитета к актуальным антигенным вариантам вирусов гриппа проводится по результатам исследования сывороток, собранных в предэпидемический период, в количестве не менее 150 сывороток в каждом субъекте Российской Федерации. Оптимальные сроки сбора сывороток — август-сентябрь.

5.2. Обследование проводится среди здорового детского и взрослого населения вне зависимости от наличия или отсутствия перенесенного гриппа в анамнезе и прививочного анамнеза в предшествовавшие эпидемические сезоны. Исследуют сыворотки крови, взятые от лиц следующих возрастных групп: 3-6 лет, 7-14 лет, 15-18 лет, 18-60 лет, старше 60 лет (не менее 30 образцов из каждой группы).

5.3. Собранные сыворотки следует аликвотировать и хранить замороженными в аликвотах для последующего использования (оценка соответствия вирусам, выделенным в начале эпидемического сезона, сравнительное исследование с сыворотками после вакцинации и постэпидемического периода).

5.4. Анализу подлежат следующие показатели:

— доля сывороток с защитным уровнем антител к актуальным штаммам вирусов гриппа (штаммы, рекомендованные в состав вакцины на предстоящий эпидемический сезон, штаммы, циркулировавшие в популяции людей ранее);

— доля сывороток с низким уровнем антител к актуальным штаммам вирусов гриппа (штаммы, рекомендованные в состав вакцины на предстоящий эпидемический сезон, штаммы, циркулировавшие в популяции людей ранее);

— доля сывороток, не содержащих антител к актуальным штаммам вирусов гриппа (штаммы, рекомендованные в состав вакцины на предстоящий эпидемический сезон, штаммы, циркулировавшие в популяции людей ранее).

5.5. Низкий уровень популяционного иммунитета — более 80% лиц, не имеющих в предэпидемический период антител или низкий титр к актуальному гемагглютинину, может служить предвестником значительного эпидемического подъема гриппа, вызванного данным вариантом вируса гриппа.

5.6. Высокий уровень популяционного иммунитета (менее 20% лиц с низким уровнем антител или их отсутствием) к актуальному гемагглютинину на протяжении 2 лет подряд указывает на возможность исчезновения из циркуляции этих антигенных вариантов вируса гриппа и высокую вероятность изменения его антигенной структуры.

VI. Оценка состояния популяционного иммунитета с целью определения этиологии эпидемии гриппа и истинной заболеваемости

6.1. Исследование коллективного иммунитета к актуальным антигенным вариантам вирусов гриппа проводится среди здорового детского и взрослого населения вне зависимости от наличия или отсутствия перенесенного гриппа в анамнезе и прививочного статуса в сравнительном аспекте оценки уровня популяционного иммунитета в предэпидемический и постэпидемический период.

6.2. Одномоментному исследованию подвергаются сыворотки, собранные в постэпидемический период (май) в количестве не менее 150 сывороток в каждом субъекте Российской Федерации, и аликвоты сывороток, собранных в предэпидемический период (август-сентябрь) и хранившихся в замороженном состоянии. Сыворотки крови, берут от здорового населения разных возрастных групп (3-6 лет, 7-14 лет, 15-18 лет, 18-60 лет, старше 60 лет, не менее 30 образцов из каждой группы).

6.3. Анализу подлежат следующие показатели:

— доля образцов, не имеющих антител к актуальным штаммам вирусов гриппа (штаммы, циркулировавшие в данный эпидемический сезон), доля образцов, содержащих антитела в низком, среднем и высоком титре;

— средние значения геометрических титров антител (СГТ) (Приложение 3 к методическим указаниям), к актуальным штаммам вирусов гриппа (штаммы, циркулировавшие в данный эпидемический сезон).

6.4. Индикатором активности вируса гриппа определенной антигенной структуры является кратность прироста антител к данному гемагглютинину в постэпидемический период по сравнению с предэпидемическим периодом.

6.5. Показателем эпидемической активности вируса служит достоверное снижение доли лиц с отрицательным и низким уровнем антител к нему, достоверное увеличение доли лиц с высоким уровнем антител к нему и увеличение СГТ в 2 и более раз.

7.1. Биологический материал для исследования берут у населения, профессионально контактирующего с сельскохозяйственными животными (свиньями, птицей), и дикой птицей.

7.2. С целью серологического мониторинга сыворотки крови собирают в августе-сентябре каждого года от людей, контактирующих с животными, в количестве не менее 100 образцов в каждом из 39 субъектов Российской Федерации, определенных в приказах Роспотребнадзора от 30.09.2013 N 714 «Об организации мониторинга за циркуляцией вирусов гриппа птиц» и от 04.08.2016 N 842 «Об организации опорных баз по мониторингу за вирусом гриппа с пандемическим потенциалом».

7.3. В случае контакта людей с животными, у которых лабораторно подтверждено наличие РНК вируса гриппа А с пандемическим потенциалом, необходимо собирать у контактных лиц парные сыворотки (1-я сыворотка — не позднее 7 дней от момента контакта, 2-я сыворотка — через 3 недели после контакта) с целью определения уровня сероконверсии в результате контакта с больным животным. Объем каждого образца сыворотки должен быть не менее 1,0 мл.

8.1. Оценка эффективности вакцинации против гриппа в текущем эпидемическом сезоне проводится путем сравнения состояния популяционного иммунитета до вакцинации (в предэпидемический период) и после вакцинации среди привитого населения, до начала сезонного подъема заболеваемости данной инфекцией.

8.1.1. Отбор сывороток проводят через один месяц после вакцинации.

8.1.2. Сыворотки крови, берут в количестве не менее 150 образцов от вакцинированного населения разных возрастных групп (3-6 лет, 7-14 лет, 15-18 лет, 18-60 лет, старше 60 лет, не менее 30 образцов из каждой группы) и из числа групп риска в отношении этой инфекции.

8.2. К группам риска в отношении сезонного гриппа относят лиц, подвергающихся повышенному риску контакта с вирусом гриппа (прежде всего, медицинские работники), а также тех, у кого грипп может протекать в тяжелой форме, способной привести к опасным осложнениям, госпитализации и к летальному исходу (например: беременные женщины, дети в возрасте до 5 лет, пожилые люди, больные хроническими заболеваниями сердечно-сосудистой системы, органов дыхания, эндокринной системы, включая метаболические нарушения, сопровождающиеся увеличением индекса массы тела).

8.3. В группу вакцинированных для изучения эффективности вакцинопрофилактики гриппа не включают:

— детей, у которых отсутствуют сведения о прививках в изучаемом эпидемическом сезоне;

— не привитых против гриппа;

— перенесших какое-либо острое заболевание за 1-1,5 месяца до обследования, так как отдельные болезни могут привести к временному снижению титра специфических антител.

8.4. По усмотрению специалистов, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический надзор, серологическое обследование может быть проведено и в других возрастных и профессиональных группах.

8.5. При формировании обследуемых групп населения, следует придерживаться следующих принципов: единство вакцинного препарата, места получения прививки, единство прививочного анамнеза и сходство эпидемиологической ситуации, в условиях которой формируются обследуемые группы.

8.5.1. Единство места получения прививки (организация здравоохранения, детское дошкольное учреждение, школа, предприятие и другие организации, в которых проводилась вакцинация). Этот принцип формирования групп позволяет выявить организации с низким качеством прививочной работы в данном эпидемическом сезоне, а при последующем тщательном расследовании определить конкретные ее недостатки (например: нарушение правил хранения, транспортирования вакцин, фальсификацию прививок, технические ошибки).

8.5.2. Единство прививочного анамнеза: обследуемая группа населения должна быть однородной, для чего необходим отбор лиц, вакцинированных одинаковым вакцинным препаратом (одного состава и производителя). Наличие вакцинации в предыдущие эпидемические сезоны не учитывается.

8.6. Одномоментному исследованию подвергаются сыворотки, собранные в субъекте Российской Федерации от вакцинированных через один месяц после вакцинации до начала сезонного подъема заболеваемости и аликвоты сывороток, собранных в предэпидемический период (август-сентябрь) и хранившихся в замороженном состоянии.

8.7. Оценку эффективности вакцинации проводят по критериям прироста среднегеометрического титра антител и уровня серопротекции после вакцинации по сравнению с предэпидемическим периодом (Приложения 3 и 4 к методическим указаниям МУ 3.1.-17). Показателем эффективности вакцинации считают достоверный прирост уровня серопротекции или увеличение СГТ в 2,0 и более раз.

8.8. При выявлении в какой-либо группе привитых лиц несоответствия указанному критерию по каждому из актуальных вакцинных штаммов вируса гриппа необходимо:

— провести анализ прививочной документации на выявленных лиц без сероконверсии для установления факта наличия прививки — сопоставить сведения о прививках во всех учетных формах (например: карта профилактических прививок (ф. N 063/у), история развития ребенка (ф. N 112/у), амбулаторная карта больного (ф. N 025/у), рабочие журналы);

— оценить условия хранения и транспортирования вакцины, порядок проведения иммунизации;

— дополнительно проверить состояние иммунитета к гриппу у лиц того же возраста в количестве не менее 100 человек, но в 2 других коллективах той же организации здравоохранения, где выявлены несоответствия;

— если после дополнительного обследования количество не защищенных от гриппа будет превышать приведенные критерии, следует провести проверку учреждения здравоохранения, в которых выявлены несоответствия, с целью установления фальсификации прививок.

8.9. Материалы серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета обобщаются по организациям разного типа, поликлиникам, району, городу (районному центру) и субъекту Российской Федерации в целом. Далее по каждой возрастной группе результаты серологического обследования сопоставляют с уровнем охвата прививками, что позволит подтвердить официальные данные об иммунизации населения или выявить несоответствие охвата прививками уровню коллективного иммунитета.

9.1. Эффективность средства специфической профилактики складывается из его иммунологической эффективности и профилактической эффективности.

9.1.1. Наиболее объективную оценку иммунологической эффективности (или иммуногенности) препарата вакцины можно получить при вакцинации серонегативных к специфическим антигенам людей. Из таких лиц формируют опытную и контрольную группы. Лица, получившие вакцинацию против гриппа в течение предыдущих 6 месяцев, исключаются из исследования.

9.1.1.1. При формировании групп соблюдают единство места получения прививки и единообразие возраста, эпидемиологической ситуации, в условиях которой формируются обследуемые группы.

9.1.1.2. Первый сбор сывороток должен быть осуществлен непосредственно перед вакцинацией (сентябрь-октябрь) и содержать не менее 200 образцов.

9.1.1.3. По результатам скрининга в РТГА следует отобрать не менее 50 участников испытания, имеющих наименьшие титры по отношению к антигенам вируса гриппа, входящим в состав вакцины. Из исследования исключаются лица, имеющие титр антител в РТГА 1:80 и более ко всем антигенам вакцины.

9.1.1.4. Второй сбор сывороток у отобранных для испытания участников проводят спустя 21 сутки (минимум) или 28 суток (максимум) после вакцинации.

9.1.2. Оценка иммунологической эффективности вакцин проводится согласно Приложению 4 к методическим указаниям.

9.1.3. Сведения о возможности переноса критериев оценки иммунологической эффективности, установленных для взрослых, на педиатрическую популяцию весьма противоречивы, в связи с чем, наиболее адекватной оценкой эффективности вакцин для детей, считается оценка их профилактической эффективности. В этом случае наряду с оценкой иммунологической эффективности проводится оценка профилактической эффективности.

9.2. В связи с тем, что живые аттенуированные или рекомбинантные вакцины могут способствовать выработке специфического секреторного или клеточного иммунитета, иммунологические критерии, установленные для инактивированных вакцин, для них могут быть не всегда корректны. В таких случаях наряду с оценкой иммунологической эффективности проводится оценка профилактической эффективности. Профилактическая эффективность препарата вакцины против гриппа оценивается путем сравнения долей заболевших гриппом в группе привитых и в группе непривитых (контрольных).

9.2.1. Объективной оценкой заболевания гриппом является лабораторное подтверждение, с этой целью проводится исследование методом полимеразной цепной реакции с зарегистрированными в Российской Федерации наборами реагентов с идентификацией субтипа гриппа и проведением углубленного молекулярно-генетического анализа вирусов гриппа в одном из референс-центров Роспотребнадзора по мониторингу за гриппом.

9.2.2. Формируются 2 группы добровольцев, одна из них — группа вакцинированных, вторая является контрольной (невакцинированные).

9.2.2.1. При формировании групп соблюдают единообразие возраста и эпидемиологической ситуации, в условиях которой формируются обследуемые группы. Объем репрезентативной выборки в каждой группе рассчитывается исходя из статистических критериев, основываясь на прогнозируемой заболеваемости гриппом, и должен увеличиваться по мере снижения ожидаемой заболеваемости.

9.2.2.2. За обеими группами проводится эпидемиологическое наблюдение в течение всего эпидемического сезона (с момента вакцинации до конца мая), и при появлении клинических проявлений острой респираторной инфекции, у участника испытаний (любой группы) берут мазки из верхних дыхательных путей для проведения лабораторного обследования.

9.2.3. По окончании эпидемического сезона проводят расчет индекса эффективности, и коэффициента эффективности (коэффициент защищенности) согласно Приложению 5 к методическим указаниям.

10.1. Метод основан на способности вирусов гриппа прикрепляться посредством гемагглютинина к эритроцитам человека, кур, морской свинки и других млекопитающих, вызывая образование своеобразной решетки, связывая два эритроцита.

10.1.1. Эритроциты, которые не связались вирусом гриппа, оседают на дно лунки и образуют «пуговицу». Эритроциты, прикрепившиеся к вирусным частицам, образуют решетку, покрывающую лунку, и получается «зонтик».

10.1.2. Подсчитано, что 1 гемагглютинирующая единица (ГАЕ) различных типов и субтипов вируса гриппа содержит приблизительно вирусных частиц.

10.1.3. Реакция торможения гемагглютинации позволяет определить уровень антител к вирусу гриппа в образцах сыворотки.

10.1.4. Суть реакции торможения гемагглютинации в том, что антитела к вирусу гриппа препятствуют прикреплению вируса к эритроцитам. Поэтому, если в сыворотке есть антитела к данному или родственному штамму и если их количество достаточно для связывания 4 ГАЕ вируса, гемагглютинация подавляется в присутствии сыворотки. В этом случае гемагглютинации в лунках наблюдаться не будет, пока разведение сыворотки не приведет к такому разбавлению антител, что их будет недостаточно для торможения гемагглютинации.

10.1.5. Наивысшее разведение сыворотки (наименьшая концентрация антител), останавливающее гемагглютинацию, называется титром сыворотки в РТГА.

10.2. Анализ занимает не более 30 минут и поэтому часто используется в лабораториях для определения относительных количеств вирусных частиц в свежеприготовленной вируссодержащей аллантоисной или культуральной жидкости.

10.3. Постановка РТГА (Приложение 2 к методическим указаниям) включает следующие этапы работы: получение препарата антигена вируса гриппа, определение его титра в реакции гемагглютинации, подготовка сывороток, приготовление взвеси эритроцитов, и постановка реакции.

11.1. Федеральный закон от 17.09.1998 N 157-ФЗ (ред. от 31.12.2014) «Об иммунопрофилактике инфекционных болезней».

11.2. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1/3.2.3146-13 «Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных болезней».

11.3. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.2.3117-13 «Профилактика гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций».

11.4. Методические указания. МУ 3.3.2.1758-03 «Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа».

11.5. Приказ Роспотребнадзора от 31.03.2005 N 373 «О совершенствовании системы эпидемиологического надзора и контроля за гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями» (вместе с «Положением об организации деятельности Федерального центра по гриппу и острым респираторным вирусным инфекциям», «Положением об организации деятельности опорной базы Федерального центра по гриппу и острым респираторным вирусным инфекциям», «Положением об организации деятельности Центра экологии и эпидемиологии гриппа», «Положением об организации деятельности опорной базы Центра экологии и эпидемиологии гриппа», «Порядком представления информации по форме «Срочное донесение о заболеваемости гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями (ОРВИ)», «Порядком представления донесений о результатах лабораторных исследований в опорных базах Федерального центра по гриппу и ОРВИ и Центра экологии и эпидемиологии гриппа», «Порядком представления информации о заболеваемости гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями Федеральным центром по гриппу и острым респираторным вирусным инфекциям и Центром экологии и эпидемиологии гриппа»).

11.6. Приказ Роспотребнадзора от 30.09.2013 N 714 «Об организации мониторинга за циркуляцией вирусов гриппа птиц».

МУ — методические указания

ПЦР — полимеразная цепная реакция

РТГА — реакция торможения гемагглютинации

РНК — рибонуклеиновая кислота

RDE — фермент, разрушающий неспецифические ингибиторы

СГТ — среднегеометрический титр

ФСБР — фосфатно-солевой буферный раствор

При проведении исследований по мониторингу популяционного иммунитета в организованных коллективах детей и учащихся составляется список обследованных лиц, в котором указываются город (район), номер детского дошкольного учреждения, группы, школы, класса, номер среднего специального учреждения, группы, название вуза, факультета, группы, регистрационный номер, фамилия, имя пациента, дата рождения, дата прививок против гриппа, дата взятия крови, подпись ответственного лица.

Капиллярную кровь берут из пальца в асептических условиях. Перед взятием крови кисть руки пациента согревают горячей водой, затем насухо вытирают чистым полотенцем. Палец, протерев 70% спиртом, прокалывают стерильным скарификатором одноразового пользования. Кровь в объеме 1,0-1,5 мл собирают непосредственно через край стерильной одноразовой центрифужной пробирки с пробкой (или в специальные микропробирки для взятия капиллярной крови). После взятия крови место укола смазывают 5% раствором йода.

При определении антител к вирусам гриппа животных у людей из групп риска, при оценке эффективности вакцинации и оценке эффективности вакцины берут кровь из вены в асептических условиях в объеме не менее 3 мл.

Пробирку следует пронумеровать и приложить к ней этикетку с указанием регистрационного номера, фамилии, инициалов, даты взятия крови.

Для получения сывороток пробирку с кровью ставят в кабинете, где проводился забор крови, при комнатной температуре на 20-30 мин для образования сгустка, после чего пробирку с кровью встряхивают для отделения сгустка от стенки пробирки.

Пробирки вместе со списками направляют в клинико-диагностическую лабораторию ЛПО, где пробирки с кровью оставляют на ночь в холодильнике при температуре 4-8°C.

После отделения сыворотки от сгустка (пробирки обводят по внутренней поверхности стерильной пастеровской пипеткой) ее центрифугируют при 1000-1200 об./мин в течение 15-20 мин. Затем сыворотку осторожно переливают или переносят пипеткой в стерильные центрифужные (пластиковые) пробирки с обязательным переносом на них этикетки с соответствующей пробирки.

В лаборатории сыворотки (без сгустка) до исследования можно хранить в холодильниках при температуре (5 +/- 3)°C в течение 7 дней. При более длительном хранении сыворотка должна быть заморожена при -20°C или ниже. Не допускается повторное замораживание размороженной сыворотки. Собрав необходимое количество сывороток, их отправляют в лабораторию ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора в субъекте Российской Федерации на исследование.

Перед транспортированием собранного материала из района обследования очень важно принять меры предосторожности: проверить наличие собранной информации, прочно закрыть пробирки пробкой, расположить пробы согласно их номерам и пр. На месте сбора следует хранить списки обследованных лиц. Для транспортирования сыворотки крови используют термоконтейнеры (сумки-холодильники). В течение всего периода транспортировки сыворотки должны оставаться при температуре -20°C или ниже.

При пересылке проб железнодорожным или воздушным транспортом лаборатории необходимо известить (по телефону, телеграммой) о номере поезда (рейса), дате и времени отправки и прибытия, количестве проб и пр.

1. Фермент, разрушающий неспецифические ингибиторы — RDE.

2. ФСБР — фосфатно-солевой буферный раствор.

Сыворотки крови животных и людей содержат различные полисахариды, включающие сиаловые кислоты, которые могут прикрепляться к гемагглютинину вируса гриппа и затруднять связывание специфических в отношении гриппа гемагглютинирующих антител. Для удаления этих неспецифических ингибиторов гемагглютинации образцы сыворотки обрабатываются ферментом RDE, разрушающим сиаловые кислоты. Работа проводится в ламинарном боксе II класса биобезопасности.

1. Быстро разморозьте исследуемые сыворотки крови при +37°C на водяной бане. Сразу после разморозки поместите сыворотки в лед и держите на льду во время использования.

Читайте также:  Хеликс анализ на антитела антирезусные

2. Добавьте 40 мкл образца сыворотки в пробирку.

3. Добавьте 120 мкл RDE в каждую пробирку.

4. Закройте пробирки пробками.

5. Выдерживайте на водяной бане при +37°C от 18 до 20 часов.

6. Затем поместите пробирки в водяную баню при +56°C на 30 минут.

7. Добавьте 240 мкл ФСБР, pH = 7,2 в каждую пробирку. Конечное разведение сыворотки имеет соотношение 1:10. Конечный объем мкл.

8. Оставьте на ночь при +4°C. Если необходимо более долгое хранение, заморозьте до -20°C или ниже.

1. Кровь человека группы 0 или морской свинки в буфере Олсвера должна быть свежей. Для работы с некоторыми антигенами штаммов вируса гриппа могут быть использованы эритроциты петуха, индейки или лошади. Допустимо хранение эритроцитов при +4°C не более 1 недели.

2. Стерильная хлопковая марлевая салфетка.

3. Физиологический раствор с ФСБР (0,01 M ФСБР, pH = 7,2). Должен быть холодным. Хранить при температуре +4°C и держать на льду или при +4°C во время использования.

4. 70% этанол в деионизованной воде.

5. Конические центрифужные пробирки для отмывания эритроцитов.

Примечание. 0,5% эритроциты готовятся в тот же день, когда тестируются сыворотки на неспецифические агглютинины, и могут храниться при +4°C для использования в РТГА на второй день. Остатки необходимо уничтожить в конце второго дня.

1. Аккуратно наберите, используя пипетку объемом 10 мл, примерно 5 мл эритроцитов со дна колбы. Профильтруйте через стерильную хлопковую марлевую салфетку в коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл.

2. Осторожно наполните коническую пробирку холодным ФСБР, закройте пробкой и слегка перемешайте, переворачивая пробирку.

3. Центрифугируйте при 1200 об./мин в течение 10 минут при +4°C.

4. Удалите надосадочную жидкость, используя пипетку объемом 10 мл. Будьте внимательны: не всколыхните осадок эритроцитов.

5. С осторожностью повторите промывку холодным ФСБР (пункты 2-4) еще два раза, чтобы всего было три промывки эритроцитов. Для предотвращения гемолиза всегда бережно обращайтесь с эритроцитами, держите ФСБР на льду при температуре +4°C и не промывайте эритроциты больше трех раз.

6. Удалите оставшийся супеpнатант при помощи микропипетки и храните уплотненные эритроциты на льду.

7. Приготовьте рабочую суспензию эритроцитов: добавьте 2,5 мл уплотненных эритроцитов к 247,5 мл холодного ФСБР в стеклянную колбу объемом 500 мл (сполосните колбу ФСБР перед использованием). Перемешайте с помощью вращательных движений.

8. Приготовьте раствор суспензии эритроцитов 1:100. Для этого добавьте 100 мкл эритроцитов к 9,9 мл холодного ФСБР в конической пробирке объемом 15 мл. Осторожно перемешайте, переворачивая пробирку.

9. Тщательно вымойте гемоцитометр 70% этанолом и протрите насухо бумагой для оптических стекол или мягкой тканью, не оставляющей ворса. Вымойте и просушите покровное стекло тем же способом и аккуратно положите его в гемоцитометр так, чтобы оно покрывало зону чувствительности счетчика.

10. Поместите 10 мкл разбавленных 1:100 эритроцитов в гемоцитометр, вставляя наконечник автоматической пипетки в канал и позволяя клеткам распределиться по счетной зоне. Будьте внимательны: не переполняйте канал.

11. Посчитайте эритроциты в каждом из 4 больших угловых квадратов в гемоцитометре.

12. Каждое большое поле содержит 16 маленьких полей. Обратите внимание, что предполагаемое число эритроцитов в одном большом поле составляет от 40 до 60 клеток. Если количество клеток в каждом большом поле 70, то добавьте холодного ФСБР к суспензии эритроцитов и посчитайте снова. Если количество эритроцитов в больших полях отличается друг от друга более чем в 2 раза, то это указывает на неверную загрузку или плохое перемешивание эритроцитов, и, следовательно, необходимо провести процедуру повторно.

А. После подсчета эритроцитов сполосните гемоцитометр и покровное стекло 70% этанолом и протрите насухо.

В. Рассчитайте, какое количество холодного ФСБР необходимо добавить для получения 0,5% суспензии эритроцитов. Для этого используйте следующую формулу:

1) Количество эритроцитов в каждом большом угловом поле
50
48
42
40
2) мл
3) (281,25 мл) — (250 мл) = 31,25 мл ФСБР надо добавить к суспензии эритроцитов.

Присутствие неспецифических агглютининов в образцах сывороток может привести к ложноотрицательному результату в РТГА. Наличие неспецифических агглютининов можно обнаружить, если к разбавленной сыворотке добавить раствор эритроцитов. Если наблюдается гемагглютинация, то в этом случае сыворотка должна быть адсорбирована с эритроцитами перед тестированием в реакции торможения гемагглютинации.

1. Эритроциты человек группы 0 или морской свинки.

2. Физиологический раствор с ФСБР (0,01 M ФСБР, pH = 7,2). Должен быть холодным. Хранить при температуре +4°C и во время использования держать на льду.

3. Образцы сывороток, обработанных RDE.

4. Полистироловый 96-луночный микропланшет с V-образным дном.

6. Одноразовые наконечники для многоканальных пипеток.

7. Микроцентрифужные пробирки.

1. Разделите планшет с V-образным дном пополам, прочертив линию маркером со стойкими чернилами между рядами D и E. Лунки рядов A и E будут служить для внесения в них сывороток. Сыворотки из ряда A будут тестироваться между рядами A и D. Сыворотки из ряда E будут тестироваться между рядами E и H.

2. Добавьте 25 мкл холодного ФСБР в лунки от ряда B до ряда D (с B1-B10 до D1-D10) для сывороток, которые будут протестированы в планшете торможения гемагглютинации N 1, и в лунки от ряда F до ряда H (с F1-F10 до H1-H10) для сывороток, которые будут протестированы в планшете торможения гемагглютинации N 2.

3. Добавьте по 50 мкл каждой сыворотки в лунки A1-A10 и E1-E10, соответствующие пронумерованным колонкам. В каждом планшете будет содержаться 22 образца сывороток.

4. Произведите серию двукратных разведений, перенося 25 мкл сыворотки из первого ряда в последующие ряды. Другими словами, перенесите из A в B, из B в C и из C в D. Удалите 25 мкл после ряда D. Также перенесите 25 мкл из E в F, из F в G, из G в H. Удалите 25 мкл после ряда H.

5. Добавьте 25 мкл холодного ФСБР во все лунки, содержащие сыворотки; колонки 1-10.

6. Добавьте 50 мкл холодного ФСБР в колонку 12 на планшете в качестве контроля эритроцитов. Колонка 11 остается пустой.

7. Слегка постучите по планшету, чтобы сыворотки хорошо перемешались с ФСБР.

8. Добавьте 50 мкл 0,5% эритроцитов во все лунки, кроме 11-й колонки.

9. Слегка постучите по планшету для лучшего перемешивания.

10. Выдержите при комнатной температуре в течение 30 минут, чтобы эритроциты смогли осесть.

11. Наклоните планшет под углом от 45° до 60°. Осевшие эритроциты в колонке 12 должны «потечь», напоминая слезу, под воздействием гравитации. Дождитесь, пока эти эритроциты не перестанут течь, и после этого запишите, в каких сыворотках произошла агглютинация эритроцитов. Агглютинированные эритроциты не «текут» и не образуют капли наподобие слезы.

12. Образцы сывороток с агглютинированными эритроцитами в лунках с разведением сыворотки 1:20 или больше должны быть адсорбированы с эритроцитами до тестирования в РТГА. Если агглютинация наблюдается только в первой лунке — разведение сыворотки 1:10, — тогда адсорбция необязательна.

1. Смешайте в микроцентрифужной пробирке 100 мкл уплотненных эритроцитов с 400 мкл сыворотки, обработанной RDE.

2. Осторожно переверните, чтобы перемешать содержимое, и выдержите 30 минут при температуре +4°C.

3. Снова осторожно переверните и выдержите еще 30 минут при температуре +4°C.

4. Центрифугируйте в микроцентрифуге Эппендорф при 600 x g в течение 5 минут.

5. Аккуратно соберите сыворотку, не затрагивая эритроциты.

1. 0,5% суспензия эритроцитов человека группы 0 или морской свинки в ФСБР.

2. Физиологический раствор с ФСБР (0,01 M ФСБР, pH = 7,2). ФСБР необходимо хранить при температуре +4°C.

Примечание. Антиген вируса гриппа должен храниться при температуре -70°C в аликвотах одноразового использования. Быстро разморозьте антиген вируса незадолго до использования и положите на лед. После работы все остатки антигена вируса гриппа должны быть утилизированы. Никогда не используйте размороженный и повторно замороженный антиген вируса гриппа.

4. Полистироловый 96-луночный микропланшет с V-образным дном.

5. Стерильные пипетки, одноразовые наконечники для многоканальных пипеток.

1. На V-образных планшетах подпишите названия двух антигенов вирусов, которые вы будете использовать в тесте. Каждый антиген вируса тестируется дважды.

2. Добавьте 50 мкл холодного ФСБР в лунки со 2 по 12 в рядах A и B для первого антигена и в лунки со 2-й по 12-ю в рядах D и E для второго антигена.

3. Добавьте 50 мкл холодного ФСБР во весь ряд H. Этот ряд будет выполнять функцию контроля эритроцитов.

4. Добавьте 100 мкл первого антигена для тестирования в лунки A1 и B1. Добавьте 100 мкл второго тестируемого антигена в лунки D1 и E1.

5. Проведите серию двукратных разведений, перенеся 50 мкл из первой лунки в каждую последующую до 12-й лунки. Из 12 лунки удалите 50 мкл.

6. Добавьте 50 мкл 0,5%-й суспензии эритроцитов во все лунки в рядах A, B, D, E и H на планшете.

7. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.

8. Выдержите при комнатной температуре или при + 4° С в течение 30 минут.

9. Определите титры гемагглютининов, наклонив планшет под углом от 45° до 60°. Осевшие эритроциты в ряду H должны «потечь» и образовать каплю. Дождитесь, пока эти эритроциты не перестанут течь, после чего отметьте те лунки, в которых эритроциты образовали «пуговки» и потекли. Наибольшее разведение антигена, которое дает полную гемагглютинацию («зонтик»), считается титром гемагглютинина.

10. Разведите антиген вируса в холодном ФСБР таким образом, чтобы приготовить рабочий раствор, содержащий 8 ГАЕ/50 мкл. Например, у Вас получился титр HA, равный 160. Разделите его на 8, получите 20. Следовательно, необходимо разбавить исходный вирусный антиген в 20 раз, т. е. смешать 1 часть антигена с 19 частями холодного ФСБР.

11. Убедитесь в том, что разведенный антиген содержит 8 ГАЕ на 50 мкл, проведя вторую реакцию гемагглютинации (РГА), как описано выше. Титр вирусного антигена должен равняться 8. Если у Вас получилось другое число, использовать этот рабочий раствор антигена нельзя!

12. Храните рабочее разведение антигена на льду и используйте в тот же день.

Примечание. Стандартное рабочее разведение вирусного антигена должно иметь титр HA, равный 8 ГАЕ в 50 мкл. Это то же самое, что и 4 ГАЕ в 25 мкл. При таком титре наблюдается гемагглютинация в первых четырех лунках при титровании антигена в РГА. Если полная гемагглютинация наблюдается в 5 лунках, антиген имеет титр 16 ГАЕ/50 мкл и тестовый антиген должен быть разбавлен в 2 раза. И наоборот, если гемагглютинация наблюдается только в 3 лунках, то антиген имеет титр 4 ГАЕ/50 мкл. В этом случае к рабочему разведению антигена надо добавить такой же объем исходного антигенного раствора, какой был взят вначале. Это удвоит концентрацию антигена в рабочем разведении, чтобы дать титр 8 ГАЕ/50 мкл. Если после 1-2 исправлений у вас так и не получился титр 8 ГАЕ/50 мкл, процедуру приготовления рабочего раствора антигена лучше повторить сначала с постановки реакции гемагглютинации.

1. 0,5% суспензия эритроцитов в ФСБР.

2. Физиологический раствор с ФСБР (0,01 M ФСБР, pH = 7,2). ФСБР необходимо хранить при температуре +4°C.

3. Диагностикумы гриппозные сухие для РТГА (применять согласно инструкции изготовителя).

4. Вирус гриппа, инактивированный бета-пропиолактоном (BPL-антиген). Аликвоты аллантоисной или культуральной антигенсодержащей жидкости хранить при -70°С.

5. Образцы сывороток, обработанные RDE, тестированные на неспецифические агглютинины эритроцитов.

Примечание. Сыворотка должна быть заморожена один раз и храниться при температуре от -20 до -70°C.

6. Полистироловый 96-луночный микропланшет с V-образным дном. В каждом планшете может быть протестировано 11 образцов сывороток.

8. Конические центрифужные пробирки для разведения антигена.

9. Одноразовые наконечники для многоканальных пипеток.

1. Быстро разморозьте сыворотки на водяной бане при +37°C. Как только сыворотки растают, держите их на льду во время работы.

2. Пронумеруйте планшеты и подпишите названия двух тестируемых антигенов. Сыворотки тестируются в повторах на двух идентичных планшетах.

3. Добавьте 25 мкл холодного ФСБР в ряды от B до H (от B1-B11 до H1-H11).

4. Добавьте 50 мкл каждого образца сывороток в первую лунку (A1-A10).

5. Внесите 50 мкл положительного контроля в лунку А11 одного планшета и отрицательного контроля в лунку A11 второго планшета.

6. Проведите серию двукратных разведений, перемещая 25 мкл сыворотки из A1-11 в лунки последующих рядов. Последние 25 мкл сыворотки из ряда H утилизируйте.

7. Добавьте 25 мкл рабочего раствора антигена, содержащего 4 ГАЕ, в лунки, содержащие сыворотки. Обратите внимание на то, что это то же самое, что 50 мкл, содержащих 8 ГАЕ.

8. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.

9. Выдержите при комнатной температуре в течение 30 минут.

10. Добавьте 50 мкл ФСБР в колонку 12, что послужит контролем эритроцитов.

11. Добавьте 50 мкл 0,5% суспензии эритроцитов в каждую лунку.

12. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.

13. Выдержите при комнатной температуре или при + 4°С в течение 30 минут.

14. Результат оценивают через 30 минут инкубирования, наклонив планшет под углом от 45° до 60°C. Осевшие эритроциты в колонке 12 должны «потечь» и образовать каплю. Дождитесь, пока эти эритроциты не перестанут течь, после чего отметьте те лунки, в которых эритроциты образовали «пуговки» и потекли так же, как в 12-й колонке. Лунки, где произошло полное торможение гемагглютинации, будут выглядеть как контрольные.

Если произошло взаимодействие антиген/антитело, гемагглютинация эритроцитов будет ингибирована. Для записи данных следует пользоваться следующими знаками: знак «+» — для полной гемагглютинации («зонтик»), знак «+/-» — для частичной гемагглютинации и знак «-» — для торможения гемагглютинации («пуговка»). Титр в РТГА соответствует наибольшему разведению сыворотки, которое полностью тормозит гемагглютинацию (последняя «пуговка»). Необходимо внимательно следить за инкубацией. Если реакция проведена при комнатной температуре результат следует прочитать сразу после того, как эритроциты в контроле полностью осядут. Если реакция проведена при температуре +4°С результат можно прочитать в течение 0,5-1 часа после того, как эритроциты в контроле полностью осядут.

15. Титр сыворотки в РТГА — это разведение сыворотки в последней лунке с полным торможением гемагглютинации, например, 1:640. Обратный титр сыворотки — это величина, обратная титру, например, 640.

Для проведения расчета СГТ титр антител в РТГА менее 1:10 принимают равным 1:5. Титр антител в РТГА равный или более 1:1280 принимают равным 1:1280. Для определения СГТ обратные титры антител переводят в логарифмы по основанию 2, суммируют и делят на число исследованных сывороток. Полученную в результате деления цифру используют как показатель степени числа 2, а число, получившееся после возведения 2 в эту степень, представляет собой обратный среднегеометрический титр сывороток исследуемой группы добровольцев.

Количество обследованных сывороток Количество сывороток с указанными титрами антител Доля серонегативных лиц, % СГТ
) 1:10 (3,3 ) 1:20 (4,3 ) 1:40 (5,3 ) 1:80 (6,3 ) 1:160 (7,3 ) 1:320 (8,3 ) 1:640 (9,3 ) >=1:1280 (10,3 )
148 10 20 68 40 10 66 1:22

из 148 исследованных сывороток 10 имели титр менее 1:10; 20 — титр 1:10; 68 — титр 1:20; 40 — титр 1:40 и 10 — титр 1:80. Переведя абсолютные значения титров в логарифмы по основанию 2, получим следующую величину среднегеометрического титра (СГТ) антител:

При оценке иммунологической эффективности вакцин против гриппа пользуются критериями, определенными Европейским медицинским агентством (COMMITTEE FOR PROPRIETARY MEDICINAL PRODUCTS (CPMP); http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500003945.pdf).

Определяют фактор сероконверсии, уровень сероконверсии и уровень серопротекции:

— Фактор сероконверсии — кратность нарастания среднегеометрического титра (СГТ) антител после вакцинации по сравнению со среднегеометрическим титром до вакцинации;

— Уровень сероконверсии — суммарная доля лиц, выраженная в процентах, с повышением титра от серонегативного ( или с четырехкратным приростом титра антител после вакцинации, если до вакцинации титр был ;

— Уровень серопротекции — доля лиц, выраженная в процентах, с защитным титром антител через 21-28 дней после вакцинации.

Измерение титров антител проводится одновременно в парных сыворотках крови, взятых непосредственно до и через один месяц после вакцинации.

По крайней мере, один из параметров должен отвечать требованиям, представленным в таблице.

Параметры иммуногенности вакцины гриппа возраст
18-60 лет Старше 60 лет
Фактор сероконверсии Более 2,5 Более 2,0
Уровень сероконверсии Более 40% Более 30%
Уровень серопротекции Более 70% Более 60%

Оценка профилактической эффективности вакцин против гриппа проводится путем расчета индекса эффективности и коэффициента эффективности по следующим формулам:

Индекс эффективности: K = b / a,

где а — доля заболевших гриппом среди вакцинированных,

b — доля заболевших гриппом среди невакцинированных.

Коэффициент эффективности: E = 100% х (b — a) / b,

где а — доля заболевших гриппом среди вакцинированных,

b — доля заболевших гриппом среди невакцинированных.

Субъект Российской Федерации N
п/п
ФИО или идентификационный код Пол Возраст Наличие вакцинации против гриппа за последние 2 года Наличие контакта с животными или птицей Дата сбора образца сыворотки Титр в РТГА с антигеном (в обратных величинах)
A(H1N1) A(H3N2) В
«____» ____________ 20__ г. Руководитель лаборатории
Субъект РФ ФИО или идентификационный код Наименование вакцины Возбудитель (ПЦР) Состояние противогриппозного иммунитета после вакцинации (РТГА)
H1N1 H3N2 B H1N1 H3N2 B
1:40 1:40 1:40
«____» ____________ 20__ г. Руководитель лаборатории
Субъект РФ Наименование вакцины Антигенная формула вируса гриппа* Количество обследованных сывороток Количество сывороток с указанными титрами антител Доля** серонегативных лиц,% Среднегеометрические титры антител
) 1:10 (3,3 ) 1:20 (4,3 ) 1:40 (5,3 ) 1:80 (6,3 ) 1:160 (7,3 ) 1:320 (8,3 ) 1:640 (9,3 ) >=1:1280 (10,3 )
Титр противогриппозных антител в популяции до вакцинации
А (H1N1)
А (H3N2)
В
А (H1N1)
А (H3N2)
В
А (H1N1)
А (H3N2)
В
Титр противогриппозных антител у привитых через 1 месяц после вакцинации
А (H1N1)
А (H3N2)
В
А (H1N1)
А (H3N2)
В
А (H1N1)
А (H3N2)
В
Титр противогриппозных антител в популяции после окончания эпидсезона
А (H1N1)
А (H3N2)
В
А (H1N1)
А (H3N2)
В
А (H1N1)
А (H3N2)
В

* Используются только диагностические штаммы, рекомендованные для производства вакцины.

** — с титром антител 1:20 и ниже.

«____» ____________ 20__ г. Руководитель лаборатории
Руководитель Федеральной службы по
надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
А.Ю. Попова

Утвержены методические указания по изучению популяционного иммунитета к гриппу у населения России (МУ 3.1.3490-17).

Документ устанавливает порядок и организацию проведения серологического мониторинга в рамках эпидемиологического надзора за гриппом. Это необходимо для прогнозирования эпидемиологической ситуации, мониторинга за циркуляцией возбудителей гриппа и объективной оценки эффективности специфической профилактики гриппа.

В методических указаниях представлен общий методический подход, порядок организации и проведения лабораторных исследований по оценке популяционного иммунитета к гриппу. Приведены оценки эффективности вакцинации и вакцин.

Методические указания предназначены для применения в организациях и учреждениях Роспотребнадзора, в лечебно-профилактических и других организациях, обеспечивающих выполнение противоэпидемических мероприятий.

источник