Анализ на титр противовирусного антитела

Титр антител — это максимальное разведение кровяной сыворотки, содержащее в своем составе специфические антитела. При изучении иммунного статуса делается одно разведение сыворотки, соответственно, прилагаемой к тест-системе (1:50, 1:100), после чего при необходимости рекомендуется ее титрование посредством последовательных двукратных разведений.

Установлено, что при наличии в анализе титров антител до обратного значения 1:600-1:800 существует прямо пропорциональная связь между показателем оптической плотности и значением титра антител данной сыворотки. Выше данной обратной величины подобная зависимость нарушается и при последующем двукратном титровании (1:1600, 1:3200, 1:6400 и т.д.) возникает ошибка, которая тем больше, чем больше разведение.

Рассмотрим подробнее, что это — титр антител.

Человеческий организм на протяжении всей жизни «знакомится» с разными возбудителями болезней, химическими веществами, продуктами распада клеток. В ответ на это он продуцирует собственные иммуноглобулины, которые еще называют антителами крови – это специфические белковые соединения, которые формируются из лимфоцитов и выступают в качестве стимуляторов иммунной защиты.

Многим интересно, что значит титры антител. В иммунологических исследованиях выделяется несколько видов антител, действующих строго на конкретные антигены. Их определяют при помощи метода титрования и в их число входят:

IgM – первоначальный иммуноглобулин, который начинает продуцироваться при попадании инфекции в организм. Его роль заключается в стимуляции иммунитета на первичную борьбу с патологическим процессом. Наличие IgG в крови наблюдается через 3-5 суток после начала болезни. Эти антитела формируют устойчивый иммунитет к определенным инфекциям, отвечают за результативность вакцинации.
IgA – защищают пищеварительный тракт, дыхательные пути и мочевыделительную систему от вредоносных микробов. Они связывают патогенные объекты, не давая им закрепиться на слизистых покровах.
IgE – активизируются в целях защиты организма от грибков, паразитов и аллергенов, и локализуются, главным образом, в бронхах, желудке и кишечнике. Данные антитела принимают участие в процессах формирования вторичного иммунитета. В плазме крови в свободном виде их практически нет.
IgD – фракция, которая до сих пор недостаточно изучена. Считается, что эти агенты отвечают за местный иммунитет, начинают продуцироваться при обострении миеломной болезни или хронических инфекций. В сыворотке составляют меньше 1% фракции всех существующих иммуноглобулинов.

Все антитела могут свободно присутствовать в плазме крови либо прикрепляться к поверхностям инфицированных клеток. Узнав антиген, специфические белки начинают соединяться с ним с помощью хвоста. Он служит особым сигналом для иммунных клеток, отвечающих за процессы нейтрализации чужеродных объектов.

С учетом того, как взаимодействуют с антигенами белки, их также подразделяют на несколько типов:

Антиинфекционные – связываются с телом болезнетворных микроорганизмов, уничтожая их.
Антитоксические – не оказывают влияния на жизнедеятельность чужеродных тел, однако обезвреживают токсины, вырабатываемые ими.
Аутоантитела – вещества, которые запускают механизм возникновения аутоиммунных нарушений посредством атаки здоровых клеток организма.
Аллореактивные – это иммуноглобулины, выступающие против антигенов клеток и тканей иных организмов одного и того же биологического вида. Исследование на определение антител этой фракции проводится посредством титрования при трансплантации различных органов.
Изоантитела – белковые соединения, которые продуцируются против агентов клеток иных биологических видов.
Антиидиотипические – соединения, которые предназначены для нейтрализации переизбытка собственных антител.

Как проводится анализ на титры антител? Это очень распространенное исследование.

Современным методом лабораторной диагностики различных заболеваний считается анализ крови ИФА (иммунофлюоресцентный анализ). Этот тест на антитела позволяет определить титр (функциональность) иммуноглобулинов, их разновидность и установить, на каком этапе развития находится конкретный патологический процесс.

Методика определения титра антител состоит из нескольких стадий: сначала лаборант получает у человека сыворотку крови. Полученный образец помещается на специализированную пластиковую планшетку с наличием лунок, в которых присутствуют очищенные антигены искомых возбудителей или белка (в случаях если необходимо определить антиген). В лунки добавляется специальное окрашивающее вещество, которое при возникновении положительной ферментной реакции меняет цвет иммунных комплексов. По плотности окрашивания делается вывод о результатах проведенного анализа крови на титр антител.

Для проведения данного тестирования исследователям необходимо от одного до трех дней. Сам анализ бывает двух видов: качественный и количественный. В первом случае указывается, что в сыворотке крови будет найден или, наоборот, отсутствовать искомый антиген. Тест количественного типа проводится в соответствии с более сложной цепной реакцией и позволяет сделать вывод о концентрации антител, установить их разновидность, оценить с какой скоростью развивается патологический инфекционный процесс.

Полный перечень показаний к проведению ИФА охватить невозможно, однако наиболее распространенными целями осуществления данного анализа является диагностика острых и хронических форм таких инфекционных патологий:

IgG к ВИЧ;
IgM и IgG к гепатитам вирусного происхождения А, B, C, E;
IgM и IgG к цитомегаловирусу;
IgM и IgG к герпесу;
IgM и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
IgG к паразитарным болезням;
IgM и IgG к токсоплазмозу;
IgM и IgG — титры антител к кори, краснухе, сальмонеллезу, клещевому энцефалиту, дизентерии и прочим заболеваниям;
IgM и IgG к инфекциям, которые передаются через половые пути;
IgG к хеликобактерной инфекции;
в целях общей оценки показателей иммунитета и маркеров аутоиммунных заболеваний;
определение онкологических маркеров (фактор некроза опухоли, простатспецифический антиген, раково-эмбриональный антиген и другие);
определение уровня гормонов крови (прогестерон, пролактин, тестостерон, тиреотропный гормон и другие).

В норме титров антител в анализе быть не должно. Результатом качественного типа исследования является однозначное заключение: искомое вещество либо не обнаружено, либо найдено в образце крови. Если же речь идет о количественном типе анализа, то концентрация может быть выражена числовым значением либо количеством знаков «+».

Анализируемыми показателями при этом считаются:

IgM – присутствие данного класса иммуноглобулинов свидетельствует об остром течении инфекционного процесса в организме. Их отсутствие может свидетельствовать об отсутствии возбудителя либо о переходе патологического процесса в хроническую стадию.
IgA при отрицательном результате тестирования на IgM в большинстве случаев свидетельствует о скрыто протекающей либо хронической инфекции.
Совместное присутствие IgM и IgA — два положительных результата свидетельствуют о разгаре острой фазы имеющейся патологии.
IgG — хронизация заболевания либо выздоровление и формирование иммунитета к конкретному инфекционному агенту.

Многих пациентов интересует вопрос – что значит результат отрицательный? Титры антител отсутствуют? Результат, который отмечен знаком «—», считается отрицательным и означает, что иммунитета к определенному инфекционному возбудителю в организме пациента не обнаружено.

Еще одним важным количественным показателем является индекс авидности антител, который выражается в процентах. Он указывает на то, какой промежуток времени прошел от начала развития инфекционного процесса. Чем такой индекс выше, тем длиннее данный период.

Бесспорными преимуществами данной методики исследования считаются ее специфичность и высокая чувствительность. Чувствительность означает возможность распознать искомый элемент, даже если его содержание в образце невысокое. Специфичность подразумевает безошибочность диагностирования: если результаты положительные, значит, обнаружены именно те антитела или антигены, которые предполагались.

Высокая степень технологичности осуществления иммуноферментного анализа методом титрования минимизирует воздействие человеческого фактора, что существенно уменьшает вероятность ошибки. Основная масса используемых в современных клиниках реактивов и тест-систем для ИФА производятся в промышленных условиях, что гарантирует достоверный результат.

Основным недостатком данной диагностической методики является то, что для ее проведения необходимо знать, что именно нужно найти. Анализ подразумевает, что врач заранее предполагает, каким патологическим агентом вызвано то или иное заболевание.

Еще один недостаток данного исследования заключается в том, что ИФА на титры антител – это довольно дорогой метод анализа крови, что часто не по карману многим пациентам. А это означает, что к назначению такой диагностики врач должен подходить с умом.

источник

Заражение вирусом — обычное дело для большинства людей. С этими внеклеточными агентами мы сталкиваемся буквально ежедневно. Но что значит положительный анализ? И почему он может быть таким, когда никаких симптомов или ухудшения состояния не наблюдается? Разобраться в разных классах антител к вирусам поможет MedAboutMe.

Инфекция начинается с острого периода: вирус активно размножается в клетках, а иммунная система вырабатывает защитные механизмы. В зависимости от вида микроорганизмов, после этого может наступить полное выздоровление, носительство или же болезнь перейдет в хроническую форму с последующими обострениями.

Чаще всего острая стадия характеризуется наличием симптомов. Например, грипп и другие острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) проявляются высокой температурой, кашлем, общим ухудшением состояния. Ветряная оспа отличается выраженной сыпью, а паротит — воспалением заушных лимфоузлов. Однако в некоторых случаях, даже на начальном этапе, вирус в организме не дает о себе знать — болезнь протекает бессимптомно.

Диагностику осложняет и то, что схожие признаки могут быть у разных вирусов. Например, папилломавирусы могут вызывать образование бородавок и кондилом, но при этом быть разными по типу, а значит, и по опасности. Некоторые виды могут проходить без лечения, другие требуют контроля, поскольку являются онкогенными.

Именно поэтому окончательный диагноз можно поставить только после анализа на антитела к вирусу — иммуноферментного исследования. Диагностика крови выявит конкретный тип, а также поможет определить стадию болезни, интенсивность поражения вирусом и даже заразность человека. В некоторых случаях используется анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция), который помогает выявить даже минимальное количество вируса в пробе.

После заражения вирусом активизируется иммунная система: к каждому конкретному чужеродному объекту (антигену) вырабатываются иммуноглобулины (антитела), которые способны нейтрализовать его. Всего у человека выделяют пять классов таких антител — IgG, IgA, IgM, IgD, IgE. В иммунитете каждый из них играет свою роль. При анализе на вирусную инфекцию наиболее важными являются два показателя — IgG, IgM. Именно по ним определяется стадия и степень болезни, отслеживается процесс выздоровления.

IgM — первые антитела, которые вырабатываются организмом при заражении вирусом. Появляются они во время острой стадии болезни, а также в период обострений хронического заболевания. Для разных вирусов период обнаружения IgM в крови разнится: например, при ОРВИ их количество достигнет пика уже на первой неделе, а при вирусе иммунодефицита человека (ВИЧ) или вирусном гепатите — лишь спустя 4-5 недель после предполагаемого заражения.

IgG — антитела, которые присутствуют в крови на стадии длительной болезни, выздоровления или хронического течения в период ремиссии. И если IgM живут несколько месяцев, то IgG к некоторым вирусам способны оставаться на всю жизнь. Даже тогда, когда сама инфекция давно побеждена.

Именно соотношение показателей IgG и IgM дает возможность врачу оценить состояние человека. В частности, предположить, как долго инфекция находится в организме. Возможные комбинации говорят о следующем:

Нет IgM и IgG. Организм не встречался с вирусом, нет иммунитета. Такая картина — не всегда повод успокоиться. Негативный анализ на некоторые виды вирусов ставит человека в группу риска по первичному заражению. Например, это актуально для тех женщин, которые планируют ребенка. В случае получения таких результатов на краснуху, паротит, ветрянку и прочие вирусы рекомендуется отложить беременность и пройти вакцинацию.
Есть IgM, нет IgG. Первичное заражение, острая стадия заболевания.
Нет IgM, есть IgG. Перенесенное заболевание, реже хроническая форма в стадии ремиссии. Приобретенный иммунитет.
Есть IgM и IgG. Хроническое заболевание в период обострения или окончание болезни.

Человеческий иммунитет делится на врожденный и приобретенный. Системы первого способны атаковать любой чужеродный микроорганизм, токсин и прочее. При этом эффективность такой защиты далеко не всегда высока. Приобретенный иммунитет, напротив, рассчитан на конкретные антигены — он способен противостоять лишь тем вирусам в организме, которые уже заражали человека.

За приобретенный иммунитет, в частности, отвечают и иммуноглобулины. В первую очередь, класса IgG, которые способны оставаться в крови человека на протяжении всей жизни. При первичном заражении иммунная система лишь производит эти антитела к вирусу. При следующих случаях заражения они быстро атакуют и нейтрализуют антиген, и заболевание просто не развивается.

Именно приобретенным иммунитетом объясняется понятие детских инфекционных болезней. Поскольку вирусы достаточно распространены, человек сталкивается с ними еще в первые годы жизни, переносит острую форму, и в дальнейшем получает надежную защиту в виде антител IgG.

И хотя большинство подобных заболеваний (краснуха, паротит, ветрянка) переносится легко, они все же могут давать осложнения на здоровье человека. Другие (полиомиелит) грозят опасными последствиями. Поэтому ко многим из них разумнее проводить вакцинацию. С помощью прививки запускается процесс производства антител к вирусу класса IgG, но при этом человек не переносит болезнь.

Некоторые вирусы в организме остаются пожизненно. Связано это с их возможностями защиты — одни проникают в нервную систему и там перестают быть доступными для иммунных клеток, а ВИЧ, например, атакует сами лимфоциты.

При этом наличие вируса не всегда говорит о самом заболевании. Иногда человек остается просто его носителем и на протяжении всей жизни не ощущает последствий вирусной инфекции. Примером таких антигенов могут быть герпесвирусы — простой герпес 1 и 2 типов, цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр. Большинство населения планеты инфицировано этими внеклеточными агентами, однако болезни, связанные с ними, встречаются нечасто.

Существуют вирусы, живущие в организме человека на протяжении всей жизни, но при этом вызывающие достаточно серьезные заболевания. Классическим примером является ВИЧ, который без должной антиретровирусной терапии вызывает СПИД — смертельный синдром приобретенного иммунодефицита. Вирус гепатита В у взрослых людей редко переходит в хроническую стадию (всего в 5-10% случаев), однако при таком исходе также не поддается лечению. Гепатит В может вызывать рак печени и цирроз. А вирусы папилломы человека (ВПЧ) 16 и 18 типов способны провоцировать рак шейки матки. При этом сегодня от гепатита В и ВПЧ указанных типов существуют эффективные вакцины, которые помогают избежать заражения вирусом.

источник

В настоящее время широко применяются 4 способа диагностики вирусных инфекций: 1) выделение вируса в культуре клеток (наиболее точный способ); 2) выявление цитоплазматических, внутриядерных включений и гигантских многоядерных клеток в окрашенных мазках; 3) выявление не менее чем четырехкратного возрастания титра антител к вирусу на разных стадиях заболевания; 4) выявление вируса или его антигенов в тканях и биологических жидкостях с помощью экспресс-тестов.

А. Материалом для выделения вируса в культуре клеток могут служить мазки со слизистой глотки и носоглотки, мокрота, моча, кал, кровь, СМЖ , экссудат, биоптат. При взятии проб соблюдают правила асептики, пробу помещают в стерильный контейнер и транспортируют в лабораторию. При подозрении на особо опасные инфекции соблюдают дополнительные меры предосторожности и используют специальное оборудование. Выделение возбудителя в этом случае проводят в специализированных лабораториях.

1. Делают надрез скальпелем по периферии везикулы.

2. Приподнимают отслоившийся эпидермис и удаляют жидкость с помощью тампона.

3. Скальпелем делают соскоб со дна везикулы. При этом следует избегать кровотечения.

4. Полученный материал переносят на 2 чистых предметных стекла и делают 2 мазка диаметром 5—10 мм.

5. Мазки высушивают на воздухе и фиксируют спиртом.

6. Фиксированные мазки окрашивают по Гимзе или обрабатывают антителами, меченными флюоресцентным красителем.

7. Для получения надежных результатов соскоб производят трижды.

В. Продукцию антител к вирусным антигенам можно оценить с помощью реакции нейтрализации, реакции торможения гемагглютинации, реакции связывания комплемента и твердофазного ИФА . Пробы крови (2—10 мл) забирают на ранней стадии заболевания и спустя 2—3 нед. В стерильных условиях получают сыворотку, помещают ее в стерильную пробирку и до отправки в лабораторию хранят в холодильнике или замораживают (–20°C). Диагностически значимым считается четырехкратное повышение титра антител в ходе заболевания.

2. Реакция нейтрализации — высокоспецифичный метод, основанный на связывании вируса антителами и его нейтрализации. Метод позволяет определить уровень противовирусных антител и способность исследуемой сыворотки нейтрализовать вирусы. Суть метода заключается в следующем: 1) производят серийные разведения исследуемой сыворотки; 2) разные разведения сыворотки смешивают с известным количеством вируса; 3) сыворотку добавляют к культуре клеток, восприимчивой к данному вирусу; 4) нейтрализующую активность сыворотки оценивают по снижению способности вирусов инфицировать культуру клеток.

3. Реакция торможения гемагглютинации — высокоспецифичный и чувствительный метод, позволяющий определить даже незначительное количество противовирусных антител в биологических жидкостях. Этот метод основан на способности некоторых вирусов сорбироваться на эритроцитах, в частности на человеческих эритроцитах группы 0 и куриных эритроцитах, и вызывать гемагглютинацию. Если исследуемая биологическая жидкость содержит противовирусные антитела, при ее добавлении к вирусам будет наблюдаться торможение гемагглютинации. Чем выше содержание противовирусных антител в исследуемой жидкости, тем сильнее подавляется гемагглютинация.

Г. Для экспресс-диагностики вирусных инфекций применяют серологические методы, основанные на применении стандартных противовирусных антител. Эти методы перечислены ниже.

Д. Инфекционный мононуклеоз вызывает вирус Эпштейна—Барр. Заболевание обычно возникает в детском и молодом возрасте. К характерным проявлениям инфекционного мононуклеоза относятся лихорадка, боль в горле, увеличение лимфоузлов, спленомегалия, лимфоцитоз. Поскольку сходная клиническая картина наблюдается также при цитомегаловирусной инфекции, бруцеллезе, туляремии, остром токсоплазмозе и на ранних стадиях краснухи, для диагностики инфекционного мононуклеоза используют серологические методы.

1. Гетерофильные антитела — IgM , взаимодействующие с антигенами животных неродственных видов, например барана или быка. Эти антитела выявляются примерно у 90% больных инфекционным мононуклеозом. Гетерофильные антитела в низком титре могут присутствовать и у здоровых людей.

а. Проба Пауля—Буннелля — стандартный метод лабораторной диагностики инфекционного мононуклеоза. Он заключается в выявлении гетерофильных антител к эритроцитам барана с помощью реакции гемагглютинации. Гетерофильные антитела при инфекционном мононуклеозе отличаются от гетерофильных антител, присутствующих в сыворотке здоровых и больных сывороточной болезнью, по способности абсорбироваться тканью почек морской свинки и эритроцитами быка. Диагностически значимым считается титр 1:128—1:256. Гетерофильные антитела обычно обнаруживают через 3—4 нед после начала заболевания. Реакция Пауля—Буннелля бывает положительной при лейкозах, вирусных гепатитах, цитомегаловирусной инфекции, лимфоме Беркитта, ревматоидном артрите и после введения иммунных сывороток. Титр антител не отражает тяжести заболевания, однако при измерении в динамике позволяет следить за течением заболевания.

б. Экспресс-тест на гетерофильные антитела (Моно-Тест, Уэмпоул Лэборэтрис). Гетерофильные антитела в этом исследовании выявляются при агглютинации стабилизированных формалином эритроцитов лошади. Абсорбцию тканью почек морской свинки и эритроцитами быка не проводят.

2. Специальные серологические методы. Инфекционный мононуклеоз не всегда сопровождается появлением гетерофильных антител. Они, в частности, отсутствуют у детей. В этом случае применяют следующие серологические методы.

а. Антитела к капсидному антигену вируса Эпштейна—Барр выявляют методом иммунофлюоресценции. На ранней стадии заболевания в сыворотке больного появляются IgM к капсидному антигену. Их титр становится максимальным через 2 нед после начала заболевания и снижается в течение 2—3 мес. Присутствие IgM к капсидному антигену вируса Эпштейна—Барр свидетельствует о недавнем заражении, а IgG — о ранее перенесенном заболевании.

б. Антитела к ранним антигенам вируса Эпштейна—Барр выявляются методом непрямой иммунофлюоресценции. Титр этих антител становится максимальным через 2—3 нед после начала заболевания.

в. Антитела к ядерному антигену вируса Эпштейна—Барр выявляются методом непрямой иммунофлюоресценции с применением комплемента и меченых антител к нему. Антитела к ядерному антигену появляются примерно через 4 нед после начала заболевания и сохраняются на протяжении всей жизни.

Е. Вирусные гепатиты — системные инфекционные заболевания, проявляющиеся преимущественным поражением печени. Их вызывают вирусы гепатитов A, B, C, D, E, вирус Эпштейна—Барр, цитомегаловирус, вирус varicella-zoster, аденовирусы.

1. Вирус гепатита A — РНК -содержащий вирус размером 27 нм. Наиболее достоверный лабораторный признак заболевания — выявление IgM к вирусу гепатита A с помощью РИА или твердофазного ИФА . Реже используется модификация метода гемагглютинации, основанная на агглютинации эритроцитов при добавлении к ним вируса и сыворотки (источник комплемента и противовирусных антител). Диагностически значимым считается четырехкратное повышение титра противовирусных антител в течение 4 нед. Выявление вирусов в кале проводят с помощью электронной микроскопии проб, обработанных противовирусными антителами.

2. Вирус гепатита B содержит двухцепочечную ДНК , окруженную нуклеокапсидом размером 27 нм, в состав которого входит HBcAg , и внешней оболочкой, содержащей HBsAg . HBsAg обнаруживается в крови за 6 нед до появления симптомов заболевания и может выявляться длительное время как при их наличии, так и в их отсутствие (при хроническом гепатите и носительстве). На ранних стадиях заболевания этот антиген обнаруживается у 90—95% больных. Антитела к HBsAg появляются в сыворотке через 2—26 нед после исчезновения HBsAg , выявление этих антител свидетельствует о выздоровлении и развитии иммунитета. Антитела к HBcAg появляются в крови в острой стадии заболевания. Даже однократное выявление этих антител в сыворотке с высокой вероятностью указывает на острый гепатит, вызванный вирусом гепатита B. У лиц, в сыворотке которых после выздоровления длительное время сохраняется HBsAg , часто выявляются и антитела к HBcAg . Третий антиген вируса гепатита B — HBeAg — появляется обычно вслед за HBsAg в конце инкубационного периода или на ранней стадии заболевания. Появление в сыворотке HBeAg свидетельствует об остром, а выявление этого антигена в течение длительного времени — о хроническом гепатите, вызванном вирусом гепатита B. После исчезновения HBeAg в сыворотке появляются антитела к нему. Присутствие этих антител в сыворотке свидетельствует о выздоровлении, а при длительном выявлении HBsAg — о носительстве вируса гепатита B. Риск заражения от больного, в сыворотке которого одновременно выявляются HBsAg и HBeAg , в 10 раз выше, чем от больного, в сыворотке которого одновременно выявляются HBsAg и антитела к HBeAg , а HBeAg отсутствует. Выявление в сыворотке больного и HBsAg , и HBeAg свидетельствует о высоком риске заражения при контакте с этим больным. Комплексное определение антигенов вируса гепатита B и антител к ним позволяет поставить диагноз, определить стадию заболевания, оценить риск заражения и иммунный ответ.

3. Вирус гепатита C относится к РНК -содержащим вирусам. Заражение вирусом гепатита C — основная причина посттрансфузионного гепатита ни-A ни-B (70—90%). С 1990 г. стало возможным определение антител к вирусу гепатита C. Их обычно удается выявить не ранее чем через 3 мес после начала заболевания, когда начинает снижаться активность АсАТ и АлАТ . Поскольку антитела к вирусу гепатита C не выполняют защитную функцию, их появление не отражает развития иммунитета. Следует еще раз подчеркнуть, что отсутствие антител к вирусу гепатита C не исключает заболевания.

4. Вирус гепатита D состоит из дефектной РНК и HDAg , окруженных внешней оболочкой, содержащей HBsAg . Вирус гепатита D реплицируется только в присутствии вируса гепатита B и обнаруживается главным образом у наркоманов, гомосексуалистов и больных гемофилией. Этот вирус чаще, чем другие возбудители вирусного гепатита, бывает причиной молниеносного гепатита и цирроза печени. Серодиагностика гепатита D основана на применении антител к HDAg . Гепатит D исключают при рецидиве желтухи после перенесенного гепатита B.

5. Вирус гепатита E. Механизм передачи фекально-оральный. Во многих странах наблюдаются вспышки гепатита E, вызванного употреблением зараженной воды. Наборы для выявления антител к вирусу гепатита E можно приобрести в Центре по контролю заболеваемости.

Ж. ВИЧ . Для диагностики ВИЧ -инфекции используется твердофазный ИФА и иммуноблоттинг.

Источник: Г.Лолор-младший, Т.Фишер, Д.Адельман «Клиническая иммунология и аллергология» (пер. с англ.), Москва, «Практика», 2000

источник

Известно, что титр антител — это максимальное разведение сыворотки, содержащее специфические антитела. При определении иммунного статуса делают одно разведение сыворотки, соответственно прилагаемой к тест-системе инструкции (1: 50, 1: 100) и затем при необходимости рекомендуют ее дальнейшее титрование путем последовательных двукратных разведений. Нами установлено, что при наличии в сыворотке крови антител в титре до величины обратной 1: 600-1:800 существует прямопропорциональная зависимость между значением оптической плотности и показателем титра антител исследуемой сыворотки (фиг.1). Выше этой обратной величины титра прямопропорциональная зависимость нарушается и при дальнейшем двукратном шаге титрования (1:1600, 1:3200, 1:6400 и т. д.) получают ошибку, которая тем больше, чем больше разведение. Это показано прямым титрованием сыворотки, при котором каждое разведение сыворотки делают из цельной сыворотки, при этом установлено, что чем меньше шаг при типировании, тем меньше ошибка 43. Титр вируса и его методы пределения 1) количество вирусов в ед. объема (обычно в 1 мл) суспензии. Подсчитывают в электронном микроскопе или методом бляшек (см. Бляшки) на к-ре клеток. В первом случае выявляют все вирионы, во втором — только инфекц.; 2) количество инфекц. ед., содержащихся в 1 мл вирусной суспензии. Определяют путем заражения 10-кратными разведениями материала животных, КЭ, к-р клеток. За титр вируса принимают наибольшее разведение, вызвавшее локальное или общее поражение тест-системы. В том и другом случае титр вируса выражают в виде десятичного логарифма

или Под титром вируса понимают выражение его концентрации в материале. Титр вируса — это количество вируса, содержащееся в единице объема материала. В вирусологической работе при экспериментальном заражении или производстве и оценке активности противовирусных и диагностических препаратов постоянно возникает необходимость определения количества вирусов в том или ином материале. Количество вируса выражают в единицах действия или единицах активности

44. титрование вирусов по инфекционному действию Этот метод более универсален. Количество вируса (титр вируса) при этом измеряется в эффективной 50 % дозе – ЭД50. 1 ЭД50 = доза вируса, способная вызывать инфекционный эффект у 50 % зараженных тест-объектов. Для каждого вируса подбирают чувствительный к нему тест-объект — лабораторные животные (обычно белые мыши), куриные эмбрионы или культура клеток. Инфекционный эффект или действие вируса на разных тест-системах может проявляться гибелью, клиническими симптомами, патологоанатомическими изменениями и цитопатическим эффектом. У лабораторных животных и куриных эмбрионов действие вируса оценивается в летальной и инфекционной дозах: 1 ЛД50 — доза вируса, убивающая 50 % лабораторных животных; Методика определения титра вируса в единицах 50 % инфекционного действия (ЛД50, ЭЛД50, ИД50, ЭИД50 и ЦПД50) заключается в том, чтобы найти такое разведение испытуемого вируссодержащего материала, в объеме заражающей дозы которого содержалась бы одна ЭД50, а затем рассчитать, сколько таких единиц вируса содержится в таком же объеме вируссодержащего материала

45. титрование вирусов по единичному инфекционному действию Из локальных повреждений, вызываемых вирусами, наиболее известны бляшки (островки мертвых, не окрашенных клеток в слое окрашенных живых) в зараженных культурах клеток, залитых агаровой средой с красителем нейтральрот и оспины (некротические узелки) на ХАО куриных эмбрионов, зараженных оспенными и некоторыми другими вирусами. Количество вируса при этом может быть измерено, соответственно, в бляшкообразуюших единицах (БОЕ) и оспообразующих единицах (ООЕ): 1 БОЕ = доза вируса, вызвавшая образование одной бляшки; 1 ООЕ = доза вируса, вызвавшая образование одной оспины. Методика определения титра вируса в БОЕ (ООЕ) заключается в следующем: 1.. Точно отмеренными и строго одинаковыми объемами исследуемого вируссодержащего материала заражают несколько культур клеток в матрасах или куриных эмбрионов на ХАО. 2. Подсчитывают количество образовавшихся в каждом матрасе бляшек или в каждом курином эмбрионе оспин. 3. Рассчитывают среднее арифметическое этого количества, которое равно количеству БОЕ или ООЕ вируса в заражающей дозе вируссодержащего материала. 4. Титр вируса (Т) рассчитывают по формуле: Т = среднее арифметическое количество бляшек (оспин) / объем заражающей дозы х разведение вируссодержащего материала. Считается, что счету поддаются бляшки и оспины, если их количество не превышает 50 на матрас или ХАО. Иногда, в случае высокой концентрации вируса в материале, бляшки в культуре клеток или оспины на ХАО могут сливаться, и их невозможно будет сосчитать. В таких случаях готовят несколько десятикратных разведений испытуемого материала и каждым разведением в одинаковых дозах заражают равные группы культур клеток или куриных эмбрионов, затем рассчитывают среднее арифметическое количество бляшек или оспин для каждого разведения. Титр вируса в этом случае рассчитывается по более сложной формуле: Т = сумма средних арифметических количества бляшек (оспин) в каждом разведении / объем заражающей дозы х сумму разведений вируссодержащего материалаМетод титрования вирусов в БОЕ дает наиболее достоверные данные о концентрации вирусов, но он встречает технические трудности с подсчетом бляшек. Что касается оспин, то их использование ограничивается довольно немногочисленными вирусами, способными образовывать узелки на ХАО куриных эмбрионов.

46. титрование вирусов по гемаглютинирующему действию. Некоторые вирусы при определенных условиях способны агглютинировать эритроциты определенных видов животных. Титр таких вирусов можно выразить в гемагглютииирующих единицах (ГАЕ). 1 ГАЕ = доза вируса, способная агглютинировать около 50 % эритроцитов, содержащихся в том же, что и вирус, объеме 1 % суспензии отмытых эритроцитов. Методика определения титра вируса по гемагглютинирующему действию такова: 1) готовят 1 % суспензию отмытых эритроцитов животных определенного вида; 2) готовят ряд последовательных 2-кратных разведений исследуемого вируссодержащего материала в плексигласовых пластинах в равных объемах; 3) ко всем разведениям вируссодержащего материала добавляют 1 % суспензию отмытых эритроцитов в таких же объемах; 4) смеси выдерживают установленное время при определенной температуре и оценивают интенсивность гемагглютииации в каждой лунке (пробирке) в крестах. То наивысшее разведение вируссодержащего материала, с которым агглютинирует 50 % эритроцитов (не менее чем на два креста), содержит 1 ГАЕ. Титр вируса будет больше во столько раз, во сколько раз разведен материал, чтобы получить 1 ГАЕ. Если высшим разведением, дающим гемагглютинацию на два креста, будет 1:128, это значит, что в объеме титрования вируса, разведенного в 128 раз, содержится 1 ГАЕ. В этом случае титр вируса в неразведенном материале равен 128 ГАЕ.

47. гемагглютинирующие свойства вирусов. Механизм РГА и ее практическое использование. Гемагглютинирующими свойствами обладают те вирусы, вирионы которых имеют на поверхности рецепторы, способные взаимодействовать с рецепторами оболочек эритроцитов. Такие вирионы адсорбируются на поверхности одного или нескольких эритроцитов и склеивают их. При добавлении к капле отмытых эритроцитов капли суспензии гемагглютинируюшего вируса, полученной от зараженного эмбриона, образуют хлопья, видимые невооруженным глазом на поверхности стекла. В пробирке гемагглютинация будет выглядеть в виде «зонтика» осевших хлопьев эритроцитов. Положительная гемагглютинация, образовавшаяся через 5-10 минут, указывает на присутствие вируса в суспензии, а также выявляет гемагглютинируюшую активность его с определенным видом эритроцитов, что служит вспомогательным диагностическим признаком. Часто заражение эмбриона или пассаж может оказаться «слепым», т.е. при вскрытии эмбриона не удается обнаружить ни одного признака размножения вируса, хотя он и находится в исследуемом материале.

источник

При подозрении на развитие инфекционного заболевания врач назначает пациенту сдать анализы на инфекции. Многие инфекционные заболевания имеют сходные симптомы. Для дифференцирования заболевания, уточнения диагноза, назначения правильной терапии доктор рекомендует пациенту сдать анализы на инфекции определенного вида. Так какие существуют виды инфекций, и какие анализы сдают на инфекции?

Основными методами лабораторной диагностики вирусной инфекции являются серологические анализы крови и определение вируса в культуре клеток. Для проведения анализа вируса в культуре клеток используют мазок из носоглотки, трахеи, бронхов, везикулярную жидкость, мочу, кал.

Образец материала помещают на специальную питательную среду, где выращивают колонии микроорганизмов. В некоторых случаях вирус можно идентифицировать под световым микроскопом. Но чаще всего для точной идентификации применяют иммунофлюоресцентное окрашивание с использованием антител к данному вирусу.

Сдать анализы на инфекции вирусной природы назначают пациентам при подозрении развития герпеса, цитомегаловируса, вируса папилломы человека, вирусных гепатитов, капельных вирусов (паротит, краснуха, корь).

Анализы крови на вирусные инфекции бывают трех видов.

Основан на применении специфических вирусных белков, которые получены методом генной инженерии или выделены из инфицированных клеток. На каждый вид возбудителя вырабатываются определенные антитела, которые не могут связываться ни с каким другим возбудителем. В результате этого обеспечивается достаточно высокая специфичность данного исследования. Иммуноферментный анализ можно использовать как для качественной оценки, так и для количественной оценки исследуемого образца.

Для определения антител к конкретному вирусу используют следующие реакции:

метод непрямой иммунофлюоресценции – взаимодействие сывороточных антител с антигенами вирусов в зараженных клетках;
реакции гемагглютинации и гемадсорбции – основаны на блокировании РНК-содержащих вирусов сывороточными антителами.

С помощью данного метода можно выявить одновременно антитела к нескольким вирусам. Данный метод больше подходит для качественной оценки вирусов.

Как правило проводят анализы на следующие виды патогенных бактерий.

Стафилококк, стрептококк, энтерококк. Данные инфекции обычно поражают мочеполовые органы, дыхательные пути, мышцы, кости, суставы. Метод анализа — бактериальный посев мазка на питательные среды.
Хламидии – внутриклеточные паразиты, вызывающие инфекционные заболевания мочеполовой системы у женщин и мужчин. Методами анализа на выявление хламидий являются микроскопия соскобов со слизистых, определение возбудителя в культуре клеток, иммуноферментный анализ (ИФА).
Микоплазмоз – микроорганизмы, которые занимают промежуточное положение между бактериями, вирусами и простейшими. Развитие данной инфекции приводит к хроническому воспалению мочевых путей, дыхательной системы, половых органов и суставов. Наиболее информативным анализом на микоплазмоз является иммуноферментный анализ.
Уреаплазмоз – инфекция, которая способствует развитию пиелонефрита, простатита и уретрита у мужчин, воспалительных процессов матки и придатков у женщин.

Инфекции, которые передаются половым путем, достаточно разрушительны не только для половой системы, но и для всего организма. Но в то же время, инфицированный человек может не ощущать и даже не догадываться, что он болен. Поэтому сдать анализы на скрытые инфекции – практически единственная возможность диагностировать и своевременно начать лечение инфекционной болезни.

Наиболее часто встречающимися скрытыми инфекциями в наши дни являются уреаплазмоз, микоплазмоз, хламидиоз, герпес, цитомегаловирус. Данные заболевания выявить без специальной диагностики практически невозможно. Поэтому если человек, инфицированный этими заболеваниями, и обращается к врачу, то уже на достаточно тяжелой стадии болезни. Но скрытые инфекции опасны своими осложнениями, одним из которых является женское и мужское бесплодие.

Правила правильной сдачи анализов на скрытые инфекции:

за 10–14 дней до сдачи анализа рекомендуется отказаться от приема антибактериальных препаратов, иммуномодуляторов и некоторых других лекарственных средств;
за 36 часов до анализа нужно воздержаться от половых отношений;
за 24 часа до сдачи анализа нельзя использовать местные контрацептивы, свечи, мази, средства для интимной гигиены, проводить спринцевания.

Перед тем, как сдать анализ, мужчина должен не мочиться в течение двух часов. Анализ мазка для исследования у мужчины берут из уретры. У женщины берут гинекологический мазок на скрытые инфекции. Также врач может назначить анализ на инфекции и мужчине, и женщине методом исследования крови. Для этого у пациента берут кровь из вены.

Не существует 100% точного метода диагностики скрытых инфекций. Каждый способ исследования имеет достоинства и недостатки. Поэтому для того чтобы точно установить диагноз, назначают несколько методов анализа.

В диагностике скрытых инфекций применяют следующие методы:

иммуноферментный анализ (ИФА) с помощью которого в крови определяют антитела (особые белковые молекулы), вырабатываемые организмом для борьбы с инфекционными заболеваниями;
ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция) – в крови или соскобе выявляют ДНК возбудителя инфекционной болезни;
культуральное исследование (посев) – выращивание в питательной среде возбудителей инфекций, которые затем можно разглядеть в микроскоп;
метод окрашивания по Грамму – окрашивание мазка специальными красителями, в результате чего возбудителей инфекции можно обнаружить без специального оборудования в течение нескольких минут.

Результаты анализа крови на скрытые инфекции обычно бывают готовы через сутки. Культуральное исследование материала завершается через 7–10 суток.

источник

Анализ крови на антитела – виды (ИФА, РИА, иммуноблоттинг, серологические методики), норма, расшифровка результатов. Где можно сдать анализ крови на антитела? Цена исследования.

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Анализ крови на антитела означает совокупное название целого ряда лабораторных методов диагностики, предназначенных для определения различных веществ и микроорганизмов в крови по наличию антител к этим выявляемым биологическим структурам.

Чтобы понимать значение термина «анализ крови на антитела», нужно знать, что такое антитела, против чего и кого они бывают, и как используются в лабораторных методах.

Итак, антитела представляют собой белки, которые вырабатываются клетками иммунной системы (В-лимфоцитами) против каких-либо микробов, попавших в организм, либо против биохимических молекул. Вырабатываемые иммунными клетками антитела предназначены для уничтожения тех микроорганизмов или биохимических соединений, против которых они были синтезированы. Иными словами, когда иммунные клетки синтезируют достаточное количество антител, последние появляются в системном кровотоке и начинают планомерное уничтожение микробов или биологических молекул, попавших в организм человека и вызывающих различные заболевания.

Иммунные клетки вырабатывают исключительно специфичные антитела, которые работают и уничтожают только строго определенный вид микробов или биомолекул, ранее распознанные иммунной системной, как чужеродные. Схематично это происходит следующим образом: в организм попадает какой-либо патогенный микроорганизм или биологическая молекула. На это соединение или микроб «садится» клетка иммунной системы, которая как бы «считывает» его характеристики (имеющиеся на поверхности белки-рецепторы), то есть «знакомится». Далее иммунная клетка-посредник путем сложного каскада биохимических реакций передает «считанную информацию» лимфоцитам. Получившие «информацию» лимфоциты активируются – они как бы приняли «задачу». И после активации лимфоциты начинают синтезировать антитела, которые содержат рецепторы, позволяющие им «узнавать» и прицепляться к поверхности только тех микробов или молекул, «характеристики» которых были переданы клетками-посредниками. В результате получаются строго специфические антитела, эффективно уничтожающие исключительно «узнанные» патогенные микробы и биомолекулы.

Такие специфические антитела нарабатываются в организме всегда при попадании в него какого-либо патогенного микроорганизма – бактерии, вируса, простейшего, гельминта и т.д. Также антитела могут синтезироваться для уничтожения биологических молекул, которые иммунная система признала «чужеродными». Например, при попадании в организм крови другой группы иммунная система распознает ее эритроциты, как «чужие», передает сигнал лимфоцитам, которые нарабатывают антитела, в свою очередь, уничтожающие чужеродные эритроциты. Из-за этого развивается реакция «хозяин против трансплантата».

Но всегда иммунная система вырабатывает антитела, действующие строго против конкретного микроба или биомолекулы, а не против всех, кто «похож» на них. Благодаря подобной специфичности и избирательности не происходит уничтожения антителами нужных клеток и биомолекул, а подвергаются нападению только признанные иммунной системой «чужими» и опасными.

Антитела на языке биохимии называются иммуноглобулинами, и обозначаются английской аббревиатурой Ig. В настоящее время выделяют пять классов иммуноглобулинов, которые может синтезировать В-лимфоцит, – это иммуноглобулины А (IgA), иммуноглобулины G (IgG), иммуноглобулины М (IgM), иммуноглобулины Е (IgE) и иммуноглобулины D (IgD). Каждый класс иммуноглобулинов обладает вышеописанной специфичностью в отношении уничтожаемых им микробов или биомолекул. Но каждый класс иммуноглобулинов имеет и, так сказать, свой «фронт», на котором они действуют.

Так, иммуноглобулины А, главным образом, расположены на слизистых оболочках, и обеспечивают уничтожение патогенных микробов во рту, носу, носоглотке, мочеиспускательном канале, влагалище. Иммуноглобулины М нарабатываются первыми при попадании микроба в кровоток, и потому считаются ответственными за острый воспалительный процесс. Иммуноглобулины G, напротив, нарабатываются медленнее, но зато долго циркулируют в крови и обеспечивают уничтожение всех остатков микробов, попавших в организм. Именно иммуноглобулины G ответственны за хронический инфекционно-воспалительный процесс, который они поддерживают вялотекущим, уничтожая патогенные микробы настолько, что они не могут привести к смертельному исходу, но недостаточно для их полного удаления из организма. Иммуноглобулины Е обеспечивают постоянное протекание аллергических реакций, так как вырабатываются в ответ на различные антигены, присутствующие в окружающей среде. А иммуноглобулины D выполняют разные функции.

Таким образом, обобщая вышесказанное, можно коротко резюмировать, что антитела в крови могут быть различных классов, и что каждое антитело строго специфично к какому-либо патогенному микробу либо к биомолекуле.

Когда лабораторными методами определяют наличие в крови антител, то обязательно указывают, к какой биомолекуле или к какому микробу ищут антитела. Определение антител к какому-либо микробу позволяет понять, заражен человек этим микроорганизмом или нет, так как если заражение отсутствует, то и антител в крови не будет. Но если заражение имеется, то в крови у человека будут циркулировать антитела, нарабатываемые иммунной системой для уничтожения микроорганизма.

Кроме того, определение антител в крови используют для того, чтобы понять, болел ли в прошлом человек какой-либо инфекцией. Такое применение анализа на антитела возможно благодаря тому, что даже после полного выздоровления в крови у человека остается небольшое количество антител (клеток памяти), уничтоживших патогенный микроб. Эти антитела циркулируют в крови «на всякий случай», чтобы при повторном попадании в организм такого же, уже знакомого микроба сразу его уничтожить и даже не дать болезни начаться. Собственно, именно такие клетки памяти и обеспечивают то, что называется иммунитетом к инфекции, а именно – то, что человек, перенесший болезнь, больше ей не заражается.

Анализ крови на антитела проводят с целью обнаружения антител к тому или иному конкретному микроорганизму или биомолекуле. Причем для обнаружения каждого конкретного вида антител делают отдельный анализ. Например, иммунная система организма против вируса гепатита В вырабатывает несколько разных антител – антитела против оболочки, антитела против ДНК вируса и т.д. Соответственно, для обнаружения антител против оболочки вируса гепатита В выполняют один анализ, а для выявления антител против ДНК вируса – другой анализ, и т.д. Таким образом, совершенно справедливым является простое правило: один вид антител – один анализ. Это правило всегда нужно учитывать при планировании обследования, когда нужно обнаружить антитела в крови к каким-либо патогенным микроорганизмам или биомолекулам.

Наличие антител в крови к различным микробам и биомолекулам определяют целым рядом различных лабораторных методик. В настоящее время наиболее распространенными методами выявления различных антител в крови являются следующие методы:

Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA);
Радиоиммунный анализ (РИА);
Иммуноблоттинг;
Серологические методики (реакция гемагглютинации, реакция непрямой гемагглютинации, реакция торможения гемагглютинации и т.д.).

Рассмотрим методы определения наличия антител в крови подробнее.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) позволяет определить наличие различных антител в крови. В настоящее время подавляющее большинство анализов крови на антитела выполняются именно методом ИФА, который относительно прост в использовании, недорог и очень точен.

Метод иммуноферментного анализа состоит из двух частей – иммунной и ферментной, которые позволяют с точностью «вылавливать» строго определенные микробы или биомолекулы в крови, и потом определять их.

Иммунная часть методики заключается в следующем: в наборе для лабораторного анализа на дно лунок прикреплены антигены, которые способны связываться с искомыми строго определенными антителами. Когда в эти лунки вносится исследуемая кровь, то присутствующие в ней антитела связываются с антигенами на дне лунок, образуя прочный комплекс. Если же в крови выявляемые антитела отсутствуют, то в лунках не образуются прочные комплексы, и результат анализа будет отрицательным. После внесения исследуемой крови в лунки ее оставляют на некоторое время, достаточное для образования комплекса антиген-антитело, после чего выливают. Далее лунку несколько раз промывают от остатков крови специальными растворами, которые не могут разъединить образовавшихся комплексов антиген-антитело, прочно прикрепленных к дну лунок.

Далее проводится ферментная часть анализа: в промытые лунки вносится специальный фермент, как правило, пероксидаза хрена, которая прочно связывается с комплексами антиген-антитело. Затем в лунки добавляют перекись водорода, которую разлагает пероксидаза хрена с образованием окрашенного вещества. Соответственно, чем больше будет комплексов антиген-антитело, тем большее количество пероксидазы окажется в лунках. А значит, тем большее количество окрашенного вещества получится в результате разложения перекиси водорода, и тем интенсивнее будет окраска раствора в лунке. Далее на специальном приборе измеряется степень интенсивности окраски полученного в лунках вещества, и по формулам вычисляется сначала концентрация пероксидазы. После этого, на основании концентрации пероксидазы, рассчитывается концентрация комплексов антиген-антитело, и, соответственно, количество, выявляемых антител в крови.

Как видно, метод ИФА не сложный, но надежный, простой, информативный и высокоточный. Более того, методом ИФА можно определить концентрацию практически любых антител в крови – достаточно просто «приклеить» к лункам вещество, с которым эти детектируемые антитела будут связываться. Именно из-за этих качеств метод ИФА и получил широчайшее распространение в настоящее время для выявления различных антител в крови человека.

Данный метод реже используется для выявления различных антител ввиду его дороговизны, отсутствия необходимого оборудования в лабораториях и сложности производства реактивов для его проведения. По своей сути РИА основан на тех же принципах, что и ИФА, только в качестве веществ, по которым производится определение концентрации искомых антител, применяются меченые изотопы, дающие излучение, а не пероксидаза хрена. Естественно, изготовление меченых изотопов и их фиксация на антигенах, прикрепленных к дну лунок, гораздо сложнее и дороже производства пероксидазы хрена. В остальном РИА состоит из тех же двух этапов, что и ИФА – на первом, иммунном этапе искомые антитела из крови связываются с прикрепленными на дне лунок антигенами. А на втором, радиоэтапе, меченые изотопы связываются с комплексами антиген-антитело, причем их количество пропорционально концентрации искомых антител. Далее специальные приборы улавливают количество посылаемых изотопами импульсов, которые затем пересчитываются в концентрации определяемых антител.

Данный метод представляет собой сочетание ИФА или РИА с электрофорезом. Иммуноблоттинг – очень точный метод выявления антител к различным микроорганизмам или биомолекулам, и именно поэтому в настоящее время его активно используют.

Иммуноблоттинг заключается в том, что сначала антигены различных микробов разделяют методом электрофореза в геле, после чего эти разные фракции антигенов наносят на специальную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану. А далее уже на этих полосках бумаги или мембраны, на которых закреплены известные антигены, проводят обычный ИФА или РИА для выявления наличия в крови антител к тем микробам, антигены которых зафиксированы на бумаге или мембране.

Серологические методы обнаружения антител в крови человека к различным микроорганизмам-возбудителям инфекционных заболеваний являются наиболее старыми способами «анализов на антитела». Но из-за своей «старости» эти методы не потеряли актуальности, довольно высокой точности и по-прежнему широко применяются для скорейшего выявления антител к некоторым опасным вирусам, бактериям и простейшим. А ряд заболеваний по наличию антител к микробу-возбудителю в крови можно диагностировать и вовсе только серологическими методами.

К серологическим методикам относят реакцию нейтрализации (РН), реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА, РПГА), реакцию торможения гемадсорбции (РТГАд), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию иммунофлуоресценции (РИФ). Все серологические методики основаны на взаимодействии искомых (определяемых) антител, присутствующих в крови человека, с антигеном. При этом в качестве антигена подбирается именно такое вещество, на которое должны среагировать антитела, которые пытаются выявить. На практике имеются готовые наборы антигенов различных микробов, которые и соединяют с исследуемой кровью, и если в последней имеются антитела к взятому антигену, то результат анализа положителен – то есть в крови человека присутствуют антитела к микробу, который был выбран для анализа.

В ходе серологических реакций удается также установить и концентрацию выявляемых антител в крови. Только эта концентрация выражается не в миллиграммах на миллилитр или в иных привычных величинах, а в титрах. Рассмотрим подробнее, что это значит, и как проводятся серологические реакции.

Конечно, каждая разновидность серологической реакции имеет собственные правила проведения, но мы постараемся описать в общем виде, как их делают, так как в принципиальных моментах они однотипны. Так, любая серологическая реакция основана на том, что в лунку или пробирку вносят исследуемую сыворотку крови с предполагаемыми в ней антителами. Затем в эту же сыворотку вносят определенное количество антигенов микроба, к которому в крови предположительно есть антитела.

Далее сыворотку исследуемой крови разводят в 10 раз, наливают в другую пробирку или лунку и добавляют к ней антигены. Затем сыворотку крови разводят снова в 10 раз, получая уже разведение 1:100, помещают в отдельную лунку или пробирку и добавляют антиген. Так делают несколько разведений, например, 1:1, 1:100, 1:1000, 1:10000 и т.д. Не обязательно всегда делают разведения, кратные 10 – часто используют разведения в два раза, и в таком случае получаются пробирки с разведениями сыворотки 1:1, 1:2, 1:4, 1:8 и т.д. Такие разведения и называются титрами.

В пробирки со всеми разведениями вносят антигены микробов, антитела к которым пытаются выявить. Затем пробирки или лунки инкубируют (оставляют в теплом месте или при комнатной температуре на некоторое время, причем для каждого антигена свой промежуток времени инкубации), чтобы антигены смогли связаться с антителами, если таковые, конечно, присутствуют в крови. После завершения инкубации в пробирки со всеми разведениями вносят чистые эритроциты кур, баранов и т.д. Далее смотрят, в какой пробирке произошло разрушение этих эритроцитов. Ведь если сформировался комплекс антиген-антитело, то он обладает определенными свойствами, среди которых разрушение специально подготовленных чистых эритроцитов. Если в какой-то пробирке видно разрушение эритроцитов, то смотрят, какое разведение сыворотки в ней. И это значит, что в крови человека присутствуют искомые антитела в титре, например, 1:8.

Анализ крови на антитела любым методом (ИФА, РИА, иммуноблоттинг, серологические методы), в принципе, выполняется в течение нескольких часов, максимум суток. Но на практике лаборатории не выдают результатов через несколько часов после сдачи крови, что обусловлено особенностями работы медицинских учреждений.

Так, во-первых, любая лаборатория, даже частная, ждет некоего часа Х, когда у нее считается завершенным набор проб на сегодняшний день. Например, такой час Х – это 12-00. Значит, даже если человек сдаст кровь в 8-00 утра, до 12-00 часов она будет просто храниться в холодильнике, пока не завершится период сбора проб. Далее, в 12-00 часов сотрудник лаборатории пустит пробы крови в работу, которая и займет несколько часов. Таким образом, результат будет только вечером, а возможно и утром, если методика выполнения анализа длинная.

Во-вторых, из-за небольшого количества запросов многие лаборатории ряд анализов проводят не каждый день, а только раз в неделю или раз в месяц. В этом случае имеется назначенный день Х, в который все собранные за неделю или месяц пробы пускают в работу. До наступления такого дня проба крови будет просто храниться замороженной. Если лаборатория действует по такому принципу, то результат анализа на антитела может быть выдан через 1 – 4 недели, в зависимости от частоты выполнения данной методики в конкретном учреждении.

В крови могут определять концентрации различных типов антител, а именно – IgG, IgM, IgA, IgE. Причем зачастую определяют концентрацию каждого типа антител отдельно, так как они имеют разное диагностическое значение. Но в некоторых случаях, когда это информативно с точки зрения диагностики, определяют концентрацию сразу всех типов антител, то есть, IgG + IgM + IgA. Ситуации, когда определяют концентрации сразу нескольких типов антител в крови, называются анализом на суммарные антитела.

Такие анализы на суммарные антитела могут выполняться для диагностики различных инфекций, например, гепатита С, сифилиса и т.д.

Аббревиатура igg – это неправильная запись IgG, что означает иммуноглобулины типа Джи. Эти иммуноглобулины относятся к антителам, которые вырабатываются иммунной системой для уничтожения различных патогенных микробов, попавших в организм. Таким образом, очевидно, что антитела igg – это антитела типа IgG, которые могут присутствовать в крови и определяться лабораторными методами анализа.

Однако просто анализа на антитела IgG не существует, так как иммунная система вырабатывает антитела этого типа против разных микробов. Причем против каждого микроба вырабатывается собственная разновидность IgG, и все они разные. То есть антитела IgG против вируса кори – одни, против вируса краснухи – вторые, против вируса гриппа – третьи, против стафилококка – четвертые, и т.д. Соответственно, можно выполнить анализы на определение IgG в крови против вируса кори, против вируса краснухи, против микобактерии туберкулеза, и т.д. А значит, нужно сначала выяснить, антитела против какого именно микроба нужно искать в крови, и только после этого выполнять анализ на антитела типа IgG к этому микроорганизму.

Вирусы являются патогенными микроорганизмами, при проникновении которых в организм иммунная система начинает вырабатывать антитела для их уничтожения. Но против каждого вируса иммунная система вырабатывает собственные, уникальные, подходящие только к этому виду микроба антитела. Соответственно, можно выявить наличие в крови антител к какому-либо конкретному вирусу, но нельзя определить антитела к вирусам вообще. Поэтому, прежде чем сдавать анализ крови на вирусы, следует точно выяснить, антитела к каким именно вирусным микроорганизмам человек желает отыскать.

Результат анализа крови на антитела, проведенный любым методом, всегда бывает двух видов – положительный или отрицательный. Положительный результат означает, что в крови человека обнаружены искомые антитела к какому-либо микробу или биомолекуле. Это свидетельствует о том, что человек был в прошлом или является в настоящий момент инфицированным каким-либо микробом (инфекционным заболеванием). Отрицательный результат означает, что в крови человека отсутствуют искомые антитела, и он не был заражен инфекционным заболеванием, гельминтами и т.д.

Кроме того, при положительном результате анализа на антитела практически всегда указывается их концентрация. Если определение проводилось методом ИФА, РИА или иммуноблоттинга, то концентрация антител указывается в МЕ/мл. Но если для анализа крови на антитела применялись серологические методики, то в таком случае концентрация антител указывается в титрах, например, 1:64 и т.д.

Расшифровка каждого анализа на антитела зависит от того, какой вид антител выявлялся в крови (IgG, IgM, IgA), а также от того, к какому именно микробу или биомолекуле эти антитела. Например, если в крови обнаруживаются антитела типов IgG и IgM к какому-либо патогенному микроорганизму, то это свидетельствует о том, что человек в настоящее время болеет инфекционным заболеванием, вызываемым этим микробом. Обнаружение же в крови антител к микробу типа IgG свидетельствует о хроническом течении инфекции или о том, что человек в прошлом ее перенес и выздоровел.

Часто для определения того, насколько давно человек был инфицирован каким-либо микробом, оценивают не просто концентрацию антител типа IgG в крови, но и их авидность. Авидность антител определяет то, насколько давно они циркулируют в крови человека. Соответственно, чем выше авидность, тем больше давность перенесенного инфекционного заболевания. Например, если авидность антител к краснухе составляет менее 40 %, то человек перенес это заболевание недавно, в ближайшие три месяца. А если авидность антител к краснухе более 60 %, то инфекция была перенесена более полугода назад.

Норма анализа на антитела зависит от того, какой именно вид антител «искали» у конкретного человека. Например, если проводился анализ на антитела к вирусу краснухи у женщины, планирующей беременность, то наличие таких антител в крови, то есть положительный результат анализа, считается хорошим. Ведь если у женщины есть антитела, значит, она уже «сталкивалась» с вирусом краснухи (переболела или была привита), организм выработал иммунитет, и в настоящее время он сохранился. А значит, такой женщине не грозит заражение краснухой во время предстоящей беременности, и у нее нет риска того, что ребенок родится глухим из-за краснухи у матери.

Если же в крови человека обнаруживаются антитела к ДНК, то это плохой результат анализа, так как он свидетельствует о тяжелом аутоиммунном заболевании, когда иммунная система по ошибке считает свои органы и ткани чужими, и планомерно уничтожает их.

Анализы крови на различные антитела можно сдать в частных или государственных лабораториях, которые выполняют необходимый тест. Так как анализ на каждый вид антител выполняется при помощи специального набора, то следует сначала точно определиться, какие именно антитела нужно обнаружить, и только после этого выяснить, какие лаборатории могут это сделать.

В зависимости от того, какие именно антитела будут определяться в крови, цена анализа может быть различной. Наиболее простые и дешевые анализы стоят около 100 рублей (например, на титр антител при беременности), а дорогие – до 3000 рублей. Конкретную стоимость анализа на антитела к определенному микроорганизму или биомолекуле нужно узнавать непосредственно в лабораториях, выполняющих такие исследования.

Симптомы полиомиелита. Лабораторная и дифференциальная диагностика полиомиелита. Антитела к вирусу – видео

Автор: Наседкина А.К. Специалист по проведению исследований медико-биологических проблем.

источник