Меню Рубрики

Ифа антитела что за анализ

Для проведения комплексной оценки состояния организма применяется ИФА-метод проведения диагностики. Иммуноферментный анализ крови предназначен для диагностирования инфекционных, гематологических, первичных и вторичных иммунодефицитов.

Многие пациенты интересуются методом ИФА: что это, для чего проводится исследование. Иммуноферментный анализ начал использоваться сравнительно недавно. Изначально с его помощью изучались антигенные структуры, и он проводился только в научных целях. Затем ученые пришли к выводу, что при помощи ферментов можно выявить специфические антитела, возникающие в ответ на протекающее заболевание.

На сегодняшний день этот метод имеет широкую сферу применения. Современные лаборатории используют его для диагностирования:

  • опухолей;
  • гормональных нарушений;
  • инфекций;
  • хронических или перенесенных ранее инфекционных процессов;
  • гельминтов.

Если в организме протекает инфекционный процесс, то этот вид диагностики считается наиболее оптимальным для определения типа заболевания.

Метод ИФА — что это, какова суть этого вида исследования? Этот и многие другие вопросы интересуют пациентов. Основой этого способа диагностики считается связывание иммунных клеток организма с антигенами возбудителей инфекции. Получившийся комплекс определяют при помощи специального фермента.

Реакцию на наличие таких иммунных комплексов проводят в лабораторных условиях, применяя уже готовые соединения, чтобы определить, есть ли в крови подобные им.

Суть метода ИФА достаточно простая, однако из-за того, что анализ крови проводится для выявления многих инфекций и болезней, существует несколько его разновидностей. Каждый отличается схемой проведения и областью применения. Может быть прямой или непрямой ИФА. Прямой метод подразумевает под собой то, что применяются обездвиженные антитела, реагирующие с антигенами. Основным плюсом такого метода является то, что все процессы можно автоматизировать, а значит, диагностика занимает немного времени.

Непрямой метод подразумевает, что применяются антитела вторичного характера. А на твердой фазе обездвиживается антиген. Анализ позволяет определить антитела к различным антигенам. Это помогает достигнуть более точного результата, однако метод отличается сложностью.

Лабораторные исследования методом ИФА имеют множество преимуществ в сравнении с другими способами диагностики. К основным можно отнести такие:

  • высокая чувствительность;
  • стабильность при хранении ингредиентов;
  • скорость проведения диагностики;
  • можно применять небольшое количество исследуемого материала;
  • есть возможность автоматизации всех процессов;
  • можно выявить инфекцию на самых ранних стадиях.

Проведение исследования при помощи метода ИФА могут назначить при подозрении на множество болезней:

  • острые и хронические инфекции, венерические болезни;
  • наличие паразитов;
  • аутоиммунные патологии;
  • онкологические заболевания;
  • для определения уровня гормонов.

На наличие антител исследуется венозная кровь. Перед проведением анализа из нее выделяют элементы, которые могут осложнять исследование. Может проводиться забор и других биологических жидкостей.

Использование метода ИФА помогает определить наличие многих инфекций в организме, в частности и сифилиса. Для проведения исследования берется кровь из вены натощак. Затем осуществляется исследование, помогающее определить не только наличие болезни в организме, но и точные сроки ее начала, так как в течение болезни одни антитела заменяются другими в строго определенном порядке.

При острой фазе, свидетельствующей о продолжительном течении болезни, или при обострении хронической инфекции в крови будут обнаружены иммуноглобулины типа M. Наличие иммуноглобулинов типа A свидетельствует о том, что инфекция обитает в организме более 4 недель. Иммуноглобулины группы G говорят о разгаре болезни или о ранее проведенной терапии.

ИФА-метод применяется и для проведения анализа на ВИЧ-инфекции. Диагностика в таком случае имеет определенные особенности, которые связаны с протеканием и прогрессированием болезни. Этот метод исследования считается наиболее приемлемым для определения, однако проводить его нужно не ранее чем через месяц после воздействия факторов риска. Это связано с наличием инкубационного периода, протекающего от 45 дней и до 6 месяцев. Именно поэтому анализ нужно повторить через полгода.

Положительным результат считается, если при первичном исследовании были обнаружены антитела. В таком случае анализ повторяется через полгода, если снова результат положительный, то исследование проводится с применением высокоспецифичных тестовых систем.

Достаточно часто доктора назначают проведение иммуноферментного анализа для определения наличия паразитов в организме. При помощи такого метода исследования можно определить:

Несмотря на все преимущества, существуют также недостатки метода ИФА. Основным недостатком считается то, что при проведении исследования доктор должен заранее иметь предположение о заболевании.

При диагностике инфекционных болезней нет возможности случайно найти возбудителя и определить его иммуноферментные свойства. Тест только указывает на наличие антител в крови больного. Кроме того, это достаточно дорогостоящий анализ.

Результатом качественного ИФА будет либо наличие антител, либо их отсутствие в крови. Если проводится количественный анализ, то концентрация антител может выражаться или в цифровом значении, или в определенным количеством знаков +.

Кроме того, анализируются такие показатели, как:

Показатель IgM указывает на протекание острого инфекционного процесса в организме. Полное его отсутствие может говорить об отсутствии возбудителя болезни или переходе ее в хроническую стадию.

Сейчас существуют специальные тесты ИФА, которые можно провести самостоятельно.

источник

Для оценки способности организма сопротивляться инфекционным болезням или для определения фазы патологии применяют анализ крови. Метод ИФА занимает важное место среди лабораторных исследований, он помогает всесторонне изучить деятельность защитной функции крови, определить иммунодефицит при инфекционных заболевания, недугах крови, гормональных, аутоиммунных процессах.

Этот метод относится к лабораторным исследованиям, определяет наличие защитных факторов крови белковой природы (антител) к определенным болезнетворным агентам (антигенам). Иммуноферментный анализ крови определяет иммуноглобулины, которые могут обнаруживаться в виде иммунокомплексов. Появляются они при возникновении сложных нейрогуморальных реакций иммунной защиты человека, которые становятся ответом на внедрение чужеродных антигенов.

Против каждого вида болезнетворного агента производятся в организме специфические антитела. Далее происходит связывание патологического микроорганизма или антигена, образуется комплексное соединение «антиген-антитело». Затем оно нейтрализуется, происходит ферментативный лизис, реакция фагоцитоза, и заканчивается процесс выводом из организма. Наличие конкретных комплексов, определяющееся ИФА, говорит о виде возбудителя, вредного вещества у больного.

Учеными обнаружено и изучено 5 видов иммуноглобулинов: IgE, IgD, IgG, IgM, IgА. Существуют и другие классы, но они находятся еще на стадии исследования, и не до конца выяснена их роль. В практической медицине важное значение имеют А, М, G. Информативность, точность определения базируется на временных промежутках, за которые они появляются, достигают максимума и исчезают.

  1. Иммуноглобулины IgA (А) – выполняют защитную функцию слизистых мочевыделительной системы, желудочно-кишечного тракта, дыхательных путей. Выявить их при остром начале патологии нельзя, они образуется только через 2 недели после первых признаков болезни, в некоторых ситуациях еще позже. Сосредоточен глобулин А в слизистых тканях (около 80% от общего количества). Оставшаяся часть находится в крови, чтобы обезвреживать и уничтожать микроорганизмы. К 8 неделе после стихания острой фазы патологии количество этих иммуноглобулинов уменьшается до полного исчезновения.
  2. Первым и главным маркером острого периода развития болезни становятся глобулины IgM (M). Анализ их показывает на 5 сутки после начала появления первых признаков патологии. Выявляет ИФА эти иммуноглобулины первые 6 недель, затем они быстро исчезают.
  3. Класс иммуноглобулинов IgG (G) показывает остаточный иммунный ответ в крови на патологический процесс. Анализ покажет фактор спустя месяц после начала болезни. Потом они могут еще долгие месяцы, года и даже всю жизнь определяться в анализе. Они защищают человека от рецидива недуга, иногда обеспечивают невозможность вторичного развития патологии. При определении роста иммуноглобулина G подозревают повторное заражение патологией. Для подтверждения проводят несколько проб ИФА с промежутком в 2 недели.
  4. В паразитологии и аллергологии используется иммуноглобулин IgE (E).
  5. Иммуноглобулин IgD (D) находится на В-лимфоцитах, небольшая концентрация встречается и у здоровых людей. Достигает максимальных значений после 10 лет жизни человека. При анализе ИФА отмечается рост иммуноглобулина D у пациентов с системными патологиями соединительной ткани, во время беременности, при бронхиальной астме, недугах, которые спровоцированы иммунодефицитным состоянием.

При помощи этого анализа можно оценивать эффективность лечения, проводить комплексное исследование перед трансплантологическими операциями, определять состояние иммунодефицита и антитела к более 600 видов аллергенов. Исследование крови методом ИФА использует в качестве дополнительного способа обнаружения онкологических клеток. Назначают анализ при необходимости обнаружения антител к микробам, которые провоцируют венерические патологии:

  • трихомониаз;
  • сифилис;
  • токсоплазмоз;
  • микоплазмоз;
  • уреаплазмоз.

При глистных инвазиях в анализе ИФА будет отмечен рост количества иммуноглобулинов. Проводится исследования для подтверждения наличия у больного:

  • вируса Эпштейна-Барра;
  • герпетических инфекций;
  • цитомегаловируса;
  • группы вирусных гепатитов.

Анализ ИФА используется в диагностике паразитарных патологий, показателем становится специфический иммуноглобулин IgE. Отмечается его рост в крови при заражении организма пациента паразитами. Иммуноглобулин Е становится маркером атопической реакции при аллергических процессах. Содержание в крови – незначительное. Локализуется, как правило, на слизистых оболочках, макрофагах, базофилах.

Основная функция белкового комплекса – защита слизистых оболочек организма. Также он участвует в иммунных реакциях, которые направлены на уничтожение паразитов. Отвечают за активизацию IgE макрофаги и эозинофилы. При сопоставлении с данными анализа этот факт помогает установить диагноз. Анализ ИФА используют для обнаружения:

  • хронической, острой формы описторхоза;
  • круглых гельминтов: остриц, аскарид;
  • лямблий;
  • трихинеллеза;
  • амебиаза;
  • форм лейшманиоза;
  • содержания токсоплазм.

Иммуноферментное исследование крови не единственный вариант для определения иммуноглобулинов. Иногда для этого исследования делают забор спинномозговой жидкости, ткани стекловидного тела, околоплодных вод. При использовании крови набирают ее из локтевой вены при помощи инъекционной иглы. Сдавать анализ необходимо натощак, перед ИФА не рекомендуется принимать медицинские препараты, которые могут повлиять на результат. Следует отказаться от алкоголя, курения, употребления наркотических веществ перед сдачей биоматериала. Варианты результатов теста:

  1. При отрицательных показателях иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA, врачи говорят об отсутствии патологии или начальной стадии. Такой же результат (отрицательный) будет после полного выздоровления по прошествии длительного периода.
  2. Если IgG проявляется положительно, а IgM и IgA не обнаружены, это указывает на образование иммунитета после прививки или инфекционной болезни.
  3. При высоких титрах IgM и отрицательных IgA, IgG ставят диагноз острого инфекционного заболевания.
  4. При положительном показателе IgG, IgM, IgA врачи говорят об острой фазе рецидива уже имеющегося хронического недуга.
  5. При хронической инфекции, которая находится на стадии стихания (ремиссии), анализ ИФА показывает отрицательные титры IgM, а IgA и IgG будут положительными.

Основным отрицательным моментом этого исследования является вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Причиной недостоверности становится прием медикаментов, технические недочеты лаборатории. Фальсифицировать анализ может процесс нарушения метаболизма в организме. Главными достоинствами анализа ИФА являются:

  • точность, диагностическая специфичность;
  • невысокая себестоимость анализа;
  • скорость получения результатов;
  • возможность динамического контроля стадии патологии, эффективности лечения;
  • простота исследования;
  • возможность выполнять массовые обследования очагов инфекции;
  • безболезненность, безопасность для больного;
  • применение при обработке информационных технологий.

источник

С прогрессом современной медицины удается проводить более углубленную диагностику при подозрении на те или иные патологии у пациента. Одним из информативных методов лабораторного исследования стал ИФА анализ, который проводят методом забора венозной крови. То есть для пациента ничего в целом не меняется. А вот лаборант-анализатор ИФА проводит сложную технику исследования забранного биоматериала. В том, что такое анализы ИФА и, каковы тонкости применения ИФА метода в качестве диагностического, разбираемся в материале ниже.

Иммуноферментный анализ крови — это один из способов лабораторной диагностики, который основан исключительно на реакции под названием «антиген-антитело». Здесь стоит уяснить, что антиген — это чужеродное белковое соединение (молекула), попавшее в организм человека с паразитарной, вирусной или другой инфекцией. То есть, попросту вредитель. В свою очередь антитело — это иммунная клетка (иммуноглобулин), встающая на защиту организма человека при обнаружении в нем чужеродных молекул.

Выработку антител провоцируют сами же антигены, проникшие в организм человека. При вступлении в «битву» за здоровье организма антитела как бы помечают собой антигены, что при исследовании крови и видит лаборант. То есть в забранном биоматериале можно отследить не только наличие инфекции, но и ее следы уже после того, как организм полностью выздоровел.

При проведении анализа на ИФА лаборант может видеть такие иммуноглобулины к антигенам:

  • Иммуноглобулины М (в результатах значатся как IgM). Свидетельствуют о том, что инфекционный процесс в организме только набирает свою силу. То есть инфицирование произошло совсем недавно;
  • Иммуноглобулины G (значатся как IgG). Способствуют уничтожению антигенов через несколько дней после внедрения инфекции в организм человека. Иммуноглобулины G могут находиться в организме пациента достаточно долго, формируя иммунитет к определенному вирусу;
  • Иммуноглобулины Е (значатся как IgЕ). Свидетельствуют о паразитарных инфекциях в организме. Он же говорит и об атопических реакциях при аллергии. При этом стоит знать, что проведение анализа ИФА дает результат с точностью 90% на паразитарные инфекции;
  • Иммуноглобулины А (значатся как IgА). Максимально выступают на защиту слизистых оболочек пациента.

Таким образом, назначая иммуноферментный анализ крови пациенту, лечащий врач может отследить давность инфекции, степень ее прогрессирования или выявить наличие иммунитета к той или иной инфекции.

Процесс ИФА диагностики выглядит таким образом:

  • Забранная венозная кровь приводится в лаборатории в состояние сыворотки крови;
  • Затем лаборант использует специальный лоток с ячейками, в каждой из которых уже имеются все необходимые антигены. Достаточно просто капнуть в каждую ячейку сыворотку крови и отследить реакцию иммуноглобулинов (антител) на антигены. О наличии «нужной» реакции свидетельствует изменение цвета исследуемого материала. В дальнейшем лаборант изучает оптическую плотность исследуемой среды.

В целом иммуноферментный анализ на паразитов помогает выявить такие паразитарные патологии:

  • Аскаридоз и энтеробиоз (аскариды и острицы);
  • Трихинеллез;
  • Описторхоз в острой и хронической формах;
  • Лямблиоз;
  • Амебиоз;
  • Токсоплазмоз;
  • Лейшманиоз в любой форме.

Важно: иммуноферментный анализ бывает как качественным, так и количественным. В первом случае лаборант лишь подтверждает или опровергает наличие искомого вещества в крови. Во втором случае в результате анализа указывают его концентрацию в организме пациента.

При всех достоинствах такого способа диагностики стоит понимать, что иммуноферментный анализ крови — не способ нахождения причины болезни пациента, а лишь метод подтверждения предполагаемого лечащим врачом диагноза. А ввиду того, что исследование является достаточно недешевым, использовать его нужно с умом. При этом результаты исследования должен трактовать только квалифицированный специалист.

Важно понимать, что выявление паразитов через анализ крови требует определенной подготовки от пациента. Так, перед сдачей крови необходимо сделать следующее:

  • За сутки до забора биоматериала нужно исключить из рациона жирную пищу, алкоголь и копчености;
  • Кровь на иммуноферментный анализ крови на паразитов и другие инфекции следует сдавать с утра натощак;
  • Перед сдачей крови запрещено курить минимум за 3-4 часа;
  • В день забора крови желательно не нервничать и не прибегать к усиленным физическим нагрузкам.
Читайте также:  И анализ на антитела иха

Соблюдение этих правил позволит избежать ложноположительного результата на антитела к паразитам.

После того как мы разобрали аббревиатуру ИФА и что это такое выяснили, стоит перейти к трактовке результатов. Здесь важно понимать, что если анализ проводили качественный, то результат будет лишь положительным или отрицательным. То есть диагностика либо подтверждает подозрения доктора относительно определенного диагноза, либо опровергает их. В этом случае в бланке будут стоять символы «+» или «-» соответственно.

Важно: отрицательный результат анализа не всегда свидетельствует об отсутствии инфекции. Дело в том, что антитела к антигенам могут формироваться в течение 14 дней после инфицирования и вполне вероятно, что они еще не сформированы.

В случае же если проводится количественный анализ, то здесь определяется вид антител, их количество и стадия активности. В частности при такой диагностике определяют антитела (иммуноглобулины) IgG и IgM, которые формируются в разные периоды прогрессирования инфекции. Самыми распространенными вариантами результатов в этом случае являются:

  • Повышенный IgМ и полное отсутствие IgG. Такая картина свидетельствует о недавнем инфицировании и острой фазе течения патологии.
  • Повышенная активность иммуноглобулинов обоих видов (IgМ и IgG). Говорит о давнем и хроническом протекании инфекционного процесса.
  • Активность IgG и полное отсутствие IgМ. Инфицирование было не менее полугода назад и сейчас вирус пребывает в затяжной хронической стадии.
  • Отсутствие антител IgG и IgA. Результат не определен.
  • Отсутствие антител IgM, IgA и IgG. Свидетельствует об отсутствии иммунитета к определенной инфекции.
  • Активность антител IgG, IgM и IgA говорит об обострении хронического процесса.

Помимо выявления типов антител лаборант в специальной графе бланка указывает и их количество на объем крови. Помните, разобравшись в том, что такое метод ИФА, не трактуйте результаты самостоятельно. Полученные результаты с точностью может интерпретировать только лечащий врач в зависимости от предполагаемого диагноза, выстраиваемого на основании клинической картины у пациента.

источник

Анализ крови на антитела – виды (ИФА, РИА, иммуноблоттинг, серологические методики), норма, расшифровка результатов. Где можно сдать анализ крови на антитела? Цена исследования.

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Анализ крови на антитела означает совокупное название целого ряда лабораторных методов диагностики, предназначенных для определения различных веществ и микроорганизмов в крови по наличию антител к этим выявляемым биологическим структурам.

Чтобы понимать значение термина «анализ крови на антитела», нужно знать, что такое антитела, против чего и кого они бывают, и как используются в лабораторных методах.

Итак, антитела представляют собой белки, которые вырабатываются клетками иммунной системы (В-лимфоцитами) против каких-либо микробов, попавших в организм, либо против биохимических молекул. Вырабатываемые иммунными клетками антитела предназначены для уничтожения тех микроорганизмов или биохимических соединений, против которых они были синтезированы. Иными словами, когда иммунные клетки синтезируют достаточное количество антител, последние появляются в системном кровотоке и начинают планомерное уничтожение микробов или биологических молекул, попавших в организм человека и вызывающих различные заболевания.

Иммунные клетки вырабатывают исключительно специфичные антитела, которые работают и уничтожают только строго определенный вид микробов или биомолекул, ранее распознанные иммунной системной, как чужеродные. Схематично это происходит следующим образом: в организм попадает какой-либо патогенный микроорганизм или биологическая молекула. На это соединение или микроб «садится» клетка иммунной системы, которая как бы «считывает» его характеристики (имеющиеся на поверхности белки-рецепторы), то есть «знакомится». Далее иммунная клетка-посредник путем сложного каскада биохимических реакций передает «считанную информацию» лимфоцитам. Получившие «информацию» лимфоциты активируются – они как бы приняли «задачу». И после активации лимфоциты начинают синтезировать антитела, которые содержат рецепторы, позволяющие им «узнавать» и прицепляться к поверхности только тех микробов или молекул, «характеристики» которых были переданы клетками-посредниками. В результате получаются строго специфические антитела, эффективно уничтожающие исключительно «узнанные» патогенные микробы и биомолекулы.

Такие специфические антитела нарабатываются в организме всегда при попадании в него какого-либо патогенного микроорганизма – бактерии, вируса, простейшего, гельминта и т.д. Также антитела могут синтезироваться для уничтожения биологических молекул, которые иммунная система признала «чужеродными». Например, при попадании в организм крови другой группы иммунная система распознает ее эритроциты, как «чужие», передает сигнал лимфоцитам, которые нарабатывают антитела, в свою очередь, уничтожающие чужеродные эритроциты. Из-за этого развивается реакция «хозяин против трансплантата».

Но всегда иммунная система вырабатывает антитела, действующие строго против конкретного микроба или биомолекулы, а не против всех, кто «похож» на них. Благодаря подобной специфичности и избирательности не происходит уничтожения антителами нужных клеток и биомолекул, а подвергаются нападению только признанные иммунной системой «чужими» и опасными.

Антитела на языке биохимии называются иммуноглобулинами, и обозначаются английской аббревиатурой Ig. В настоящее время выделяют пять классов иммуноглобулинов, которые может синтезировать В-лимфоцит, – это иммуноглобулины А (IgA), иммуноглобулины G (IgG), иммуноглобулины М (IgM), иммуноглобулины Е (IgE) и иммуноглобулины D (IgD). Каждый класс иммуноглобулинов обладает вышеописанной специфичностью в отношении уничтожаемых им микробов или биомолекул. Но каждый класс иммуноглобулинов имеет и, так сказать, свой «фронт», на котором они действуют.

Так, иммуноглобулины А, главным образом, расположены на слизистых оболочках, и обеспечивают уничтожение патогенных микробов во рту, носу, носоглотке, мочеиспускательном канале, влагалище. Иммуноглобулины М нарабатываются первыми при попадании микроба в кровоток, и потому считаются ответственными за острый воспалительный процесс. Иммуноглобулины G, напротив, нарабатываются медленнее, но зато долго циркулируют в крови и обеспечивают уничтожение всех остатков микробов, попавших в организм. Именно иммуноглобулины G ответственны за хронический инфекционно-воспалительный процесс, который они поддерживают вялотекущим, уничтожая патогенные микробы настолько, что они не могут привести к смертельному исходу, но недостаточно для их полного удаления из организма. Иммуноглобулины Е обеспечивают постоянное протекание аллергических реакций, так как вырабатываются в ответ на различные антигены, присутствующие в окружающей среде. А иммуноглобулины D выполняют разные функции.

Таким образом, обобщая вышесказанное, можно коротко резюмировать, что антитела в крови могут быть различных классов, и что каждое антитело строго специфично к какому-либо патогенному микробу либо к биомолекуле.

Когда лабораторными методами определяют наличие в крови антител, то обязательно указывают, к какой биомолекуле или к какому микробу ищут антитела. Определение антител к какому-либо микробу позволяет понять, заражен человек этим микроорганизмом или нет, так как если заражение отсутствует, то и антител в крови не будет. Но если заражение имеется, то в крови у человека будут циркулировать антитела, нарабатываемые иммунной системой для уничтожения микроорганизма.

Кроме того, определение антител в крови используют для того, чтобы понять, болел ли в прошлом человек какой-либо инфекцией. Такое применение анализа на антитела возможно благодаря тому, что даже после полного выздоровления в крови у человека остается небольшое количество антител (клеток памяти), уничтоживших патогенный микроб. Эти антитела циркулируют в крови «на всякий случай», чтобы при повторном попадании в организм такого же, уже знакомого микроба сразу его уничтожить и даже не дать болезни начаться. Собственно, именно такие клетки памяти и обеспечивают то, что называется иммунитетом к инфекции, а именно – то, что человек, перенесший болезнь, больше ей не заражается.

Анализ крови на антитела проводят с целью обнаружения антител к тому или иному конкретному микроорганизму или биомолекуле. Причем для обнаружения каждого конкретного вида антител делают отдельный анализ. Например, иммунная система организма против вируса гепатита В вырабатывает несколько разных антител – антитела против оболочки, антитела против ДНК вируса и т.д. Соответственно, для обнаружения антител против оболочки вируса гепатита В выполняют один анализ, а для выявления антител против ДНК вируса – другой анализ, и т.д. Таким образом, совершенно справедливым является простое правило: один вид антител – один анализ. Это правило всегда нужно учитывать при планировании обследования, когда нужно обнаружить антитела в крови к каким-либо патогенным микроорганизмам или биомолекулам.

Наличие антител в крови к различным микробам и биомолекулам определяют целым рядом различных лабораторных методик. В настоящее время наиболее распространенными методами выявления различных антител в крови являются следующие методы:

  • Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA);
  • Радиоиммунный анализ (РИА);
  • Иммуноблоттинг;
  • Серологические методики (реакция гемагглютинации, реакция непрямой гемагглютинации, реакция торможения гемагглютинации и т.д.).

Рассмотрим методы определения наличия антител в крови подробнее.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) позволяет определить наличие различных антител в крови. В настоящее время подавляющее большинство анализов крови на антитела выполняются именно методом ИФА, который относительно прост в использовании, недорог и очень точен.

Метод иммуноферментного анализа состоит из двух частей – иммунной и ферментной, которые позволяют с точностью «вылавливать» строго определенные микробы или биомолекулы в крови, и потом определять их.

Иммунная часть методики заключается в следующем: в наборе для лабораторного анализа на дно лунок прикреплены антигены, которые способны связываться с искомыми строго определенными антителами. Когда в эти лунки вносится исследуемая кровь, то присутствующие в ней антитела связываются с антигенами на дне лунок, образуя прочный комплекс. Если же в крови выявляемые антитела отсутствуют, то в лунках не образуются прочные комплексы, и результат анализа будет отрицательным. После внесения исследуемой крови в лунки ее оставляют на некоторое время, достаточное для образования комплекса антиген-антитело, после чего выливают. Далее лунку несколько раз промывают от остатков крови специальными растворами, которые не могут разъединить образовавшихся комплексов антиген-антитело, прочно прикрепленных к дну лунок.

Далее проводится ферментная часть анализа: в промытые лунки вносится специальный фермент, как правило, пероксидаза хрена, которая прочно связывается с комплексами антиген-антитело. Затем в лунки добавляют перекись водорода, которую разлагает пероксидаза хрена с образованием окрашенного вещества. Соответственно, чем больше будет комплексов антиген-антитело, тем большее количество пероксидазы окажется в лунках. А значит, тем большее количество окрашенного вещества получится в результате разложения перекиси водорода, и тем интенсивнее будет окраска раствора в лунке. Далее на специальном приборе измеряется степень интенсивности окраски полученного в лунках вещества, и по формулам вычисляется сначала концентрация пероксидазы. После этого, на основании концентрации пероксидазы, рассчитывается концентрация комплексов антиген-антитело, и, соответственно, количество, выявляемых антител в крови.

Как видно, метод ИФА не сложный, но надежный, простой, информативный и высокоточный. Более того, методом ИФА можно определить концентрацию практически любых антител в крови – достаточно просто «приклеить» к лункам вещество, с которым эти детектируемые антитела будут связываться. Именно из-за этих качеств метод ИФА и получил широчайшее распространение в настоящее время для выявления различных антител в крови человека.

Данный метод реже используется для выявления различных антител ввиду его дороговизны, отсутствия необходимого оборудования в лабораториях и сложности производства реактивов для его проведения. По своей сути РИА основан на тех же принципах, что и ИФА, только в качестве веществ, по которым производится определение концентрации искомых антител, применяются меченые изотопы, дающие излучение, а не пероксидаза хрена. Естественно, изготовление меченых изотопов и их фиксация на антигенах, прикрепленных к дну лунок, гораздо сложнее и дороже производства пероксидазы хрена. В остальном РИА состоит из тех же двух этапов, что и ИФА – на первом, иммунном этапе искомые антитела из крови связываются с прикрепленными на дне лунок антигенами. А на втором, радиоэтапе, меченые изотопы связываются с комплексами антиген-антитело, причем их количество пропорционально концентрации искомых антител. Далее специальные приборы улавливают количество посылаемых изотопами импульсов, которые затем пересчитываются в концентрации определяемых антител.

Данный метод представляет собой сочетание ИФА или РИА с электрофорезом. Иммуноблоттинг – очень точный метод выявления антител к различным микроорганизмам или биомолекулам, и именно поэтому в настоящее время его активно используют.

Иммуноблоттинг заключается в том, что сначала антигены различных микробов разделяют методом электрофореза в геле, после чего эти разные фракции антигенов наносят на специальную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану. А далее уже на этих полосках бумаги или мембраны, на которых закреплены известные антигены, проводят обычный ИФА или РИА для выявления наличия в крови антител к тем микробам, антигены которых зафиксированы на бумаге или мембране.

Серологические методы обнаружения антител в крови человека к различным микроорганизмам-возбудителям инфекционных заболеваний являются наиболее старыми способами «анализов на антитела». Но из-за своей «старости» эти методы не потеряли актуальности, довольно высокой точности и по-прежнему широко применяются для скорейшего выявления антител к некоторым опасным вирусам, бактериям и простейшим. А ряд заболеваний по наличию антител к микробу-возбудителю в крови можно диагностировать и вовсе только серологическими методами.

К серологическим методикам относят реакцию нейтрализации (РН), реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА, РПГА), реакцию торможения гемадсорбции (РТГАд), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию иммунофлуоресценции (РИФ). Все серологические методики основаны на взаимодействии искомых (определяемых) антител, присутствующих в крови человека, с антигеном. При этом в качестве антигена подбирается именно такое вещество, на которое должны среагировать антитела, которые пытаются выявить. На практике имеются готовые наборы антигенов различных микробов, которые и соединяют с исследуемой кровью, и если в последней имеются антитела к взятому антигену, то результат анализа положителен – то есть в крови человека присутствуют антитела к микробу, который был выбран для анализа.

В ходе серологических реакций удается также установить и концентрацию выявляемых антител в крови. Только эта концентрация выражается не в миллиграммах на миллилитр или в иных привычных величинах, а в титрах. Рассмотрим подробнее, что это значит, и как проводятся серологические реакции.

Конечно, каждая разновидность серологической реакции имеет собственные правила проведения, но мы постараемся описать в общем виде, как их делают, так как в принципиальных моментах они однотипны. Так, любая серологическая реакция основана на том, что в лунку или пробирку вносят исследуемую сыворотку крови с предполагаемыми в ней антителами. Затем в эту же сыворотку вносят определенное количество антигенов микроба, к которому в крови предположительно есть антитела.

Читайте также:  Иммуноферментный анализ на антитела к гельминтам

Далее сыворотку исследуемой крови разводят в 10 раз, наливают в другую пробирку или лунку и добавляют к ней антигены. Затем сыворотку крови разводят снова в 10 раз, получая уже разведение 1:100, помещают в отдельную лунку или пробирку и добавляют антиген. Так делают несколько разведений, например, 1:1, 1:100, 1:1000, 1:10000 и т.д. Не обязательно всегда делают разведения, кратные 10 – часто используют разведения в два раза, и в таком случае получаются пробирки с разведениями сыворотки 1:1, 1:2, 1:4, 1:8 и т.д. Такие разведения и называются титрами.

В пробирки со всеми разведениями вносят антигены микробов, антитела к которым пытаются выявить. Затем пробирки или лунки инкубируют (оставляют в теплом месте или при комнатной температуре на некоторое время, причем для каждого антигена свой промежуток времени инкубации), чтобы антигены смогли связаться с антителами, если таковые, конечно, присутствуют в крови. После завершения инкубации в пробирки со всеми разведениями вносят чистые эритроциты кур, баранов и т.д. Далее смотрят, в какой пробирке произошло разрушение этих эритроцитов. Ведь если сформировался комплекс антиген-антитело, то он обладает определенными свойствами, среди которых разрушение специально подготовленных чистых эритроцитов. Если в какой-то пробирке видно разрушение эритроцитов, то смотрят, какое разведение сыворотки в ней. И это значит, что в крови человека присутствуют искомые антитела в титре, например, 1:8.

Анализ крови на антитела любым методом (ИФА, РИА, иммуноблоттинг, серологические методы), в принципе, выполняется в течение нескольких часов, максимум суток. Но на практике лаборатории не выдают результатов через несколько часов после сдачи крови, что обусловлено особенностями работы медицинских учреждений.

Так, во-первых, любая лаборатория, даже частная, ждет некоего часа Х, когда у нее считается завершенным набор проб на сегодняшний день. Например, такой час Х – это 12-00. Значит, даже если человек сдаст кровь в 8-00 утра, до 12-00 часов она будет просто храниться в холодильнике, пока не завершится период сбора проб. Далее, в 12-00 часов сотрудник лаборатории пустит пробы крови в работу, которая и займет несколько часов. Таким образом, результат будет только вечером, а возможно и утром, если методика выполнения анализа длинная.

Во-вторых, из-за небольшого количества запросов многие лаборатории ряд анализов проводят не каждый день, а только раз в неделю или раз в месяц. В этом случае имеется назначенный день Х, в который все собранные за неделю или месяц пробы пускают в работу. До наступления такого дня проба крови будет просто храниться замороженной. Если лаборатория действует по такому принципу, то результат анализа на антитела может быть выдан через 1 – 4 недели, в зависимости от частоты выполнения данной методики в конкретном учреждении.

В крови могут определять концентрации различных типов антител, а именно – IgG, IgM, IgA, IgE. Причем зачастую определяют концентрацию каждого типа антител отдельно, так как они имеют разное диагностическое значение. Но в некоторых случаях, когда это информативно с точки зрения диагностики, определяют концентрацию сразу всех типов антител, то есть, IgG + IgM + IgA. Ситуации, когда определяют концентрации сразу нескольких типов антител в крови, называются анализом на суммарные антитела.

Такие анализы на суммарные антитела могут выполняться для диагностики различных инфекций, например, гепатита С, сифилиса и т.д.

Аббревиатура igg – это неправильная запись IgG, что означает иммуноглобулины типа Джи. Эти иммуноглобулины относятся к антителам, которые вырабатываются иммунной системой для уничтожения различных патогенных микробов, попавших в организм. Таким образом, очевидно, что антитела igg – это антитела типа IgG, которые могут присутствовать в крови и определяться лабораторными методами анализа.

Однако просто анализа на антитела IgG не существует, так как иммунная система вырабатывает антитела этого типа против разных микробов. Причем против каждого микроба вырабатывается собственная разновидность IgG, и все они разные. То есть антитела IgG против вируса кори – одни, против вируса краснухи – вторые, против вируса гриппа – третьи, против стафилококка – четвертые, и т.д. Соответственно, можно выполнить анализы на определение IgG в крови против вируса кори, против вируса краснухи, против микобактерии туберкулеза, и т.д. А значит, нужно сначала выяснить, антитела против какого именно микроба нужно искать в крови, и только после этого выполнять анализ на антитела типа IgG к этому микроорганизму.

Вирусы являются патогенными микроорганизмами, при проникновении которых в организм иммунная система начинает вырабатывать антитела для их уничтожения. Но против каждого вируса иммунная система вырабатывает собственные, уникальные, подходящие только к этому виду микроба антитела. Соответственно, можно выявить наличие в крови антител к какому-либо конкретному вирусу, но нельзя определить антитела к вирусам вообще. Поэтому, прежде чем сдавать анализ крови на вирусы, следует точно выяснить, антитела к каким именно вирусным микроорганизмам человек желает отыскать.

Результат анализа крови на антитела, проведенный любым методом, всегда бывает двух видов – положительный или отрицательный. Положительный результат означает, что в крови человека обнаружены искомые антитела к какому-либо микробу или биомолекуле. Это свидетельствует о том, что человек был в прошлом или является в настоящий момент инфицированным каким-либо микробом (инфекционным заболеванием). Отрицательный результат означает, что в крови человека отсутствуют искомые антитела, и он не был заражен инфекционным заболеванием, гельминтами и т.д.

Кроме того, при положительном результате анализа на антитела практически всегда указывается их концентрация. Если определение проводилось методом ИФА, РИА или иммуноблоттинга, то концентрация антител указывается в МЕ/мл. Но если для анализа крови на антитела применялись серологические методики, то в таком случае концентрация антител указывается в титрах, например, 1:64 и т.д.

Расшифровка каждого анализа на антитела зависит от того, какой вид антител выявлялся в крови (IgG, IgM, IgA), а также от того, к какому именно микробу или биомолекуле эти антитела. Например, если в крови обнаруживаются антитела типов IgG и IgM к какому-либо патогенному микроорганизму, то это свидетельствует о том, что человек в настоящее время болеет инфекционным заболеванием, вызываемым этим микробом. Обнаружение же в крови антител к микробу типа IgG свидетельствует о хроническом течении инфекции или о том, что человек в прошлом ее перенес и выздоровел.

Часто для определения того, насколько давно человек был инфицирован каким-либо микробом, оценивают не просто концентрацию антител типа IgG в крови, но и их авидность. Авидность антител определяет то, насколько давно они циркулируют в крови человека. Соответственно, чем выше авидность, тем больше давность перенесенного инфекционного заболевания. Например, если авидность антител к краснухе составляет менее 40 %, то человек перенес это заболевание недавно, в ближайшие три месяца. А если авидность антител к краснухе более 60 %, то инфекция была перенесена более полугода назад.

Норма анализа на антитела зависит от того, какой именно вид антител «искали» у конкретного человека. Например, если проводился анализ на антитела к вирусу краснухи у женщины, планирующей беременность, то наличие таких антител в крови, то есть положительный результат анализа, считается хорошим. Ведь если у женщины есть антитела, значит, она уже «сталкивалась» с вирусом краснухи (переболела или была привита), организм выработал иммунитет, и в настоящее время он сохранился. А значит, такой женщине не грозит заражение краснухой во время предстоящей беременности, и у нее нет риска того, что ребенок родится глухим из-за краснухи у матери.

Если же в крови человека обнаруживаются антитела к ДНК, то это плохой результат анализа, так как он свидетельствует о тяжелом аутоиммунном заболевании, когда иммунная система по ошибке считает свои органы и ткани чужими, и планомерно уничтожает их.

Анализы крови на различные антитела можно сдать в частных или государственных лабораториях, которые выполняют необходимый тест. Так как анализ на каждый вид антител выполняется при помощи специального набора, то следует сначала точно определиться, какие именно антитела нужно обнаружить, и только после этого выяснить, какие лаборатории могут это сделать.

В зависимости от того, какие именно антитела будут определяться в крови, цена анализа может быть различной. Наиболее простые и дешевые анализы стоят около 100 рублей (например, на титр антител при беременности), а дорогие – до 3000 рублей. Конкретную стоимость анализа на антитела к определенному микроорганизму или биомолекуле нужно узнавать непосредственно в лабораториях, выполняющих такие исследования.

Симптомы полиомиелита. Лабораторная и дифференциальная диагностика полиомиелита. Антитела к вирусу – видео

Автор: Наседкина А.К. Специалист по проведению исследований медико-биологических проблем.

источник

Иммуноферментный анализ крови – одно из важнейших исследований, проводимых для оценки способности организма человека противостоять атаке болезнетворных микроорганизмов. Оно позволяет понять, насколько хорошо иммунная система справляется с инфекционными процессами. Это, в свою очередь, дает возможность скорректировать схему лечения, если таковое проводится.

И это еще далеко не все особенности данного теста, поэтому давайте подробно рассмотрим вопросы, что такое ИФА анализ, кому он показан, как он выполняется, и о чем могут говорить полученные данные.

Итак, что это такое – ИФА анализ? Расшифровывается данная аббревиатура как «иммуноферментный анализ». Проводится он в том случае, если необходимо определить наличие антител к разного рода антигенам.

Антигенами называются болезнетворные агенты, способствующие развитию различных патологий. Антитела – вещества, которые необходимы для уничтожения чужеродных клеток.

Иммуноанализ крови направлен на определение уровней иммуноглобулинов, которые могут объединяться в иммунокомплексы. Они активно вырабатываются иммунной системой в ответ на внедрение в организм антигенов.

Примечание. Для борьбы с каждым отдельным видом антигена вырабатываются свои специфические антитела. Именно это помогает выявить болезнь, и даже ее стадию, с помощью иммуноферментного исследования крови.

При проникновении чужеродного антигена в организм человека антитела «связываются» с ним, после чего нейтрализуют его воздействие. Происходит это за счет ферментативного лизиса и реакций фагоцитоза. Благодаря такому процессу антигены выводятся из крови.

Разобравшись в том, что такое иммуноферментный анализ, разберемся в ситуациях, при которых показано его проведение. Так, исследование необходимо при:

  • онкологических заболеваниях;
  • вирусных гепатитах;
  • герпетических высыпаниях на коже или слизистых оболочках;
  • сальмонеллезе;
  • кори;
  • энцефалите;
  • сифилисе;
  • дизентерии;
  • атопических дерматитах или нетипичных проявлениях аллергических реакций.

Помимо этого, метод ИФА применяется для определения и выявления возбудителей:

  • заболеваний, передающихся половым путем;
  • цитомегаловирусной инфекции;
  • гельминтозов.

Иммуноферментный анализ – это исследование, помогающее определить природу эндокринных заболеваний, а также выявить наличие иммунодефицита и бесплодия у мужчин и женщин. С его помощью составляются прогнозы дальнейшего течения инфарктов, инсультов, неврологических и почечных заболеваний.

Проводится ИФА анализ и в профилактических целях. Обязательно его выполняют при беременности, а также пациентам, ранее перенесшим вышеописанные заболевания. Лица, входящие в группу риска развития ранее упомянутых болезней тоже регулярно сдают кровь на ИФА.

В большинстве случаев для иммуноферментного исследования берется кровь больного. Но при определенных обстоятельствах может осуществляться забор тканей с поверхности стекловидного тела. У беременных женщин ИФА диагностика может проводиться посредством изучения состава околоплодных вод.

Забор крови выполняется с использованием шприца, при этом материал для исследования берут, как правило, из вены, походящей на внутренней стороне локтевого сгиба. Пациент при этом должен находиться в расслабленном состоянии, в положении сидя.

Важно! Результаты теста, его и расшифровка данных зависит от методики проведения диагностической манипуляции, и используемого при этом оборудования. Как правило, каждая лаборатория указывает на бланке нормы показателей иммуноглобулинов.

Анализ крови на ИФА требует выполнения определенных подготовительных процедур:

  • отказа от завтрака в день теста;
  • прекращения приема препаратов, разжижающих кровь, и других фармакологических средств, способных повлиять на результаты (после предварительной консультации у лечащего врача);
  • воздержания от курения в день исследования;
  • отказа от употребления спиртного за день до забора крови;
  • исключения приема наркотических веществ (в том числе, и медпрепаратов, которые их содержат).

Соблюдение таких правил подготовки к иммунохимическому анализу крови исключает возможность искажения данных.

Результаты исследования выдаются пациенту на руки, после чего он проходит повторную консультацию у специалиста. Расшифровка данных ИФА может быть положительной или отрицательной. При этом в расчет также принимаются цифры, обозначающие уровень иммуноглобулинов (если таковые были обнаружены).

Если ИФА отрицательный, это может говорить об отсутствии патологических процессов, либо о начальной фазе их развития. Также «минусовый» результат исследования наблюдается при выздоровлении пациента после пройденного курса терапии. Но подобные данные можно получить только по истечении определенного промежутка времени (1 – 2 месяцев).

Если иммуноглобулины IgA и IgM в крови отсутствуют, а анализ ИФ показал положительный результат на IgG, это может свидетельствовать о том, что у пациента сформировался стойкий иммунитет к определенному виду антигенов. Подобное происходит при иммунизации.

При высокой концентрации IgM на фоне отсутствия IgG и IgA речь может идти о воспалительном процессе, протекающем в острой фазе.

Что означает, если ИФА положительный для всех видов иммуноглобулинов? В подобных случаях речь может идти о рецидиве инфекционной патологии. При этом возникновение антител фиксируется только при острой фазе хронической болезни.

При переходе заболевания в фазу затухания показатели IgM будут отрицательными. А вот ИФА на IgG и IgA будет положительным.

Исследование крови методом ИФА имеет свои сильные и слабые стороны. К плюсам можно отнести:

  • относительно невысокую стоимость;
  • точность;
  • возможность регулярного проведения с целью оценки эффективности проводимого лечения;
  • быстроту выполнения;
  • использование высокоточных и высокоинформативных технологий для получения достоверных результатов;
  • возможность проведения множественных исследований в области одного и того же очага патологического процесса;
  • абсолютную безболезненность;
  • отсутствие любых рисков для здоровья пациента;
  • относительную простоту исследования.

Исследование крови ИФА, благодаря вышеописанным преимуществам, приобрело широкую распространенность, и играет немаловажную роль в диагностике различных заболеваний.

Существенным минусом ИФА крови является вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Но это связано в большинстве случаев не с самим методом исследования, а с человеческим фактором.

Читайте также:  Групповой анализ на антитела в ростове

Еще один нюанс, способный повлиять на конечные данные, — применяемые в ходе теста медикаментозные препараты. При их неправильном использовании, либо же в случае брака, расшифровка анализов ИФА будет недостоверной. Следовательно, исследование придется проводить повторно.

Важно! Повлиять на данные теста может нарушение обменных процессов в организме пациента. Помимо этого, на результатах может сказаться и наличие сразу нескольких очагов инфекционных (хронических!) заболеваний.

Что такое ИФА анализ крови в паразитологии? Это один из самых точных и информативных методов диагностики. Определяется наличие паразитов в организме человека специфическим ИГ Е. При подтверждении диагноза его уровень в крови будет значительно повышен.

Анализ крови методом ИФА проводится для выявления:

  • аскаридоза;
  • описторхоза – острого или хронического;
  • лямблиоза;
  • токсоплазмоза.

Также при проведении исследования в организме пациента могут быть обнаружены острицы или амебы. Диагноз «лейшманиоз» и «трихинеллез» тоже нередко ставятся больным на основании данных анализа крови ИФА.

Такое исследование может давать некоторые погрешности в результатах. Однако его точность при изучении образца крови на обнаружение паразитов составляет почти 90%.

Расшифровка иммунологического анализа крови в паразитологии идентична таковой при других заболеваниях. Положительный результат говорит о наличии патологического процесса, отрицательный – об его отсутствии или начальной стадии развития.

Имейте в виду! Личинки и взрослые особи гельминтов и других паразитов могут обитать не только на стенках органов желудочно-кишечного тракта, что позволяет обнаружить их с помощью исследования кала. Вместе с циркулирующей кровью они способны перемещаться по организму, оседая в почках, сердце, печени, легких, селезенке, и даже головном мозгу. В этом случае выявить их будет крайне проблематично, поскольку яиц глистов в кале зараженного человека попросту не будет. И только с помощью анализа крови на ИФА можно определить их наличие, и принять меры для предотвращения их распространения на здоровые внутренние органы.

Конечно, самостоятельно разобраться в данных теста очень трудно, поскольку во время этого процесса должны учитываться многочисленные факторы. Вредные привычки, наличие сопутствующих заболеваний, применение определенных групп медикаментозных препаратов – все это играет важную роль, и может повлиять на результаты, что и берется в расчет врачами при расшифровке результатов ИФА.

Однако, «осведомлен, значит, вооружен», поэтому каждому человеку важно знать особенности проведения и трактовки данных тех лабораторных исследований, которые ему назначает лечащий врач. И метод ИФА не является исключением!

источник

ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA – англ.) вошел в жизнь практической медицины еще где-то в 60-х прошлого столетия. Первоначальной его задачей были гистологические исследования в научных целях, которые сводились к поиску и идентификации антигенной структуры клеток живого организма.

В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических антител (АТ) и родственных антигенов (АГ) с образованием комплекса «антиген – антитело», который выявляют при помощи фермента. Этот факт натолкнул ученых на мысль, что метод может быть использован в диагностических целях для выявления специфических иммуноглобулинов различных классов, участвующих в иммунном ответе на ту или иную инфекцию. И это был прорыв в клинической лабораторной диагностике!

Активно использоваться метод начал только в начале 80-х и то, в основном, в специализированных учреждениях. Первыми иммуноферментными анализаторами были снабжены центры и станции переливания крови, инфекционные и венерологические стационары, поскольку рожденный на африканском континенте, появившийся на горизонте у нас и тут же примкнувший к «старым» инфекциям грозный СПИД, требовал незамедлительных мер диагностики и поиска лечебных препаратов, воздействующих на него.

Возможности иммуноферментного анализа поистине обширны. Теперь и представить себе трудно, как можно обойтись без подобных исследований, применяемых буквально во всех отраслях медицины. Кажется, что может сделать ИФА в онкологии? Оказывается, может. И многое. Способность анализа находить маркеры, свойственные некоторым видам злокачественных новообразований, лежит в основе раннего выявления опухоли, когда другим способом она еще не определяется из-за своих небольших размеров.

Современная клиническая лабораторная диагностика (КДЛ), кроме онкомаркеров, располагает значительным арсеналом панелей для ИФА и использует их для диагностики различных патологических состояний (инфекционных процессов, гормональных нарушений) и мониторинга фармацевтических лечебных препаратов с целью выявления их влияния на организм больного и, кстати, не только человека. В настоящее время иммуноферментный анализ широко используется и в ветеринарной службе, ведь «братья наши меньшие» тоже подвержены многим заболеваниям, от которых, порой, очень сильно страдают.

Таким образом, ИФА, благодаря своей чувствительности и специфичности, по образцу крови, взятому из вены, может определить:

  • Гормональный статус (гормоны щитовидной железы и надпочечников, половые гормоны);
  • Присутствие вирусной и бактериальной инфекции (ВИЧ, гепатиты В и С, хламидиоз, сифилис, уреа- и микоплазмоз, герпетическая и TORCH-инфекции, а также многие другие болезни, вызванные патогенными микроорганизмами);
  • Следы жизнедеятельности микроорганизмов, возбудивших инфекционный процесс, который благополучно закончился и перешел в стадию формирования иммунного ответа на этот возбудитель. Такие следы, то есть, антитела, во многих случаях остаются циркулировать в крови пожизненно, чем защищают человека от повторного заражения.

Иммуноферментный метод, позволяет определить не только присутствие самого возбудителя (качественный анализ), но и его количественное содержание в сыворотке крови больного.

Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях.

Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск.

Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки. Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки.

Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами. Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд. На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы.

Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм сифилиса, а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак. В работе используются планшеты с определенной специфичностью (АТ классов А, М, G) или суммарные антитела.

Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:

  • IgM указывают на продолжительность инфекционного процесса (могут появляться при обострении хронических воспалительных заболеваний);
  • IgA констатируют, что заражение случилось более месяца назад;
  • IgG свидетельствуют о том, что инфекция находится в самом разгаре или о проведенном недавно лечении, что легко выясняется при сборе анамнеза.

При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования. Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой. Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ).

Анализ на ВИЧ, пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

Иммуноферментный метод, применяемый для диагностики ВИЧ инфекции, относится к первостепенным стандартным исследованиям, которые, однако, требуют особых условий, поскольку тема очень деликатная.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций, предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным. Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок. Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

  1. Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);
  2. Повторный (+) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;
  3. Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);
  4. Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

Анализы на хламидии и цитомегаловирус иммуноферментным методом также обрели особую популярность, ввиду того, что позволяют определить время заражения, стадию заболевания и эффективность лечебных мероприятий.

При внедрении хламидии тоже можно наблюдать появление антител различных классов в разных фазах патологического состояния, вызванного инфекционным агентом:

  • IgM могут обнаружиться уже дней через семь после заражения;
  • IgA говорят о том, что инфекция в организме живет уже более месяца;
  • IgG подтверждают диагноз хламидиоза, помогает следить за лечением и определить его действенность. Следует заметить, что антитела класса G остаются и циркулируют в организме независимо от давности болезни, поэтому для правильной расшифровки анализа нужно принимать во внимание референтные значения (нормы), которые, кстати, для каждой КДЛ свои: с учетом марки тест-системы и специфичности реагентов, входящих в набор. Значения нормы вписываются в бланк рядом с результатом ИФА.

Что касается цитомегаловируса (ЦМВ), то здесь несколько иначе: антитела класса М появляются приблизительно через месяц-полтора, то есть, положительным результат (IgM+) становится в фазе первичного инфицирования или при реактивации скрытой инфекции и остается таковым от 4 месяцев до полугода.

Наличие АТ класса G характерно для начала первичной острой инфекции или реинфекции. Анализ констатирует, что вирус имеет место, однако информации, в какой стадии находится инфекционный процесс – не дает. Между тем, определение нормы титра IgG тоже вызывает затруднения, так как она целиком зависит от иммунного статуса конкретного человека, который, впрочем, устанавливается выявлением иммуноглобулинов класса G. Учитывая такое поведение антител, при диагностике ЦМВИ возникает необходимость в оценке способностей антител класса G взаимодействовать с ЦМВ, чтобы потом «обезвредить» его (авидность АТ). На начальном этапе болезни IgG очень плохо связываются с антигенами вируса (низкая авидность) и лишь потом начинают проявлять активность, стало быть, можно говорить о повышении авидности антител.

Алгоритм ИФА-исследований при подозрении на ЦМВ

Что такое паразиты – вряд ли стоит рассказывать, ведь они преследуют человека, начиная с детского возраста и, в полном смысле слова, отравляют ему жизнь (продукты жизнедеятельности паразитов очень ядовиты). Они бывают внушительных размеров (гельминты, а попросту – глисты) или маленькие (амебы, трихомонады, лямблии).

До появления в клинической лабораторной диагностике иммуноферментного метода найти паразитов было весьма сложно, теперь же, как говорят: «Нет проблем!». А все потому, что есть ИФА, который отыщет паразита, в какой бы форме тот не пребывал (цисты, личинки, яйца или взрослая особь) и в какой бы части человеческого тела не находился. Для этого нужно лишь взять кровь из вены и найти антитела, которыми организм уже ответил на чужеродные антигены.

О достоинствах иммуноферментного анализа можно говорить долго и много, ведь этот метод сумел решить многие диагностические задачи, используя лишь венозную кровь. Не нужно долгих ожиданий, волнений и проблем с забором материала для исследования. К тому же тест-системы для ИФА продолжают совершенствоваться и не за горами тот день, когда тест выдаст 100% достоверность результата.

источник