Специфические белки крови выполняютразнообразные функции: осуществляют транспорт различных веществ, участвуют в свертывании крови, ингибируют протеолитические ферменты, активно участвуют в иммунных реакциях.
На течение воспалительной реакции оказывают влияние многие органы и ткани, главным образом с помощью промежуточных метаболитов, основным из которых является печень, С началом воспалительного процесса любого характера и локализации в печени изменяется скорость синтеза, а следовательно, состав и количество определенных видов белков в крови. Белки, синтез которых неспецифически увеличивается в ответ на патологические процессы разного характера (воспаление, повреждение, злокачественные новообразованиях а также при беременности называются «реактантами острой фазы воспаления».
Повышение уровня реактантов острой фазы виспаления различно. Содержание С-реактивного белка (СРБ) может возрастать на 1000%, фибриногена, гатттоглобина и агантнтрипсина — обычно на 200—400%, ферритина на 50%.
Из специфических белков наиболее часто в клинической практике определяют уровень СРВ, орозомукоида, а,-ан гитрипсина и церулоплазмина,
Кислый at-гликопротеин (орозомукоид) — белок плазмы крови, наиболее богатый углеводами. Обладает способностью ингибировать активность протеолитических ферментов, изменять адгезивность тромбоцитов, подавлять иммунореактивность, связывать многие медикаменты (пропранолол) и некоторые гормоны (прогестерон). Референтные величины содержания кислого а,-гликопротеина в сыворотке составляют 13,4— 34,1 мкмоль/л (0,55—1,40 г/л).
Орозомукоид относится к белкам острой фазы. Содержание оро- зомукоида в крови увеличивается при воспалительных процессах (инфекции, ревматические заболевания), травма, хирургические вмешательства), опухолях. Исследование этого показателя в динамике позволяет оценивать протекание воспалительного процесса, а при опухолях в случае их оперативного лечения диагностировать возникновение рецидива.
Поскольку уровень орозомукоида в кроьи увеличивается при воспалительных процессах, он способен связывать повышенное количество принимаемого больным лекарственного средства, вследствие чего может возникать расхождение между фармакологическим эффектом и уровнем препарата в крови.
Снижение содержания орозомукоида может быть выявлено в раннем детском возрасте, при беременности (в ранние сроки), тяжелых поражениях печени, нефротическом синдроме, приеме эстрогенов, контрацептивов.
а,-Анттрипсин является гликопротеидом, синтезируемым печенью. Функционально он обеспечивает 90% активности, ингибирующей трипсин в крови. Этот гликопротеид тормозит действие не только трипсина, но и химотрипсина, эластазы, калликреина, катепсинов и других протеолитических ферментов, способствуя их расщеплению. Референтные величины содержания агантитрипсина в сыворотке крови у взрослых до 60 лет 0,78—2,0 г/л, старше 60 лет — 1,15—2,0 г/л.
-Антитрипсин относится к белкам острой фазы, поэтому его содержание в сыворотке крови повышается при воспалительных
процессах! острых, подострых и хронических инфекционных заболеваниях, острых гепатитах и циррозах печени в активной форме, некротических процессах, состояниях после операций и восстановительной фазе термических ожогов, при вакцинации.
Особый интерес представляют снижение содержания а,-антитрипсина н сыворотке крови. Выраженный врожденный дефицит а,- ангитрипсина часто сочетается с ювенильной базальной эмфиземой легких, развитием эмфиземы у людей в возрасте 20-40 лет, муковис- цидозом. Довольно часто встречаются стертые формы врожденной антитрипсиновой недостаточности. У таких детей обнаруживают различные формы поражения печени, включая ранние холестазы. У 1—2% больных развивается цирроз печени.
Приобретенный дефицит 01,-антитрипсина встречается при нефротическом синдроме, гастроэнтеропатии с потерей белка, острой фазе термических ожогов, Содержание а,-антитрипсина в крови может быть снижено у больных вирусным гепатитом вследствие нарушения его синтеза в печени.
Церулоплазмин представляет собой белок, обладающий оксидазной (ферментативной) активностью. Он содержит 8 ионов Си+ и 8 ионов Си2+ и катализирует окисление кислородом различных веществ. Субстратами церулоплазмина в организме человека могут быть аскорбиновая кислота, соединения железа, норадреналин, серотонин и сульф| идрильные соединения. Он также инактивирует активные формы кислорода, предотвращая пеоекисное окисление липидов. Церулоплазмин — главный медьсодержащий белок плазмы, который относится к 2-глобулинам; на его долю приходится 3% общего содержания меди в организме и свыше 95% меди сыворотки. Ему принадлежит ведущая роль в транспорте меди к тканям. Церулоплазмин синтезируется в печени. Референтные величины содержания церулоплазмина в сыворотке крови у взрослых составляют 180—430 мг/л.
Важнейшую роль определение уровня церулоплазмина в сыворотке крови играетдля диагностик и болезни Вильсона— Коновапова (гепатоцеребральная дегенерация). В основе заболевания лежит генетический дефект синтеза белка ь печени. При недостаточности церулоплазмина ионы меди после их всасывания в желудочно-кишечном транкте из продуктов питания попадают в общий кровоток. Однако из-за отсутствия церулоплазмина в плазме ионы
меаи быстро выходят во внесосудистое пространство (содержание меди в крови снижается). Они проходят черев базальные мембраны почек в гломерулярный фильтра! и выводятся с мочой или накапливаются в тканях (например, в роговице глаза). Для проявления клинических признаков заболевания особое значение имеет степень накопления меди в центральной нервной системе. Недостаточность ионов меди в крови (вследствие дефицита церулоплазмина) приводит к повышению их резорбции б кишечнике, что еще больше способствует ее накоплению в организме с последующим повреждением органов и тканей. В наибольших количествах медь откладывается в печени и базальных ганглиях головного мозга, а также в почечных канальцах. В клинической картине болезни симптомы поражения печени обычно появляются первыми. Патолш ический процесс, развивающийся в печени (гепатит), приводит через несколько лет к хронической печеночной недостаточности. В ткани мозга появляются полости и дегенеративные изменения не только в базальных ганглиях, но и в коре головного мозга, особенно в пибных долях Неврологические симптомы чаще всего начинают отмечаться с 6—8-летнего возраста. Появляются двигательные нарушения и отклонения в психике. Движения рук напоминают взмахи крыльев птицы. Могут возникнуть психические отклонения, задержка умственного развития. Поражение почек проявляется развитием почечного канальипевого ацидоза, усиленной потерей с мочой аминокислот, неорганического фосфора, глюкозы (глюкозурия). Болезнь обычно прогрессирует медленно. Снижение уровня церулоплазмина в крови выявляется у 97% пациентов с болезнью Вильсона—Коновалова.
Однако низкие уровни церулоплазмина в сыворотке крови могут быть выявлены также при нефротическом синдроме (потеря белка с мочой), заболеваниях желудочно-кишечного тракта (нарушение всасывания аминокислот), тяжелых заболеваниях печени (в 23% случаев) вследствие нарушения его синтеза, заболеваниях центральной нервной системы (у 15% пациентов).
Церулоплазмин является белком острой фа зы (период полураспада 6 сут), поэтому возрастание его уровня наблюдается у больных с острыми и хроническими инфекционными заболеваниями, циррозом печени, гепатитами, инфарктом миокарда, системными заболеваниями, лимфогранулематозом. Повышение уровня церулоплазмина может быть отмечено у больных шизофренией
Содержание церулоплазмина в сыворотке крови увеличивается при злокачественных новообразованиях различной локализации (рак легкого, молочной железы, шейки матки, же тудочцо-кишел ного тракта) в 1,5-2 раза, достигая более значительных величин при распространенности процесса. Успешное химио- и лучевое лечение сопровождается снижением уровня церулоплазмина вплоть до нормального. При неэффективности комбинированной терапии, а также прогрессировании заболевания содержание церулоплазмина остается высоким.
источник
Белки сыворотки крови представляют собой гетерогенную группу белков, включающую транспортные белки, ферменты, иммуноглобулины, гормоны, белки-ингибиторы и многие другие. Несмотря на различия в составе, структуре, физических и химических свойствах и выполняемой функции, белкам сыворотки присущ ряд общих характеристик:
- содержат атомы углерода, водорода, кислорода, азота;
- состоят из аминокислот, соединенных пептидными связями;
- обладают поглощением в ультрафиолетовой области спектра;
- сходно ведут себя в ряде химических реакций.
Исходя из этих общих свойств и были разработаны методы определения белка в биологических жидкостях.
Среди методов определения концентрации общего белка можно выделить несколько основных групп, основанных на различных принципах:
- азотометрические;
- гравиметрические (весовые);
- «преципитационные»;
- спектрофотометрические;
- рефрактометрические;
- колориметрические.
Кроме перечисленных выше разработаны также другие методы, например, флюориметрические, поляриметрические, а также методы атомно-абсорбционной спектрофотометрии и аминокислотного анализа белка.
Азотометрические методы определения общего белка сыворотки основаны на определении количества белкового азота, образующегося при разрушении аминокислот, входящих в состав белков. Впервые метод был предложен Кьельдалем в 1883 году. В методе Кьельдаля, в настоящее время представляющем в целом исторический интерес, азот, содержащийся в составе белков, окисляют до иона аммония и его количество определяют титрованием точным раствором соляной кислоты. Кроме того, ион аммония может быть определен реактивом Несслера, манометрическим методом после превращения иона аммония в молекулярный азот под действием гипобромита или с помощью оптического теста Варбурга при участии фермента глутаматдегидрогеназы. Исходя из того, что белки из биологических объектов содержат в среднем 16 % азота, полученное в результате анализа количество азота умножают на коэффициент 6,25. Исторически используют фактор 6,25, хотя его величина зависит от белкового состава исследуемого образца. Для отдельных фракций белка в сыворотке или плазме величина фактора колеблется в диапазоне от 5,69 до 6,52.
Недостатком азотометрических методов является длительность и сложность процедуры, даже при том, что аммиак, образующийся в реакции, можно определять ферментативным методом. Автоматизация позволяет использовать этот метод в ряде случаев в качестве метода сравнения из-за его достаточной точности и воспроизводимости.
Гравиметрические (весовые) методы определения общего белка сыворотки основаны на высушивании белков до постоянной массы и взвешивании на аналитических весах. Методы трудоемки и в настоящее время практически не используются для определения общего белка сыворотки. Гравиметрический метод продолжает использоваться в некоторых лабораториях для определения фибриногена в плазме крови.
«Преципитационные» методы определения общего белка основаны на снижении растворимости белков и образовании суспензии взвешенных частиц под воздействием различных агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния (нефелометрический метод анализа), определяемого числом светорассеивающих частиц, либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).
Результаты данной группы методов зависят от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения рН среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению воспроизводимых результатов. «Преципитационные» методы для определения белка в сыворотке крови не получили признания и нашли применение при определении белка в моче, спинномозговой жидкости и многих индивидуальных белков с использованием специфических антител.
Спектрофотометрические методы определения общего белка сыворотки крови основаны на измерении светопоглощения в ультрафиолетовой области.
Растворы белка обладают поглощением при 270–290 и 200–225 нм. Поглощение при 270–290 нм определяется присутствием в молекуле белка ароматических аминокислот — тирозина, триптофана и фенилаланина. Поглощение при 200–225 нм практически в 20 раз выше, чем при 280 нм, и обусловлено главным образом пептидными связями.
Точность и специфичность методов определения белка, основанных на поглощении при 270 –290 нм, невелика, поскольку содержание тирозина и триптофана может колебаться в различных белках сыворотки крови. Кроме того, присутствие в сыворотке свободных аминокислот — тирозина и триптофана, мочевой кислоты и билирубина, поглощающих при 280 нм, вносит определенную погрешность. В связи с этим данный метод не используют для прямого определения содержания общего белка в сыворотке.
Напротив, поглощение в ультрафиолетовой области — 200 – 225 нм обусловлено в основном пептидными связями, в связи с чем величина поглощения различных белков сыворотки различается незначительно. В этом спектральном диапазоне закон Бера соблюдается при концентрации белка в сыворотке до 120 г/л.
Определение общего белка сыворотки крови с помощью прямой фотометрии при 210 нм обеспечивает получение результатов, сравнимых с биуретовым методом и методом Кьельдаля. В то же время данный метод практически не применяется из-за необходимости использования кювет, не поглощающих при 210 нм, и монохроматора, что удорожает метод.
Рефрактометрические методы определения общего белка сыворотки основаны на способности растворов белка к преломлению светового потока. При температуре 17,5 °С показатель преломления воды равен 1,3332, при той же температуре показатель преломления сыворотки колеблется в пределах 1,3480–1,3505. В связи с тем, что концентрация электролитов и небелковых органических соединений, влияющих на ее преломляющую способность, невелика и достаточно постоянна в сыворотке здорового человека, величина показателя преломления сыворотки крови зависит в первую очередь от содержания в ней белков. Калибровку прибора проводят сывороткой с известной концентрацией белка. Простота делает рефрактометрию удобным методом для определения содержания общего белка в сыворотке крови, хотя при ряде заболеваний, в частности, при сахарном диабете, хронической почечной недостаточности его использование может приводить к существенной ошибке.
Колориметрические методы определения общего белка основаны на цветных реакциях белков с хромоген-образующими реактивами или на неспецифическом связывании красителя.
Среди колориметрических методов определения концентрации общего белка сыворотки наиболее распространенным считается биуретовый метод, основанный на так называемой «цветной биуретовой реакции», в ходе которой белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет, интенсивность окраски зависит от концентрации общего белка в сыворотке. Биуретовый метод определения общего белка в сыворотке крови был утвержден в качестве унифицированного в 1972 г.
Колориметрические методы определения общего белка сыворотки крови достаточно просты и относительно дешевы. К недостатку метода относится интерферирующее действие некоторых веществ (в том числе лекарств).
Флюориметрические и другие современные методы определения общего белка (например, поляриграфический микрометод или атомно-абсорбционный анализ) обладают высокой чувствительностью и специфичностью, однако необходимость ввода специальной аппаратуры, а иногда и специальной квалификации аналитика наряду с достаточно высокой стоимостью определения делает этот метод достоянием научно-исследовательских учреждений и значительно ограничивает его использование в клинической лаборатории.
- Справочник «Лабораторные методы исследования в клинике» под редакцией Меньшикова В. В. — Москва, «Медицина», 1987 г
- А.В. Козлов А. В., Слепышева В. В. — Определение белка в сыворотке крови.
- Медицинская биохимия: Лабораторный практикум под редакцией Семиколеновой Н. А. — Омск, издательство ОмГУ, 2005 г
Для количественного определения белка пригоден любой образец мочи. Большинство исследователей для выяснения величины суточной потери белка предпочитают определять содержание белка в моче, собранной за сутки.
Раздел: Анализ мочи
Под термином общий белок сыворотки крови понимается большое количество белков, присутствующих в сыворотке крови и различающихся между собой по структуре, физико-химическим свойствам, функции. Все белки сыворотки крови делят на альбумин и глобулины. В плазме крови помимо альбумина и глобулинов содержится также фибриноген, поэтому содержание общего белка в плазме крови несколько выше, чем в сыворотке.
Раздел: Клиническая биохимия
Определение общего белка по биуретовой реакции является на сегодняшний день самым распространенным методом определения общего белка в сыворотке крови. Метод относительно дешев, прост, обладает хорошей воспроизводимостью и специфичностью, использование его позволяет выполнять исследование как на анализаторах (автоматических и полуавтоматических), так и на обычном фотометре.
Раздел: Клиническая биохимия
Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи.
Раздел: Анализ мочи
Фотометрические методы определения мочевины основаны на реакции мочевины с различными веществами с образованием окрашенных соединений. Среди фотометрических методов определения мочевины наиболее распространенными являются методы, основанные на реакции мочевины с диацетилмонооксимом.
Раздел: Клиническая биохимия
источник
Цели и задачи клинической биохимической диагностики. История развития клинической биохимической диагностики. Вклад российских и белорусских ученых в развитие. Связь с другими клиническими и теоретическими дисциплинами. Роль биохимической лаборатории в диагностическом процессе.
1.2.Организационные основы клинической биохимической диагностики
Диагностические профили и диагностические алгоритмы. Принципы унификации и стандартизации клинических биохимических исследований.
Правила оформления направлений на клинические биохимические исследования. Характеристика плановых, неотложных и дежурных исследований. Основные этапы клинического биохимического исследования. Факторы преаналитического этапа, влияющие на результат лабораторного исследования. Правила транспортировки и хранения материала для биохимического исследования. Порядок приема и регистрации проб для планового и неотложного лабораторного исследования. Порядок выдачи результатов клинических биохимических исследований. Виды биологического материала используемого в клинических биохимических исследованиях.
1.3. Устройство, оснащение и организация работы клинико-биохимической лаборатории
Биохимическая клинико-диагностическая лаборатория учреждений здравоохранения, организационная структура. Требования к помещениям клинической биохимической лаборатории, размеры площадей, перечень помещений, общее и локальное освещение, электроснабжение, система вентиляции. Виды лабораторного оборудования, аппаратов, приборов клинических биохимических лабораторий. Лабораторная мебель. Штаты клинической биохимической лаборатории. Централизация клинических биохимических лабораторных исследований.
1.4. Охрана труда и техника безопасности в клинической биохимической лаборатории
Санитарно-противоэпидемический режим в клинической биохимической лаборатории. Содержание аптечки для неотложной медицинской помощи. Правила санитарно-противоэпидемического режима при взятии крови. Правила обеззараживания использованного материала.
Неотложная помощь пострадавшим в лаборатории при травмах, ожогах, поражении электротоком. Правила безопасной работы с едкими веществами (кислоты, щелочи) и токсическими реагентами. Средства индивидуальной защиты. Противопожарная безопасность в клинической биохимической лаборатории.
Способы и средства дезинфекции различных объектов биохимической лаборатории. Контроль качества стерилизации, методы. Упаковка материалов для стерилизации. Сроки хранения простерилизованных изделий. Профилактика внутрибольничного заражения ВИЧ-инфекцией в учреждениях здравоохранения. Меры предосторожности при оказании медицинской помощи, обслуживании больных и работе с биоматериалом.
2 . Аналитические технологии и оборудование современной клинико-диагностической лаборатории
2.1. Лабораторная посуда и инструментарий. Средства пробоподготовки в лаборатории
Лабораторная посуда, классификация. Стеклянная посуда общего и специального назначения. Мерная посуда. Проверка калиброванной посуды. Пластиковая посуда и расходные материалы. Правила ухода за лабораторной посудой. Мытье и сушка лабораторной посуды. Механические и физические методы очистки. Методы сушки. Виды и особенности работы со стеклянными приборами.
Металлическое и пластиковое оборудование. Лабораторный инструментарий. Пробки и обращение с ними. Фильтровальная и индикаторная бумага.
Дозирующие устройства. Требования к дозаторам жидкости. Автоматические дозаторы. Основные режимы дозирования: прямое, обратное, многократное, разведения.
Центрифугирование, принцип метода, основные определения и формулы. Основные типы центрифугирования (осаждение, препаративное, аналитическое), их характеристика. Конструкции роторов. Классификация центрифуг. Препаративное центрифугирование, методы. Области применения центрифуг.
Перемешивающие устройства, классификация, принципы работы. Термостатирующие устройства, классификация, принципы работы. Основные типы, их характеристики. Электронагревательные устройства. Меры безопасности. Весоизмерительная техника, классификация. Основные типы весов (аптечные, техно-химические, аналитические, торсионные). Полуавтоматические весы. Автоматические весы для экспресс-взвешивания. Правила эксплуатации весов.
Химические реактивы, определение, классификация. Правила работы с реактивами. Общие правила приготовления реактивов. Правила хранения химических реактивов. Особенности организации учета движения и размещения реактивов в лаборатории. Правила оформления этикеток на реактивах. Правила приготовления растворов. Правила разбавления процентных растворов. Правила приготовления титрованных растворов. Приготовление растворов из фиксаналов. Определение рН. Буферные растворы. Фильтрование, определение, виды фильтрующих материалов. Особенности фильтрования через бумажные фильтры. Правила фильтрования и сбора фильтрата в различные емкости, фильтрование под вакуумом. Питательные среды, классификация, состав. Применение для лабораторных исследований.
Плотность раствора, определение. Виды приборов для определения плотности, особенности измерения. Измерение температуры, виды термометров, особенности работы с ними. Характеристика термометров, используемых для измерения максимальных и минимальных температур, принципы действия манометрических и электрических термометров.
2.3. Отбор и подготовка биологических образцов для биохимических анализов
Виды биологического материала, запрос на анализ, взятие материала, требования к доставке в лабораторию и хранению. Факторы влияющие на результаты биохимических исследований. Биологическая и аналитическая вариация.
2.4. Аналитические основы биохимических исследований, единицы СИ
Основные критерии оценки аналитической надежности методов лабораторных исследований: воспроизводимость, правильность, специфичность, чувствительность. Принципы определения допустимых погрешностей результатов лабораторных исследований. Факторы и вариации, влияющие на результаты лабораторных исследований: биологические, ятрогенные, преаналитические, аналитические, постаналитические. Методы коррекции факторов вариации лабораторных исследований. Понятие «норма». Критерии выбора аналитического метода исследования в лаборатории. Характеристика степени патогномоничности изменения величины лабораторного показателя для той или иной патологии. Диагностическая специфичность и чувствительность теста, способы расчета. Полезность, диагностическая и клиническая значимость результатов лабораторных исследований. Критические величины результатов лабораторных исследований. Характеристика порога клинического решения.
Единицы СИ в клинической биохимической лаборатории, определение, основы, правила образования основных типов единиц. Правила применения системы единиц, коэффициенты перевода.
3. М етоды биохимических исследований
3.1. М етоды абсорбционной фотометрии в клинической лаборатории
Фотометрические методы анализа. Методы адсорбционной фотометрии. Приборы, классификация и основные типы фотометрической аппаратуры, правила эксплуатации. Спектрофотометрия, фотоколориметрия, нефелометрия. Правила проведения фотометрии, способы оценки результатов фотометрии (по конечной точке, по фиксированному времени, кинетически), расчет результатов исследований (по калибровочной кривой, градуировочной кривой, стандартным растворам, в условных единицах, путем градуировки шкалы прибора).
3.2. Методы эмиссионной фотометрии и рефрактометрии в клинической лаборатории
Эмиссионная фотометрия (флюориметрия, пламенная фотометрия), принципы методов. Приборы, классификация и основные типы, правила эксплуатации . Применение методов эмиссионной фотометрии в клинико-диагностической лаборатории (КДЛ).
Атомно-эмиссионный спектральный анализ. Принципы, способ оценки результатов, применение в КДЛ.
Рефрактометрия, поляриметрия: принципы анализа, приборы, возможности применения в КДЛ.
3.3. Иммунохимические методы анализа в клинической лаборатории
Иммунохимические методы исследования: определение, аналитические характеристики, принципы проведения, подходы к измерению результатов реакции. Иммуноанализы с использованием меченых антигенов или антител, используемые метки. Гомогенный и гетерогенный иммунохимический анализ.
3.4. Методы радиоиммунологического и иммуноферментного анализа
Радиоиммунологический анализ (РИА): виды, особенности методов, этапы исследования, преимущества и недостатки. Расчет результатов. Реагенты и наборы для РИА. Приборы для РИА, основные типы, преимущества, недостатки, техника безопасности.
Иммунолюминесцентные методы: принципы, классификация, приборы, применение в КДЛ. Иммуноферментный анализ (ИФА). Приборы для ИФА. Измерительное и вспомогательное оборудование для проведения ИФА. Классификация методов ИФА. Принцип проведения, преимущества, недостатки, аналитические характеристики, применение в лабораториях. Основные этапы ИФА. Возможные ошибки при проведении ИФА. Оценка результатов ИФА.
3.5. Методы фракционирования: электрофорез, хроматография
Хроматография: принцип метода, основные понятия хроматографии, применяемые сорбенты, виды хроматографии и их принципы. Типы хроматографических методов в зависимости от агрегатного состояния подвижной и неподвижной фаз. Приборы для хроматографического анализа. Газовая хроматография, жидкостная хроматография, аффинная хроматография, ионообменная хроматография, гель-фильтрация: основные принципы, правила подготовки материала для исследований, применение.
Электрофорез: принцип метода, используемые носители, применение в клинике. Методы анализа электрофореграмм. Классификация методов электрофореза. Горизонтальный и вертикальный электрофорез, иммунный электрофорез, капиллярный электрофорез. Учет и представление результатов.
3.6. Молекулярно-биологические методы исследования
Методы, основанные на полимеразной цепной реакции ( ПЦР): оборудование, организация технологического процесса, правила санитарно-противоэпидемического режима. Подготовка образцов биоматериалов для тестирования нуклеиновых кислот.
Полимеразная цепная реакция: принцип, аналитическая процедура, ошибки. ДНК-зонды. ПЦР-анализ в реальном времени. Методы детекции продуктов амплификации. Интерпретация результатов.
Применение молекулярно-биологических методов в клинической практике.
3.7. Автоматизация клинико-биохимических исследований
Принципы функционирования и основные типы технологических устройств для автоматизированного биохимического исследования. Биохимические полуавтоматические и автоматические анализаторы. Критерии оценки автоанализаторов, преимущества и недостатки. Особенности организации работы на автоанализаторах. Контроль качества биохимических исследований в рамках автоматизированной системы.
3.8. Методы «сухой химии» в клинико-диагностической лаборатории
Методы «сухой химии», принцип и варианты метода. Аналитические характеристики. Индикаторные тест-полоски для полуколичественного и количественного анализа. Методы контроля функциональности тест-полосок. Приборы для «сухой» химии, основные типы, правила эксплуатации. Диагностические возможности и ограничения применения методов «сухой» химии в клинико-диагностических лабораториях.
4. Методы исследования белков и азотсодержащих веществ
4.1 . Методы определения белка сыворотки крови и мочи
Способы определения общего белка в сыворотке крови и других биологических жидкостях. Колориметрические методы (биуретовый метод, метод Лоури) и спектрофотометрический метод. Общие принципы, аналитическая процедура, чувствительность, причины ошибок.
Количественное турбидиметрическое определение белка в моче с сульфосалициловой кислотой, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Колориметрические экспресс-методы определения белка в моче. Колориметрический метод с реактивом Брэдфорда, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Определение белка Бенс-Джонса в моче. Показания к исследованию, правила подготовки материала, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Альбуминурия. Методы определения альбумина в моче. Клиническое значение определения альбумина в моче.
4.2. Методы определения белковых фракций сыворотки крови
Определение содержания альбумина сыворотки (плазмы) крови (по реакции с бромкрезоловым зеленым, биуретовым методом), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Преальбумин сыворотки крови.
Исследование белкового спектра плазмы (сыворотки) крови, принципы методов, чувствительность, ошибки. Требования к приборам, реагентам. Распределение белков плазмы (сыворотки) при электрофорезе на хроматографической бумаге, ацетатцеллюлозной пленке, гелях. Особенности аналитической процедуры и учета результатов в зависимости от носителя, интерпретация, чувствительность, ошибки. Анализ результатов с помощью денситометров. Иммуноэлектрофоретические техники в типировании моноклональных гаммапатий, подходы к выбору методов (электрофорез, иммунодиффузия, иммунофиксация), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки, клинико-диагностические аспекты. Клинико-диагностическое значение исследования протеинограмм сыворотки крови.
4.3. Методы анализа специфических белков сыворотки
Методы анализа специфических белков сыворотки, применяемые в лабораторной практике: иммунодиффузия, латекс-анализ, иммунонефелометрия, иммунотурбидиметрия, электрохемилюминесценция. Международная стандартизация исследования специфических белков. Методы подготовки образца. Референтные величины. Факторы, влияющие на результат измерения специфических белков. Допустимая аналитическая ошибка.
Определение тропонинов Т и I в сыворотке (плазме) крови (методом ИФА), принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Определение миоглобина в сыворотке (плазме) крови (методом ИФА, РИА), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Иммуноглобулины крови, представители, характеристика, методы определения, интерпретация результатов. Клинико-диагностическое значение определения специфических белков сыворотки крови.
4.4. Белки острой фазы. Пробы коллоидоустойчивости
Определение кислого альфа-1-гликопротеина, альфа-1-антитрипсина, гаптоглобина, церулоплазмина, альфа-2-макроглобулина в сыворотке крови. Определение С-реактивного белка в сыворотке (плазме) крови (турбидиметрически, латексным методом), принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Высокочувствительный С-реактивный белок, определение. Клиническая значимость определения С-реактивного белка. Пробы коллоидоустойчивости белков сыворотки крови, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
4.5. Лабораторные методы определения остаточного азота и мочевины
Правила подготовки пациента, условия и способы взятия крови, условия хранения, подготовка биологического материала для исследования. Подходы к проведению исследований, тактика применения, ограничения использования. Специфика применения методов определения остаточного азота. Клинико-диагностическое значение.
Мочевина и методы ее определения: диацетилмонооксимный, уреазный методы. Принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
4.6. Методы определения мочевой кислоты, креатинина и других азотсодержащих субстратов
Определение содержания креатинина и креатина в сыворотке крови и моче. Метод Яффе-Поппера, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение. Кинетическое исследование содержания креатинина. Клинико-диагностическое значение. Геморенальные пробы. Методика и техника выполнения пробы Реберга. Амилазо-креатининовый индекс.
Методы определения мочевой кислоты в сыворотке крови и моче. Ферментативный (уриказный) метод. Принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Определение содержания в сыворотке крови и моче индикана, аммиака, оксида азота, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Гомоцистеин в сыворотке крови, метод определения, интерпретация результатов.
4.7. Лабораторные методы оценки пигментного обмена
Гемохромогенные пигменты. Транспорт и метаболизм билирубина. Лабораторные методы определения билирубина и его продуктов в крови и моче. Особенности преаналитического этапа. Определение общего билирубина в сыворотке крови (по Йендрашику, прямой спектрофотометрический метод), конъюгированного и неконъюгированного билирубина. Клинико-диагностическое значение. Методы определения содержания билирубина и уробилиноидов в моче. Определение стеркобилиногена в кале. Интерпретация результатов. Клинико-диагностическое значение исследований пигментного обмена при желтухах различного генеза.
Функциональные билирубинемии. Синдромы Жильбера, Кларка, Криглера-Найяра, Ориеса-Люцея, Дубина-Джонсона, Ротора. Клинико-лабораторные особенности. Физиологическая желтуха новорожденных, причины формирования, подходы к лабораторному мониторингу.
Лабораторная диагностика нарушений порфиринового обмена. Принципы обнаружения продуктов порфиринового обмена в биологическом материале. Определение порфиринов порфобилиногена, дельта-аминолевуленовой кислоты в моче, аналитическая процедура, чувствительность, ограничения, интерпретация.
Первичные и вторичные порфирии. Клинические проявления. Особенности лабораторных показателей при различных нарушениях порфиринового обмена.
5. Лабораторные методы исследования активности ферментов
5.1. Аналитические основы энзимологических исследований
Аналитические основы энзимологических исследований. Правила взятия и хранения биологического материала. Классификация ферментов. Классификация методов определения активности ферментов. Методы выражения энзиматической активности. Специфика применения энзимологических методов.
5.2. Методы определения активности аминотрансфераз, альфа-амилазы, липазы, гаммаглутамилтранспептидазы, эластазы
Методы определения активности аспартатаминотрансферазы и аланинаминотраснферазы в сыворотке крови (по Райтману-Френкелю, кинетически), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Метод определения активности альфа-амилазы в сыворотке крови (по Каравею), принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Методы определения активности амилазы с использованием хромогенных субстратов и кинетически, принцип, особенности. Клинико-диагностическое значение.
Метод определения активности панкреатической липазы в сыворотке крови (кинетически), принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Метод определения активности гамма-глутамилтранспептидазы в сыворотке крови (кинетически), принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Эластаза, принцип метода определения, аналитическая процедура, интерпретация результатов.
5.3. Методы определения креатинкиназы, фосфатаз, лактатдегидрогеназы, альдолаз, глутаматдегидрогеназы. Определение ферментов в моче
Метод определения общей активности креатинкиназы в сыворотке крови, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Электрофоретические методы определения активности отдельных изоферментов креатинкиназы в сыворотке (плазме) крови, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Методы определения общей активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в сыворотке крови (Севела и Товарека, кинетически), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Электрофоретические методы определения активности отдельных изоферментов ЛДГ. Определение активности гидроксибутиратдегидрогеназы (ЛДГ1) в сыворотке (плазме) крови, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Методы определения активности альдолаз в сыворотке крови, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Методы определения активности кислой и щелочной фосфатаз в сыворотке крови, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Электрофоретические методы определения активности отдельных изоферментов кислой и щелочной фосфатаз, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Метод определения активности глутаматдегидрогеназы в сыворотке крови, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Клинико-диагностические ферментативные профили при заболеваниях печени, сердца, поджелудочной железы.
6. Методы определения углеводных и липидных компонентов
6.1. Лабораторные методы определения глюкозы
Гомеостаз глюкозы в организме. Углеводные компоненты крови. Глюкоза крови. Правила подготовки пациента, условия и способы взятия крови, условия хранения, подготовка биологического материала для исследования. Подходы к проведению исследований, тактика применения, ограничения использования. Специфика применения методов оценки углеводного обмена.
Методы определения содержания глюкозы в крови, сыворотке (плазме), ликворе и моче (орто-толуидиновый и ферментативные): принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Полуколичественное определение глюкозы с помощью тест-полосок. Клинико-диагностическое значение. Тест толерантности к глюкозе: показания, технология выполнения, клинико-диагностическое значение. Сахарный диабет, классификация, нарушения метаболизма, лабораторные критерии диагностики, мониторинга терапии и оценки осложнений.
6.2. Лабораторные методы определения гликозилированных белков и углеводных компонентов крови
Методы определения гликозилированного гемоглобина, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Методы определения фруктозамина: принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Методы определения молочной кислоты в крови, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Методы определения пировиноградной кислоты в крови (по Умбрайту, энзиматически), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Метод определения серомукоида в плазме (сыворотке) крови (орциновый метод), принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Метод определения сиаловых кислот в плазме (сыворотке) крови (резорциновый метод), принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
6.3. Лабораторные методы исследования состояния липидного обмена
Система транспорта липидов. Липопротеины сыворотки крови и их обмен. Классификация липопротеинов по плотности. Аполипопротеины: структурная и метаболическая функция. Метаболические превращения липопротеинов, ферменты обмена липопротеинов. Рецепторы липопротеинов. Лабораторная оценка липид-транспортной системы. Факторы, влияющие на результаты.
Правила подготовки пациента, условия и способы взятия крови, условия хранения, подготовка биологического материала для исследования. Подходы проведению исследований, тактика применения, ограничения использования. Специфика применения методов оценки липидного обмена.
Метод определения неэстерифицированных жирных кислот в сыворотке (плазме) крови (колориметрический метод), принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Методы определения триглицеридов в сыворотке (плазме) крови (с ацетилацетоном, с фенилгидразином и энзиматически), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Методы определения общего холестерола в сыворотке (плазме) крови (по Ильку, Златкису-Заку, энзиматически), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
Ферментативный метод определения общего и свободного холестерола в сыворотке (плазме) крови, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Определение холестерола в липопротеинах высокой плотности, принцип, аналитическая процедура, чувствительность, ошибки. Интерпретация результатов. Липопротеиновое распределение холестерола, значение для оценки липидного профиля сыворотки крови.
6.4. Методы оценки липопротеинового состава крови
Методы фракционирования липопротеинов сыворотки (ультрацентрифугирование, электрофоретическое разделение), принципы, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Методы определения аполипопротеинов, принципы, интерпретация результатов. Дислипопротеинемии. Классификация по Фридриксону. Типирование. Современные представления об атерогенезе. Клинико-диагностические аспекты исследования липидных компонентов крови.
6.5. Система «перекисное окисление липидов – антиоксидантная защита организма»: лабораторные методы оценки. Лабораторная оценка эндотоксемии
Правила подготовки пациента, условия и способы взятия крови, условия хранения, подготовка биологического материала для исследования. Подходы к проведению исследований, тактика применения, ограничения использования.
Спектрофотометрический метод определения содержания диеновых конъюгатов, кетодиенов и оснований Шиффа в плазме крови, принцип, аналитическая процедура, чувствительность, ошибки. Интерпретация результатов.
Определение содержания тиобарбитуровокислото — активных веществ (малонового диальдегида) в эритроцитах крови, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Факторы антиоксидантной защиты и их определение. Определение супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы, глутатиона в крови, общей антиоксидантной активности плазмы крови, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Биохимические фазы эндогенной интоксикации. Показатели интегральной оценки эндотоксикоза. Определение среднемолекулярных пептидов, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки. Клинико-диагностическое значение.
7. Лабораторная оценка водно-минерального обмена и кислотно-основного состояния
7.1. Лабораторные методы оценки водно-электролитного баланса
Распределение электролитов во вне- и внутриклеточном пространстве. Осмотическое давление. Общая осмоляльность плазмы, осмотическое равновесие. Лабораторные методы оценки обмена воды и осмоляльности биологических жидкостей.
Показания к определению концентрации электролитов, виды биологического материала. Условия взятия, хранения и транспортировки биологического материала. Особенности преаналитического этапа.
Методы определения концентрации калия, натрия и хлорид-ионов в биологических жидкостях (пламенная фотометрия, ионометрия), принципы, аналитическая процедура, чувствительность, интерпретация, ошибки. Методы определения ионов с использованием ферментов.
Клинико-диагностическое значение исследования показателей водно-электролитного обмена. Нарушения водного – электролитного обмена, классификация, клинические признаки, лабораторные показатели. Лабораторный мониторинг эффективности лечебных мероприятий.
7.2. Лабораторные методы оценки минерального обмена
Метаболизм кальция, неорганического фосфора, магния, в организме. Регуляция обмена кальция, фосфора, магния.
Показания к определению концентрации кальция, магния и фосфора, виды биологического материала. Условия взятия, хранения и транспортировки биологического материала. Особенности преаналитического этапа.
Лабораторные тесты для исследования обмена кальция. Методы определения концентрации кальция (ионизированного и лигандного) и магния в биологических жидкостях (ионометрия, атомная адсорбционная спектрофотометрия), принципы, аналитическая процедура, чувствительность, интерпретация, ошибки. Ультрафильтрация как метод разделения фракций кальция.
Лабораторные тесты для исследования обмена фосфора. Методы определения концентрации неорганического и общего фосфора крови, неорганического фосфора мочи (по восстановлению фосфорномолибденовой кислоты), принцип, аналитическая процедура, чувствительность, интерпретация, ошибки.
Лабораторные тесты для исследования обмена магния. Исследование уровня магния в сыворотке крови, эритроцитах, моче. Методические подходы, клинико-диагностическое значение.
Нарушения метаболизма кальция, фосфата и магния. Причины развития, клинические и лабораторные признаки гипер- и гипокальциемии, гипер- и гипофосфатемии. Недостаточность магния.
Нарушения метаболизма кальция и фосфора при заболеваниях костной ткани. Биохимические маркеры формирования и резорбции кости, методы определения. Клинико-диагностическое значение результатов при заболеваниях костной ткани (остеомаляция, остеопероз, болезнь Педжета, метастазы опухоли в кость).
7.3. Лабораторные методы оценки кислотно-основного состояния организма
Понятие кислотно-основного состояния (КОС) организма. Буферные системы крови. Аналитические основы измерения параметров КОС. Основные параметры (рН, рСО 2 , бикарбонат-анион, дефицит (избыток) буферных оснований, лактат и другие) и дополнительные лабораторные показатели (параметры обмена кислорода, электролитного обмена, параметры определяемые в моче, функционально-нагрузочные пробы).
Показания к исследованию, виды биологического материала. Условия взятия, хранения и транспортировки биологического материала. Преаналитические ошибки.
Методы исследования КОС на автоматических анализаторах, принципы, аналитическая процедура, чувствительность, интерпретация. Точность измеряемых показателей. Оценка и диагностика нарушений КОС по номограммам.
Классификация нарушений КОС. Механизмы формирования и клинико-лабораторная диагностика респираторных и нереспираторных нарушений КОС.
Смешанные нарушения кислотно-основного обмена. Причины, лабораторная диагностика.
Основные принципы коррекции нарушений кислотно-основного обмена. Принципы лабораторного мониторинга основных типов нарушения КОС.
7.4. Лабораторные методы оценки обмена железа
Регуляция всасывания и обмена железа. Транспорт железа в организме. Депо железа. Диагностические тесты для определения содержания железа в организме. Определение содержания железа в организме. Правила подготовки пациента, условия и способы взятия крови, условия хранения, подготовка биологического материала для исследования. Подходы проведению исследований, тактика применения, ограничения использования.
Методы определение содержания железа в сыворотки крови, аналитическая процедура, интерпретация результатов. Методы определения общей и ненасыщенной железосвязывающей способности сыворотки крови: принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Определение трансферрина, процента насыщения трансферрина железом, уровня растворимых рецепторов к трансферрину в сыворотке крови. Методы, клинико-диагностическое значение.
Лабораторные методы оценки запасов железа в организме. Лабораторные методы определения ферритина, принцип, аналитическая процедура, чувствительность, ошибки, клиническая интерпретация результатов.
Десфераловый тест, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, чувствительность, ошибки.
Клинико-диагностическое значение оценки обмена железа. Патология обмена железа. Причина дефицита железа, клинические проявления, лабораторная диагностика. Избыточное содержание железа в организме, клинические проявления, лабораторная диагностика.
8. Лабораторные методы оценки системы гемостаза
8.1. П редставления о системе гемостаза. Преаналитический этап в оценке гемостаза
Основные функциональные компоненты гемостаза. Факторы свертывания. Первичный гемостаз и его компоненты. Вторичный гемостаз. Внешний и внутренний механизмы свертывания крови. Современные представления о механизме коагуляционного гемостаза. Основные компоненты противосвертывающей и фибринолитической систем, регуляция.
Особенности преаналитического этапа при исследовании системы гемостаза: планирование объема исследований, правила подготовки пациента, условия и способы взятия крови, оборудование и реактивы, условия хранения, приготовление стабилизированной крови, тромбоцитарной и бестромбоцитарной плазмы, сыворотки для исследования гемостаза. Обработка лабораторной посуды.
8.2. Методы исследования сосудисто-тромбоцитарного гемостаза
Оценка времени кровотечения по Айви, Дуке: принцип, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки. Определение резистентности капилляров (проба щипка, жгута). Определение показателей тромбоцитов: подсчет тромбоцитов в камере Горяева, в мазке, на автоматических анализаторах. Оценка свойств тромбоцитов: средний объем, дисперсия по объему, тромбоцитокрит, принципы, аналитическая процедура, клинико-диагностическое значение. Определение агрегации тромбоцитов с АДФ, адреналином, ристоцетином: принцип, аналитическая процедура, оценка агрегатограмм, клинико-диагностическое значение.
8.3. Методы исследования коагуляционного гемостаза
Исследование внутреннего и общего пути свертывания: активированное время рекальцификации – каолиновое время, активированное частичное тромбопластиновое время – каолин-кефалиновое время, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки, преимущества и недостатки.
Исследование внешнего и общего пути свертывания: протромбиновое время, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки, преимущества и недостатки. Расчет протромбинового индекса и международного нормализованного отношения. Клинико-диагностическое значение.
Исследование конечного этапа свертывания крови: тромбиновое время рептилазное время, определение содержания фибриногена, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки, преимущества и недостатки.
8.4. Методы исследования фибринолитической и противосвертывающей систем. Клинические аспекты оценки системы гемостаза
Время лизиса эуглобулинового сгустка, тесты паракоагуляции, определение спонтанного фибринолиза, определение XII-зависимого фибринолиза, определение продуктов деградации фибрина, определение D – димеров, α2-антиплазмина, ингибитора активатора плазминогена, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки, преимущества и недостатки, клинико-диагностическойе значение.
Методы определения антитромбина III, протеинов С и S, принципы, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки, преимущества и недостатки.
Методы автоматизации коагулологических исследований, принципы работы анализаторов, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки, преимущества и недостатки.
Лабораторный контроль терапии прямыми и непрямыми антикоагулянтами. Лабораторная диагностика гиперкоагуляционных состояний и тромбофилий. Лабораторная диагностика ДВС-синдрома.
9. Методы исследования обмена гормонов и биогенных аминов
9.1. Общее представление о методах исследования гормонального обмена
Общие принципы функционирования эндокринной системы. Причины развития эндокринной патологии. Основные подходы лабораторного обследования при подозрении на эндокринную патологию. Физиологические основы клинико-лабораторных тестов оценки гормональных нарушений. Применение гормональных исследований в клинической практике.
Особенности преаналитического этапа при планировании гормональных исследований: правила подготовки пациента, условия и способы взятия крови, условия хранения, подготовка биологического материала для исследования. Подходы к проведению исследований, тактика применения, ограничения использования. Специфика применения методов оценки гормонального статуса.
Нарушения функции оси «гипоталамус-гипофиз»: основные причины формирования, клинические проявления. Лабораторные методы исследования функциональной активности гипоталамуса и гипофиза. Гормоны передней доли гипофиза, методы определения, факторы интерференции, клинико-диагностическое значение. Антидиуретический гормон, определение в плазме крови, интерпретация результатов, клинико-диагностическое значение.
9.2. Лабораторная оценка обмена гормонов надпочечников
Гормоны надпочечников: транспорт, экскреция, биологические эффекты. Лабораторные тесты для оценки функции коры надпочечников. Методы определения кортикостероидов и их метаболитов в плазме крови: материал для исследования, особенности преаналитического и аналитического этапов, клинико-диагностическое значение. Динамические функциональные тесты для выявления избытка кортизола, особенности проведения, клинико-диагностическое значение. Динамические функциональные тесты для выявления недостатка кортизола, особенности проведения, клинико-диагностическое значение.
Лабораторные тесты в диагностике нарушений системы ренин-ангиотензин-альдостерон. Определение уровня альдостерона в крови, определение активности ренина сыворотки, ангиотензина I и II, тест с фуросемидом. Оценка показателей водно-электролитного и кислотно-основного обменов в диагностике заболеваний гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы.
Андрогены надпочечников, биологическая функция адреналовых андрогенов. Методы оценки андрогенсекретирующей функции надпочечников, применение в клинике.
Методы исследования гормонов мозгового слоя надпочечников. Определение содержания адреналина, норадреналина, дофамина и диоксифенилаланина (ДОФА) в моче, принцип, аналитическая процедура, чувствительность, интерпретация, ошибки. Клинико-диагностическое значение. Количественное определение ванилил-миндальной и гомованилиновой кислот в моче, принцип, аналитическая процедура, чувствительность, интерпретация, ошибки. Нарушения функции мозгового вещества надпочечников. Лабораторные методы диагностики феохромацитомы.
9.3. Лабораторная оценка обмена гормонов щитовидной железы
Синтез, распределение и механизм действия гормонов щитовидной железы. Основные нарушения функции щитовидной железы, причины повышенной и пониженной функций щитовидной железы. Биохимические лабораторные методы диагностики нарушений функции щитовидной железы. Тесты 1-го, 2-го, 3-го уровней, интерпретация полученных результатов, клинико-диагностическое значение. Функциональные тесты для исследования патологии щитовидной железы: проба с тиреотропин-рилизинг-гормоном (ТРГ, тиролиберин), показания, техника проведения, интерпретация результатов.
Методы определения уровня циркулирующих антител к ткани щитовидной железы: виды антител, показания для исследования, диагностическое значение, интерпретация результатов.
Исследование экскреции йода с мочой, возможности клинического применения.
9.4. Лабораторная оценка обмена женских и мужских половых гормонов
Синтез, распределение и механизм действия половых гормонов. Репродуктивная система у плода, новорожденного, в препубертатном периоде. Особенности функционирования репродуктивной системы у женщин и мужчин в период полового созревания и репродуктивном возрасте. Особенности функционировании репродуктивной системы у женщин и мужчин в климактерическом возрасте.
Биохимические лабораторные методы диагностики нарушений функции женской и мужской половой системы. Методы определения концентрации тропных гормонов (лютропин, фоллитропин, пролактин), показания для исследования, клинико-диагностическое значение. Методы определения концентрации эстрогенов в крови, показания, клинико-диагностическое значение. Методы определения концентрации прогестерона в крови, показания, клинико-диагностическое значение. Клинико-диагностическое значение определения хорионического гонадотропина, альфа-фетопротеина в биологических жидкостях пациента, показания для выполнения, клинико-диагностическое значение. Функциональные пробы, используемые в диагностике заболеваний яичников (проба с гестагенами, эстрогенами, кломифеном, люлиберином), цель и техника проведения, интерпретация результатов.
Методы определения концентрации тестостерона и других андрогенов в плазме крови, показания к исследованию, клинико-диагностическое значение определения. Функциональные пробы, используемые в диагностике заболеваний яичек (проба с хорионическим гонадотропином, кломифеном и гонадотропин-рилизинг-гормоном), цель и техника проведения, интерпретация результатов.
9.5. Лабораторные методы исследования биогенных аминов
Лабораторные методы оценки обмена 5-гидрокситриптамина. Определение уровня 5-гидрокситриптамина в крови флюориметрическим методом, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки, клинико-диагностическое значение.
Определение содержания гистамина в цельной крови флюориметрическим методом, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки. Определение активности гистаминазы в сыворотке крови, принцип, аналитическая процедура, интерпретация, ошибки. Клинико-диагностическое значение исследования системы «гистамин-гистаминаза».
10. Биохимические исследования в диагностике наследственных заболеваний и злокачественных опухолей
Патогенетические механизмы развития наследственных болезней обмена веществ. Последствия ферментативных дефектов. Недостаточность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. Клинико-лабораторные изменения.
Галактоземия. Биохимические основы. Клинико-лабораторные проявления.Фенилкетонурия. Биохимические основы. Клинико-лабораторные проявления. Муковисцидоз. Патогенез. Клинические проявления. Лабораторная диагностика.
Современные подходы к пренатальной диагностике наследственных заболеваний: показания, сроки проведения, принципы обследования матери и плода.
Метаболические аспекты онкологических заболеваний. Алгоритм исследования на онкомаркеры. Специфичность и чувствительность. Факторы, влияющие на уровень онкомаркеров. Схема назначения исследований. Интерпретация результатов тестирования опухолевых маркеров. Роль в клинической практике.
Камышников, В.С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике / В. С. Камышников. – М.: МЕДпресс-информ., 2009. – 896 с.
Камышников, В.С. Техника лабораторных работ / В. С. Камышников. – Мн.: Белорусская наука, 2001. – 286 с.
Назаренко, Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И.Назаренко, А.А.Кишкун. – М.: Медицина, 2000. – 544 с.
Долгов, В.В. Лабораторная диагностика нарушений обмена минералов и заболеваний костей / В. В. Долгов, И.П. Ермакова. – М.: РМАПО, 1998. – 60 с.
Камышников, В.С. Методы клинических лабораторных исследований / В. С. Камышников. – Мн.: Белорусская наука, 2002. – 776 с.
Кишкун, А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики / А.А. Кишкун. – М.: ГЭОТАР-МЕД., 2007. – 780 с.
Комаров, Ф.И. Биохимические исследования в клинике / Ф.И.Комаров, Б.Ф.Коровкин, В.В.Меньшиков. – Элиста: АПП Джангар, 1999. – 250 с.
Маршал, В.Дж. Клиническая биохимия; пер. с англ. / В.Дж. Маршал. – М.: БИНОМ, 1999. – 368 с.
Никулин, Б.А. Пособие по клинической биохимии / Б.А. Никулин. – М.: ГЭОТАР-МЕД., 2007. – 254 с.
Преаналитический этап обеспечения качества лабораторных исследований (справочное пособие) – М.: Лабинформ, 1999. — 318 с.
Ткачук, В. А. Клиническая биохимия / В.А.Ткачук. – М.: ГЭОТАР-МЕД., 2004. – 512 с.
Цыганенко, А.Я. Клиническая биохимия: учебное пособие / А.Я. Цыганенко, В.И. Жуков, В.В. Мясоедов, И.В. Завгородний. – М.: Триада, 2002. – 502 с.
источник