Меню Рубрики

Чувствительность анализов на гепатит с

Вирусный гепатит С представляет серьезную медико-социальную проблему. Около 180 млн. человек в мире сегодня страдают этим заболеванием, 350 тысяч ежегодно умирает. Длительное скрытое (бессимптомное) течение заболевания приводит к запоздалой диагностике. Анализ на гепатит С проводится с целью диагностики заболевания, дифференциальной диагностики, с его помощью определяют ранее перенесенное заболевание «на ногах».

Исследование применяется у лиц с симптомами гепатита С, повышенным уровнем ферментов печени, при получении сведений о перенесенном ранее заболевании неуточненной этиологии, у лиц из групп риска и скрининговых исследованиях.

Диагностика гепатита С проводится в 2 этапа:

1 этап. Определение наличия в сыворотке крови антител к вирусу (анти HCV).

2 этап. При наличии анти HCV проводится тест на наличие РНК (рибонуклеиновой кислоты) методом ПЦР на гепатит С. Тест позволяет выявить фазу процесса — «активная/неактивная», решить вопрос о необходимости лечения. Известно, что около 30% инфицированных лиц, самостоятельно избавляются от инфекции, так как имеют сильную иммунную систему и в лечении не нуждаются. С помощью ПЦР определяется генотип вируса. Разные генотипы по-разному реагируют на лечение.

Степень поражения печени определяется с помощью биопсии или других инвазивных и неинвазивных тестов (например, фибротест). Степень стеатоза печени определяется с помощью стеатотеста. Во всех случаях диагностика гепатита С должна базироваться на данных эпидемиологического расследования, клинике заболевания и данных биохимического исследования крови.

Рис. 1. Тяжелые последствия вирусного поражения печени — напряженный асцит.

Антитела к вирусам (анти HCV) являются специфическими маркерами инфицирования. В организме больного человека к белкам вируса (антигенам) вырабатываются специфические антитела — иммуноглобулины класса IgM и IgG (анти HCV IgM/IgG).

При получении положительного результата на антитела выполняется подтверждающий тест — определение суммарных антител к структурным и неструктурным белкам вируса. К структурным оболочечным белкам вируса Е1 и Е2 вырабатываются aнти HCV IgM, нуклеокапсидному белку С — cor (aнти HCV IgG), к 7-и неструктурным белкам-ферментам NS (aнти HCV NS IgG).

Для выявления антител к вирусу гепатита С используется иммуноферментный анализ (ИФА). Для подтверждения (+) результатов ИФА применяют подтверждающие тесты — RIBA (рекомбинатный иммуноблотинг), реже Inno-Lia (анализ синтетических пептидов).

  • Антитела IgM появляются в сыворотке крови через 4 — 6 недель после инфицирования и быстро достигают максимума. По окончании острого процесса (через 5 — 6 мес.) их концентрация падает.
  • Длительная регистрация наличия анти HCV IgM говорит о том, что гепатит С приобрел хроническое течение.
  • Повышение уровня IgM в период хронического течения говорит о реактивации инфекционного процесса.
  • Уровень иммуноглобулинов IgM позволяет проводить оценку эффективности лечения.

Антитела IgG появляются в сыворотке крови больного через 11 — 12 недель после инфицирования. На 5 — 6 месяце регистрируется пик концентрации. Далее антитела сохраняются на постоянном уровне в течение всего срока заболевания в острый период и период выздоровления.

Суммарные антитела к вирусу (аnti HCV total) используются для диагностики «свежих» случаев заболевания. Суммарные антитела — это антитела нуклеокапсидному белку С — cor (aнти HCV IgG) и 7-и неструктурным белкам-ферментам NS (aнти HCV NS IgG) — aнти HCV NS3, aнти HCV NS4 и aнти HCV NS5.

Суммарные антитела к вирусу гепатита С появляются в сыворотке крови инфицируемого спустя 11 — 12 недель от начала инфицирования, достигают пика к 5 — 6 месяцу и сохраняются на постоянном уровне в течение всего срока заболевания в острый период и в течение 5 — 9 лет после периода выздоровления.

Каждый из видов антител имеет самостоятельное диагностическое значение:

  • Анти HCV C (cor) являются основными показателями контакта с вирусами гепатита С.
  • Анти HCV NS3 выявляются одними из первых в процессе сероконверсии (выработки антител в ответ на присутствие вируса), указывают на остроту инфекционного процесса и свидетельствуют о высокой вирусной нагрузке. С их помощью определяется гепатит С у больных, не подозревающих у себя наличие инфекции. Продолжительное нахождение анти HCV NS3 в сыворотке крови говорит о высоком риске хронизации процесса.
  • Анти HCV NS4 говорят о том, что гепатит С имеет длительное течение. По уровню титров антител можно судить о степени поражения печени.
  • Анти HCV NS5 указывают на наличие вирусной РНК. Их обнаружение в острый период является предвестником хронизации процесса. Высокие титры антител на фоне лечения говорят о том, что больной не отвечает на лечение.
  • Анти HCV NS4 и анти HCV Данный вид антител появляются на поздних сроках развития гепатита. Их снижение указывает на формирование ремиссии инфекционного процесса. После излечения титры антител NS4 и NS5 снижаются в течение 8 — 10 лет. От повторного заражения этот вид антител не защищает.

Рис. 2. Макропрепарат. Цирроз печени — грозное осложнение вирусного гепатита С.

Отсутствие антител к вирусу гепатита С обозначается термином «Норма». Однако это не всегда это обозначает отсутствие заболевания у человека. Так отсутствие антител в крови у инфицированного человека регистрируется до момента их появления в крови — в срок до 6-и месяцев с момента заражения (в среднем через 12 недель). Период отсутствия антител в крови инфицируемого называется «серологическим окном». Высокой специфичностью (до 99,7%) обладают тест-системы 3-го поколения (ELISA-3). Около 0,3% приходится на получение ложноположительных результатов.

Наличие анти HCV свидетельствуют о текущей инфицированности или перенесенной в прошлом инфекции.

  • Обнаружение антител IgM и антител Corе IgG , нарастание титров антител Corе IgG и (+) результат ПЦР при наличии клинических и лабораторных признаков острого гепатита говорит об остром периоде заболевания.
  • Обнаружение антител IgM, анти HCV Corе IgG, анти HCV NS IgG и (+) результат ПЦР при наличии клинических и лабораторных признаков заболевания указывает на реактивацию хронического гепатита С.
  • Обнаружение анти HCV Corе IgG и анти HCV NS IgG при отсутствии клинических и лабораторных признаков заболевания и отрицательном результате ПЦР говорит о наличии у больного хронического гепатита в латентной фазе.

Рис. 3. Макропрепарат печени. Первичный рак печени — грозное осложнение гепатита С.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является «золотым стандартом» диагностики вирусного гепатита С. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять генетический материал вирусов (РНК) даже если их в исследуемом материале единицы. ПЦР способна выявлять РНК вирусов задолго до появления антител в сыворотке крови, но не ранее чем с 5-го дня от момента инфицирования. При заболевании с помощью ПЦР РНК вирусов обнаруживаются не только в сыворотке крови, но и в биоптатах печени.

  • Полимеразная цепная реакция позволяет определить наличие или отсутствие в крови вирусов гепатита С и решить вопрос о начале лечения. Известно, что до 30% больных самостоятельно избавляются от инфекции, так как имеют сильную иммунную систему и в лечении не нуждаются.
  • С помощью ПЦР определяется генотип вируса. Разные генотипы по-разному реагируют на лечение.
  • ПЦР применяется с целью контроля за эффективностью лечения.
  • ПЦР применяется при отсутствии антител в крови, но при наличии весомых подозрений на заболевание (повышение уровня щелочной фосфатазы, общего билирубина, превышение в 2 раза печеночных ферментов АСТ и АЛТ).
  • Анализ ПЦР на гепатит С используется с целью контроля над внутриутробной передачей вирусов гепатита.

к содержанию ↑

С помощью анализа ПЦР возможно определить не только наличие РНК вирусов в крови — качественный анализ (обнаружено/не обнаружено), но и их количество — вирусную нагрузку (количество единиц вирусной РНК в 1 мл крови). Количественный показатель ПЦР применяется с целью контроля эффективности лечения.

Методы, применяющиеся для проведения ПЦР, обладают разной чувствительностью. В РФ согласно методическим рекомендациям 2014 года рекомендовано применять методики, обладающие чувствительностью 25 МЕ/мл и менее. Согласно рекомендациям Европейской ассоциации по изучению печени 2015 года предлагается применять методики определения вирусной РНК, обладающих чувствительностью 15 МЕ/мл и менее.

В зависимости от чувствительности тест-системы больной получает тот или иной результат исследования:

  • Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR составляет 600 МЕ/мл (анализатор старого поколения).
  • Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR ВГС-TEST составляет 50 МЕ/мл, что составляет 100 копий в 1 мл.
  • Минимальная чувствительность анализатора РеалБест РНК ВГС составляет 15 МЕ/мл, что составляет 38 копий в 1 мл (входит в группу современных тест-систем). Специфичность данных анализаторов составляет 100%. С их помощью выявляются РНК вирусов гепатита С субтипов 1а и 1b, 2а, 2b, 2c и 2i, 3, 4, 5а и 6.

При наличии копий РНК ниже порога чувствительности данного анализатора пациент получает ответ «не обнаружено».

Рис. 4. Пример анализа ПЦР (количественный тест). Определение вирусной нагрузки.

  • Отсутствие РНК вируса указывает на отсутствие инфицирования.
  • Отсутствие РНК в анализе на фоне наличия антител в крови указывает на исчезновение болезни под влиянием лечения или при самоизлечении.
  • В ряде случаев вирус присутствует в крови, но в подпороговых уровнях, когда его концентрация не улавливается анализаторами. Такие больные остаются опасными в плане заражения.
  • Выявление РНК вируса в течение 6 месяцев подряд у больных с острым гепатитом С говорит о том, что заболевание приняло хроническое течение.
  • Снижение вирусной РНК в анализах на фоне лечения говорит об эффективности проводимой терапии и наоборот.

Рис. 5. Макропрепарат. Жировой гепатоз — одно из последствий заболевания.

Биохимические анализы крови помогают установить функциональное состояние многих органов и систем человека.

Печеночные ферменты синтезируются внутриклеточно. Они принимают участие в синтезе аминокислот. Их большое количество находится в клетках печени, сердца, почек и скелетной мускулатуры. При поражении органов (нарушение целостности клеточных мембран) ферменты поступают в кровь, где их уровень повышается. Повышенный уровень ферментов регистрируется при поражении (лизисе, разрушении) печеночных клеток, инфаркте миокарда и других заболеваниях. Чем выше уровень трансаминаз в сыворотке крови, тем больше клеток подверглось разрушению. АЛТ преобладают в клетках печени, АСТ — в клетках миокарда. При разрушении клеток печени уровень АЛТ повышается в 1,5 — 2 раза. При разрушении клеток миокарда уровень АСТ повышается в 8 — 10 раз.

При диагностике хронического вирусного гепатита необходимо обращать внимание на соотношение АСТ/АЛТ (коэффициент де Ритиса). Превышение уровня АСТ над АЛТ говорит о поражении печеночных клеток.

  • Норма АСТ для мужчин составляет до 41 ед./л, женщин — до 35 ед./л, детей старше 12 лет — до 45 ед./л.
  • Норма АЛТ для мужчин составляет до 45 ед./л, женщин — до 34 ед./л, дети 12 лет и старше — до 39 ед./л.
  • В норме (у здоровых людей) коэффициент АСТ/АЛТ имеет значение от 0,91 — 1,75.

Билирубин является продуктом распада гемоглобина. Билирубин в крови содержится в виде непрямого (до 96%) и прямого (4%). Процесс распада этого вещества происходит, в основном, в клетках печени, откуда с желчью выводится из организма. При разрушении клеток печени уровень билирубина в сыворотке крови возрастает. В норме содержание общего билирубина составляет менее 3,4 — 21,0 мкмоль/л. При уровне 30 — 35 мкмоль/л и выше билирубин проникает в ткани, из-за чего кожа и склеры приобретают желтушную окраску.

Рис. 6. Желтуха — один из признаков поражения печени.

источник

Для лечения печени наши читатели успешно используют Leviron Duo. Видя, такую популярность этого средства мы решили предложить его и вашему вниманию.
Подробнее здесь…

Причиной болезни является вирусный агент, который относится к РНК-содержащим возбудителям. Он имеет отличительную черту – способность мутировать, то есть изменять свою структуру. Благодаря этому инфекция ускользает от атаки иммунной системы и в большинстве случаев приводит к хронизации воспалительного процесса в печени.

Учитывая существование различных подтипов вируса, подбор лекарственных средств должен проводиться с учетом результатов генотипирования. Несмотря на длительное изучение болезни и особенностей строения HCV, до сих пор не удалось разработать специфическую прививку от заболевания.

Трудности ранней диагностики заключаются в бессимптомном течении гепатита, вследствие чего человек обращается к врачу на стадии цирроза. Чтобы вовремя обнаружить заболевание, требуется регулярное проведение медосмотров. Только путем лабораторного исследования крови удается выявить HCV и предупредить заражение окружающих. Дело в том, что носитель инфекции может длительное время не догадываться о патологии и продолжать передавать вирус здоровым людям.

Вирус в большинстве случаев распространяется через кровь, так как в ней содержится наибольшая концентрация патогенных агентов. Таким образом, инфекция передается:

  • при гемодиализе;
  • при уколе зараженной иглой;
  • в процессе драки, когда травмируются кожные покровы, и происходит гемоконтакт;
  • при гемотрансфузии (переливании крови).

Вероятность заражения при интимной близости незначительная, так как в сперме и выделениях из влагалища содержится небольшое количество возбудителей. Риск инфицирования существенно увеличивается при нарушении целостности слизистой гениталий. Такое наблюдается при агрессивном и анальном сексе.

Что касается вертикального способа передачи инфекции, то он осуществляется в процессе родовой деятельности. В периоде вынашивания плода возбудитель не может проникнуть через плаценту к эмбриону. При естественных родах патогенный агент передается ребенку при травмировании его кожи, когда наблюдается контакт с кровью матери.

Читайте также:  Зачем перед операцией анализ на гепатит

После проникновения возбудителя в здоровый организм начинается синтез антител, которые являются защитой от инфекции и относятся к иммунным структурам. Именно они обнаруживаются при первичном исследовании человека с помощью ИФА.

Для подтверждения диагноза пациенту проводится полимеразная цепная реакция. Она представляет собой анализ на выявление генетического материала патогенного агента и определение вирусной нагрузки.

Лабораторная диагностика начинается с проведения иммуноферментного анализа. Основная его задача заключается в обнаружении антител, вырабатывающихся против возбудителя. Его эффективность – почти 95%. Благодаря этому исследованию на доклинической стадии удается выявить вирусоносителя и направить его на дальнейшее обследование.

Качественный анализ ИФА указывает на наличие или отсутствие иммуноглобулинов в крови пациента. Его результат может быть «положительный» или «отрицательный». Получив первый вариант ответа, человек направляется на следующее обследование – ПЦР. Его цена зависит от качества реактивов и лаборатории. Стоимость полимеразной цепной реакции может достигать 4 тысяч рублей.

С помощью полимеразной цепной реакции даже небольшой объем биологического материала позволяет оценить вирусную нагрузку в крови, то есть подсчитать концентрацию возбудителей в одном миллилитре жидкости.

С появлением ПЦР диагностика гепатита значительно упростилась. Анализ дает возможность выявить РНК HCV, установить стадию инфекционного процесса и заразность вирусоносителя.

Существует несколько разновидностей генетической диагностики:

  1. качественный анализ ПЦР на гепатит С – подтверждает факт наличия или отсутствия HCV в крови обследуемого:
  2. количественный, благодаря которому можно подсчитать концентрацию вирусов и установить стадию болезни. Результат выдается в МЕ/мл или копии/мл (в зависимости от лаборатории);
  3. генотипирование – необходимо для определения генотипа HCV. Это требуется для точного подбора лекарственных средств, которые будут максимально эффективны в данном случае. Анализ косвенно указывает на тяжесть патологического процесса в печени. Так, при третьем генотипе возбудителя чаще всего наблюдается стеатоз, в основе развития которого лежит накопление жира в гепатоцитах (ее клетках). Помимо этого, тип вируса влияет на результат и продолжительность терапевтического курса.

Первым делом в лаборатории биологический материал исследуется на наличие РНК HCV. Важно помнить, что качественный анализ на гепатит С имеет определенный уровень чувствительности, в связи с чем не всегда может давать верный ответ. В таком случае рекомендуется повторное проведение лабораторной диагностики с применением других реактивов.

Для получения достоверных результатов следует использовать тест-системы с чувствительностью – не ниже 50 МЕ/мл.

Результат диагностики может быть как «положительный», так и «отрицательный». Если возбудитель не найден в крови, исследование завершается. При выявлении патогенного агента в образце далее проводится количественный подсчет вирусной нагрузки.

Ложноотрицательный ответ получается, когда нарушается технологический процесс, например, в среду попадают активные компоненты, угнетающие построение копий возбудителя. Таким образом не удается отобразить истинную картину крови, из-за чего инфицирование человека не диагностируется.

Ложноположительный результат можно получить, если пробирка для забора биологического материала, а также среда для проведения исследования были загрязнены. Помимо этого, такой ответ анализа возможен при микст-инфекции, когда печень поражается несколькими вирусами, например, гепатитом С и D.

Врач может назначать пациенту качественное исследование на выявление РНК вируса гепатита С:

  • при получении положительного или сомнительного ответа иммуноферментной диагностики;
  • для верификации диагноза;
  • определения вирусной нагрузки;
  • постановки стадии заболевания;
  • диагностики микст-инфекции. Зачастую гепатит С поражает печень одновременно с вирусом «D»;
  • определения терапевтической тактики с учетом генотипа возбудителя;
  • оценки динамики изменений на фоне лечения противовирусными медикаментами.

К преимуществам полимеразной цепной реакции относится:

  1. высокая чувствительность методики, что позволяет установить факт инфицирования на доклинической стадии;
  2. выявление генетического материала возбудителя, а не антител к нему;
  3. возможность установления субтипа патогенного агента;
  4. высокая скорость диагностики, так как не требуется посев материала на питательную среду, а достаточно использовать специфические тест-системы. Человек получает результат спустя 5 часов;
  5. универсальность. Анализ позволяет выявить любой генетический материал (РНК, ДНК). Благодаря этому врач может подтвердить гепатит С и другие виды болезни (В);
  6. возможность выявления скрытой инфекции.

При исследовании крови с помощью полимеразной цепной реакции удается подсчитать количество возбудителей в фиксированном объеме биологического материала. Показатель представлен в МЕ/мл. Благодаря анализу можно установить степень заразности пациента, определить стадию инфекционного процесса, а также оценить эффективность лекарственной терапии.

На основании ПЦР специалист решает, какие дозы медикаментов позволяют блокировать размножение возбудителей. Кроме того, определяется длительность противовирусного лечения и прогноз для жизни. Важно помнить, что тест-системы имеют высокую чувствительность, поэтому метод дает возможность подтвердить инфицирование человека еще на доклинической стадии.

Учитывая способность возбудителя мутировать, для определения тактики лечения и выбора противовирусных лекарств необходим его генотип. Например, лечение гепатита HCV 1 длится 48 недель, при этом положительная динамика отмечается лишь в 60% случаев. Генотипы 2 и 3 имеют более благоприятный прогноз. Противовирусные лекарства назначаются на 8 месяцев, а их эффективность достигает 85%.

Согласно статистическим данным, в большинстве случаев на территории Российской Федерации регистрируется HCV 1, 2 и 3.

При расшифровке лабораторного исследования может быть указан такой ответ – «не типируется». Это значит, что в кровеносной системе больного циркулирует вирус, которого не удается распознать тест-системой. Результат анализа в данном случае свидетельствует о заражении человека нетипичным для данной географической зоны возбудителем.

Чтобы качественное исследование ПЦР по выявлению РНК возбудителя гепатита С показало правильные результаты, необходимо соблюдать требования по подготовке к лабораторной диагностике:

  1. забор крови осуществляется натощак, причем «голодный» промежуток не должен быть короче 8-ми часов;
  2. за два дня до исследования рекомендуется прекратить распитие спиртных напитков и отказаться от острых, жирных и копченых блюд;
  3. отменить введение лекарственных средств, снижающих свертываемость крови, например, гепарина. Если данные медикаменты назначены по жизненным показаниям, необходимо предупредить об этом врача. Кроме того, специалист должен знать о приеме других препаратов, которые могут повлиять на результат лабораторного исследования;
  4. накануне забора биологического материала не следует проводить физиотерапевтические процедуры и подвергать себя тяжелой физической нагрузке.

На результаты анализа может влиять не только человек, сдающий кровь, но и другие факторы, а именно:

  • некачественный забор крови;
  • несоблюдение рекомендаций по транспортировке биологического материала;
  • недостаточная профессиональная подготовка работников лаборатории;
  • несоблюдение техники проведения исследования;
  • введение антикоагулянтов (гепарина) накануне забора крови. Данная группа лекарств снижает свертываемость, тем самым замедляя работу реактивов.

В разных лабораториях ответ диагностики может несколько отличаться, однако эти погрешности не влияют на конечный результат исследования.

Особое внимание уделяется видам тест-систем, которые используются в лаборатории. Зачастую предпочтение отдается реактивам с высокой чувствительностью. Это важно для пациентов с низкой вирусной нагрузкой, поскольку ее сложно обнаружить.

Первично полимеразная цепная реакция проводится людям, у которых при иммуноферментном анализе были выявлены антитела к возбудителю гепатита. В данном случае она назначается для подтверждения факта заражения человека и установления стадии болезни. Кроме того, анализ позволяет определить субтип вируса, что особенно важно для выбора лекарственных средств.

Следующим периодом для обязательного лабораторного исследования является 3 месяца от начала противовирусной терапии. Диагностика дает возможность оценить эффективность медикаментов, откорректировать дозу или заменить их.

Помимо основных анализов, ПЦР может дополнительно проводиться на 4 и 24 неделях от начала лечения. Положительный прогноз болезни подтверждается уменьшением вирусной нагрузки по истечении трех месяцев терапии. Так, например, она должна снизиться с 1 миллиона МЕ/мл до нескольких сотен тысяч.

Если концентрация патогенных агентов в крови остается на прежнем уровне или несколько нарастает, это указывает на неэффективность противовирусных средств и требует их замены. С помощью ПЦР в конце лечения удается подтвердить выздоровление пациента.

Чтобы правильно трактовать результаты лабораторной диагностики, требуется консультация гепатолога или инфекциониста. Учитывая большую частоту ложных ответов при ИФА, анализ используют исключительно для первичного скрининга. Для более тщательного обследования пациента применяется полимеразная цепная реакция.

  • 1 Вирусная нагрузка, зачем ее определяют при гепатите?
  • 2 Как определяется?
  • 3 Расшифровка результатов
  • 4 Может ли быть ошибка в таблицах?
  • 5 Сроки проведения анализа и пределы
  • 6 Как снизить вирусную нагрузку?

Определяется вирусная нагрузка при гепатите С для того, чтобы установить концентрацию патогенных микроорганизмов в крови. Вирусная инфекция может протекать бессимптомно, анализ показывает динамику вирусных тел и вероятность ремиссивного состояния. Нагрузка позволяет проследить реакцию организма и назначить дальнейшую схему лечения. Гепатит С имеет острую форму и хроническую, но при каждом состоянии болезнь требует к себе особого внимания.

Вирусная нагрузка — это определение концентрации вирусных рибонуклеиновых кислот в крови, очень важно контролировать уровень нагрузки. В медицинской практике используют несколько тестов для ее определения. Вирусы — это неполноценные микроорганизмы, они встраиваются в клеточную структуру и начинают их разрушать. Так происходит и с клетками печени при заболевании, именно поэтому вовремя поставленный диагноз убережет от необратимых процессов.

Если в организме пациента выявлены антитела РНК к гепатиту С, возникает необходимость установить их количество. Кровь забирается с вены утром натощак, курящие должны воздержаться от сигарет за 40 минут до сдачи образцов. Для диагнострования используют 3 распространенных теста:

  • Метод ДНК. Направлен на установление нагрузки, при показателе не ниже 5000 международных единиц на миллилитр. К сожалению, он обладает маленькой чувствительностью, но доступен для всех людей и прост в проведении.
  • Определение вирусной нагрузки с помощью транскрипционной амплификации. Метод основан на обнаружении генетического материала. Основное преимущество — высокая чувствительность даже к несущественным показателям.
  • Полимеразная цепная реакция. Также относится к ряду сверхчувствительный тестов, он помогает выявить заболевание на ранних стадиях развития. Если в крови обнаружены РНК, значит лечение движется в правильном направлении. После исследования обязательно назначается УЗИ печени и забор биоматериала.

Всего различают два вида определения нагрузки: качественный и количественный. Качественная направлена на выявление наличия вирусной инфекции. Соответственно ответ будет получен положительный либо отрицательный. Количественный используется для получения результатов в единицах, используется на более поздних стадиях болезни. Это необходимо для корректирования терапии и выявления общей картины.

РНК в капле крови свидетельствует о вирусной нагрузке.

Норма у взрослых на вирусную нагрузку является отсутствие РНК в крови. Если они все же были выявлены, сдается образец повторно. Высокий показатель свидетельствует о структурно-функциональном нарушении печени. Отрицательный показатель говорит о мизерном содержании либо неправильно выполненном хранении материала. Рекомендуется проводить тест в одном и том же месте, во избежание существенно разных результатов.

Чем выше нормы концентрация вируса гепатита С, тем опаснее человек для окружающих людей. Средняя концентрация позволяет проводить адекватную терапию, что приведет к скорому выздоровлению.

При получении бланка с результатами будет приведена таблица с количественными данными:

После первого сданного образца результаты будут готовы через неделю. Если вирус будет выявлен, то второй анализ с нагрузкой состоится не раньше чем через месяц. Единоразово процедура проводится пациентам, у которых выявлены антитела. В большинстве случаев ответ на первый анализ выдается в виде подтверждения диагноза либо опровержения, и в виде числовой таблицы при высоких показателях, когда требуется смена лечения.

Пределы РНК важны для лечения, чем выше концентрация тем сложнее и дольше будет процесс восстановления. В активной форме вирус продолжает дальше встраиваться и разрушать клетки не только печени, но и близлежащих органов. Когда данные теста указывает на снижение вируса, а это может произойти спустя 3 дня, то пациента переводят на поддерживающую терапию. Стоит брать внимание на все результаты анализов и только после этого делать соответствующие выводы.

В последнее время гепатит С стал плохо поддаваться медикаментозной терапии, разработано новое дорогостоящее лекарственное средство стоимостью 84 тысячи долларов за 3-х месячный курс лечения.

Снизить показатели до нормы, то есть избавиться от вируса, крайне сложно, но перейти от острой формы в латентную возможно. Иногда это происходит само собой, а иногда приходится прибегнуть к медикаментозному лечению. Чтобы это сделать, сперва следует расшифровать генотип вируса, выяснить все противопоказания на препараты, а также установить наличие сопутствующих болезней. На снижение концентрации влияет множество факторов начиная от пола и возраста больного до давности инфицирования. При правильной диагностике и лечении эффективность составляет от 40 до 90%. Даже несущественное снижение показателей замедляет процесс денатурации клеток и тканей. С целью профилактики можно обратиться в медицинский центр для вакцинации. Также не стоит забывать о поддержании тонуса организма, регулярные обследования не дадут вирусной инфекции стать причиной цирроза печени.

источник

РНК-вирус проникает в клетки печени и вызывает болезнь – гепатит С. Заболевание проходит в острой и хронической форме. Для него характерно протекание без видимых признаков. Такое течение объясняется высокой способностью вируса к мутации и появлению различных видов. Это помогает патогену приспосабливаться к организму хозяина и ускользать от иммунной защиты.

Исследования на ранних стадиях развития не дает результата. Качественный анализ ПЦР на гепатит С проводят, чтобы выявить патоген, и начать вовремя лечение.

Гепатит С – серьезное заболевание, при хроническом развитии которого возникает цирроз и рак печени. Ученые длительное время не могут разработать вакцину от болезни, несмотря на изучение особенностей строения HCV. Многообразие видов патогена слабо поддается изучению.

Только с помощью лабораторных исследований можно обнаружить поражение органа, и предупредить инфицирование окружающих. С этой целью проводят качественный анализ ПЦР на гепатит С.

Носитель в течение многих лет может быть инфицирован и не подозревать о болезни. Качественный анализ предполагает проведение в лаборатории полимеразной цепной реакции крови пациента на наличие РНК вируса. Диагностика проводится на сверхчувствительном медицинском оборудовании, которое помогает его обнаружить.

Качественное обследование с помощью ПЦР обладает достоинствами перед другими методами:

  • даннй метод помогает выявить генетический материал патогена на ранних стадиях;
  • показывает вид возбудителя;
  • используется система тестов, нет необходимости высеивать материал в питательной среде;
  • обладает высокой скоростью диагностики возбудителя: результат анализа будет готов через 5 часов;
  • выявляет скрытую инфекцию.

Качественный анализ назначают при профилактическом осмотре, когда имеются показания на его проведение. Он проводится во время лечения, после выздоровления. С его помощью подтверждают наличие или отсутствие антител вируса гепатита С в крови.

  • количественное содержание генотипа HCV;
  • качественные характеристики вирусной РНК;
  • генотипирование.

Диагностику проводят повторно для подтверждения результата с более чувствительным реагентом.

Для проведения качественной ПЦР нужны предпосылки для ее назначения:

  • сексуальная связь с лицом, который инфицирован вирусом гепатита;
  • цирроз печени;
  • обязательное обследование перед оперативным вмешательством;
  • проведение вакцинации против вируса гепатита В;
  • плановое обследование работников медицинских учреждений, садов, школ.

Если у пациента видны явные признаки гепатита:

  • желтизна кожных покровов, белков глаз;
  • боль в правом подреберье;
  • усталость;
  • увеличение в размерах печени;
  • тошнота.

Вирус гепатита С проникает в клетки печени через кровеносные сосуды. Патоген может попасть при гемодиализе, при пользовании инфицированной иглой, при нанесении татуировки, в стоматологических и косметических кабинетах.

Возможна передача вируса новорожденному от инфицированной матери, если происходит травмирование кожи ребенка при родах. Качественный анализ выявляет вирус и указывает на второстепенные признаки: наличие в крови больного антител.

Врач-гепатолог или инфекционист проводит расшифровку результатов ПЦР и ИФА на гепатит С. Полученные данные подтверждаются комплексным обследованием:

  • биохимическим анализом;
  • УЗИ органа;
  • биопсией печеночных тканей.

Опираясь на полученные данные, врач подтверждает или отрицает гепатит С.

Стандартная чувствительность теста на ПЦР колеблется в пределах 10-500 МЕ/мл. Анализ не дает результата, если она ниже указанного параметра.

Количественный анализ ПЦР показывает вирусную нагрузку: концентрацию патогена в человеческом организме (сколько фрагментов флававируса в 1 мл крови). Такой метод обследования назначают перед началом комплексной терапии и на 12 неделе заболевания. Он помогает:

  1. Выявить степень болезни. Если концентрация вируса в крови пациента высокая, возможна передача инфекции другим лицам.
  2. Назначить противовирусную терапию, выбрать нужный метод лечения.
  3. Сделать прогноз выздоравления.

Важно определить генотип, так как патоген постоянно мутирует и приспосабливается к организму. Известно 11 типов, на территории РФ выявлены три: 1, 2, 3. Обследование покажет тип вирусной инфекции.

  • РНК обнаружено;
  • РНК не обнаружено (болезнь не выявлена);
  • тип флававируса;
  • количественный состав (концентрацию в крови);
  • название теста.

Если гепатит С обнаружен в биологическом материале пациента, врач назначает повторное исследование, чтобы исключить ошибку. Обследование биоматериала делают от 1 до 5 дней. Срок исполнения зависит от загруженности персонала.

Присутствие флававируса и антител к нему свидетельствует о продолжительном течении болезни, которая перешла в хроническую стадию. Ложные показания бывают у беременных женщин и у людей, имеющих другие инфекционные заболевания.

Качественный анализ не обнаружил гепатит С. Отрицательное значение означает, что в крови отсутствуют РНК вируса. Утомляемость и другие признаки возможно связаны с протеканием другой инфекции в организме и требуют дальнейшего изучения.

Если вирус обнаружен в крови, нельзя отчаиваться и впадать в панику. В 20 процентах болезнь излечивается самостоятельно. Антитела не всегда свидетельствует о том, что вы болеете гепатитом С. Случаются ошибки при лабораторных исследованиях. Доброкачественные и злокачественные опухоли, инфекционные очаги в организме, проведенная ранее вакцинация смазывают картину ПЦР.

Раннее обнаружение помогает вовремя остановить болезнь. Назначают противовирусную терапию. Препараты помогают вылечить хроническое заболевание в течение 3-6 месяцев.

источник

«Выявление генов вируса гепатита С (HVC) в крови пациента является вторым этапом лабораторной диагностики этой инфекционной патологии. Чтобы обнаружить возбудителя, который не имеет клеточной мембраны и, соответственно, поверхностных антигенов, используют метод полимеразной цепной реакции. С помощью этого метода определяют непосредственно молекулу, в которой закодирована вся его генетическая информация — РНК.

РНК — Рибонуклеиновая кислота, наряду с ДНК входит в состав клеток всех живых организмов. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет способность к ее мутациям.

Исследование на наличие генома HVC назначают обычно после того, как проводят общий, биохимический анализ крови и получают положительный ответ на антитела (anti-HVC).

Исследование на антитела к HVC является скрининговым, то есть с его помощью можно обследовать большие контингенты населения (медиков, беременных, пациентов стационаров, доноров, инъекционных наркоманов, ВИЧ-инфицированных). Отрицательный результат лабораторного анализа anti-HVC говорит о том, что в крови обследуемого не обнаружено иммунной реакции на вирус. Отрицательный результат может быть получен в таких случаях:

Если человек никогда не заражался гепатитом С.

Если чувствительность лабораторной тест-системы оказалась ниже, чем концентрация anti-HVC.

Если инфицирование произошло менее 2 месяцев назад и anti-HVC в крови еще недостаточно для определения. При ложноотрицательном ответе по причине человеческого фактора.

Если же получен результат, что антитела к HVC у больного обнаружены, это значит, что вирус гепатита С находился в организме обследуемого на момент проведения исследования или был в крови некоторое время назад. При положительном результате на anti-HVC возникает необходимость проведения дополнительных лабораторных исследований, которые обнаружат генетический материал самого возбудителя, определят концентрацию его генов (вирусную нагрузку, виремию) и установят генотип.

Геном HVC в лабораторных условиях можно обнаружить с помощью нескольких исследований:

транскрипционной амплификации (ТМА);

полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Метод р-ДНК — недорогой и простой способ обнаружения вирусного генома у большого количества обследуемых людей. Его главным недостатком является низкая чувствительность: выявляет HVC только при его концентрации свыше 500 МЕ/мл.

Метод транскрипционной амплификации обнаруживает в сыворотке крови нуклеиновые кислоты вируса. Анализ имеет высокую чувствительность (5-10 МЕ/мл), но он еще недостаточно внедрен в повсеместную лабораторную практику.

Метод ПЦР в России является самым распространенным и доступным лабораторным обследованием с высокой чувствительностью (от 50-60 МЕ/мл).

Исследование ПЦР выполняется в любой клинической лаборатории, имеющей соответствующую аккредитацию. Очень важным нюансом этого метода диагностики, который влияет на результат анализа, является чувствительность используемой в лаборатории тест-системы. Например, чувствительность диагностикума 60 МЕ/мл, как в лабораториях «Инвитро», позволяет обнаруживать вирусную РНК спустя 3 месяца после заражения. При низкой чувствительности тест-системы гены возбудителя могут не обнаруживаться даже спустя 4 месяца после инфицирования.

Метод ПЦР имеет множество преимуществ перед другими лабораторными исследованиями для обнаружения генов HVC:

высокая чувствительность. Метод позволяет определять генетический материал возбудителя даже при его минимальной концентрации в образце;

большая специфичность. Выявляет гены вируса определенного генотипа среди множества ДНК и РНК других возбудителей, что позволяет проводить генотипирование возбудителя;

быстрота проведения. Отсутствие длительного процесса культивирования возбудителя сокращает время получения результата до нескольких часов; универсальность анализа.

Универсальная процедура проведения исследования позволяет одновременно использовать один образец крови человека для обнаружения генетического материала разных возбудителей. Эти преимущества позволяют считать ПЦР «золотым стандартом» лабораторной диагностики вирусного гепатита С вместе с иммуноферментным анализом на anti-HVC.

ПЦР — это исследование, используемое для определения генов HVC в крови обследуемого человека. Исследование состоит из нескольких этапов:

Отбора образца биоматериала.

Многократного увеличения концентрации копий РНК в отобранном образце.

Обнаружения генетического материала с помощью специальных тест-систем.

После забора венозной крови у пациента проводят искусственное инициирование процесса множественного реплицирования (амплификации, копирования) генов HVC.

Для этого определенным способом несколько раз изменяют температуру внутри пробирки с биоматериалом. Когда количество копий РНК в пробирке достигает необходимого значения, проводят обнаружение возбудителя с помощью специальных тест-диагностикумов.

качественной (обнаруживает присутствие вируса),

количественной (определяет концентрацию вирусных генов в единице объема)

генотипической (устанавливает генотип возбудителя).

Задача качественного ПЦР — определение наличия HVC в представленном биоматериале. Это исследование проводится обычно для скрининговой диагностики заболевания или выявления носительства. Назначают его после того, как выявят anti-HVC методом ИФА.

Чтобы поставить диагноз гепатита С, достаточно обнаружить генетический материал HCV качественно, то есть без подсчета его концентрации в объеме крови. Результатом качественного ПЦР может быть: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено».

Точность метода соответствует 95%. При этом точность самих тест-диагностикумов достигает 100%, а 5% — это человеческий фактор, который всегда присутствует в лабораторных исследованиях. Чтобы избежать ложноотрицательного анализа, особенно у людей с низкой виремией, необходима высокая чувствительность применяемой в исследовании диагностической системы. Чувствительность тест-системы должна быть не меньшей, чем 60 МЕ/мл.

Количественный анализ назначают тогда, когда нужно знать уровень виремии в организме человека. Показаниями для проведения этого исследования являются:

положительный результат качественного ПЦР при условии обнаружения антител к вирусу;

установление стадии патологии;

определение вирусной нагрузки при гепатитах;

выбор комбинации противовирусных препаратов;

мониторинг вирулогического ответа на проводимую противовирусную терапию;

оценка вероятности перехода острого гепатита С в хронический.

Результат анализа выражается в МЕ/мл (международных единицах в 1 мл сыворотки) или в копиях/мл (количестве копий генов вируса в 1 мл сыворотки). Количественный ПЦР не имеет нормы: в норме ген HVC в крови человека обнаруживаться не должен. Полученные результаты обследования сравнивают с референсными значениями, установленными для той или иной степени вирусной нагрузки.

ниже 4×10*5 считаются низкой виремией;

Чем больше копий вирусной РНК в крови, тем агрессивнее протекает заболевание и больше риск передачи вируса окружающим. Но уровень вирусной нагрузки — не единственный показатель, влияющий на тяжесть течения патологии и дальнейший прогноз для пациента: важен также генотип возбудителя.

Установление генотипа необходимо для назначения правильной схемы лечения. От него также зависит прогноз для здоровья и жизни пациента. Например, вирус 3 генотипа чаще приводит к фиброзу или циррозу печени, в сравнении с пациентами носителями 1 генотипа.

РНК Диагноз гепатита С невозможно поставить только по результатам только качественного и/или количественного анализа ПЦР: определения HVC и уровня вирусной нагрузки недостаточно для назначения адекватной противовирусной терапии. Потенциального больного нужно обследовать комплексно (клинически, лабораторно, инструментально), чтобы иметь объективную картину патологии. Правильно назначить комплекс обследований для установления диагноза гепатита С, а затем грамотно расшифровать полученные результаты может только врач.

источник

Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.

По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.

Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев. Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Различают три вида ПЦР-анализа:

    Качественный анализ ПЦР . Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.

Количественный анализ ПЦР . Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.

  • Генотипирование . Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.
  • ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

    • контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
    • положительный результат иммуноферментного анализа;
    • признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
    • появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
    • повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
    • перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
    • с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
    • после окончания лечения для контроля за рецидивами;
    • при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

    Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

    В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.

    Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности.

    Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования.

    Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование.

    Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно.

    Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким.

    Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови.

    Обнаружена РНК определенного генотипа

    В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа.

    Обнаружена РНК вируса гепатита С

    В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования.

    Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала.

    Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

    Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

    • кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
    • образец биоматериала был загрязнен;
    • в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
    • в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

      Диагностика на ранних стадиях . ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.

    Низкая вероятность ошибки . В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.

  • Высокая чувствительность . ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.
  • Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

    Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

    • анализ крови сдают с утра;
    • перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
    • за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
    • в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.

    источник

    Существует множество субтипов HCV, из-за чего не всегда удается подобрать эффективные противовирусные лекарства и достичь желаемых результатов в лечении. Разнообразие возбудителей обусловлено их способностью изменять свою структуру, то есть мутировать. Вследствие этого иммунитет не успевает сформировать мощный ответ против патогенного агента, а медикаменты оказываются неэффективными.

    Зачастую гепатит диагностируется на стадии цирроза, чему предрасполагает позднее выявление болезни из-за отсутствия клинических признаков. Только путем лабораторного исследования удается обнаружить HCV в инкубационном периоде.

    Количественный анализ на гепатит С дает возможность не только установить факт присутствия возбудителя в крови, но и подсчитать его концентрацию.

    Специфической подготовки к лабораторной диагностике не требуется. Достаточно придерживаться следующих рекомендаций:

    1. количественный анализ проводится натощак, при этом последний прием пищи – за 8 часов до забора крови;
    2. за двое суток следует отказаться от спиртного и «тяжелых» блюд;
    3. особое значение имеют лекарственные средства, которые принимает пациент. Они могут повлиять на результат исследования, поэтому врач должен знать о них.

    Также не желательна тяжелая физическая нагрузка и физиотерапевтические процедуры накануне забора крови. Чтобы расшифровка количественного анализа на гепатит С получилась достоверной, не стоит пренебрегать вышеперечисленными рекомендациями.

    Зачастую результат анализа пациент получает через сутки. Цена исследования на определение концентрации возбудителя в крови зависит от лаборатории и качества реактивов и может достигать 4 тысяч рублей.

    К числу первостепенных методов диагностики относится ИФА, или иначе иммуноферментный анализ. Он назначается для обнаружения специфических антител к HCV. Его эффективность достигает 95%. Если расшифровка исследования дает положительный результат, стоит заподозрить присутствие возбудителя в крови.

    Заметим, что у половины обследуемых при «+» тесте в ходе дальнейшей диагностики вирусный агент в крови не выявляется. ИФА в данном случае указывает на перенесенный контакт с HCV в прошлом, что подтверждается циркулирующими антителами.

    Более точным исследованием является полимеразная цепная реакция, или иначе ПЦР. Она позволяет определить концентрацию РНК возбудителя в крови. Обнаружив генетический набор вируса в биологическом материале, врач подтверждает гепатит С.

    ПЦР назначается пациенту для верификации диагноза. Она дает возможность выявить РНК на стадии, когда антитела еще отсутствуют. Существует несколько видов генетических исследований:

    1. количественный анализ ПЦР на гепатит С, который не только устанавливает факт присутствия возбудителя в крови, но и предоставляет информацию о его концентрации;
    2. качественный – подтверждает инфицирование;
    3. генотипирование – позволяет определить генотип патогенного агента и подобрать наиболее эффективные лекарства против него.

    Как уже было сказано, существует несколько видов лабораторного исследования:

    • качественный анализ – свидетельствует о присутствии патогенного агента в крови. Данный вид диагностики имеет определенный «уровень реагирования», поэтому не всегда оказывается достоверным. Чтобы правильно расшифровать результаты и получить реальные показатели, для исследования рекомендуется использовать тест-систему с чувствительностью — не ниже 50 МЕ/мл. Норма анализа – это «отрицательный ответ» или «вирус не обнаружен». Это указывает на отсутствие генетического набора возбудителя в исследуемом материале. Если результат оказался положительный, требуется дальнейшее обследование пациента;
    • количественный анализ ПЦР на гепатит С определяет вирусную нагрузку, то есть концентрацию патогенного агента в крови. Результат исследования показывает число единиц РНК в фиксированном объеме биологической жидкости;

    Вирусная нагрузка – это подсчет инфекционной РНК в одном миллилитре крови исследуемого. Единицы измерения – МЕ/мл, однако некоторые лаборатории определяют «копии/мл», при этом указывая на бланке нормы анализа для сравнения и оценки результатов.

    • генотипирование. Из-за способности возбудителя изменяться выбор эффективных противовирусных лекарств для терапии должен осуществляться на основании его генотипа. От него зависит не только результат, но и длительность лечебного курса. Так, гепатит HCV 1 требует назначения медикаментов на год, однако положительная динамика наблюдается лишь в 60% случаев. Что касается второго и третьего генотипов, то они являются менее стойкими к действию противовирусных средств, из-за чего эффективность терапии превышает 85%. При получении такого результата исследования – «вирус не типируется», стоит заподозрить присутствие возбудителя, который не распознается стандартными тест-системами.

    Расшифровка количественного анализа на гепатит С необходима для:

    1. дальнейшего обследования пациента, когда при ИФА были обнаружены антитела к HCV;
    2. подтверждения диагноза;
    3. установления вирусной нагрузки при микст-инфекции, когда человек заражен несколькими видами возбудителя;
    4. определения тактики лечения (выбора противовирусных медикаментов, их замены или завершения терапии);
    5. оценки динамики прогрессирования заболевания, а также эффективности лекарств;
    6. определения стадии патологии (острая, хроническая).

    ПЦР имеет следующие преимущества:

    1. хорошая чувствительность, благодаря чему удается подсчитать даже небольшое количество вируса;
    2. определение самого возбудителя (РНК), а не антигенов;
    3. специфичность методики — установление определенного типа патогенного агента;
    4. быстрота получения результатов, ведь для анализа не требуется выращивание культур на питательной среде. Ответ готов через 5 часов;
    5. универсальность – позволяет выявить генетический набор различных возбудителей, как РНК, так и ДНК-содержащих (гепатит В);
    6. обнаружение скрытой инфекции.

    Лабораторное исследование помогает подтвердить диагноз и является неотъемлемой частью комплексного обследования (анализа клинических симптомов, результатов ИФА и биохимии).

    Кроме того, ПЦР широко используется в аллергологии, генетике, а также для установления факта отцовства.

    Оценка результатов лабораторной диагностики осуществляется врачом путем сравнения полученных данных с нормой.

    Ответ анализа (МЕ/мл) Что означает
    Не обнаружено Это норма количественного анализа на гепатит С, что свидетельствует о том, что возбудитель не найдет, или его концентрация находится ниже уровня чувствительности методики
    До 1,8*10^2 Содержание патогенного агента ниже нормы
    До 8*10^5 Низкая вирусная нагрузка, что указывает на благоприятный прогноз и эффективную терапию
    Более 8*10^5 Возбудитель обнаружен — большая нагрузка.
    Выше 2,4*10^7 Концентрация вируса значительно превышает линейный диапазон

    Концентрация патогенного агента определяется амплификатором и сравнивается с диапазоном, границы которого от 1,8*10^2 до 2,4*10^7. Благодаря регулярному обследованию вирусоносителя удается своевременно обнаружить увеличение вирусной нагрузки, что подтверждает активацию возбудителя и обострение болезни.

    На результаты ПЦР могут влиять некоторые факторы:

    • некачественный сбор материала;
    • введение гепарина накануне исследования. Он относится к лекарственным средствам, которые уменьшают свертываемость крови, тем самым замедляя действие реактивов ПЦР;
    • несоблюдение правил транспортировки материала;
    • низкий уровень профессионализма врачей-лаборантов;
    • несоблюдение техники проведения анализа.

    Норма количественного исследования на определение РНК вируса гепатита С может несколько отличаться в разных лабораториях, однако эти погрешности зачастую не влияют на конечный результат обследования. Не последнюю роль играет вид тест-систем, а именно их чувствительность. Это особенно важно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой, которую некоторые лаборатории могут не обнаружить.

    Лабораторная диагностика проводится на этапе обнаружения гепатита С, в процессе лечения, а также после проведенной терапии. Это дает возможность правильно установить субтип возбудителя, подобрать эффективные лекарства и отследить динамику изменений на фоне их приема.

    Кроме того, исследование крови позволяет подтвердить выздоровление или хронизацию инфекционно-воспалительного процесса. Обязательным считается анализ перед началом терапии и спустя 3 месяца, что необходимо для оценки динамики и эффективности выбранных противовирусных средств.

    Дополнительно врач назначает ПЦР на 4 и 24 неделях терапии. О благоприятном прогнозе можно говорить при снижении вирусной нагрузки к концу третьего месяца. Например, при ее уменьшении с 1 млн МЕ/мл до 100 тысяч. Если концентрация возбудителей остается на прежнем уровне или несколько увеличивается, значит, противовирусные медикаменты неэффективны, и требуется их замена или добавление новых.

    В случае медленного снижения уровня патогенных агентов в крови врач может продлить лечение или наоборот, отменить препараты, получив отрицательный ответ ПЦР.

    При получении положительного результата лабораторной диагностики следует немедленно обратиться к инфекционисту, поскольку успех в лечении напрямую зависит от стадии, на которой был поставлен диагноз гепатита С и начата терапия. Кроме того, необходимо помнить о риске заражения окружающих, поэтому прием противовирусных препаратов важен не только для инфицированного, но и для его родственников.

    источник