Гепатит с анализы количественный или качественный

Существует множество субтипов HCV, из-за чего не всегда удается подобрать эффективные противовирусные лекарства и достичь желаемых результатов в лечении. Разнообразие возбудителей обусловлено их способностью изменять свою структуру, то есть мутировать. Вследствие этого иммунитет не успевает сформировать мощный ответ против патогенного агента, а медикаменты оказываются неэффективными.

Зачастую гепатит диагностируется на стадии цирроза, чему предрасполагает позднее выявление болезни из-за отсутствия клинических признаков. Только путем лабораторного исследования удается обнаружить HCV в инкубационном периоде.

Количественный анализ на гепатит С дает возможность не только установить факт присутствия возбудителя в крови, но и подсчитать его концентрацию.

Специфической подготовки к лабораторной диагностике не требуется. Достаточно придерживаться следующих рекомендаций:

1. количественный анализ проводится натощак, при этом последний прием пищи – за 8 часов до забора крови;
2. за двое суток следует отказаться от спиртного и «тяжелых» блюд;
3. особое значение имеют лекарственные средства, которые принимает пациент. Они могут повлиять на результат исследования, поэтому врач должен знать о них.

Также не желательна тяжелая физическая нагрузка и физиотерапевтические процедуры накануне забора крови. Чтобы расшифровка количественного анализа на гепатит С получилась достоверной, не стоит пренебрегать вышеперечисленными рекомендациями.

Зачастую результат анализа пациент получает через сутки. Цена исследования на определение концентрации возбудителя в крови зависит от лаборатории и качества реактивов и может достигать 4 тысяч рублей.

К числу первостепенных методов диагностики относится ИФА, или иначе иммуноферментный анализ. Он назначается для обнаружения специфических антител к HCV. Его эффективность достигает 95%. Если расшифровка исследования дает положительный результат, стоит заподозрить присутствие возбудителя в крови.

Заметим, что у половины обследуемых при «+» тесте в ходе дальнейшей диагностики вирусный агент в крови не выявляется. ИФА в данном случае указывает на перенесенный контакт с HCV в прошлом, что подтверждается циркулирующими антителами.

Более точным исследованием является полимеразная цепная реакция, или иначе ПЦР. Она позволяет определить концентрацию РНК возбудителя в крови. Обнаружив генетический набор вируса в биологическом материале, врач подтверждает гепатит С.

ПЦР назначается пациенту для верификации диагноза. Она дает возможность выявить РНК на стадии, когда антитела еще отсутствуют. Существует несколько видов генетических исследований:

1. количественный анализ ПЦР на гепатит С, который не только устанавливает факт присутствия возбудителя в крови, но и предоставляет информацию о его концентрации;
2. качественный – подтверждает инфицирование;
3. генотипирование – позволяет определить генотип патогенного агента и подобрать наиболее эффективные лекарства против него.

Как уже было сказано, существует несколько видов лабораторного исследования:

• качественный анализ – свидетельствует о присутствии патогенного агента в крови. Данный вид диагностики имеет определенный «уровень реагирования», поэтому не всегда оказывается достоверным. Чтобы правильно расшифровать результаты и получить реальные показатели, для исследования рекомендуется использовать тест-систему с чувствительностью — не ниже 50 МЕ/мл. Норма анализа – это «отрицательный ответ» или «вирус не обнаружен». Это указывает на отсутствие генетического набора возбудителя в исследуемом материале. Если результат оказался положительный, требуется дальнейшее обследование пациента;
• количественный анализ ПЦР на гепатит С определяет вирусную нагрузку, то есть концентрацию патогенного агента в крови. Результат исследования показывает число единиц РНК в фиксированном объеме биологической жидкости;

Вирусная нагрузка – это подсчет инфекционной РНК в одном миллилитре крови исследуемого. Единицы измерения – МЕ/мл, однако некоторые лаборатории определяют «копии/мл», при этом указывая на бланке нормы анализа для сравнения и оценки результатов.

• генотипирование. Из-за способности возбудителя изменяться выбор эффективных противовирусных лекарств для терапии должен осуществляться на основании его генотипа. От него зависит не только результат, но и длительность лечебного курса. Так, гепатит HCV 1 требует назначения медикаментов на год, однако положительная динамика наблюдается лишь в 60% случаев. Что касается второго и третьего генотипов, то они являются менее стойкими к действию противовирусных средств, из-за чего эффективность терапии превышает 85%. При получении такого результата исследования – «вирус не типируется», стоит заподозрить присутствие возбудителя, который не распознается стандартными тест-системами.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С необходима для:

1. дальнейшего обследования пациента, когда при ИФА были обнаружены антитела к HCV;
2. подтверждения диагноза;
3. установления вирусной нагрузки при микст-инфекции, когда человек заражен несколькими видами возбудителя;
4. определения тактики лечения (выбора противовирусных медикаментов, их замены или завершения терапии);
5. оценки динамики прогрессирования заболевания, а также эффективности лекарств;
6. определения стадии патологии (острая, хроническая).

ПЦР имеет следующие преимущества:

1. хорошая чувствительность, благодаря чему удается подсчитать даже небольшое количество вируса;
2. определение самого возбудителя (РНК), а не антигенов;
3. специфичность методики — установление определенного типа патогенного агента;
4. быстрота получения результатов, ведь для анализа не требуется выращивание культур на питательной среде. Ответ готов через 5 часов;
5. универсальность – позволяет выявить генетический набор различных возбудителей, как РНК, так и ДНК-содержащих (гепатит В);
6. обнаружение скрытой инфекции.

Лабораторное исследование помогает подтвердить диагноз и является неотъемлемой частью комплексного обследования (анализа клинических симптомов, результатов ИФА и биохимии).

Кроме того, ПЦР широко используется в аллергологии, генетике, а также для установления факта отцовства.

Оценка результатов лабораторной диагностики осуществляется врачом путем сравнения полученных данных с нормой.

Концентрация патогенного агента определяется амплификатором и сравнивается с диапазоном, границы которого от 1,8*10^2 до 2,4*10^7. Благодаря регулярному обследованию вирусоносителя удается своевременно обнаружить увеличение вирусной нагрузки, что подтверждает активацию возбудителя и обострение болезни.

На результаты ПЦР могут влиять некоторые факторы:

• некачественный сбор материала;
• введение гепарина накануне исследования. Он относится к лекарственным средствам, которые уменьшают свертываемость крови, тем самым замедляя действие реактивов ПЦР;
• несоблюдение правил транспортировки материала;
• низкий уровень профессионализма врачей-лаборантов;
• несоблюдение техники проведения анализа.

Норма количественного исследования на определение РНК вируса гепатита С может несколько отличаться в разных лабораториях, однако эти погрешности зачастую не влияют на конечный результат обследования. Не последнюю роль играет вид тест-систем, а именно их чувствительность. Это особенно важно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой, которую некоторые лаборатории могут не обнаружить.

Лабораторная диагностика проводится на этапе обнаружения гепатита С, в процессе лечения, а также после проведенной терапии. Это дает возможность правильно установить субтип возбудителя, подобрать эффективные лекарства и отследить динамику изменений на фоне их приема.

Кроме того, исследование крови позволяет подтвердить выздоровление или хронизацию инфекционно-воспалительного процесса. Обязательным считается анализ перед началом терапии и спустя 3 месяца, что необходимо для оценки динамики и эффективности выбранных противовирусных средств.

Дополнительно врач назначает ПЦР на 4 и 24 неделях терапии. О благоприятном прогнозе можно говорить при снижении вирусной нагрузки к концу третьего месяца. Например, при ее уменьшении с 1 млн МЕ/мл до 100 тысяч. Если концентрация возбудителей остается на прежнем уровне или несколько увеличивается, значит, противовирусные медикаменты неэффективны, и требуется их замена или добавление новых.

В случае медленного снижения уровня патогенных агентов в крови врач может продлить лечение или наоборот, отменить препараты, получив отрицательный ответ ПЦР.

При получении положительного результата лабораторной диагностики следует немедленно обратиться к инфекционисту, поскольку успех в лечении напрямую зависит от стадии, на которой был поставлен диагноз гепатита С и начата терапия. Кроме того, необходимо помнить о риске заражения окружающих, поэтому прием противовирусных препаратов важен не только для инфицированного, но и для его родственников.

источник

Для постановки диагноза «хронический вирусный гепатит С (ХВГС)» требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

• высокая чувствительность – 97-98%;
• гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
• быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

• в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
• часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
• вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

• исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
• разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
• накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
• за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
• до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.

источник

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

• вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
• эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
• риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
• риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

• положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
• положительный результат качественной ПЦР;
• контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

• до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
• 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
• последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
• 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

• сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
• процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
• в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
• за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
• если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

• самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
• раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
• при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

• позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
• позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
• определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

Гепатит С является болезнь с вирусной этиологией, которая поражает печень. Провоцирует данное состояние вирус HCV с РНК-молекулой. Наличие этой кислоты дает возможность делать анализ ПЦР на гепатит С.

Опасность рассматриваемого заболевания в том, что период между попаданием вируса в организм и появлением первых симптомов может быть довольно длительным — от 1-2 до 4-5 недель. Это мешает выявить заболевания и начать терапию своевременно.

Зависимо от особенностей организма носителя вируса заболевание может протекать остро, а также приобретать хроническую форму, которая требуется затратного и продолжительного по времени лечения. Если обнаруживаются вирусные частицы гепатита С, то пациента назначаются необходимые анализы, одним из которых есть ПЦР на гепатит С. Этот анализ проводится абсолютно всем лицам, у кого были обнаружена антитела к вирусу.

Анализ крови поможет доктору определить наличие или отсутствие вируса гепатита С в организме пациента. Данный показателя определяют количество вируса, который поразил организм, а также его генотип и характеристики.

На основе полученных результатов после проведения данного анализа, а также ссылаясь на дополнительное проведенные исследования специалист определяет продолжительность лечения, и степень угрозы пациента для здоровья других людей.

ПЦР гепатит С имеет и другое название — РНК-анализ. Такое название объясняется тем, что в вирусе присутствует частичка РНК. Этот микроорганизм способен мутировать.

Все генотипы вируса характеризуются дифференциальной резистентностью, именно поэтому каждому пациенту назначаются разные методы терапии и в каждом индивидуальном случае дальнейший прогноз может отличаться.

В качестве исследуемого материала выступает кровь из вены. ЕЕ нужно сделать на голодный желудок. Обычно тестирование осуществляется методом Real-Time PCR, но также может использоваться тест COBAS AMPLICOR. В не зависимости от выбранного типа исследования крайне важно учесть порог чувствительности, то есть возможность реагента определить саму малую концентрацию вирусных частиц в крови.

Если показатели нормальные, то в расшифровке теста будет указано «не найдено».

• количественный анализ;
• качественный;
• генотропирование.

Благодаря тесту можно выявить генетику вирусной инфекции, а также стадию его развития в организме пациента. В зависимости от того, насколько система диагностики чувствительна, анализ моет проводиться либо один раз либо несколько — для подтверждения результата, используя более чувствительный реагент.

Рассматриваемый анализ также может называть анализ ПЦР на гепатит С качественный. Обычный уровень чувствительности теста, который позволяет определить присутствие вируса — от 10 до 500 МЕ.

При отрицательных показателях можно говорить о том, что уровень вируса в крови пациента значительно меньше порога чувствительности теста.

В случае, если результаты тестов ничего не показали, доктору необходимо немного больше узнать о пороге чувствительности пациента.

Тест может определить наличие вируса в организме пациента примерно через неделю после инфицирования.

Благодаря подобному исследованию можно узнать количество РНК флавивируса присутствует в организме человека. Он определяет, сколько вирусного РНК есть на 1 кубическом см крови. Результаты анализов расшифруются в МЕ на мл.

Количественную диагностику ПРЦ следует проводить прежде чем назначать лечебную терапию, ну и конечно же после проведенных процедур, примерно на 12 недели лечения. Данная процедура необходима для того, чтобы удостоверится в правильности лечебной терапии. Вирусная нагрузка дает возможность определить 3 главных показателя болезни:

• продолжительность и прогноз противовирусного лечения (чем большей будет вирусная нагрузка, тем длительней будет терапевтический курс);
• эффективность, а также метод терапии;
• инфекционность, то есть степень риска передачи вируса от зараженного человека к здоровому.

Данный вид диагностики зависит от вида лабораторного теста, а также от порога чувствительности.

Так как HCV имеет высокую активность в плане мутации, при проведении теста необходимо определить, какой генотип вируса присутствует у больного в крови. Существует 11 генотипов вируса гепатита С, они также делятся на разные субтипы.

Следует помнить о том, что данный этап анализа крайне важен, потому что благодаря нему доктор может сделать выводы об фазе вируса, назначить подходящее лечение, а также выписать пациенту наиболее эффективные препараты.

Различные генотипы HCV поддаются лечению по-разному. К примеру, чтобы вылечить первый генотип потребуется более года, а эффективность такой терапии примерно 65%. А вот генотип 2 и 3 можно вылечить за полгода, при этом эффективность терапии значительно выше — примерно 90%.

Также следует отметить, что благодаря генотипироанию можно также понять, в каком состоянии находится печень. К примеру, часто генотип 3 протекает совместно с стеатозом, который способствует накоплению жира в клетках печени.

Анализ крови на ПРЦ способен определить генотип заболевания. В некоторых случаях тестовые системы не могут определить вирус. В таком случае можно получить результат «не типируется». Подобный результат анализов говорит о том, что генотип вируса не характерен для определенной территории. В подобных случаях нужно провести повторные анализы но уже с высшим пороком чувствительности.

Вся расшифровка анализов основана на сведениях полученных ранее. Благодаря лабораторным исследованиям в большинстве случаев обозначаются такие данные:

• тест обычно называется Real-time;
• обозначается цифра генотипа;
• к-во фракций с РНК;
• найдено или не найдено.

Самым важным при расшифровке данного анализа есть пункт под номером 3. Он позволяет увидеть вирусную нагрузку, от которой зависит продолжительность лечебных процедур, и дальней шее состояния пациента, а также его время его выздоровления.

Результаты исследований показывают цифру генотипа а также иногда можно увидеть латинскую букву, которая является определителем субгенотипа вируса. Чтобы доктор мог поставить правильный диагноз и назначить лечение ему необходимо знать генотип заболевания, этого будет достаточно для проведения дальнейших действий.

Для того, чтобы расшифровать анализы, надобно обратиться к таким специалистам — инфекционисту либо гепатологу. Эти доктора смогут расшифровать полученные данные. В основном расшифровка результатов анализа крови, да и вообще любых анализов, для человека без медицинского образования, совершенно непонятны.

К примеру, при отрицательном тесте на гепатит, и ИФА положительном, смело можно утверждать об отсутствии у пациента НСВ, но это не исключает того, что гепатит С пациент перенес намного раньше, при чем в острой форме.

Считается, что положительный ИФА говорит, о том, что в кровяном русле обнаружены антитела, произведенные после того, как вирус был в прошлом поражен. Однако в нынешней медицине этот анализ не считают достаточно надежным. Доктора его используют исключительно в качестве первичного скрининга. При диагностике болезни доктора отталкиваются от показателей ПЦР-тестов.

Чтобы сделать анализ ПЦР используется кровь из вены. Обычно делают двойной забор биоматериала — для теста ПЦР и для ИФА. Чтобы результаты были точными и достоверными, нужно соблюдать некоторые правила забора биоматериала:

• между употреблением еды и забором биоматериала должен быть выдержан временной промежуток — не меньше 8 часов;
• кровь нужно сдавать на голодный желудок, в первой половине дня;
• на протяжении суток перед анализом нужно отказаться от интенсивных физнагрузок;
• перед тем, как сдавать анализ, надобно отказаться от употребления жареной еды и от питья спиртного.

Готовые результаты можно забрать на следующий день.

источник

Метод ПЦР включает два основных способа исследования биологического материала на поиск вируса гепатита С:

Эти исследования имеют различные задачи.

Качественный анализ на гепатит с расшифровкой подтверждает наличие вируса после того как в крови уже найдены антитела к этому заболеванию. Если исследование дало положительный результат, значит, болезнь обнаружена.

Иными словами, человек инфицирован. Если получен отрицательный результат, это означает, что человек не инфицирован, либо в наличии слишком маленькая концентрация вируса.

Эта концентрация не обнаруживается таким способом.

Помимо этого клиническая картина заболевания строится на основании маркеров гепатита С и расшифровки анализа. Основные маркеры — иммуноглобулины (антитела) M и G. Наличие их в крови пациента указывает на нехарактерный процесс для здорового организма. На основании наличия этих антител больному, как правило, устанавливается первичный диагноз.

Количественный анализ назначается при первичном обнаружении антител и при необходимости проведения лечения.

Также количественный анализ на гепатит С назначают при выявлении микст-гепатитов (заражение сразу несколькими вирусами).

Количественный анализ с расшифровкой проводится с целью:

• прояснения окончательного диагноза;
• выстраивания прогнозов относительно течения заболевания и его лечения — продление, сокращение лечения либо изменение тактики;
• мониторинга терапии.

Чтобы результаты были верными, нужно соблюдать установленный режим перед тем как сдавать кровь:

• прийти в лабораторию натощак, последний раз принять пищу можно за 8 часов до процедуры;
• за два дня до исследования запрещен алкоголь, жирные и жареные продукты;
• ультразвуковые исследования, массаж, физиотерапию перед исследованием проводить нельзя;
• за день запрещен прием лекарств, если прием отдельных препаратов невозможно отменить, об этом сообщается до забора крови;
• перед процедурой рекомендуется снизить по возможности физические и нервные нагрузки.

Выполнение этих требований будет залогом получения верных результатов количественного анализа на гепатит С.

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса.

Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

• для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
• для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
• для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

• гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
• при микст-гепатитах;
• если планируется проведение противовирусной терапии;
• во время и после лечения от гепатита С;
• при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах.

Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа могут подаваться как в единицах МЕ/мл, так и в копиях на мл. При этом коэффициент перевода обычно отличается для разных лабораторий и методик. Его значения колеблются в пределах от одного до пяти, принято считать, что в среднем 1 МЕ — это 4 копии на мл.

Лабораторный анализ на гепатит подразумевает исследование биологического материала на предмет наличия или отсутствия вируса у конкретного человека.

ПЦР качественный позволяет определить наличие вирусного поражения, находящегося в пределах от 10 до 500 МЕ/мл. Негативный ПЦР свидетельствует о том, что концентрация вируса в крови человека ниже уровня восприимчивости диагностической системы. Анализ на гепатит В и С может проводиться уже на 4–5 день с момента попадания вируса в кровь человека.

Вирус обладает высокой мутационной активностью, именно поэтому в процессе выявления заболевания необходимо зафиксировать, какой именно генотип находится в крови у больного человека.

Для этого проводится РНК гепатита С. На данный момент во всем мире официально зарегистрировано 11 разновидностей вируса гепатита С.

На территории РФ чаще всего встречаются 1, 2 или 3 тип.

Определение РНК вируса — это одна из наиболее важных частей всего лабораторного исследования. Именно от результатов генотипирования зависит вид терапии, которая будет назначена врачом, а также время лечения.

Для 2 и 3 генотипа достаточно 20-дневной интенсивной терапии, лечение 1 генотипа может длиться в среднем 50 дней. Дополнительно в процессе генотипирования определяется состояние, в котором находится печень человека, так как гепатит в первую очередь поражает именно этот орган.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это наиболее современный и действенный метод изучения гена вируса и его возможностей. Такая диагностика способна установить разновидность заболевания и определить его дальнейшую мутацию в организме больного.

Анализ проводится путем забора крови, которую в последующем помещают в специальные реактивы, в которых происходит клонирование клеток.

Из одной клетки получается две, и так далее. В итоге появляются сотни ДНК, благодаря которым можно диагностировать возбудитель и выявить вирус на ранней стадии.

Поэтому ПЦР делится на несколько видов:

• качественный анализ — распознает гены инфекция в крови. Если при проведении качественного анализа у пациента подтверждается заболевание, то следует провести количественный анализ, устанавливающий степень инфекции. В результате проведения данной диагностики специалисты пишут “обнаружено/ не обнаружено”. “Обнаружено” — говорит о том, что недуг присутствует в организме и выявлен уже его РНК. “Не обнаружено” — свидетельствует об отсутствии в пробе гена вируса, то есть РНК гепатита отсутствует. Но врачи рекомендуют провести повторное исследование через 10 дней.
• количественный анализ — определяет объем генетического материала инфекции в крови. Такая диагностика помогает установить тяжесть болезни и всю клиническую историю. В результате такого анализа может быть написано только: “Положительно/Отрицательно/Недействительный”. “Положительно” — изображает инфекционную нагрузку. Доктора такой метод диагностики болезни назначают для определения действенности проводимого лечения на 4, 12, 16 и 24 неделях болезни.Если показатель вируса находится в диапазоне 8х10т МЕ/мл, то лечение эффективно, если показатели выше — то нет. “Отрицательно” — ген инфекции не обнаружен. “Недействительный” — такое бывает, если ген вируса обнаружили при качественном, но при этом не выявили при количественном анализе. Встречается подобное при условии, что объем инфекции ниже уровня.

Медиками проводится два вида ПЦР-исследований крови:

• качественный анализ
• и количественный

А также отдельно стоит подчеркнуть возможность выделения генотипа, поступившего в кровь вируса.

Метод качественного исследования назначается с целью обнаружения вируса в крови, поэтому результат анализа может быть только в двух вариациях:

Результат «Не обнаружено» является нормой. Однако возможен ложноотрицательный ответ, что связано с крайне малым количеством вируса в крови.

Но если качественный анализ имеет результат «Обнаружено», такое заключение указывает на наличие возбудителей болезни в крови обратившегося.

Количественный анализ ПРЦ служит для определения концентрации вируса в крови или, иными словами, вирусную нагрузку на организм. Анализ позволяет узнать количество вирусов на единицу взятой у больного крови, определить степень виремии.

В свою очередь, виремия – это состояние, определяемое в медицине, когда вирусы попали в ток крови и распространяются по всему организму. Также результат количественного анализа позволит судить о заразности больного.

Расшифровывается результат количественного анализа следующим образом. В результате анализа указаны цифры, это – количественный показатель вирусной нагрузки.

Для выражения концентрации вирусов используется исчисление в МЕ (международная единица) на мл, либо количество копий на мл. Наиболее часто используется шифрование в МЕ.

Как правило, 1 МЕ/мл сравнимо с 4 копиями/мл.

Соответственно, по объему обнаруженных вирусов можно судить о тяжести заболевания.

Количественный анализ ПРЦ может назначаться во время противовирусной терапии, на разных ее сроках. Как правило, это происходит на 1-й,4-й, 12-й и 14-й неделях.

Необходимо исследование, в данном случае, для понимания эффективности проводимого лечения, когда результат не оправдывает ожиданий, терапию корректируют и ждут следующего срока для проведения анализа.

В зависимости от стоимости исследования, оно может проводиться двумя способами:

• недорогим Р-ДНК методом, который наиболее часто, собственно, и используется. Его недостаток в невысоком пороге чувствительности – искомый ген обнаруживается от 500 МЕ на мл крови;
• более дорогостоящим ТМА способом, который позволяет обнаружить во взятой крови нуклеиновые кислоты вирусных клеток. Благодаря этому, его порог чувствительности начинается от 5-ти МЕ на мл. Его стоимость окупается в том плане, что ТМА диагностику достаточно провести единожды, в отличие от предыдущего метода, ведь чтобы получить достоверный результат необходимо повторять исследование.

Стоит принять во внимание, что по полученным данным исследования невозможно определить степень изменений, произошедших в печени. Эту информацию могут предоставить только биохимия, биопсия или эластометрия.

Достоверность результатов, полученных от проведения любого лабораторного исследования, зависит в некоторой степени от подготовки самого пациента, и ПЦР анализ не исключение. Многие задаются вопросом о том, что такое подготовка к анализам.

Ответ прост — это комплекс мер, рекомендованных врачом и проводимых пациентом за некоторое время до предполагаемого забора биоматериала. Перед сдачей венозной крови для выявления вируса гепатита С человеку необходимо:

• посетить лабораторию в утренние часы обязательно на голодный желудок (пищу допустимо принимать не позднее, чем за 8 часов до предполагаемого визита в лабораторию);
• рекомендовано сократить объем или полностью отказаться на 8–10 часов от употребления всевозможных напитков (чай, кофе, сок), допускается только обычная вода без газа;
• за 48 часов до забора крови необходимо обязательно отказаться от употребления алкогольных напитков, а также слишком жирной пищи;
• лучше воздержаться от курения (минимум за несколько часов);
• не рекомендуется сдавать кровь в один день вместе с другими медицинскими процедурами, например, ультразвуковой диагностикой, массажем, физиотерапией, флюорографией;
• по возможности за 24 часа следует отказаться от приема каких-либо лекарственных препаратов (если они не являются жизненно важными для человека);
• ближайшие 15 минут следует провести в спокойном состоянии, а для этого нужно прийти в процедурный кабинет немного пораньше назначенного времени.

Кроме всего вышеперечисленного, человеку лучше воздержаться от активной физической деятельности и от психоэмоциональных нагрузок.

Существуют некоторые исключения. Например, забор биоматериала можно делать в вечернее и дневное время. Только в этом случае принимать пищу запрещено ближайшие 5 часов перед проведением медицинской процедуры.

При выполнении общего анализа крови при гепатите С можно оценить состояние пациента. Изменения показателей крови не воспринимаются, как специфические симптомы гепатита, однако при данном заболевании происходят такие нарушения, как:

• снижается концентрация гемоглобина, тромбоцитов и лейкоцитов;
• повышается содержание лимфоцитов;
• нарушается свертываемость крови;
• увеличивается скорость оседания эритроцитов (СОЭ).

Если Вы хотите самостоятельно пройти данное исследование буду больным гепатитом С, то мы Вам все-таки рекомендуем посоветоваться с Вашим лечащим врачом, так как информативность вирусного показателя отмечается на 1,4,12 и 24 неделях болезни.

Благодаря такому диапазону можно проследить эффективность или неэффективность проводимого лечения. Установить график улучшения или ухудшения состояния больного способен только лечащий врач.

Поэтому доверьтесь всецело ему.

Данное исследование назначается врачом в случае положительного ответа при диагностике гепатита С. Как правило, оно назначается одновременно с анализом на определение генотипа вируса гепатита С.

О чем говорит расшифровка количественного анализа на гепатит С? В первую очередь, этот анализ говорит о том, насколько пациент инфицирован и, соответственно, заразен. Количественное определение вируса в крови позволяет также определить, насколько эффективна применяемая схема терапии.

Врачи назначают его после 4, 12 и 24 недель лечения. Снижение уровня вирусной нагрузки говорит о том, что терапия выбрана правильно.

Также анализ назначается после 24 недель от момента завершения терапии.

РНК (рибонуклеиновая кислота) — вид макромолекулы, одна из составляющих живой клетки. РНК отвечает за кодировку генетической информации. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет обыкновение мутировать. Известны 6 его подтипов, а также много субтипов.

Болезнь в своей хронической стадии приводит к фиброзу печени — разрастаются соединительные ткани, структура органа постепенно нарушается. Фиброз поддается своевременному лечению, так как печень не подверглась еще разрушительным процессам.

В отличие от цирроза, тяжелого необратимого заболевания печени, в который может перерасти фиброз без принятия необходимых мер вовремя.
.

Человеку с подозрением на наличие у него вируса гепатита, определяют антитела к нему. Если их нет — заболевание исключается, при их наличии прибегают к методу ПЦР (полимеразной цепной реакции).

В молекулярной биологии он является экспериментальным, но занимает ведущее место среди методик диагностирования инфекционных болезней. С помощью него можно значительно увеличить концентрацию фрагментов молекул в пробе.

Через 10 дней после инфицирования РНК уже возможно определить в крови.

Этот метод является единственным, позволяющим выявить заболевание на ранних стадиях. Другими способами (напр., биохимическим исследованием крови) это сделать невозможно, так как печень еще не поражена.

Открыл метод в 1993 году биохимик Кэрри Муллис, за что получил Нобелевскую премию. ПЦР стал прорывом в медицине и науке, так как позволил быстро и точно определять инфекции в крови и других биологических материалах человека. Иными словами, метод ускорил развитие диагностики инфекционных заболеваний.

РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР является эффективным по следующим причинам:

• имеет хорошую чувствительность — определяется даже малое количество вируса в крови;
• определяется сам вирус, а не побочные продукты, создаваемые им;
• определяется вид возбудителя.

После получения показателей количественного анализа необходимо сделать расшифровку результатов анализов на гепатит С. Результаты вычисляются и в единицах МЕ/мл, и в копиях на мл. Для получения результатов, пересчитанных в копии, применяют несколько методик.

• HCV Monitor (коэффициент пересчета на МЕ — 2,7);
• LCX HCV RNA (коэффициент пересчета на МЕ — 3,8).

Таблица. Расшифровка количественного анализа HCV RNA методом ПЦР.

Такая расшифровка результатов анализов на гепатит С помогает определить степень опасности заболевания в плане возможности его передачи. Чем больше обнаружена концентрация вируса в крови при расшифровке, тем выше вероятность заразить другого человека. Также концентрация влияет на успешность назначаемого лечения.

Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу.

Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. МЕ/мл, можно говорить о минимальной концентрации вируса в крови, но не об отсутствии заболевания. Нагрузку более 800 тыс. МЕ/мл определяют как высокую.

Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций. Границей считают 400 тыс. МЕ/мл.

Сдача анализов на гепатит с расшифровкой — надежный современный способ диагностики. Исследования проводятся до лечения, во время и после него, при наличии как острой, так и хронической форм заболевания. Диагностика, проведенная до терапии, определяет его эффективность в дальнейшем.

Во время лечения забор крови делают на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Уже на 12-й неделе показатель виремии должен значительно снизиться.

Если этого не происходит, лечение неэффективно и нужно подыскивать новое. Например, с 1 млн МЕ нагрузка должна уменьшиться до 100 тыс. МЕ.

После окончания лечения проводят расшифровку анализа гепатита С для исключения рецидивов.

Максимум через неделю у пациента окажутся результаты его теста на вирусную нагрузку. Если речь идет о больном, который проходит лечение от гепатита С, то следующий тест ему нужно сделать через месяц; единоразово лабораторный анализ такого типа проводится людям, в крови которых обнаружили антитела; и раз в год при наличии стабильного вирусного ответа.

По итогам разных анализов, результат может быть выдан в формате отрицательного или положительного ответа или с указанием конкретного количества РНК вируса.

Также врач может оставить запись «РНК обнаружены ниже диапазона измерений». Это означает, что РНК присутствуют у пациента, но их настолько мало, что используемый метод не смог показать конкретное количество (требуется дополнительная диагностика).

Количественные анализы хороши тем, что помогают врачам определять меру необходимости перехода на следующий этап терапии или надобность что-то в ней поменять. А также позволяют обнаружить людей, которые из-за высокого содержания в крови РНК вируса могут представлять опасность для окружающих.

Анализ сдается натощак, самой информативной является венозная кровь.

Иногда установленные результаты меняются в соответствии с тем, как хранили и обрабатывали забранную на анализ кровь. Особо стоит обратить внимание, что, одна и та же кровь может дать разные результаты в двух лабораториях.

В случае, когда кровь была загрязнена химическими или же белковыми соединениями, гепарином, хранилась ненадлежащим образом, анализ будет неточным или ошибочным.

Для того чтобы лечение по вирусной нагрузке было скорректировано правильно, необходимо периодически посещать лабораторию и сдавать кровь. Ведь именно снижение показателя в период проведения лечения свидетельствует об успешном применении препарата. В таком случае медики говорят, что терапевтический эффект привел к вирологическому ответу.

РНК может начать снижаться уже на третий день терапии, что оперативно покажет тест.

Считается, что терапия успешная, если на протяжении лечения показатель вирусной нагрузки снизился хотя бы на две единицы. Если уровень РНК остался на прежнем уровне или даже повысился, скорее всего используемый препарат не поможет избавиться от вирусного гепатита С.

Если вирусная нагрузка увеличилась по окончании курса лечения, то скорее всего речь идет о рецидиве. Именно поэтому люди, которые успешно побороли гепатит, должны в дальнейшем периодически сдавать анализ на вирусную нагрузку, чтобы следить за состоянием организма.

med-explorer.ru

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя.

Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HCV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×102 – 1,0×108копий/мл образца.

Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.

Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

>Какой биоматериал можно использовать для исследования?

>Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

>Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания.

HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой).

У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов.

У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания. Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения.

При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается.

Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса.

Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

>Для чего используется исследование?

• Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
• Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
• Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

• При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
• При остром и хроническом вирусном гепатите С.
• При микст-гепатитах.
• При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 400 МЕ/мл).

источник