Меню Рубрики

Показатели количественного анализа на гепатит в

В медицинском мире заболевание гепатита В считается одним из самых опасных в наши дни.

Данный вирус способен передавать при контакте с кровью зараженного – это могут быть ножницы для кутикулы в маникюрном салоне, медицинские инструменты, в частности инструменты дантистов, которые не прошли необходимую стерилизацию, или она была выполнена не надежным путем. Кроме того, вирус передается половым путем.

Для того, чтобы констатировать заболевание на гепатит В, у пациента необходимо взять кровь на анализ.

Как было описано выше, вирус может передаваться половым, бытовым путем, он относится к гематогенному типу распространения. При заражении вирус попадает в клетки печени, и оттуда начинает распространяться по всему организму. Вирус разносится через кровеносную систему, он крайне стойкий к перепадам температуры и сохраняет свою способность, вредить живим клеткам.

В том случае, когда человек ощутил первые симптомы заболевания гепатит В, следует немедленно обратится к доктору и сдать анализы. При исследовании у больного берут кровь, чтобы ее протестировать. Кровь берут натощак, последний прием пищи должен быть не меньше 8 часов назад.

Чтобы установить наличие заболевания в организме человека, необходимо сделать три типа анализа крови:

  • Полимеразная цепная реакция покажет, имеется ли в клетках ДНК НВ V;
  • Исследуют наличие белка и антигена в крови пациента;
  • Анализы о наличии белка укажут на обострение заболевания.

Доктора очень часто проводят клинические анализы по нескольким маркерам для того, чтобы установить полную картину заболевания.

В данный период времени достоверными являются иммунологические анализы на гепатит В. Анализы нацелены на то, чтобы выявить в крови антитела, образовавшиеся в печени. Обычно проверка на гепатит В затрагивает расшифровку собранных данных отдельных клеток белка. Во время пробы обращают внимание на такие антитела:

  • HBsAg – их часто можно встретить в начале заражения, еще до того, как болезнь даст о себе знать. Положительный маркер указывает на то, что человека инфицирован, хотя были случаи положительного результата у совершенно здорового человека. Результаты негативны в том случае, когда в организме пациента насчитываться не больше 0.05 МЕ/мл, при большей концентрации антител – анализ положительный.
  • HBeAg – данные антитела имеются почти у всех зараженных пациентов. При длительной высокой концентрации антител в крови, происходит переход заболевания в хроническую форму. Маркер положительный означает обострение заболевания. Наличие вышеупомянутого антитела в организме пациента, говорит о том, что болезнь прогрессирует и выходит на пик.
  • Anti-НВс имеет два типа антител – это l gGи lgM. Наличие в крови антитела lgM говорит о том, что болезнь подходит к своей высшей точке и способна перейти в хроническую форму. Доктора должны следить за тем, что данное антитело не увеличило свои показатели в крови. К счастью lgG – это хорошо, означает образование иммунитета на вирус гепатита В.
  • Anti-НВе – антитело говорит о том, что заболевание протекает нормальным путем и в организме пациента формируется иммунитет к гепатиту В.
  • Anti-HBs – это означает, что пациент здоров и его иммунная система значительно окрепла.

Для клинического исследование, которое поможет определит заражен ли пациент вирусом гепатита В, выбирают метод ПРЦ. Аббревиатура ПЦР означает полимеразная цепная реакция, путем ее изучения можно определить наличие вируса в организме.

Результаты исследования помогают определить наличие генного возбудителя в клетках печени. При правильном проведении процедуры – результаты считаются достоверными.

  • Качественное ПРЦ – положительный или отрицательный результат. Данная процедура обязательна для всех пациентов с подозрением на заражение гепатитом В. В том случае, когда в клетках ДНК вирус находится в маленьком количестве, он не будет обнаружен.
  • Количественное ПРЦ. Данное исследование покажет не только, наличие или отсутствие вируса, но и стадию его заражения. Благодаря определению стадии заболевания можно назначить необходимый курс лечебной терапии.

Кроме всего прочего ПРЦ помогает точно назначить лечение и даже корректировать дозировку лекарственных препаратов. Определяется также длительность лечебной терапии, в некоторых случаях ее можно прекратить раньше времени, а другим пациентам требуется дополнительной курс реабилитации.

Для того, чтобы составить всю картинку заражения и протекания заболевания необходимо сделать биохимический анализ крови. Данное исследование, поможет установить, в каком состоянии находятся внутренние органы пациента и как они функционируют. Анализы дают общую картину метаболических процессов в организме, а также говорит о скорости обмена веществ.

Биохимический анализ также укажет на все витамины и микроэлементы, которые необходимы для нормальной борьбы организма с заболеванием и для укрепления иммунной системы.

Анализы на гепатит В можно сдать в любой клинике, частной или государственной. При выявлении вируса гепатита В в организме человека, путем биохимического анализа, имеются такие составляемые.

Данный фермент можно встретить в большой концентрации, при отрой или хронической форме инфицирования вирусом гепатита В. Фермент находится в клетках печени, а благодаря кровотоку распространяется по всем сосудам.

Концентрация вещества в организме постоянно меняется из-за чего, следует проводить анализы раз в квартал. Благодаря АЛТ можно исследовать не только активность вируса, но и оценить масштабы его негативного влияния на печень и организм в целом.

Белок – это одно из самых главных веществ в организме человека, из него строятся все жизненно важные органы, в том числе и сердце. При заболевании гепатитом В большой показатель АСТ, говорит о фиброзе печени.

Высокие показатели указывают на разрушение клеток печени. Для окончательного диагноза следует учесть соотношение АСТ и АЛТ. При высокой концентрации обоих ферментов, развивается некроз печени.

Гемоглобин расщепляется в тканях печени и селезенки, благодаря этому появляется такое вещество как билирубин. Именно данный компонент является основой желчи. Билирубин может быть прямой и непрямой. При высокой концентрации прямого билирубина в крови, можно установить заражение гепатитом В или другими заболеваниями печени.

Высокая концентрация не прямого билирубина в крови говорит о синдроме Жильбера. Кроме того, большая концентрация любого билирубина сигнализирует о плохой проходимости желчных протоков. При заражении гепатитом моча становится темной, лицо и белки глаз приобретают желтый цвет.

Альбумин – это белок, который синтезируется в печени. При низком показатели данного белка в организме происходит поражение клеток печени.

Снижение концентрации общего белка в организме пациента говорит о нарушение работы печени.

Данный фермент доктора используют, чтобы выявить желтуху или холецистит. Повышенный уровень ГГТ говорит о токсическом поражении клеток печени, которое может произойти вследствие хронического алкоголизма или отравления медикаментами. Белок крайне чувствителен к алкоголю и токсинам и при их избыточном количестве, активность белка увеличивается.

В печени происходит белковый обмен, а продукт данного обмена в медицине называют креатинином. При понижении уровня креатинина замедляется работа печени.

Низкий уровень белковых фракций говорит о явных нарушениях в работе печени.

Для диагностики вируса необходимо провести целый ряд различных исследований. Результаты всех анализов в комплексе дадут четкую картину заболевания.

Анализы на антитела при гепатите В

Положительный (встречается у здоровых людей)

Положительный (хроническая и острая формы)

Положительный (формирование иммунитет к болезни)

Положительный (обострение, хроническая форма)

Положительный (образование иммунитета)

Положительный (хорошее протекание болезни)

Вирус не обнаружен, низкий уровень генного материала, курс лечения на основе биопсии клеток печени, сильное поражение клеток печени и нарушение ее функционирования

Биохимический анализ крови

Непрямой – не больше 17 мкмоль/л

Всего – не больше 20.5 мкмоль/л

Ложным анализом чаще всего называют анализ при положительной реакции на вирус, которого в действительности нет в организме человека. На такое стечение обстоятельств могут повлиять следующие факторы:

  • Беременность;
  • Онкологические заболевания;
  • Острые инфекционные заболевания;
  • Вакцинация;
  • Нарушение работы иммунной системы.

Кроме того, ложную информацию могут показать анализы, которые не были выполнены по всем правилам. Для подтверждения диагноза назначают повторные анализы. Для того, чтобы удостоверится больны вы или нет, лучше всего проходить анализ на ПРЦ.

источник

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Проводимое исследование Цели выполнения
Биохимический анализ крови и печеночные пробы Позволяет оценить функциональную активность печени, уровень билирубина, показатели печеночных трансаминаз. Превышение нормы в 2 раза и более указывает на наличие заболевания
Клинические анализы крови, мочи и кала Данные исследования неспецифичны, но по результатам можно установить наличие воспалительного процесса, оценить общее состояние пациента. Обнаружение билирубина в моче, изменение оттенка кала говорит в пользу поражения печени
Иммуноферментный анализ (ИФА) Позволяет определить как наличие вирусной инфекции в организме, так и ее форму (острую или хроническую). Недостатком исследования является вероятность ложных результатов
Полимеразная цепная реакция Дорогостоящий, сложный в проведении, но вместе с тем наиболее точный метод диагностики HCV. Позволяет подтвердить наличие вируса в организме человека, количественно установить уровень копий РНК, определить генотип HCV
Инструментальные обследования печени Необходимо проведение УЗИ органов брюшной полости, установление стадии фиброза, оценка тяжести цирроза, исключение гепатоцеллюлярной карциномы

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

  1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
  2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
  3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

  1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
  2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
  3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.
Читайте также:  Ифа анализ на гепатит сколько делается

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

  • вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
  • эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
  • риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
  • риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

  • положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
  • положительный результат качественной ПЦР;
  • контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

  • до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
  • 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
  • последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
  • 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

  • сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
  • процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
  • в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
  • за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
  • если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Значение показателя Уровень вирусной нагрузки
РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы) Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии
1,8×102–7,9×105 МЕ/мл Низкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов
8×102–2,3×107 МЕ/мл Умеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача
2,4×107 МЕ/мл и выше Высокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени)

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

  • самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
  • раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
  • при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

  • позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
  • позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
  • определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

Наличие современных препаратов против гепатита B (HBV) с четкими показаниями для их назначения требует точной и быстрой верификации диагноза. Однако ввиду скудных клинических данных на первых неделях болезни и ограниченности иммуноферментных методов анализа, скорость постановки диагноза снижается.

Присутствие маркеров анти-HBc IgM, HBsAg, анти-HBc, HBeAg, анти-HBe позволяют подтвердить HBV или установить факт перенесенной болезни. Но определить присутствие активных вирусных частиц в крови и посчитать их число на момент проведения исследования можно посредством ПЦР — количественного real-time теста по выявлению гепатита B. Метод, в сравнении с иммуноферментными способами диагностики, решает диагностические проблемы и позволяет прогнозировать течение болезни на фоне приема противовирусных препаратов.

Диагностика гепатита B основывается на оценке клинических проявлений, иммуноферментных и инструментальных методов исследований. Заболевание протекает в острой фазе после инкубационного периода и, в зависимости от дозы инфекции и эффективности лечения, переходит в хроническую стадию. Главной целью лечения остается предотвращение хронизации, то есть элиминация всех вирусных частиц из крови. Клиническая норма течения болезни — излечение без последующей виремии.

Факт устранения инфекции необходимо доказать количественным методом исследования.

Поскольку любой качественный иммуноферментный анализ позволяет диагностировать HBV косвенно, то есть не показывают наличие возбудителя во внутренней среде организма, а характеризует иммунный ответ на инфекцию, то контроль эффективности терапии и факт излечения становится труднодоказуемыми. Потому пациенту с гепатитом B или с наличием диагностических критериев в его пользу должна проводиться полимеразная цепная реакция с целью количественного определения числа вирусных частиц в крови. Диагностическая норма — это отсутствие копий ДНК инфекта.

Высокочувствительный метод ПЦР-диагностики гепатита В относится к категории генно-инженерных молекулярно-биологических исследований. Посредством него определяется количество вирусной ДНК в биологическом материале пациента и допустимая норма. По полученным результатам устанавливается число вирусных частиц в единице объема. Материалом для диагностического теста является венозная кровь пациента. Забор желателен натощак из-за возможного влияния хилезной сыворотки на результат исследования.

Полученные результаты необходимо предоставить врачу для интерпретации и определения дальнейшей тактики. Самостоятельная расшифровка не представляет диагностической ценности.

Значимость результата числа вирусных частиц, полученного метода ПЦР, превышает значение иммуноферментных исследований. Поскольку анализ в режиме real-time показывает присутствие возбудителя заболевания в крови, его информативность выше прочих. Если ИФА свидетельствуют только о наличии антител, что наблюдается с 4-х недель инкубационного периода и сохраняется более 8 недель после элиминации вируса из крови, то полимеразная цепная реакция однозначно подтверждает активное течение заболевания или его излечение, характеризует динамику назначенной терапии.

Полимеразная цепная реакция с количественным определением частиц возбудителя решает диагностические вопросы в пользу прекращения лечения в связи с выздоровлением или продолжения терапии из-за ее недостаточной эффективности. Метод максимально специфичен в отношении вируса HBV и отличается приемлемой погрешностью.

Количественный анализ гепатита B является наиболее достоверным и позволяет подтвердить данные, полученные иммуноферментными методами. Он назначается при:

  1. получении положительного диагностического результата ИФА;
  2. лечении пациента с установленным диагнозом вирусного поражения печени;
  3. при диагностике гепатитов смешанной этиологии;
  4. при необходимости определения вирусной нагрузки у пациента.

Поскольку более широко в практике инфекциониста применяется метод иммуноферментного анализа, то часть пациентов с легким течением болезни можно лечить и не прибегая к необходимости подсчета вирусной нагрузки. Но ПЦР общепринято считается «золотым стандартом» диагностики в гепатологии, так как из-за однозначности своего результата снимает ряд организационных вопросов. Поэтому направление пациента на количественный анализ преследует следующие цели:

  • получение данных о числе вирусных частиц в крови пациента;
  • подтверждение острого течения гепатита и своевременной верификации хронизации заболевания;
  • постоянное выявление латентных вирусоносителей с положительными ИФА-тестами, мониторинг их виремии;
  • принятие решения о назначении антивирусного лечения, его комбинирования и прекращения.

Наиболее значимой целью применения количественного ПЦР-теста на выявление HBV является определение возможных комбинаций лечения. В случаях с высокой вирусной нагрузкой результат анализа дает специалисту возможность приступить к комбинированию препаратов. В ходе терапии на основании результата ПЦР легко определить эффективность назначенного фармакологического лечения. Руководствуясь только данными иммуноферментных методов, нельзя своевременно определить факт излечения и его текущую эффективность. Поэтому количественный real-time тест — необходимый анализ перед началом лечения острого гепатита, латентного вирусоносительства с высокой виремией и хронического HBV.

Расшифровка результатов количественного ПЦР-теста должна проводиться лечащим врачом пациента. Необходимо дать оценку диагностического показателя и определить терапевтическую тактику.

Стандартный анализатор способен выдавать количественный показатель, который отражает число копий вирусной ДНК, присутствующих в исследуемой венозной крови. Единицы измерения — копии/мл, МЕ/мл (копии на миллилитр, международные единицы на миллилитр). Расшифровка результатов приведена в таблице с указанием разных единиц измерения.

Копии/мл МЕ/мл Характеристика Тактика лечения
5 4 Умеренная виремия Тактика определяется результатами биопсии печени, биохимического анализа.
>10 5 >2*10 4 Высокая виремия Показана противовирусная терапия, умеренный риск хронизации.
>1*10 8 >4,8*10 7 Показатель выше диапазона значений анализатора Проведение комбинированной противовирусной терапии с мониторингом виремии. Высокий риск хронизации HBV.

Анализатор способен выдавать один качественный показатель «не обнаружено». Он означает, что ДНК вируса в исследуемом материалы не были определены, либо их число находится ниже чувствительности аппарата (диагностическая норма).

Анализатор распределяет значения в линейном диапазоне концентраций. У современных аппаратах он определен детектирующим амплификатором и находится в пределе от 750 до 1*10 8 копий на миллилитр. В международных единицах на миллилитр — от 360 до 4.8*10 7 .

Расшифровка показателей, которые определяет количественный ПЦР-анализатор, позволяет сделать единственно возможное заключение о состоянии пациента. Однако существует значение, вызывающее неоднозначные трактовки. Результат «не обнаружено» может свидетельствовать как о полном отсутствии вирусных частиц гепатипа В, так и о их низком числе, то есть ниже линейного диапазона, улавливаемого детектирующим амплификатором. Поскольку анализ проводится после положительного иммуноферментного теста, то вероятность контакта с вирусом велика. Это либо условная норма (поствакцинальная реакция), либо малая виремия после заражения. Тактика наблюдения, как и при умеренной виремии, должна включать анализ аминотрансфераз и ультрасонографию печени с повторным проведением ИФА.

Читайте также:  Helix анализ на гепатит с

В прочих клинических ситуациях расшифровать количественный тест ПЦР — значит решить диагностические сложности, возникшие из-за недостатков ИФА-исследований. Это — окончательный метод, позволяющий решить, присутствует ли вирус в крови пациента, способен ли он вызвать развитие хронического гепатита, или это норма клинического течения. При этом возможность выявления ДНК HBV в инкубационном периоде до момента синтеза антител гарантирует раннее выявление. Это важное диагностическое преимущество, которое в значительной степени влияет на прогноз при неосторожном очевидном заражении. Подобное может наблюдаться при заражении оперирующего хирурга или пациента при переливании крови.

источник

Гепатит В — одно из самых опасных заболеваний современности.

Его вызывает вирус, проникающий в организм при контакте крови с инфицированным биологическим материалом, в том числе, остающимся на маникюрных принадлежностях, медицинских инструментах, машинках для нанесения татуировок, которые не были нужным образом продезинфицированы. Вирус может передаваться и при половом контакте.

Для диагностики болезни проводится анализ на гепатит В путем забора крови пациента.

Заражение происходит половым и бытовым путем, тип распространения — гематогенный (через кровь). При инфицировании вирус проникает в гепатоциты (клетки печени), в которых продуцируется в дальнейшем. Посредством кровотока болезнь стремительно распространяется по организму. Вирус В (HBV) характеризуется высокой устойчивостью к воздействиям температуры и кислоты, способен сохранять поражающие свойства в течение полугода.

Если гепатит В проявил первые симптомы, прежде чем начать терапию и лечение, необходимо сдать анализы. Исследование крови является достоверным способом установки заражения гепатитом. Проводится в лабораторных условиях. Материал для анализа на гепатит В сдается натощак: с последнего приема пищи должно пройти минимум 8 часов.

Для выявления в крови вируса гепатита В применяются анализы трех типов, характеризующих присутствие вируса в крови:

  • анализ на наличие в материале ДНК HBV путем исследования полимеразной цепной реакции;
  • качественное исследование присутствия белка Anti-HBc IgG и антигена HBsAg (встречаются у здоровых, инфицированных и переболевших);
  • анализ на выявления белков HBeAg и Anti-HBc IgM (характеризуют обострение болезни).

Для полноты картины рекомендуется одновременно провести исследования по нескольким маркерам.

Наиболее распространенными анализами на гепатит В является иммунологические. Их суть — выявить в крови антитела, выработанные организмом или печенью. Пробы носят качественный и количественный характер. Анализы на гепатит В и их расшифровка, как правило, содержат информацию о нескольких характерных белках. При проведении пробы исследуются следующие антитела:

Встречается на ранних сроках заражения до проявления клинических признаков.

Положительный маркер говорит о присутствии вируса, но встречается и у абсолютно здоровых людей. Если в крови присутствует менее 0,05 МЕ/мл, то результат считается отрицательным. Если значение концентрации антитела выше, анализ признается положительным.

Обнаруживается практически у каждого инфицированного пациента. Сохранения показателей на высоком уровне может говорить о переходе болезни в хроническую форму течения. Положительный маркер говорит о нахождении болезни в периоде обострения, затяжном выздоровлении. HBeAg является крайне плохим признаком. Больной очень заразен. В норме — белок в крови не обнаруживается.

Существует два типа антител Anti-НВс: IgG и IgM. Присутствие в крови IgM является признаком течения острой формы, высокой заразности больного и возможности перерохода заболевания в хроническую форму. В норме присутствие IgM не допускается. IgG — благоприятный показатель. Маркер указывает на сформировавший иммунитет организма против гепатита В.

При выявлении в крови маркера можно делать вывод о благоприятном течении заболевания и формировании защитного иммунитета у больного.

Маркер сигнализирует о выздоровлении и формировании иммунитета.

Для лабораторного обследования и выявления наличия диагноза гепатита В в крови применяют метод ПЦР. Способ рассмотрения полимеразной цепной реакции является самым современным в области выявления заболевания.

Итоговая расшифровка показывает, имеются ли следы генного присутствия возбудителя в клетках печени.

Если при проведении исследования соблюдаются все принципы, то результат обладает абсолютной точностью. Метод используется для постановки диагноза, применяется в процессе лечения и при противовирусной терапии.

  1. Качественное ПЦР по итогу имеет всего два значения: «обнаружено» и «не обнаружено». Процедура проводится каждому пациенту с подозрением на гепатит. При средней чувствительности теста на ПЦР в диапазоне от 10 до 500 МЕ/мл, при низких содержаниях ДНК вируса в крови, генный материал обнаружен не будет.
  2. Количественное ПЦР. В отличие от качественного, указывает не только на гепатит В. Количественный анализ указывает насколько норма здорового человека далека от показателей больного в числовом выражении. Метод позволяет оценить стадию заболевания и назначить лечение. Чувствительность теста ПЦР при количественном следовании выше, чем при качественном методе. В основе лежит подсчет выявленной ДНК, который выражается в копиях на миллилитр или МЕ/мл.

Кроме того, количественное ПЦР дает понимание воздействия лечения и корректности подобранной терапии. В зависимости от количества генного материала вируса может быть принято решение о сокращении срока лечения или, наоборот, о его продлении и усилении.

Метод биохимического анализа является обязательным для получения полной клинической картины течения заболевания. Этот диагностический метод дает понимание о работе внутренних органов (печени, почек, желчного пузыря, щитовидной железы и других). Расшифровка дает понимание о скорости обмена веществ в организме, возможных патологиях метаболизма. Развернутые показатели укажут на недостаток витаминов, макроэлементов и минералов, необходимых для здоровья и жизни человека.

Сдать анализ на гепатит можно в любом другом диагностическом центре (Инвитро, Гемотест и др). Биохимический анализ крови при выявлении гепатита В включает следующие компоненты.

Этот фермент наиболее часто встречается в повышенных концентрациях при остром и хроническом гепатите. Вещество содержится в печеночных клетках, а при поражениях органа посредством кровотока попадает в сосуды.

Количество и концентрация в крови при вирусном заболевании постоянно меняется, поэтому исследования проводятся не реже, чем раз в квартал. АЛТ отражает не только активность вируса гепатита, но и степень вызванных им нарушений в печени. Уровень АЛТ возрастает при повышении количества токсических веществ печеночного происхождения и в присутствие вируса.

Белок является составляющей важнейших органов человека: печени, нервной ткани, ткани почек, скелета и мышц. Фермент участвует и в построении самой главной мышцы — сердца. Высокие показатели АСТ у больного с гепатитом В может сигнализировать о фиброзе печени. Аналогичная ситуация возникает при алкогольном, медикаментозном или любом другом токсическом поражении клеток печени.

Зашкаливающие показатели являются признаком разрушения печени на клеточном уровне. Необходимо учитывать при постановке диагноза соотношение АСТ и АЛТ (коэффициент де Ритиса). Одновременное повышение концентрации обоих ферментов — признак некроза печени.

Вещество образуется в селезенке и печени, как результат распада гемоглобина в их тканях. Этот компонент входит в состав желчи. Выделяют две фракции белка: прямой билирубин (связанный) и непрямой билирубин (свободный). При возрастании в крови связанного билирубина имеет смысл подозревать гепатит или другие поражения печени. Это непосредственно связано с цитолизом печеночных клеток.

Если возрастает количество непрямого билирубина, то, скорее всего, присутствует поражение паренхимотозной ткани либо синдром Жильбера. Высокий уровень билирубина по результатам анализа может стать следствием непроходимости желчных протоков. При уровне билирубина свыше 30 микромоль на литр у больного проявляется желтушный оттенок кожи, моча становится темной, а белки глаз изменяют свой цвет.

Синтез этого белка происходит в печени. Если его количество снижено, то это свидетельствует об уменьшении синтеза ферментов в органе вследствие возникновения тяжелых поражений печеночных клеток.

Если количество общего белка становится существенно ниже, чем принятая норма, то это говорит о замедлении функционирования печени.

Фермент, используемый при обнаружении механической желтухи и холециститов. Возрастание уровня ГГТ является сигналом токсического поражения печени. Может провоцироваться хронических алкоголизмом и бесконтрольным употреблением медикаментов. Белок особо чувствителен к токсинам и алкоголю, под их влиянием его активность растет стремительно. Сохранение высокой концентрации ГГТ в крови в течение длительного времени говорит о тяжелых поражениях печени.

Является продуктом белкового обмена, происходящего в печени. Резкое снижение уровня — сигнал замедления работы органа.

Снижение уровня белковых фракций является признаком патологии печени.

Диагностирование гепатита В представляет собой совокупное исследование показателей. Только их комплексный анализ позволяет сделать выводы об инфицировании пациента. Рассмотрим расшифровку анализа на гепатит В. Для сравнения приведена норма веществ в крови.

Таблица. Расшифровка анализа на гепатит В.

Наименование вещества В норме При инфицировании
Исследования на анти-тела при гепатите В
HBsAg Отрицательный маркер Положительный маркер (иногда обнаруживается у здоровых людей)
HBeAg Отрицательный маркер Положительный маркер (характерен для хронического и острого состояния)
Anti-НВс IgG Положительный (свидетельствует об формировании иммунитета к заболеванию) /отрицательный маркер Отрицательный
Anti-НВс IgM Отрицательный маркер Положительный маркер (гепатит в стадии обострения или хронического течения, повышенная заразность)
Anti-НВе Положительный (формирование иммунитета)/отрицательный маркер Положительный (благоприятное течение)/отрицательный маркер
Anti-HBs Положительный (формирование иммунитета)/отрицательный маркер Положительный (благоприятное течение)/отрицательный маркер
Метод ПЦР
Качественное ПЦР Отрицательный Положительный
Качественное ПЦР Отрицательный «Не обнаружено» — генный материал вируса не присутствует или его количество слишком мало;

Менее 3,6*10^2 МЕ/мл — низкая концентрация генного материала;

2*10^4 МЕ/мл — средняя концентрация. Лечение должно быть основано на результатах биопсии печеночных клеток;

2*10^4 МЕ/мл — обостренное течение заболевания (обязательно применение противовирусных препаратов);

4,8*10^7 МЕ/мл — избыточное количество ДНК вируса в крови, крайне негативный показатель, высокая степень поражения печени.

Биохимический анализ крови
АЛТ 6-37 МЕ/л 500-3000 МЕ/л.
АСТ У мужчин до 40-41 МЕ/л

У детей до 50 МЕ/л

Свыше указанных норм
Билирубин Непрямого — не более 17 мкмоль/л

Всего — не более 20,5 мкмоль/л

Свыше указанных норм
Альбумин От 35 до 50 г/л Ниже указанной нормы
Общий белок У взрослых от 65 до 84 г/л Свыше указанной нормы
ГГТ У мужчин — 10-71 ед/л

У женщин — 6-42 ед/л

Свыше указанной нормы

Ложноположительным называют результат, который возникает в виде положительной реакции на присутствие возбудителя вируса в крови при его отсутствии. Такой результат возможен при прохождении обследования на гепатит В и формируется под влиянием различных факторов. Встречается подобная реакция при:

  • беременности;
  • развитии онкологических заболеваний;
  • тяжелых инфекционных проявлениях;
  • перенесенной вакцинации;
  • сбоев в работе иммунной системы.

Ложноположительный анализ на гепатит В возможен при нарушениях в ходе забора крови или во время процедуры проведения ее исследования. Анализы на гепатит В в этом случае необходимо сдать повторно. Во избежание подобного рекомендуется проходить дополнительное обследование методом ПЦР, которое без обнаружения генов гепатита В, полностью исключает заболевание.

Дополнительная интересная информация о гепатите В – в следующем видео:

источник

Существует множество субтипов HCV, из-за чего не всегда удается подобрать эффективные противовирусные лекарства и достичь желаемых результатов в лечении. Разнообразие возбудителей обусловлено их способностью изменять свою структуру, то есть мутировать. Вследствие этого иммунитет не успевает сформировать мощный ответ против патогенного агента, а медикаменты оказываются неэффективными.

Зачастую гепатит диагностируется на стадии цирроза, чему предрасполагает позднее выявление болезни из-за отсутствия клинических признаков. Только путем лабораторного исследования удается обнаружить HCV в инкубационном периоде.

Количественный анализ на гепатит С дает возможность не только установить факт присутствия возбудителя в крови, но и подсчитать его концентрацию.

Специфической подготовки к лабораторной диагностике не требуется. Достаточно придерживаться следующих рекомендаций:

  1. количественный анализ проводится натощак, при этом последний прием пищи – за 8 часов до забора крови;
  2. за двое суток следует отказаться от спиртного и «тяжелых» блюд;
  3. особое значение имеют лекарственные средства, которые принимает пациент. Они могут повлиять на результат исследования, поэтому врач должен знать о них.

Также не желательна тяжелая физическая нагрузка и физиотерапевтические процедуры накануне забора крови. Чтобы расшифровка количественного анализа на гепатит С получилась достоверной, не стоит пренебрегать вышеперечисленными рекомендациями.

Зачастую результат анализа пациент получает через сутки. Цена исследования на определение концентрации возбудителя в крови зависит от лаборатории и качества реактивов и может достигать 4 тысяч рублей.

К числу первостепенных методов диагностики относится ИФА, или иначе иммуноферментный анализ. Он назначается для обнаружения специфических антител к HCV. Его эффективность достигает 95%. Если расшифровка исследования дает положительный результат, стоит заподозрить присутствие возбудителя в крови.

Заметим, что у половины обследуемых при «+» тесте в ходе дальнейшей диагностики вирусный агент в крови не выявляется. ИФА в данном случае указывает на перенесенный контакт с HCV в прошлом, что подтверждается циркулирующими антителами.

Более точным исследованием является полимеразная цепная реакция, или иначе ПЦР. Она позволяет определить концентрацию РНК возбудителя в крови. Обнаружив генетический набор вируса в биологическом материале, врач подтверждает гепатит С.

Читайте также:  Hbs hcv анализ на гепатит

ПЦР назначается пациенту для верификации диагноза. Она дает возможность выявить РНК на стадии, когда антитела еще отсутствуют. Существует несколько видов генетических исследований:

  1. количественный анализ ПЦР на гепатит С, который не только устанавливает факт присутствия возбудителя в крови, но и предоставляет информацию о его концентрации;
  2. качественный – подтверждает инфицирование;
  3. генотипирование – позволяет определить генотип патогенного агента и подобрать наиболее эффективные лекарства против него.

Как уже было сказано, существует несколько видов лабораторного исследования:

  • качественный анализ – свидетельствует о присутствии патогенного агента в крови. Данный вид диагностики имеет определенный «уровень реагирования», поэтому не всегда оказывается достоверным. Чтобы правильно расшифровать результаты и получить реальные показатели, для исследования рекомендуется использовать тест-систему с чувствительностью — не ниже 50 МЕ/мл. Норма анализа – это «отрицательный ответ» или «вирус не обнаружен». Это указывает на отсутствие генетического набора возбудителя в исследуемом материале. Если результат оказался положительный, требуется дальнейшее обследование пациента;
  • количественный анализ ПЦР на гепатит С определяет вирусную нагрузку, то есть концентрацию патогенного агента в крови. Результат исследования показывает число единиц РНК в фиксированном объеме биологической жидкости;

Вирусная нагрузка – это подсчет инфекционной РНК в одном миллилитре крови исследуемого. Единицы измерения – МЕ/мл, однако некоторые лаборатории определяют «копии/мл», при этом указывая на бланке нормы анализа для сравнения и оценки результатов.

  • генотипирование. Из-за способности возбудителя изменяться выбор эффективных противовирусных лекарств для терапии должен осуществляться на основании его генотипа. От него зависит не только результат, но и длительность лечебного курса. Так, гепатит HCV 1 требует назначения медикаментов на год, однако положительная динамика наблюдается лишь в 60% случаев. Что касается второго и третьего генотипов, то они являются менее стойкими к действию противовирусных средств, из-за чего эффективность терапии превышает 85%. При получении такого результата исследования – «вирус не типируется», стоит заподозрить присутствие возбудителя, который не распознается стандартными тест-системами.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С необходима для:

  1. дальнейшего обследования пациента, когда при ИФА были обнаружены антитела к HCV;
  2. подтверждения диагноза;
  3. установления вирусной нагрузки при микст-инфекции, когда человек заражен несколькими видами возбудителя;
  4. определения тактики лечения (выбора противовирусных медикаментов, их замены или завершения терапии);
  5. оценки динамики прогрессирования заболевания, а также эффективности лекарств;
  6. определения стадии патологии (острая, хроническая).

ПЦР имеет следующие преимущества:

  1. хорошая чувствительность, благодаря чему удается подсчитать даже небольшое количество вируса;
  2. определение самого возбудителя (РНК), а не антигенов;
  3. специфичность методики — установление определенного типа патогенного агента;
  4. быстрота получения результатов, ведь для анализа не требуется выращивание культур на питательной среде. Ответ готов через 5 часов;
  5. универсальность – позволяет выявить генетический набор различных возбудителей, как РНК, так и ДНК-содержащих (гепатит В);
  6. обнаружение скрытой инфекции.

Лабораторное исследование помогает подтвердить диагноз и является неотъемлемой частью комплексного обследования (анализа клинических симптомов, результатов ИФА и биохимии).

Кроме того, ПЦР широко используется в аллергологии, генетике, а также для установления факта отцовства.

Оценка результатов лабораторной диагностики осуществляется врачом путем сравнения полученных данных с нормой.

Ответ анализа (МЕ/мл) Что означает
Не обнаружено Это норма количественного анализа на гепатит С, что свидетельствует о том, что возбудитель не найдет, или его концентрация находится ниже уровня чувствительности методики
До 1,8*10^2 Содержание патогенного агента ниже нормы
До 8*10^5 Низкая вирусная нагрузка, что указывает на благоприятный прогноз и эффективную терапию
Более 8*10^5 Возбудитель обнаружен — большая нагрузка.
Выше 2,4*10^7 Концентрация вируса значительно превышает линейный диапазон

Концентрация патогенного агента определяется амплификатором и сравнивается с диапазоном, границы которого от 1,8*10^2 до 2,4*10^7. Благодаря регулярному обследованию вирусоносителя удается своевременно обнаружить увеличение вирусной нагрузки, что подтверждает активацию возбудителя и обострение болезни.

На результаты ПЦР могут влиять некоторые факторы:

  • некачественный сбор материала;
  • введение гепарина накануне исследования. Он относится к лекарственным средствам, которые уменьшают свертываемость крови, тем самым замедляя действие реактивов ПЦР;
  • несоблюдение правил транспортировки материала;
  • низкий уровень профессионализма врачей-лаборантов;
  • несоблюдение техники проведения анализа.

Норма количественного исследования на определение РНК вируса гепатита С может несколько отличаться в разных лабораториях, однако эти погрешности зачастую не влияют на конечный результат обследования. Не последнюю роль играет вид тест-систем, а именно их чувствительность. Это особенно важно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой, которую некоторые лаборатории могут не обнаружить.

Лабораторная диагностика проводится на этапе обнаружения гепатита С, в процессе лечения, а также после проведенной терапии. Это дает возможность правильно установить субтип возбудителя, подобрать эффективные лекарства и отследить динамику изменений на фоне их приема.

Кроме того, исследование крови позволяет подтвердить выздоровление или хронизацию инфекционно-воспалительного процесса. Обязательным считается анализ перед началом терапии и спустя 3 месяца, что необходимо для оценки динамики и эффективности выбранных противовирусных средств.

Дополнительно врач назначает ПЦР на 4 и 24 неделях терапии. О благоприятном прогнозе можно говорить при снижении вирусной нагрузки к концу третьего месяца. Например, при ее уменьшении с 1 млн МЕ/мл до 100 тысяч. Если концентрация возбудителей остается на прежнем уровне или несколько увеличивается, значит, противовирусные медикаменты неэффективны, и требуется их замена или добавление новых.

В случае медленного снижения уровня патогенных агентов в крови врач может продлить лечение или наоборот, отменить препараты, получив отрицательный ответ ПЦР.

При получении положительного результата лабораторной диагностики следует немедленно обратиться к инфекционисту, поскольку успех в лечении напрямую зависит от стадии, на которой был поставлен диагноз гепатита С и начата терапия. Кроме того, необходимо помнить о риске заражения окружающих, поэтому прием противовирусных препаратов важен не только для инфицированного, но и для его родственников.

источник

Вирусный гепатит В успешно лечится, если его вовремя обнаружить и правильно определить количество антител и антигенов в крови больного. С помощью иммуноферментного анализа на гепатит можно обнаружить присутствие маркеров вируса, но не могут установить точно стадию процесса.

Для количественной оценки применяют ПЦР диагностику. С помощью теста возможно посчитать количество маркеров, спрогнозировать течение болезни и вероятность излечения при помощи противовирусных препаратов.

Главное преимущество исследования — возможность обнаружить даже минимальные концентрации вируса, идентифицировать возбудителя на видовой стадии.

Вирус гепатита В отличается большой контагиозностью и устойчивостью к внешним воздействиям. Он сохраняет активность в следах крови больного до нескольких недель. Поэтому каждый человек подвержен риску заражения даже при условии соблюдения профилактики.

Для диагностики заболевания назначают следующие исследования:

Иммуноферментный анализ крови на наличие антител к ВГВ Это быстрый и информативный тест. Его недостатком является то, что исследование только дает информацию о присутствии антител, но не уточняет их количество.
Биохимический анализ крови При начавшихся изменениях в печени в крови больного будет повышен уровень билирубина, щелочной фосфатазы и снижен уровень печеночных ферментов. Но на начальной стадии показатели будут находиться в пределах нормы.
ПЦР (полимеразная цепная реакция) С ее помощью восстанавливают ДНК вируса, подсчитывают количественные показатели антител, уточняют стадию заболевания. То есть разное количество антител может свидетельствовать об остром этапе или о постпрививочном иммунитете.

Американский химик К.Муллис получил Нобелевскую премию, и до сих пор применяется его метод диагностики

Родоначальником метода ПЦР (полимеразной цепной реакции) считается ученый из Норвегии Х. Клеппе. Он первый стал проводить амплификацию (восстановление) ДНК при помощи короткой цепочки ДНК, то есть синтетического праймера (своеобразной копии).

Однако, ученому не удалось реализовать свою идею. Похожие исследования сделал американский химик К.Муллис, который в 1993 был удостоен Нобелевской премии за свое изобретение. С тех пор ПЦР используют для установления отцовства, диагностики генетических болезней, обнаружения вирусов.

Суть реакции в том, что при помощи ферментов копируется определенный участок ДНК. Скопировать можно только участок, который соответствует заданным параметрам и если он есть в представленном образце. Для запуска реакции применяют следующие компоненты:

  1. Матричная ДНК с участком, подлежащим копированию.
  2. Праймеры, схожие по строению участку ДНК.
  3. Полимераза, то есть фермент, запускающий реакцию. Она должна быть термостабильной, то есть выдерживать перепады температур.
  4. Раствор с определенными параметрами, обеспечивающий прохождение реакции.

Реакция проводится в несколько этапов:

Денатурация (прогревание) Сначала раствор нагревают, в результате чего цепочки ДНК расходятся.
Стадия отжига Раствор остужают, праймеры связываются с одноцепочечной матрицей.
Этап элонгации Полимераза создает дочернюю цепь ДНК, достраиваются все фрагменты цепочки. Цепочка может расти до пределов, которые задаются количеством реагентов, затем достигает состояния плато.

Для обнаружения гепатита в применяют два типа реакции: количественную и качественную.

Количественный метод определяет количество генома ВГВ

Количественный ПЦР предполагает одновременное создание копий фрагментов ДНК и определение количества молекул. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования.

Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного.

Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы:

  1. С какой интенсивностью прогрессирует болезнь.
  2. Насколько эффективно проводимое лечение.
  3. Развилась ли резистентность к назначенным препаратам.

Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции. Если количество ДНК ниже 100 шт/мл при нормальном уровне трансаминаза, то человек является носителем вируса.

При острой фазе количество антител значительно выше.При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения.

Качественный ПЦР дает меньше информации, однако может исключить заражение

Качественный ПЦР позволяет только установить присутствие возбудителя в крови. Если они отсутствуют, то пациент не заражен, при попадании возбудителя в кровь результат будет положительным.

Однако, с помощью качественной реакции невозможно уточнить геном вируса, этап заболевания. Поэтому для диагностики ВГВ проводят как количественное, так и качественное измерение.

Для проведения анализа методом полимеразной реакции необходима венозная кровь. Это необходимо сделать утром на голодный желудок.

Пациенту следует правильно подготовиться к исследованию:

  1. За 10 часов отказаться от пищи, можно пить только чистую воду.
  2. Накануне прекратить прием алкоголя, за 4 часа не курить.
  3. Перед обследованием стоит избегать физических и эмоциональных стрессов.
  4. За 2 суток перестать употреблять лекарства, если это невозможно, то необходимо предупредить лаборанта. Некоторые препараты оказывают влияние на конечный результат.

При количественной реакции оценивают полученные показатели в зависимости от числа копий ДНК

Интерпретировать данные качественного измерения несложно. Он дает либо положительный, либо отрицательный ответ.

При количественной реакции оценить полученные показатели можно в зависимости от числа копий ДНК. Единицей измерения является копий/мл.

Расшифровываются данные следующим образом:

  1. Если количество ДНК ВГВ менее 90, то инфекция отсутствует. У пациента развился поствакцинальный иммунитет, либо он излечился от болезни.
  2. При числе копий 2х100 говорят о носительстве вируса.
  3. Количество 2х106 свидетельствует о хронической стадии болезни.
  4. При ДНК более 2х109 пациент болен острой стадией гепатита.

Преимущества метода диагностики с помощью полимеразных реакцийи заключаются в следующем:

  1. Прямое обнаружение возбудителей. В отличие от него, метод ИФА дает информацию о присутствии антител к вирусу.
  2. Специфичность. То есть копируется именно участок ДНК, который имеется в образце биоматериала.
  3. Повышенная чувствительность. Метод может обнаружить даже единичные фрагменты клеток.
  4. Диагностика болезней в острой и в скрытой стадии. То есть, можно диагностировать болезнь на этапе доклинических проявлений.

У метода есть недостатки, которые приводят к ложным результатам. Самый существенный недостаток — вероятность загрязнения материала. Основным источником загрязнения являются плохо обработанные пробирки, руки лаборанта, реактивы.

В кровь может попасть часть ДНК от предыдущей реакции. Поэтому к лабораториям предъявляются повышенные санитарные требования: раздельные помещения, пластиковые пробирки, обработка лабораторий ультрафиолетом и т. д.

Ложноотрицательные результаты могут быть следствием сниженной чувствительности реакции. Это происходит в следующих ситуациях:

  • пациент принимает лекарственные препараты, например, антикоагулянты;
  • человек перед анализом перенес физическое напряжение (занятия спортом, тяжелая работа);
  • заражение произошло недавно.

Если у пациента есть высокая вероятность инфицирования, а результат исследования отрицательный, ему необходимо повторное обследование.

Метод полимеразной цепной реакции является основным и самым информативным для диагностики ВГВ. Он позволяет не просто установить носительство инфекции, но и уточнить этап заболевания, оценить результаты лечения.

Для более точного диагноза применяют качественное и количественное измерение. К недостаткам способа можно отнести вероятность загрязнения, снижение чувствительности и довольно высокую цену.

Для того, чтобы результаты были наиболее достоверными, следует правильно подготовиться к исследованию и проводить его в клинике с соответствующей лицензией и хорошей репутацией.

Смотрите видео о ПЦР:

источник