Меню Рубрики

Пробирки для анализа на гепатит

Гепатит C – инфицирование печени, вызванное вирусом Flaviviridae HCV, состоящим из одной или нескольких молекул РНК. Как правило, проводится ряд диагностических мероприятий для установления у пациента гепатита C. ПЦР является анализом, точно подтверждающим диагноз. Часто заключение предоставляется врачами, когда у больного уже присутствуют первые признаки заболевания.

Поражение печени вирусной инфекцией, передающейся через кровь или половым путем, в медицине называется гепатитом С. Возбудителем является РНК-содержащий вирус неклеточных инфекционных агентов семейства Flaviviridae. Инфекция может долго находиться в организме, никак себя не проявляя. Поэтому лишь при обнаружении микроорганизма с помощью исследования крови методом ПЦР РНК гепатит C (как диагноз) считается обоснованным.

Флавивирус не продуцируется в искусственно выращенных изолированных клетках. В процессе размножения инфекционный агент создает иммунологически отличающиеся модификации. Эти факторы мешают организму давать соответствующий защитный ответ, а у специалистов возникают трудности с разработкой действенной вакцины.

Передается вирус парентеральным способом. Для заражения необходимо его попадание в достаточном количестве непосредственно в кровь.

Вирусные патологии печени диагностируются с помощью лабораторных тестов. Клинические исследования гепатита C проводят методом изучения чужеродных и опасных для организма антигенов или белковых соединений (антител) в биоматериале пациента, в основном в крови.

  • Иммуноферментный анализ (ИФА). Метод базируется на выявлении в крови антител lgM. Иммуноглобулин считается наиболее крупным и представляет собой пентамер. Он проявляется при первичном защитном ответе лимфоцитов на неизвестное чужеродное вещество.
  • Радиоиммунологический анализ (РИА) – количественное определение иммуноглобулина lgM при помощи помеченного радиоактивного изотопа йода.
  • ПЦР гепатита C – определение в биоматериале (крови) вирусной РНК. Данный анализ достоверно подтверждает диагноз.

Исследование на иммуноглобулин G не является достоверным. Его наличие в сыворотке крови может говорить не только о присутствии флавивируса, так и о другой перенесенной инфекции, имеющей такого же возбудителя.

Полимеразная цепня реакция (ПЦР) базируется на установлении участков ДНК, специфичных для некоторых болезнетворных микроорганизмов в образцах материала для исследований (эпителий, кровь). Анализ дает возможность определить патогенные мельчайшие организмы (вирусы) посредством выявления их РНК либо ДНК в биологическом материале.

Лабораторная процедура по выявлению антител ПЦР гепатита C проводится в 3 этапа:

  1. Выделение. Исследуемый биоматериал очищают от примесей и получают ДНК в подвижной фазе хроматографической колонки.
  2. Амплификация. Анализ проводят в приборе-термостате амплификаторе. Он с определенной цикличность нагревает и охлаждает пробирки. За одно исследование производится до 35 циклов. В результате получается достаточное количество фрагментов ДНК для выявления, идентификации и оценки возбудителя.
  3. Электрофорез. Полученные фрагменты помещают в гель с разной насыщенностью агарозы и проводят электрофорез. Полученную электрофореграмму анализируют на компьютере.

Применяют не только стандартное исследование ПЦР, но и анализ Real Time PCR. Это диагностика в реальном времени. Метод позволяет проводить качественный и количественный анализ, что дает возможность выявить формацию и динамику болезни, а также назначить терапию, направленную на ликвидацию причины происхождения патологии. Также ПЦР в реальном времени применяют для определения чистой культуры инфекционных агентов (генотипирование).

Для диагностики может быть использована любая биологическая жидкость человека. Биоматериалом для исследования на гепатит C обычно является кровь.

Забор образцов для диагностики проводят в процедурном кабинете. Для взятия крови используют одноразовые пробирки с веществом, угнетающим ее свертываемость. Мероприятия, сориентированные на предотвращение распространения возбудителей инфекции, помогают избежать попадания другого штамма микроорганизмов извне.

Кровь на ПЦР гепатита C сдают утром натощак. Пробу стараются сразу доставить в лабораторию. Допускается хранение биоматериала при температуре от +4 до +8 градусов Цельсия. Контейнеры маркируют и снабжают направлением. Результаты анализа можно получить через 48 часов, иногда раньше.

Спектр применения полимеразной цепной реакции достаточно широк. Инфекционисты определяют с помощью ПЦР гепатит B, заболевания, передающиеся кровососущими насекомыми, СПИД, туберкулез. В онкологии с помощью данного метода выявляют опухолевые клетки на ранних стадиях.

Существует около четырнадцати видов анализа. Использование того или иного вида зависит от сферы применения и конечных результатов анализов. Некоторые разновидности ПЦР незаменимы там, где результат необходим в течение 20 минут.

Для диагностики гепатита C используют 3 вида полимеразной цепной реакции:

  • Качественная оценка может быть либо положительной указывающей на присутствие в организме инфекции, либо отрицательной – отсутствие флавивируса.
  • ПЦР в реальном времени (количественный анализ) – определяет количественное РНК возбудителя в МЕ/мл.
  • Генотипирование – анализ, выявляющий разновидность (генотип) вируса.

Для точного выявления и определения заболевания с последующим назначением оптимальной терапии применяют все три вида исследований.

Анализ назначают в обязательном порядке всем, у кого ИФА выявил антитела к HCV. ПЦР качественный на гепатит C является стандартным тестом на чувствительность. Метод направлен лишь на обнаружение, никакого подсчета или выделения других веществ не производится.

Для определения антител используют специальные тест-системы с порогом чувствительности не ниже 50 МЕ/мл. При обнаружении антител назначаются другие уточняющие анализы. При отрицательном результате дальнейшие исследования не проводятся.

В некоторых случаях ложноотрицательный результат может быть следствием некомпетентности сотрудников лаборатории или низкокачественными реагентами. Для страховки лучше пересдать анализ в другом месте.

Метод применяется для прямого исследования числа флавивируса за один цикл реакции. Для точного измерения используют фрагменты ДНК, применяемые для гибридизации, или флуоресцентно-меченые праймеры. Существует экономичный вариант детекции, с применением красителя SYBL Green. Красящее вещество вклинивается в небольшую бороздку ДНК и при облучении лазером окрашивается в синий цвет.

Концентрация определяется аппаратом-амплификатором в цифровом эквиваленте. В разных лабораториях показатели могут немного отличаться, поэтому их необходимо сравнивать с референтными показателями.

Количественный ПЦР гепатита C помогает подобрать оптимальную дозировку лекарственных средств и определить продолжительность терапии. Частота проведения исследования зависит от стадии заболевания, вида генотипа и назначенного курса лечения.

Вирус гепатита C имеет изменчивое генетическое строение. Многочисленные модификации не дают возможность создать вакцину, а также затрудняют терапию. Всего выявлено и зафиксировано 11 генотипов и 100 подтипов. В странах бывшего СССР у лиц, инфицированных гепатитом C, ПЦР выявляет в основном генотипы 1b и 3.

При наличии любого из генотипов может резвиться цирроз или рак печени. Поэтому так важно обнаружить вирус вовремя.

Для некоторых пациентов определенные лекарства, предназначенные для борьбы с HCV, являются токсичными. Генотипирование позволяет определить разновидность белка и назначить эффективное лекарственное средство.

В результатах анализов на типирование стоит цифра со строчной латинской буквой, указывающая на генотип вируса. В случае если HCV обнаружен, но не типируется, это означает, что у человека несвойственный для определенной географической зоны генотип.

Расшифровкой результатов занимается врач. Только данные нескольких исследований (в совокупности с анамнезом и осмотром) могут дать общую реальную картину истории болезни.

  • У здорового человека тест на качественную реакцию в биоматериале ничего не обнаруживает. Если указано значение «обнаружено» – инфицирование подтверждается, а пациент нуждается в дальнейшей диагностике с последующим лечением.
  • Определение числа возбудителей инфекции дает возможность оценивать вирусную нагрузку на организм. В норме количественного ПЦР гепатита C возбудитель не обнаруживается. Показатель до 8*10^5 расценивается как низкая нагрузка и при грамотной терапии гарантирует благоприятный исход. Более высокие значения требуют углубленного обследования и определения длительной терапии, за положительный исход которой никто не ручается.
  • Положительные результаты генотипирования указывают, какой именно генотип распознан. Отрицательный результат свидетельствует либо об отсутствии флавивируса, либо о наличии генотипа, который нехарактерен для данного региона.

Любое серьезное заболевание требует комплексной диагностики. Положительный ПЦР гепатита C подтверждает диагноз, но прогнозы можно делать только после дополнительных лабораторных и инструментальных исследований.

Обнаружение вируса не дает полного представления о патологии. Необходимо выявить его тип и характер, определить, как он влияет на печень и другие органы. Выявление HCV на ранних стадиях часто имеет благоприятный терапевтический исход.

При наблюдении симптомов, свойственных поражениям печени, есть большая вероятность того, что инфекции уже попала в организм. Поэтому следует обратиться к гепатологу или инфекционисту. Специалист в ходе расспросов соберет анамнез и назначит необходимое обследование.

Если по результатам исследований на гепатит C ПЦР отрицательный, а иммуноферментный анализ положительный, то это говорит о наличие в крови антител к флавивирусу. Обычно так бывает, когда инфекция попала в организм в небольшом количестве, поэтому иммунитет справился с ней самостоятельно. Но такие люди все равно считаются инфицированными и обязаны проходить обследование каждые 6 месяцев. Если с такими результатами анализов человеку отказывают в бесплатном медицинском обследовании, для сохранения здоровья лучше сдать ПЦР платно, а при положительных показателях обратится к специалисту для постановки диагноза и назначения лечения.

При установлении диагноза «гепатит C» ПЦР имеет ряд преимуществ:

  • Обнаружение возбудителя на ранних стадиях.
  • Точное определение вируса.
  • Оперативность проводимой диагностики.
  • Минимальная вероятность ошибки.
  • Высокая чувствительность.
  • Высокая стоимость анализа. Для проведения теста необходимы дорогостоящее оборудование, реагенты и высококвалифицированные медицинские сотрудники. Все вместе складывается в немалую сумму.
  • Жесткие требования к транспортировке биоматериала.

Анализ ПЦР на вирус гепатита C считается основополагающим для постановки диагноза, но не окончательным. Чтобы терапия была эффективной, требуется ряд дополнительных лабораторных и инструментальных исследований. После прохождения всех диагностических мероприятий врач назначает лечение:

  • Прописывается диета №5.
  • Спиртное полностью исключается.
  • Совместный прием «Интерферона» и «Рибавирина» в течение 25 дней.
  • Курсовой прием гепапротекторов «Эссенциале», «Карсил», «Фосфоглив».
  • В особых случаях применяют дискретный плазмаферез.

Медикаменты, назначенные гепатологом, применяют регулярно, не меняя дозировку. Продолжительность приема препаратов определяется врачом после сдачи контрольных анализов. После завершения курса терапии необходимо посещать доктора каждые полгода.

ПЦР-диагностика позволяет выявить возбудителя гепатита C на ранних сроках. Это способствует эффективности терапии и недопущению перехода заболевания в такие опасные формы, как цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.

источник

Информация о документе
Дата добавления:
Размер:
Доступные форматы для скачивания:

4.2.2. Вакуумные пробирки: виды, цветовая кодировка

Вакуумные пробирки представляют собой основной компонент для взятия венозной крови. Пробирки производятся из стекла или специального материала полиэтилен-терфталата (пластика и стекла), который отличается особой прочностью и препятствует газообмену. Они изготовляются и стерилизуются в заводских условиях, предназначены для одноразового применения. Пробирки выпускаются различных объемов и размеров и уже содержат все реагенты и добавки, необходимые для проведения анализа. Вакуум в пробирках обеспечивает взятие необходимого объёма крови и, соответственно, позволяет гарантировать соблюдение правильного соотношения крови и реагента.

Пробирка состоит из трех основных частей:

безопасная крышка с идентификационным кольцом;

Вакуумные пробирки с наполнителем (не реагентом) содержат в себе гель либо гранулы, и используются в случаях, когда требуется разделить составляющие крови. Гель обволакивает сгущенную кровь, обособляя ее от сыворотки, гранулы же превращаются в своеобразный барьер, работая аналогично гелю.

Для некоторых видов анализов добавлен реагент (литий, гепарин, ЭДТА).

Вакуумные пробирки закрываются резиновыми пробками или специальными крышками Hemogard , которые обеспечивают безопасность лаборанта при работе с пробой. Цвет крышки указывает на вид наполнителя и назначение пробирки. Цветовая кодировка пробирок соответствует международному стандарту ISO 6710.

Пробирки для получения сыворотки

Сыворотка крови – наиболее часто используемый материал в клинико-диагностических лабораториях. Для получения сыворотки кровь должна полностью свернуться.

Пробирки для получения сыворотки бывают двух видов – стеклянные и пластиковые. В стеклянных пробирках функцию активатора свертывания выполняет непосредственно само стекло, так как в его состав входит кремний, ускоряющий процесс коагуляции. В пластиковые пробирки для ускорения процесса коагуляции добавляются активаторы свертывания – кремнезем и/или тромбин. Пробирки могут содержать также специальный гель либо гранулы для четкого отделения сыворотки от сгущенной крови.

Стеклянные пробирки без наполнителя и пластиковые пробирки с кремнеземом для исследования сыворотки различают по красной крышке (рис. 5, а ). Пробирки для получения сыворотки с тромбином отличаются окрашенностью крышки или резиновой пробки в оранжевый цвет (рис. 5, б, в ). Тромбин является природным активатором свертывания и значительно сокращает время образования сгустка (3-5 мин.). Пробирки с тромбином применяются для ускоренного получения сыворотки, поэтому чаще всего используются для экспресс-анализов, когда требуется срочно получить сведения о составе крови пациента, к примеру, в реанимационной палате и т.д.

Производятся стеклянные пробирки, в которых содержится только тромбин, и пластиковые пробирки с комплексным наполнителем – тромбин с кремнеземом. Также производятся пробирки с тромбином и гелем, время свертывания крови в которых 3-5 минут.

После заполнения пробирку с тромбином следует обязательно перемешать путем переворачивания 5-6 раз. Полное свертывание крови происходит за 5 минут.

Пробирки с гелем для получения и отделения сыворотки производятся только из пластика, и их можно отличить по желтой крышке (рис. 5, г ). С целью лучшего отделения сгустка крови от сыворотки в пробирки добавлен гель. После взятия пробы пластиковые пробирки следует перемешать путем переворачивания 5–6 раз.

Читайте также:  Анализы на носительство вируса гепатит в

а б в

Рис. 5. Пробирки для получения сыворотки:

а – с активатором свертывания (пластиковые);

Пробирки для исследования плазмы

Для получения плазмы в пробирках используется литиевая или натриевая соль гепарина, распыленная на внутреннюю поверхность пробирки. Гепаринизированную плазму обычно используют для биохимического и иммунологического анализа.

Основное действие гепарина – торможение перехода растворимого фибриногена в нерастворимый фибрин вследствие блокирования активности тромбина.

Пробирки без геля с гепарином (гепарин лития или гепарин натрия) отличаются зеленым цветом крышки. Гепарин лития используется для клинических анализов крови, гепарин натрия – при подборе дозы и мониторинге терапии препаратами лития. Пробирки с гепарином и разделительным гелем для получения плазмы имеют светло-зеленую крышку, в них используется только литиевая соль гепарина. Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8-10 раз. Центрифугирование следует производить сразу после взятия крови.

Рис. 6. Пробирки для получения плазмы: а – с гепарином; б – с гепарином и гелем.

Пробирки для коагулологических исследований

При взятии образцов для исследования системы гемостаза стандартным антикоагулянтом является цитрат натрия . Его механизм действия основан на связывании ионизированного кальция крови, что ведет к обратимому блокированию процесса коагуляции.

Выпускаются как стеклянные, так и пластиковые пробирки с крышкой голубого цвета (рис. 7). Для предотвращения испарения цитрата натрия пластиковые пробирки изготовляются по особой технологии из разного рода пластика и имеют двойные стенки.

Очень важно соблюдать правильное соотношение крови к антикоагулянту как 9:1. Недостаток цитрата в пробе ведет к образованию микросгустков и коагуляции пробы, а избыток – к искажению результатов за счет связывания кальция из реагентов.

При взятии пробы в несколько пробирок у одного пациента пробирка с цитратом должна заполняться до пробирки с активатором свертывания. Сразу после взятия образца пробирку необходимо аккуратного перемешать 4-5 раз.

Для проведения некоторых коагулологических анализов также могут использоваться пробирки с комплексным наполнителем CTAD (Цитрат натрия/Теофиллин/Аденозин/Дипиридамол).

Рис. 7. Пробирки с цитратом натрия.

Пробирки для гематологических исследований

В качестве антикоагулянта в пробирках для гематологических исследований цельной крови используется ЭДТА (калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Противосвертывающее действие ЭДТА обеспечивается за счет связывания ионов кальция в крови. В пробирках со светло-лиловой (сиреневой) крышкой антикоагулянт находится в виде раствора или порошка, распыленного на внутреннюю поверхность пробирок (рис. 8).

Для обеспечения правильного соотношения крови и антикоагулянта пробирка с ЭДТА должна заполняться точно до указанного объема. Недостаток ЭДТА в пробе приводит к ее коагуляции, а избыток – к сморщиванию клеток крови и искажению таких клинических показателей, как гематокрит, размер клеток и т.д.

Сразу после взятия крови в пробирку с ЭДТА ее необходимо тщательно перемешать, переворачивая 8-10 раз.

Рис. 8. Пробирки для гематологических исследований цельной крови.

Пробирки для специальных тестов

Пробирки для исследования глюкозы

Для стабилизации глюкозы используются пробирки с серой крышкой и следующими наполнителями: фторид натрия и оксалат калия, йодоацетат и лития гепарин, фторид натрия и ЭДТА.

Пробирки должны заполняться полностью до указанного на них объема. После взятия пробы пробирки следует перемешать, переворачивая 6-8 раз. Поскольку пробирки с фторидом/оксалатом особенно подвержены гемолизу, их необходимо перемешивать с особой осторожностью.

Рис. 9. Пробирки для исследования глюкозы.

Пробирки для исследования микроэлементов

Микроэлементы находятся в крови в крайне малых количествах, поэтому используемые материалы должны исключать возможность загрязнения образца инородными примесями. Это возможно при применении специальных пробирок с крышкой синего цвета (рис.10).

Пробирки предназначены для исследования цинка, железа, меди, кальция, селена в крови; а также токсикологических исследований свинца, кадмия, мышьяка, сурьмы.

Взятие образца и пробоподготовка производятся в соответствии с используемым наполнителем: они могут быть с активатором свертывания, К 2 -ЭДТА или гепарином натрия или без наполнителя. При анализе сыворотки на наличие микроэлементов в следовых количествах не рекомендуется использовать стандартные пробирки с красной крышкой, так как они содержат повышенную концентрацию цинка и других микроэлементов.

При взятии крови у одного пациента сразу в несколько вакуумных пробирок необходимо пробирку для микроэлементов следует заполнять последней для снижения вероятности загрязнения пробы через иглу.

Рис. 10. Пробирки для исследования микроэлементов.

Пробирки для исследования нестабильных гормонов белковой природы

Для сохранения нестабильных ферментов и гормонов белковой природы в пробирках вместе с антикоагулянтом ЭДТА используется ингибитор протеиназы – апротинин. Он применяется для стабилизации таких гормонов и ферментов, как ренин, адренокортикотропный гормон, глюкогон, соматостин, кальци-тонин, остеокальцин, b-эндорфин, секретин, нейротензин, вазоактивный интестинальный пептид. Апротинин содержится в пробирках объемом 5-10 мл с розовой пробкой .

Пробирки для определения группы крови с розовой крышкой

Эти пробирки используются как для определения группы крови, так и для перекрестной пробы при переливании крови. Выпускаются без наполнителя, с кремнеземом (активатор свертывания) или К 2 ЭДТА. Специальная этикетка на пробирке удобна для записи информации о доноре и пациенте.

Рис. 11. Пробирки для определения группы крови.

Пробирки для стабилизации цельной крови (для иммуногематологии)

Пробирки для стабилизации цельной крови содержат комбинированный наполнитель ACD, состоящий из активного антикоагулянта тринатрия цитрата, лимонной кислоты, которая обеспечивает буферный раствор с тринатрия цитратом, и декстрозы, являющейся питательным веществом для эритроцитов. Стеклянные пробирки с ACD можно отличить по светло-желтой крышке , они обычно используются в отделениях иммунной гематологии для анализа поверхностных антигенов лейкоцитов (HLA-типирование, некоторые приложения проточной цитометрии, исследование функций лейкоцитов и специальные иммунологические тесты).

В пробирках наполнитель ACD присутствует в виде раствора (тип А или В). Цельная кровь смешивается с образцом в соотношении 1:6 (1 часть ACD обеих концентрации к 6 частям образца).

Сразу же после заполнения пробирки с ACD пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8-10 раз.

Рис. 12. Стеклянные пробирки с ACD для иммуногематологии.

Пробирки для измерения СОЭ по методу Вестергрена

Система для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Вестергрена состоит из вакуумных пробирок для взятия венозной крови и штатива с градуированной шкалой.

Стерильные стеклянные пробирки, закрытые черной крышкой Hemogard , содержат раствор цитрата натрия. При полном заполнении пробирки кровью (5,2 мл) достигается соотношение крови и антикоагулянта, равное 4:1.

Штатив рассчитан на 10 пробирок, каждая ячейка снабжена механизмом, с помощью которого совмещается уровень пробы в пробирке с нулевой отметкой шкалы штатива. Измерение СОЭ проводится в закрытой первичной пробирке, при этом пробу не нужно переливать и дополнительно разбавлять.

Хранить образец до анализа нужно при комнатной температуре, вдали от солнечного света и отопительных приборов. Анализ необходимо провести в течение 6 часов после взятия пробы. Для этого необходимо пробирка помещается в специальный штатив, стоящий на ровной горизонтальной поверхности. В течение всего времени проведения теста штатив должен оставаться неподвижным. Далее совмещают нулевую метку с мениском образца и по истечении 60 минут зафиксируют показатели СОЭ по градуированной шкале штатива между осевшими эритроцитами и плазмой.

Рис. 13. Система BD Seditainer для определения СОЭ по методу Вестергрена.

Пробирки для проведения анализов методами
молекулярной диагностики

Пробирки для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики

Эти пластиковые стерильные пробирки используются для взятия крови, пробоподготовки, транспортировки и хранения образца неразбавленной плазмы. Пробирки различаются по крышке жемчужно-белого цвета и применяются для определения вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитах, а также для проведения анализов методами молекулярной диагностики (например, ПЦР) и идеально подходят для хранения и транспортировки плазмы.

Пробирки содержат антикоагулянт К 2 ЭДТА в виде порошка, распыленного на стенках пробирки, и полиэстерный гель, позволяющий отделить плазму от клеток крови во время центрифугирования.

Рис. 14. Пробирки для отделения плазмы с К2ЭДТА и гелем

Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя кровь необходимо тщательно перемешать с антикоагулянтом, аккуратно переворачивая 8-10 раз. Образец до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.

Плазму в пробирках можно хранить в замороженном виде при
-70°C. В пробирках стабильность РНК ВИЧ и вируса гепатита С сохраняется в течение 72 часов при комнатной температуре.

Пробирки для выделения мононуклеарных клеток крови (моноцитов и лимфоцитов)

Пробирки позволяют отделить мононуклеарные клетки периферической крови в один прием, причем в одной первичной пробирке, внутренние стенки которой покрыты силиконом для минимизации неспецифической активации клеток.

Пробирки выпускаются двух видов:

с сине-черной пестрой пробкой (пробирки с натрия цитратом);

с красно-зеленой пестрой пробкой (пробирки натрия гепарином).

Пробирки содержат антикоагулянт разделительный гель и специальную жидкость фиколл, создающую градиент плотности для разделения мононуклеаров. Данные пробирки предназначены для:

исследования количественных и функциональных характеристик мононуклеарных клеток, исследования их активности,

обнаружения злокачественных новообразований,

анализа генетических маркеров,

исследование провирусной ДНК, РНК вирусов (в т.ч. ВИЧ).

Сразу же после извлечения пробирки с кровью из держателя ее необходимо аккуратно перевернуть 8–10 раз. Образец до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.

источник

При наличии у пациента клинических симптомов гепатита ему с диагностической целью назначается исследование крови на маркеры различных типов вируса. Такой анализ позволяет обнаружить эту серьёзную и весьма опасную болезнь даже при отсутствии у человека её характерных признаков. Правильно поставленный диагноз и своевременно проведенное грамотное лечение может спасти человеческую жизнь.

Заболевания различной этиологии, поражающие печень человека, называются гепатитами, которые подразделяются на вирусные и невирусные.

  • Вирусные гепатиты представляют собой инфекционную группу заболеваний.
  • К невирусным причисляют аутоиммунные, лучевые и токсические формы болезни.

Гепатиты бывают острыми, хроническими и диффузными, то есть затрагивающими целиком весь орган.

Для точной диагностики гепатита, при наличии либо отсутствии характерной симптоматики, пациентам в обязательном порядке назначается сдача крови на антитела.

Алгоритм подготовки к сдаче анализа крови на гепатит достаточно прост

  • Предпочтительно сдавать кровь утром натощак. Это означает, что последний приём пищи перед анализом должен быть за 8 часов и более до него.
  • Есть вариант забора крови днём и вечером. В этом случае покушать следует за пять-шесть часов до исследования.
  • С утра и до момента сдачи крови нельзя пить ни чая, ни кофе, ни соков, можно пить только чистую питьевую воду.
  • За двое суток до исследования нужно исключить из рациона жирную и жареную пищу, а также алкогольные напитки.
  • Как минимум в течение часа до сдачи крови следует воздержаться от табакокурения.
  • Сразу после рентгенографических, ультразвуковых и инструментальных исследований, а также после массажа и физиотерапевтических процедур кровь сдавать не рекомендуется.
  • За 24 часа до взятия крови нужно прекратить приём лекарственных препаратов и не допускать больших физических нагрузок, в том числе интенсивного подъёма по лестнице и беговых упражнений. Эмоциональное перевозбуждение также противопоказано.
  • Перечень принимаемых больным лекарств, которые нельзя отменить, должен быть указан на бланке направления.
  • Четверть часа непосредственно перед анализом следует провести совершенно спокойно.

Исследование крови на гепатит А проводится при первых признаках заболевания. Антитела к данному вирусу максимально концентрируются в крови в течение тридцати дней. Затем за следующие 12 месяцев их уровень постепенно снижается до нормального.

Кровь на анализ медработник можно брать у пациента в медицинском учреждении или на дому! Для процедуры используются стерильные одноразовые материалы и инструменты.

Как берут кровь на гепатит из вены

  • Чтобы приостановить кровоток в вене, предплечье пациента обвязывается специальным медицинским жгутом. Благодаря данной процедуре вены в области локтевого сгиба наполняются кровью и становятся более выпуклыми, поэтому в них проще попасть иглой.
  • Кожа на руке человека в месте предполагаемого укола тщательно дезинфицируется спиртом с помощью кусочка марли или ваты.
  • В вену вводится игла с подсоединенным к ней шприцем. В некоторых клиниках кровь из иглы собирают сразу в пробирку или специальную трубку.
  • Сразу после введения в вену иглы рука пациента освобождается от сдавливающего жгута.
  • Когда в лабораторную ёмкость набрано достаточное для исследования количество крови, игла плавным движением удаляется из мягких тканей пациента.
  • К месту укола тотчас прикладывается слегка смоченный спиртом стерильный ватный тампон.
  • Чтобы предотвратить образование гематомы и быстрее остановить кровь, поступающую из образовавшейся ранки, тампон рекомендуется с усилием прижать к месту прокола, а руку согнуть в локте, прислонить к туловищу и держать так несколько минут.
Читайте также:  Анализы на инфекции вич гепатит

На случай, если человек плохо переносит уколы или вид крови, у медработника обязательно должен быть заготовлен нашатырный спирт. Потерявшему сознание пациенту дают понюхать ватку с нашатырём, и он быстро приходит в себя.

Отрицательный результат анализа говорит о том, что вирусы гепатита у человека отсутствуют. Тем не менее, нельзя полностью исключить наличие инфекции, так как состояние иммунной системы у всех людей разное, к тому же,у каждой инфекции существует определенный инкубационный период.

Окончательно удостовериться в правильности результатов первого анализа поможет повторная сдача крови. Для максимально корректного сравнения данных рекомендуется сдавать кровь оба раза в одной и той же клинике в то же самое время суток.

Диагностика на определение lg G вируса проводится имуннохемилюминисцентным методом. Положительные результаты анализа на антитела свидетельствуют об остро текущем либо только что перенесённом заболевании. Нормой считается наличие менее 1 S/CO.

Результат исследования со знаком плюс фиксируется специалистами при нахождении в крови пациента даже следов антител класса LgM. Это означает, что у человека присутствует данное заболевание в острой или хронической форме.

Аналогичная гепатиту А форма заболевания под буквой Е особенно опасна для женщин, ожидающих ребёнка. Гепатит D протекает в большинстве случаев параллельно с В-типом. Заболевание вида G весьма схоже с С-формой, но, как правило, гораздо менее тяжелое и не столь опасное.

Исследование на антитела к перечисленным формам вирусов делается по методу ИФА. Несмотря на состоявшееся заражение, в первые 1,5 месяца болезни анализ крови на антитела будет еще отрицательным и не покажет их наличия. В связи с этим требуется повторная диагностика. Нормой является отсутствие в крови антител. Данные анализа будут положительными в период течения болезни либо тотчас после выздоровления.

При подозрении на невирусные формы болезни кровь изучают на:

В норме его уровень у взрослого человека 5-21 мкмоль/л. Превышение нормального уровня говорит о возможном заболевании.

У здорового человека его может быть от 1,8 до 3,5 грамма на литр. При поврежденной печени уровень фибриногена падает ниже нормы.

  • общий белок сыворотки крови

В здоровой крови его концентрация достигает 66-83 г/л. При гепатите уровень альбуминов значительно снижается.

Норма АЛТ составляет от 0 до 50, АСТ — от 0 до 75 единиц на литр. При заболевании гепатитом количество ферментов в крови превышает нормально допустимые значения.

Помимо описанных методов исследования крови на антитела к вирусам гепатитов, в настоящее время широко применяется способ молекулярной диагностики под названием полимеразная цепная реакция, или ПЦР.

В его основу положен принцип многократного копирования определенного участка молекулы ДНК или РНК с помощью ферментного воздействия. Благодаря этому образуется такое количество задвоенных отрезков генетической молекулярной цепочки, которое позволяет выявить даже малое количество частиц возбудителя инфекции.

Высокая чувствительность данного метода определяет достаточно большую, по сравнению с обычным анализом, точность его показателей.

Достоинствами ПЦР-исследования

  • Быстрота — для постановки реакции нужно лишь несколько часов.
  • Универсальность — обнаружение любых цепочек молекул РНК или ДНК.
  • Выявление непосредственно возбудителя, в отличие от других анализов, которые позволяют обнаружить только реакцию организма на проникновение вируса.

При всех несомненных преимуществах новейшего принципа диагностики гепатитов, у него есть свои недостатки.

  1. Они связаны главным образом с необходимостью высочайшей степени чистоты в помещении лаборатории, поскольку малейшее внешнее загрязнение может радикально повлиять на результат тестирования.
  2. Подобные условия далеко не всегда могут быть созданы в медицинском учреждении.
  3. Кроме того, анализировать данные должен весьма квалифицированный специалист с богатым практическим опытом, который одновременно является лечащим врачом больного, сдавшего анализ. Соблюдение этого условия повсеместно, к сожалению, пока невозможно.

Учитывая данные факторы, нельзя однозначно сказать, что метод ПРЦ всегда и безусловно точен. Он тоже может давать «ложный» результат как со знаком плюс, так и со знаком минус.

Анализ крови на антитела к гепатиту готовится от 1 до 8 дней, в зависимости от типа вируса и категории тестирования.

Стоимость исследования в основных клиниках и медицинских центрах Москвы и Санкт-Петербурга составляет от 250 до 12 000 рублей.

Разброс цен обусловлен сложностью выполнения того или иного анализа.

Загрузка.

Если ребенок постоянно болен, или у него подозреваются опасные симптомы, а врачи не могут точно диагностировать причину заболевания, — для уточнения диагноза могут предложить люмбальную, или спинномозговую пункцию. Это забор образца спинномозговой жидкости при проколе межпозвоночной области. Когда необходим такой инвазивный диагностический … Читать далее → →

Рассматриваемый вид исследования — один из наиболее значимых для уролога. Данное уродинамическое обследование является достаточно информативным, несложным в выполнении и его можно применять по отношению к большому количеству людей. Кроме того, урофлоуметрия — доступная процедура. С ее помощью можно заподозрить … Читать далее → →

источник

Вакуумная пробирка — основной инструмент для забора венозной крови. Она может быть наполнена реагентом, который позволит провести быстрый и точный анализ. В таком случае каждая пробирка имеет колпачок своего цвета. Цветное кодирование соответствует международному стандарту ISO 6710.

Вакуумные пробирки для получения сыворотки (биохимия, серология). Цвет крышечки – коричневый или красный

Сыворотка крови – жидкая часть крови лишенная форменных элементов и некоторых белков (фибрин и др.) в отличие от плазмы, в которой сохраняются все элементы жидкой части крови кроме форменных элементов.

Получение сыворотки крови является результатом двухступенчатого биохимического процесса: свертывания (коагуляции) крови и ретракции (уплотнения) сгустка. Для запуска коагуляционного каскада необходимо наличие внешнего активатора, каковым может служить кремния диоксид, поэтому процесс свертывания крови быстрее происходит в стеклянных пробирках, так как кремния диоксид является базовым материалом стекла или в пластиковых пробирках с активатором свертывания. Активатор свертывания (clot activator) выполнен в виде напыления на внутренней стенке пробирки.
После образования сгустка начинается этап его уплотнения и выделения сыворотки. На практике ретракция сгустка ускоряется центрифугированием пробирок с кровью.
Для получения максимально чистой сыворотки рекомендуется соблюдение трех условий:
1. После забора крови в пробирку в соответствии с инструкцией необходимо осторожно однократно перевернуть пробирку для более полного контакта крови с активатором свертывания;
2. Дождаться завершения процесса свертывания крови в течение 20-30 минут при комнатной температуре и вертикальном положении пробирки;
3. Центрифугировать пробирку со свернувшейся кровью не менее 10 минут с ускорением 1500 G (примерно 3000 об/мин) для максимального выдавливания сыворотки из сгустка. При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4000G c крышечкой и до 12000G без крышечки.
После центрифугирования и полной ретракции сгустка сыворотка располагается над сгустком, но в контакте с ним. Сохраняется опасность загрязнения сыворотки составляющими сгустка при неосторожном обращении с пробиркой (встряхивание, опрокидывание и пр.). Для лучшего очищения сыворотки и более полного разграничения сыворотки и сгустка применяются специальные пробирки, содержащие биологически инертный олефиновый гель. Последний представляет собой тиксотропный кополимер, который тяжелее сыворотки, но легче кровяного сгустка, поэтому после центрифугирования гель в виде тонкой полоски занимает промежуточное положение и служит разделительным барьером. Стабильность такого барьера гарантирована в течение 5-7 дней при хранении пробирки с кровью при комнатной температуре.
Оптимальные сроки сохранности образца крови в данных пробирках составляет при комнатной температуре 6 часов, при хранении в холодильнике (+4ºС) – 24 часа. Повторное центрифугирование пробирок, особенно с гелем, не допускается.
Полученная сыворотка крови применяется для очень широкого спектра лабораторных биохимических, ИФА и иммунологических исследований:
белковый состав, ферменты, гормоны, онкомаркеры, ВИЧ-инфицирование, гепатиты и пр.

Вакуумные пробирки для получения цельной крови или плазмы

Не все анализы в клинике делаются из сыворотки крови. Для многих видов исследований необходима цельная кровь, содержащая форменные элементы, или плазма, освобожденная от клеток крови центрифугированием. С целью получения несвернувшейся крови разработаны пробирки с определенными добавками – антикоагулянтами. На практике используют два вида антикоагулянтов:
ингибиторы (вещества, вызывающие торможение) тромбина. Тромбин является ключевым игроком в коагуляционном каскаде. Он принимает участие в формировании ряда факторов свертывания крови и способствует трансформации фибриногена в фибрин. Добавление биохимических ингибиторов тромбина эффективно активирует антикоагуляционные свойства крови.
связывание (удаление) ионов Ca2+. При прочих равных условиях свертывание крови происходит при активном участии ионов Ca2+. Удаление их является эффективным механизмом сохранения крови в жидком состоянии.

Гепарин. Цвет крышечки – зеленый, светло-зеленый

Гепарин — кислый мукополисахарид с молекулярной массой 4000-40000 – является натуральным антикоагулянтом, присутствующем в любом здоровом организме. Гепарин активирует создание комплексных соединений между антитромбином III и такими факторами свертывания крови, как тромбин, факторы XIIa, XIa, Xa, IXa и VIIa. В таком комплексе факторы свертывания инактивируются необратимо.
Для целей получения плазмы крови в пробирки добавляют литиевую либо натриевую соль гепарина в пропорции к забираемой в пробирку кровью 15-20 МЕ/1 мл, что служит гарантией полной инактивации свертывания крови и не искажает исследуемые параметры. Эритроциты сохраняются в образце крови до 8 часов. Нельзя использовать для проведения анализов образец крови, хранившийся более 48 часов даже в условиях холодильника (+4ºС).
Для получения качественного результата анализа необходимо:
Немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и гепарина,
Плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования – 1000-1500G (2000-3000 об/мин). При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4000G c крышечкой и до 12000G без крышечки.
В клинике пробирки с гепарином применяются, в основном для проведения исследования:
электролитного состава крови,
газового состава крови,
содержания алкоголя в крови.
Не рекомендуется использовать гепарин для: морфологических исследований, так как кислотный характер гепарина способствует обесцвечиванию мазка крови, придавая ему голубоватый оттенок, подсчета лейкоцитов и тромбоцитов, поскольку гепарин стимулирует агрегацию этих клеток крови.
исследований по методике полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Для более чистого разграничения плазмы крови и сгустка применяются специальные пробирки, содержащие кроме гепарина инертный олефиновый гель. Последний представляет собой тиксотропный кополимер, который тяжелее плазмы, но легче форменных клеток крови, поэтому после центрифугирования гель в виде тонкой полоски занимает промежуточное положение и служит разделительным барьером.

Фторид натрия/ЭДТА калия. Цвет крышечки – серый

Добавление фторида натрия и ЭДТА калия в пробирку позволяет предотвратить разрушение глюкозы крови (процесс, называемый гликолизом) и сохранить ее уровень во взятом образце крови.
Фторид натрия и оксалат калия выступают в качестве антикоагулянтов, связывая ионы Са2+ и, кроме того, фторид натрия стабилизирует уровень глюкозы.
Глюкоза разрушается до пирувата и лактата при последовательном осуществлении различных энзиматических реакций. Фторид натрия ингибирует некоторые ферментативные реакции, включая превращение фосфоглицерата в фосфоенолпируватацид, и предотвращает гликолиз.
Для получения качественного результата анализа необходимо:
немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта
плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования – 1000-1500G (2000-3000 об/мин).
Пробирки с добавлением фторида натрия и оксалата калия используют для проведения определения уровня сахара (глюкозы) в крови. Соотношение компонентов 1/1, общее количество добавляемых реагентов – 4,5 мг/1 мл забираемой в пробирку крови.

Замечания: Фторид блокирует активность уреазы и некоторых других ферментов. Образцы крови из данных пробирок нельзя использовать для прямого определения энзимов. Фторид натрия и ЭДТА калия связывают ион Са2+, заменяя в крови 1 ион кальция на 2 иона натрия или калия. Следствием этого является повышение напряжения ионов в межклеточной жидкости и выкачивание воды из внутриклеточного пространства в межклеточное, сморщивание клеток крови с умеренным «выдавливанием» из эритроцитов гемоглобина. Поэтому видимый гемолиз свойственен образцам крови с данной добавкой.
Глюкоза превращается в лактат в результате комплекса реакций, включающего в себя различные этапы. Фторид ингибирует один их последних этапов разрушения глюкозы, начальные этапы с участием гексокиназы и фосфофруктокиназы блокируются менее эффективно, поэтому можно наблюдать снижение содержания глюкозы в образце крови на 6-7% от первоначального.
После первоначального незначительного снижения уровня глюкозы ее количество остается постоянным при хранении крови в пробирке в течение 8-10 часов при температуре до 25ºС и в течение 2-3 дней в холодильнике (+4ºС).

ЭДТА-К2. Цвет крышечки — сиреневый

Этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) является предпочтительным антикоагулянтом для гематологических исследований. ЭДТА и его щелочные соли способны создавать хелатные соединения с ионами кальция с образованием растворимых высокостабильных комплексов. Наиболее эффективная концентрация ЭДТА – 1,2 мг/мл крови. Во всем мире используют три варианта солей ЭДТА: ЭДТА-К3, ЭДТА-К2 и ЭДТА-Na2. Наиболее предпочтительной и рекомендуемой Международной Комиссией по Стандартизации в Гематологии является двукалиевая соль ЭДТА:

Читайте также:  Анализы на пцр показали гепатит с

ЭДТА-К3 показывает меньшую способность поддержания крови в жидком состоянии, также ЭДТА-К3 влияет на подсчет лейкоцитов, занижая их количество.
различия между ЭДТА-К2 и ЭДТА-Na2 в клиническом плане незначительны и ими можно пренебречь, но ЭДТА-Na2 хуже растворим.

Для получения качественного результата анализа необходимо:
немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта;
плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования – 1000-1500G (2000-3000 об/мин). При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4000G c крышечкой и до 12000G без крышечки.

Наиболее широко используются пробирки, содержащие 1,95 мг ЭДТА/1мл крови. Они нашли свое применение в таких областях лабораторной практики, как:
гематологические исследования – подсчет клеток крови, определение СОЭ и пр.
ПЦР-исследования (качественные и количественные методики).

Пробирки с образцами крови можно хранить до 6-10 часов при 4ºС, хранение свыше 24 часов не рекомендуется из-за снижения числа эритроцитов и лейкоцитов.

Цитрат натрия. Цвет крышечки — голубой

Цитрат натрия является антикоагулянтом для сбора венозной крови с це6лью проведения исследований коагуляционных свойств крови.

Процесс свертывания крови представляет собой последовательность сложных реакций, в которых результатом первых реакций (с участием активных ферментов) является активация следующих, первоначально неактивных энзимов. Последним активным ферментом в этой цепочке присутствует тромбин, который осуществляет превращение фибриногена в фибрин. Нити фибрина опутывают клетки крови и окончательно формируют кровяной сгусток. Крайне важную роль на этом этапе играют ионы Са2+. Антикоагуляционные свойства цитрата проявляются в формировании комплекса с ионами Са2+ и эффективном удалении их из крови.

Общее исследование свертывания крови определяется временем, необходимым для последовательной активации ферментов, участвующих в коагуляционном процессе. Проводится определение времени активации и количественное измерение различных составляющих коагуляционного каскада, для чего создаются так называемые «обходные пути» добавлением некоторых промежуточных продуктов свертывания.

Наиболее часто используются пробирки с 3,8% или 3,2% раствором цитрата натрия (0,129 моль/л), соотношение цитрата к количеству забираемой крови 1/9.

Для максимально качественного проведения коагулологических исследований рекомендуется соблюдение определенных правил:
нельзя использовать пробирку для взятия крови на коагуляционные тесты первой, сразу после венепункции, так как на результаты может повлиять выделяющийся при пункции тканевой тромбопластин;
венозный жгут во время взятия крови в пробирку должен быть снят;
немедленно после взятия крови пробирку аккуратно переворачивают 5-6 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта;
сразу после этого надо проверить количество взятой крови: ее верхняя граница должна быть на уровне голубой полоски на этикетке.

Оптимальными условиями хранения пробирки с образцом крови является температура 20-24ºС и исследование коагуляционных свойств и факторов свертывания крови должно быть проведено в течение 2-х часов с момента взятия крови

источник

Подготовка обследуемых

Взятие венозной крови производится натощак, в утренние часы. При взятии венозной крови необходимо учитывать ряд факторов которые могут повлиять на результат гематологических исследований: физическое перенапряжение (бег, быстрая ходьба, подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение, прием пищи накануне исследования, купение, прием алкоголя и т.д. Для исключения этих факторов, следует соблюдать следующие условия подготовки пациентов:
• взятие венозной крови осуществляется после 15-минутного отдыха обследуемого;
• пациент во время взятия сидит, у тяжелых больных взятие крови может осуществляться лежа.
• курение, прием алкоголя и пищи непосредственно перед исследованием исключаются;

Основной способ взятия венозной крови для лабораторного исследования – пунктирование вены. Венозную кровь, как правило, забирают из локтевой вены. В случае необходимости ее можно получить из любой вены (запястья, тыла ладони, над большим пальцем и т.д.). У новорожденных и грудных детей кровь обычно берется из лобной, височной или яремной вены.
При взятии крови из вены необходимо избегать: мест шрамов, гематом; вен, используемых для переливания растворов; ножных вен (у больных диабетом, при нарушениях периферического кровотока, ангиопатиях).

Оборудование

Для венепункции можно использовать три варианта пункционных систем:
• одноразовые пластиковые системы (вакутейнеры), состоящие из контейнера с навинчивающейся на него одноразовой иглой и пробирки с плотно прилегающей пробкой и вакуумом внутри;
• одноразовые шприцы с подходящим диаметром иглы;
• иглы с внутренним диаметром 0,55-0,65 мм.

Условия транспортировки венозной крови

Правильно собранная венозная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 60 мин после взятия крови. Если доставка крови в лабораторию осуществляется в течении дня, то она хранится при температуре +40С-+60С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию.
Во время транспортировки пробирки и контейнеры с кровью должны быть соответствующим образом защищены от вредного воздействия окружающей среды и погодных условий. При транспортировке венозной крови должны строго соблюдаться правила техники безопасности, асептики и антисептики.
Пробирки должны быть промаркированы, упакованы и плотно закрыты. Упаковка должна быть удобной для транспортировки. Сроки хранения зависят от исследуемого показателя, температуры хранения и антикоагулянта, с помощью которого осуществляется взятие крови.

Методика получения сыворотки крови (без использования разделительных или вспомогательных средств для центрифугирования)

Оборудование
1. Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл.
2. Стеклянные палочки или Пастеровские пипетки с запаянными на конце капиллярами (для отделения сгустка).
3. Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин).

Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов в центрифужную стеклянную пробирку, отстаивается в ней при комнатной температуре (15-200С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. По окончании образования сгустка пробирки открывают и осторожно проводят тонкой стеклянной палочкой или запаянным капилляром Пастеровской пипетки по внутренним стенкам пробирки по окружности в верхнем слое крови для отделения столбика сгустка от стенок пробирки. Сыворотку сливают в другую центрифужную пробирку, придерживая сгусток стеклянной палочкой, и центрифугируют, либо центрифугируют в тех же, первичных, пробирках.

После ретракции сгустка пробы центрифугируют при относительной центробежной силе RCF от 1000 до 1200 xg (максимально до 1500 xg) в течение 10 минут.
В случае использования микропробирок и центрифуги для них центрифугирование проводят при 6000-15000 xg в течение 1,5 минут. После центрифугирования сыворотку сливают во вторичные (транспортные) пробирки. Сыворотка не должна быть гемолизированной.
Плазма получается из крови путем отделения клеток крови. Она представляет собой бесклеточную надосадочную жидкость, которая получается при центрифугировании крови, свертываемость которой ингибирована добавлением антикоагулянтов тотчас после взятия. В плазме содержатся факторы свертывания крови. В связи с тем, что плазма и сыворотка содержат около 93% воды, в отличие от цельной крови, которая содержит около 81% воды, концентрация компонентов в плазме на 12% выше, чем в цельной крови. Это может иметь принципиальное диагностическое значение при исследовании активности, например ЛДГ у которого наиболее высокая концентрация наблюдается в сыворотке крови, чем в плазме.
Широко применяются коммерческие системы для получения плазмы. Они представляют собой пробирки или устройства типа шприцев (“вакутейнер”) с вакуумом внутри, содержащие различные антикоагулянты и/или ингибиторы гликолиза. Как и в случае устройств для сыворотки, эти пробирки для плазмы имеют разные варианты, содержащие разделительные гели и гранулят из полистирола, ускоряющие получение плазмы, облегчающие транспортировку и хранение. В них уже имеются антикоагулянты и метки до которых следует набирать кровь.

Методика получения плазмы

Венозную кровь, полученную с антикоагулянтом немедленно после взятия перемешивают переворачиванием пробирок с кровью, закрытых крышками, не менее 5 раз. Перемешивание должно осуществляться без встряхивания и пенообразования. Время между началом наложения жгута и смешиванием крови с антикоагулянтом не должно превышать 2 минут.
После уравновешивания пробирок с кровью, их центрифугируют при RCF 1000-1200 xg, но не более 1500 xg, в течение 10-15 минут. Плазму немедленно сливают в транспортную центрифужную или химическую пробирку. Пробирку закрывают крышкой.
Условия транспортировки плазмы крови
Правильно полученная и собранная плазма крови должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 24 часа. Если доставка плазмы в лабораторию осуществляется в течение дня, то она хранится при температуре +4. +80С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию. Для более длительного хранения плазма может быть заморожена при температуре –200С.
Правила транспортировки плазмы такие же как и венозной крови.

источник

Оснащение: шприц ёмкостью 10 – 20мл с иглой для в/в инъекций, спиртовые шарики (спирт – 70%), маска, перчатки, жгут, клеёнчатая подушечка, салфетка, маска, кожный антисептик, стерильная пробирка.

  1. Объяснить пациенту цель исследования и заручиться его согласием.
  2. Приготовить направление.
  3. Надеть маску, тщательно вымыть руки проточной водой с мылом, обработать кожным антисептиком, надеть перчатки, обработать их спиртовым шариком или антисептикомдля перчаток.
  4. Усадить пациента на стул или уложить на кушетку.
  5. Освободить руку от одежды до середины плеча.
  6. Попросить пациента максимально разогнуть руку в локтевом суставе, под локоть положить клеёнчатую подушечку.
  7. Проверить упаковку шприца на целостность, срок годности.
  8. Наложить жгут на среднюю треть плеча.
  9. Правила наложения жгута:
    • концы жгута должны смотреть вверх;
    • жгут накладывается на плечо через салфетку или одежду;
    В иммунологическую лабораторию КРОВЬ НА ВИЧ НАПРАВЛЕНИЕ Ф.И.О.__________________________ Год рождения____________________ Адрес___________________________ Место работы____________________ Код контингента__________________ Дата______________ Отделение_______________________ Ф.И.О. врача_____________________
      • пульс на лучевой артерии должен прощупываться (рука не должна бледнеть или синеть – пережимаются только вены, артерии свободны).
      1. Попросить пациента несколько раз сжать и разжать кулак (поработать кулачком).
      2. Прощупать вену и встать по ходу вены.
      3. Дважды обработать кожу спиртовыми шариками движениями снизу вверх вначале 10х10см и вторым шариком 5х5см по ходу вены.
      4. Вскрыть упаковку со шприцем, насадить иглу на шприц и проверить проходимость иглы и наличие воздуха в шприце.
      5. Попросить пациента сжать кулак и зафиксировать вену первым пальцем левой руки, оттягивая кожу вниз.
      6. Держа иглу срезом вверх (и делениями на цилиндре вверх)параллельно вене, под острым углом к коже проколоть кожу.
      7. Продолжая фиксировать вену, слегка изменить направление иглы к вене и осторожно проколоть вену. Возникает ощущение попадания в пустоту (провала).
      8. Зафиксировать шприц, слегка придавив его к руке пациента вторым пальцем правой руки.
      9. Оттянуть поршень на себя и набрать нужное количество крови.
      10. Снять жгут. Пациент при этом разжимает кулак.
      11. На место прокола приложить спиртовый шарик и извлечь иглу, придерживая кожу. Запомните! Сначала снять жгут, дать крови отток, а затем извлечь иглу!
      12. Попросить пациента перехватить ватный шарик свободной рукой и согнуть руку в локте на 5 минут, резко не вставать, посидеть 5 – 10 минут в процедурном кабинете.
      13. Снять иглу со шприца с помощью специального устройства на контейнере, поместить в контейнер для использованных игл для дезинфекции,
      14. Осторожно по стеночки вылить кровь из шприца в стерильную пробирку, на пробирке написать фамилию и номер пациента, поместить пробирку в штатив.
      15. Шприц освободить от остатков крови в ёмкость №1 с дезраствором, набрать полный шприц дезраствора из ёмкости №1, и поместить в ёмкость № 2 с дезсредством. После дезинфекции шприцы и иглы помещаются в жёлтый мешок «Б» для утилизации.
      16. Помочь пациенту лечь удобно, поправить постель.
      17. Снять перчатки вымыть руки.
      18. Отметить в медицинской карте и в процедурном листе о выполнении процедуры.
      19. Отправить пробирку вместе с направлением в лабораторию.

      Примечание: на некоторые виды исследования (исследования свёртывающей системы крови) кровь берут без шприца. После пункции вены шприц отсоединяют от иглы, к канюле подставляют стерильную пробирку и ждут, когда наберётся нужное количество крови. В связи с угрозой инфицирования вирусными гепатитами и ВИЧ-инфекцией, данную методику необходимо применять только по показаниям.

      Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

      Лучшие изречения: Сдача сессии и защита диплома — страшная бессонница, которая потом кажется страшным сном. 8443 — | 7002 — или читать все.

      193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

      Отключите adBlock!
      и обновите страницу (F5)

      очень нужно

      источник