Меню Рубрики

Пцр анализ на гепатит с количественный анализ

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Проводимое исследование Цели выполнения
Биохимический анализ крови и печеночные пробы Позволяет оценить функциональную активность печени, уровень билирубина, показатели печеночных трансаминаз. Превышение нормы в 2 раза и более указывает на наличие заболевания
Клинические анализы крови, мочи и кала Данные исследования неспецифичны, но по результатам можно установить наличие воспалительного процесса, оценить общее состояние пациента. Обнаружение билирубина в моче, изменение оттенка кала говорит в пользу поражения печени
Иммуноферментный анализ (ИФА) Позволяет определить как наличие вирусной инфекции в организме, так и ее форму (острую или хроническую). Недостатком исследования является вероятность ложных результатов
Полимеразная цепная реакция Дорогостоящий, сложный в проведении, но вместе с тем наиболее точный метод диагностики HCV. Позволяет подтвердить наличие вируса в организме человека, количественно установить уровень копий РНК, определить генотип HCV
Инструментальные обследования печени Необходимо проведение УЗИ органов брюшной полости, установление стадии фиброза, оценка тяжести цирроза, исключение гепатоцеллюлярной карциномы

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

  1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
  2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
  3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

  1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
  2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
  3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

  • вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
  • эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
  • риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
  • риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

  • положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
  • положительный результат качественной ПЦР;
  • контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

  • до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
  • 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
  • последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
  • 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

  • сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
  • процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
  • в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
  • за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
  • если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Значение показателя Уровень вирусной нагрузки
РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы) Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии
1,8×102–7,9×105 МЕ/мл Низкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов
8×102–2,3×107 МЕ/мл Умеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача
2,4×107 МЕ/мл и выше Высокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени)

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

  • самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
  • раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
  • при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

  • позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
  • позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
  • определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

Гепатит С. Чем он опасен для человека. Как диагностировать инфекцию. Что нужно для проведения анализа

Вирус гепатита С или ВГС – инфекционное заболевание, которое несет в себе молекулу рибонуклеиновой кислоты.

Этот тип вируса умеет легко приспосабливаться к условиям обитания и часто трансформируется в разные формы болезни, поэтому нашей защитной системе организма так сложно с ним справиться. Классифицируют шесть главных генетических типов инфекции и десятки подтипов. В наших краях зачастую встречаются первые три типа вируса.

По статистике лишь четверть случаев заболевания ВГС протекают без осложнений, во всех остальных случаях норма, если инфекция перерастает в хронический процесс, который пагубно влияет на внутренние органы. Так гепатит может осложняться печеночным фиброзом – процесс замены печеночных клеток. Дальше осложнения развиваются по цепной реакции: вследствие фиброза появляются раковые опухоли, болезнь печени перерастает в цирроз.

В большинстве случаев инфекция попадает в организм человека по кровеносным сосудам. Диагностируют вирус гепатита С несколькими методами. Отслеживают уровень концентрации антител к ВГС. Инфицирование не произошло, если в крови пациента не будут найдены антитела к ней. В противном случае вирус изучается более глубоко, проводят еще один тест – ПЦР. Только этот метод позволяет идентифицировать РНК вируса спустя всего полторы недели после заражения, во время, когда организм не успевает начать производство антител к инфекции, и последствия заражения никак не отражены на общем состоянии, тем более в результатах других исследований, таких как БАК и биопсия.

Читайте также:  Что такое биологический анализ на гепатит

Вирусная нагрузка или количественный анализ ПЦР – анализ на определение уровня содержания инфекции в плазме. По сути, количественный анализ – это число молекул инфекционной рибонуклеиновой кислоты в одном миллилитре крови.

Р-ДНК – быстрый, дешевый и не самый точный количественный способ определения вируса на основе выявления клеток разветвленной ДНК. Этот тест может не идентифицировать заражение, присутствующее в организме из-за плохой чувствительности – около 450 МЕ/мл.

Количественный метод транскрипционной амплификации позволяет найти в организме клетки РНК. Этот способ появился сравнительно недавно, он стоит недорого и является достаточно эффективным средством диагностики. Чувствительность теста около 10 МЕ/мл.

Попробуем объяснить результаты анализов. Ниже приведена таблица и расшифровка.

Норма для каждого случая

Обнаруженная концентрация молекул инфекции, МЕ/мл Описание
отсутствует Результат – норма. Инфекция не присутствует в организме или присутствует в настолько малом количестве, что находится ниже порога чувствительности теста
0-1,8х10^2 Норма. Количество молекул инфекции меньше допустимых границ
1,8х10² – 8х10^5 Не норма. Инфекция присутствует в небольшом количестве.
8х10^5 – 2,4*10^7 Не норма. Инфекция в большом количестве
Свыше 2,4*10^7 Не норма. Большая опасность. Инфекция сильно выражена

Результат анализа может быть предоставлен исходя и другой классификации – по концентрации копий молекул вируса в единице жидкости. Усредненно можно полагать, что в одной единице МЕ 4 копии на один миллилитр.

Чтобы определить степень активности инфекции в организме, применяют метод исследования виремии. На основе такого анализа специалист дает заключение о возможности заражения пациентом окружающих, вступающих с ним в тесный контакт. Особой значимости набирает этот анализ при опасности передачи инфекции во время беременности от матери к плоду.

Данный тест проходят пациенты, у которых в крови нашлись антитела к инфекции. Примерно четверть больных острым гепатитом С излечиваются самостоятельно, то есть при клинических исследованиях следов вируса не выявляется. По итогам теста врач прогнозирует дальнейшее протекание болезни и назначает соответственное лечение.

Лечебные процедуры назначаются после проведения исследования ПЦР. Высокие показатели по результатам ПЦР снижают шансы на беспрепятственное восстановление здорового состояния организма, низкие же наоборот – повышают.

Также данный тест проходят пациенты уже параллельно с терапевтическими процедурами: в начале первого месяца, конце первого месяца, в конце квартала и через пол года.

Если уровень заражения с течением времени, а в частности в конце первого квартала лечения, не снижается, значит, лечение малоэффективно. Врачу следует изменить вектор терапии.

Снижение активности заражения определяется понижением в десять раз количеством молекул вируса в крови. То есть если на первой неделе было найдено10000 единиц, а в конце квартала 1000 единиц, инфекция считается угасающей, а лечение стоит продолжать.

После окончания курса терапии все равно необходимо отслеживать состояние инфекции, так как существует опасность рецидивной инфекции, т.е. вирус может снова распространяться, а болезнь прогрессировать.

Результат теста может быть некорректным из-за присутствия человеческого фактора при исследовании материала. Лаборантом может быть не соблюдены условия содержания опытных проб, например:

  • попадание грязи на испытуемую пробу
  • присутствие в плазме гепарина
  • наличие в плазме специальных веществ, действующих на реагенты, входящие в состав ПЦР.

В разных клиниках по одному и тому ж анализу могут предоставить отличающиеся результаты. Причина в различном подходе исследований, работе с разными реагентами. Это вполне обычная ситуация. Уберечь себя от неточного результата анализа можно, если сдавать анализы только в своей проверенной клинике.

В дополнение к уровню виремии необходимо идентифицировать генетический тип инфекции, особенно в период назначения и прохождения курса лечения. Стоит понимать, что характер болезни невозможно выявить путем проведения анализа ПЦР. Для этого служат и обязательны к применению другие тесты, такие как биохимический анализ крови (БАК), биопсия печени и так далее.

Материал для проведения опыта при гепатитах забирают из локтевой вены. Пациент сдает кровь рано утром до приема еды. Настоятельно рекомендуется ограничить физическую работу, организовать рациональное питание, воздержаться от вредных превычек за день до сдачи анализа. Тогда степень достоверности теста будет значительной. Как правило, исследование материала занимает не больше суток, то есть на следующий день после сдачи можно забирать результаты анализа.

источник

Вирус гепатита С способен размножаться в клетках крови и вызывать лимфопролиферативные болезни. Благодаря множественным мутациям иммунная защита организма ослабевает, возникают генотипы и субтипы вируса. При правильном и своевременном определении конкретного вида зависит эффективность противовирусной терапии. Опасность инфицирования состоит в том, что болезнь протекает бессимптомно. Всего в 15 процентах из 100 могут наблюдаться тошнота и рвота, похудением и повышением температуры.

Стандартная норма гепатита С – это размеры от 40 до 60 нм, с большинством липидов, поражение печени в результате острого или хронического течения болезни. Гепатит С, а именно РНК-вирус семейства Togaviridae, крайне стойкий, передается путем переливания крови или использования нестерильных предметов, неправильная гигиена ванных принадлежностей и др. Количественный анализ позволяет исследовать кровь и выявить генетическую структуру инфицируемого вируса.

Чтобы гепатит С и его генотипы были определены, проводят количественный анализ. В зависимости от анализатора могут определить три уровня заболеваемости РНК-вирусом.

Субтипы могут производить различные модификации, поэтому специфика и чувствительность анализатора должна быть на сто процентов. Помимо обнаружения болезни у пациента, необходимо определить степень его тяжести. Некоторые лаборатории не имеют полностью всех данных по расшифровкам РНК-вируса, есть вероятность ложноположительного ответа.

Исследование на гепатит С будет точнее при изучении таких показателей:

Обратив внимание на результаты этих показателей и общее состояние организма, выводится результат, показывающий степень зараженности, форму, а также количество клеток гепатита С в крови. Это способствует процессу выздоровления и эффективности противовирусной терапии.

Полиразмерная цепная реакция (ПЦР) дает представление о количестве частиц ДНК во взятых у пациента анализах, при этом правильно определит возбудителя инфекции.

Могут проявиться возбудители инфекционных заболеваний. Такое инфекционное заболевание печени, как гепатит С, в наше время поддается лечению, когда его своевременно обнаруживают. При подозрении на наличие вируса делают ПЦР анализ.

При том, что длительное время симптомы вируса могут маскироваться, человек может не ощущать начала течения болезни. Но при тщательном обследовании в 60–70% случаев выявляется гепатит С, первоочередный анализ, при котором – это ИФА, затем следует ПЦР диагностика. Анализ проводится в определенные периоды, чтобы определить стадию заболевания и назначить соответствующее лечение. Обойтись без этого, не применяя все эти процедуры, можно, прививаясь от гепатита.

Анализ, включающий ПЦР-диагностику, предоставляет картину болезни, то, насколько активен вирус в разные периоды развития.

Сначала идет качественный анализ, который лишь подтверждает гипотезу насчет инфицирования, а затем количественный, определяющий нагрузку на печень. Идеальным вариантом будет отрицательный результат на гепатит С в генетическом материале пациента.

Качественный и количественный анализ

Различают анализ качественный и количественный. Суть первого в том, что он определяет присутствие инфекции в крови. А это значит вирус поражает здоровые клетки печени. При обнаружении у больного антител к гепатиту С сразу проводят качественный тест. Норма, которую должен выдать результат – это «в крови не обнаружено». При определении концентрации вируса есть необходимость в знании чувствительности диагностической системы, так как анализ могут делать люди, проходящие противовирусную терапию. Степень чувствительности анализатора не должна быть менее 50 МЕ/мл.

При обнаружении вируса делают количественный анализ, другими словами, вирусную нагрузку, определяющую концентрацию вируса в крови и тяжесть заболевания.

Вирусная РНК, находящаяся в определенном количестве крови, определяется как норма из расчета 1 мл на 1 сантиметр кубический. После количественного определения вирусной нагрузки можно судить о степени заражения еще неинфицированного окружения. Как только концентрация гепатита С повышается в крови, от окружения нужно изолироваться.

Важно на первых этапах обнаружить степень концентрации гепатита, чтобы определиться с темпами реабилитации. Если норма гепатита С превышена на более, чем 800 тысяч МЕ/мл, она считается завышенной, при увеличении до одного миллиона – критической. Если количественный диапазон менее 400 тысяч МЕ/мл, считается, что заражение окружающих произойдет с меньшей вероятностью. Такая цифра дает понять, что гепатит С в организме присутствует в очень маленьких дозах. Анализ не смог определить количественное значение РНК частиц вируса, поэтому его назначают повторно несколько раз для точности диагноза.

Задача определения количества вирусной нагрузки в крови пациента – это выявление степени заражения для окружающих.

позволяет оценить эффективность противовирусной терапии, уровень заразности и количество инфицированных тканей.

Важно не допустить прогрессирования болезни, вовремя принять меры по профилактике, назначить правильное лечение на основе ПЦР-диагностики. Если по результатам уровень вирусной нагрузки менее 400 тысяч МЕ/мл, значит концентрация может быть минимальной, что говорит о возможном полном выздоровлении. Норма для положительного результата – это отсутствие инфекции.

Ответ положительный означает наличие в биологическом материале инфекции. Анализ позволяет определить точное количество инфицированных клеток. Отрицательный ответ говорит об отсутствии инфекции, которую тщательно искали в организме.

Метод количественного определения на гепатит С является точным и информативным, проводится на оборудовании с высокой чувствительностью. Расшифровка результатов анализа позволяет узнать есть ли инфекция и ее специфику, увидеть наименьшее количество инфицированных клеток на высокочувствительных анализаторах.

Ложноположительные или противоположные результаты анализ редко выдает, чаще это случается при исследованиях иммуноферментного исследования.

Гепатит С — это одно из самых опасных и трудно диагностируемых вирусных заболеваний. Для определения болезни используют метод ПЦР гепатита С. Это новая высокотехнологичная методика, что позволяет исследовать генетический материал на существование жизни в мельчайших частицах (молекулах) и наименьших количествах. Вирус гепатита очень стойкий, он способен долго жить в окружающей среде и отлично приживается в организме человека.

Нынче существует огромное количество самых различных болезней. И не меньшее число методов их определения. Так как агенты инфекций научились с легкостью приживаться в окружающей среде и эволюционировать, то чтобы их диагностировать, применяются новейшие технологии. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это более быстрый и точный метод, что направлен на поиск возбудителя заболевания, путем существенного повышения части ДНК вируса гепатита в образце. О нем часто пишут: ищет иглу в стогу сена, а потом из игл строит стог.

Качественное тестирование поможет определить присутствие вируса гепатита С в организме.

Выделяют качественный и количественный анализ на гепатит. Чтобы определить, находится ли вирус в организме, и тем, у кого нашли антитела к гепатиту С, проводят качественное тестирование. Расшифровка анализа выдает итог: «положительно»; «отрицательно». Негативное значение означает: либо человек здоров, либо агентов в крови еще недостаточно и их невозможно найти. Поэтому стоит провести повторное исследование через некоторое время.

Положительный результат говорит о существовании инфекции. Это практически всегда точное значение. Ошибочные результаты зависят обычно от человеческого фактора (неправильное хранение или несоблюдение правил проведения методики). Когда норма, итог — отрицательный. Перед проведением тестирования особых правил нет, просто берут кровь с вены.

Ежели нашли, проводят количественный анализ (вирусная нагрузка) — он дает числовые значения: сколько РНК вируса гепатита находится на данное время в установленном объеме исследуемого материала. При активном развитии инфекции ее можно обнаружить на 1−2 неделе у зараженного человека. Обычно исследуют также кровь, потому что агенты в ней свободно циркулируют.

Количественный ПЦР поможет подобрать наиболее эффективное лечение гепатита С.

Отличием количественного анализа есть то, что не все его проходят. Качественный — определяет наличие, а количественный — помогает с подтверждением заключения «вирус гепатита», прогнозом протекания болезни и определения хода лечения. Насколько эффективна терапия, смотрят по числу РНК до и во время лечения. Также с его помощью определяют назначение доз препаратов.

Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть:

определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией;качественный ПЦР нашел антитела гепатита С;нахождение острого и хронического гепатита С;существование микст-гепатитов;при планировании лечения;если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии.

Также смотрят, какая вирусная нагрузка при гепатите: низкая — терапия проводится успешно; повышенная — лечение не эффективно и его нужно менять.

Анализ поможет контролировать результаты терапии на всех стадиях лечения.

На разных фазах заболевания исследование проводят, чтобы дать рецензию пользы лечения и планированию срока его дальнейшего проведения. При хороших ответах на терапию срок ее сокращают. В противном случае, при медлительном уходе вируса, курс лечения продлевают. ПЦР на гепатит делают на 1,4, 12, 24 неделе терапии. Когда показатели не падают по истечении 12 недель, то делают вывод, что терапия не подходит этому организму. Этот анализ используют для установления, насколько активна инфекция и какая вероятность ее передать. Например, при беременности есть риск заразить малыша. После терапии выявляют риск возобновления болезни.

После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена. «Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему. Таблица 1. Расшифровка количественного анализа РНК вируса

Читайте также:  Что такое core анализ на гепатит

Диагностика гепатита включает целый комплекс анализов для определения наличия вируса в крови. Одним из способов обнаружения заболевания является такой метод исследования, как ПЦР на гепатит С. Что это такое, почему анализ ПЦР на гепатит так важен, как его проводят и расшифровывают?

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР, используется для диагностики язвы желудка, колита, энтерита. Но главное ее преимущество заключается в том, что она помогает обнаружить в организме как сам вирус гепатита C, так и антитела к нему, которые обладают способностью не вызывать реакции иммунной системы из-за их способности к мутации.

Исследование и его суть заключаются в создании определенных условий, при которых происходит цепная реакция РНК гепатита. Если при их сопоставлении с нуклеотидной последовательностью вируса гепатита C выявляются совпадения, это свидетельствует о том, что в крови имеются вирусные частицы, а в печени происходят процессы распада. Если количество вируса ниже определенного уровня, выносится отрицательный диагноз, если выше – положительный.

Существует два вида исследования крови методом ПЦР при гепатите: количественный анализ и качественный анализ.

Количественный ПЦР, как упомянуто выше, определяет концентрацию РНК вируса гепатита. Кроме того, он способен дать информацию об интенсивности, с которой развивается патология, и эффективности назначенного лечения. Количественный анализ на гепатит C крайне важен, поскольку фиксирует резистентность к действию противовирусных препаратов и позволяет скорректировать терапию.

После того как больной пройдет курс лечения, ПЦР помогает определить дальнейший порядок назначений. В некоторых случаях выявляется необходимость дополнительных обследований. Например, если уровень АЛП повышен (но не более, чем в 2 раза в течение полугода), а расшифровка анализа указывает на вирусную нагрузку выше 105 МЕ/мл, пациенту назначается биопсия. Если количественный анализ на ПЦР выявляет сильное воспаление и фиброз, больному прописывают курс лечения противовирусными препаратами.

В ситуациях, когда большое количество вирусных частиц сочетается с высоким показателем АЛТ, пациенту незамедлительно должно быть назначено лечение без проведения дополнительных диагностическим мероприятий.

Пройдите этот тест и узнайте есть ли у вас проблемы с печенью.

Качественно расшифровать показатели при количественном анализе крови на гепатит могут только квалифицированные и опытные специалисты, а современные технологии помогают сделать это при низкой концентрации вируса в крови.

Качественный анализ ПЦР направлен на определение и подтверждение фактического присутствия вируса в организме. Его проводят при обнаружении в крови антител к гепатиту. Именно качественный анализ на гепатит гарантирует точность результата на 100% и позволяет поставить диагноз на ранних стадиях заболевания, что дает возможность начать борьбу с гепатитом уже в течение первых недель после заражения и повышает шансы на полное выздоровление (в случае с заболеванием типа B).

При исследовании методом ПЦР и расшифровке анализа крови на гепатит можно также определить генотип возбудителя заболевания. Всего существует 6 генотипов вируса и большое количество субтипов, однако в нашем регионе распространение получили 1, 2 и 3 генотипы.

Другими преимуществами данного вида диагностики являются:

  • высокая точность полученных показателей и низкая вероятность ошибки в них;
  • высокий уровень чувствительности к вирусным частицам в крови;
  • возможность выявления сразу нескольких возбудителей;
  • диагностика болезнетворных внутриклеточных микроорганизмов, обладающих высокой антигенной изменчивостью;
  • работа с расшифровкой анализа на гепатит позволяет обнаружить скрытые текущие инфекции.

Анализ ПЦР на гепатит обязательно сдают следующие категории людей:

  • беременные женщины;
  • сотрудники учреждений здравоохранения;
  • потенциальные доноры крови и органов;
  • те, кто имеют характерные признаки заболевания;
  • ВИЧ-инфицированные лица;
  • наркозависимые;
  • лица, ведущие беспорядочную половую жизнь.

Забор крови для ПЦР-исследования производится из вены. Как правило, это происходит утром до того, как человек поел, поскольку после приема пищи должно пройти минимум 8 часов. В крайних случаях кровь могут взять на исследование днем или вечером, но временной зазор между анализом и приемом пищи должен составлять не менее 5 часов.

Человеческий фактор может количественно отразиться на результатах: их точность в некоторых случаях снижается со 100% до 95%, поэтому к сдаче крови необходимо заблаговременно готовиться. Качество биоматериала для анализа будет соответствующим при следовании пациентом следующим правилам:

  • перед сдачей крови можно пить только чистую воду;
  • за двое суток до проведения исследования нужно отказаться от приема жареной и жирной пищи, а также алкогольных напитков;
  • за сутки до посещения лаборатории следует прекратить прием лекарственных средств. В случае если это не представляется возможным, об этом в обязательном порядке необходимо предупредить лаборанта и лечащего врача;
  • накануне нужно избегать стрессовых ситуаций и физических нагрузок;
  • не следует проходить ультразвуковое, рентгенологическое и инструментальное исследования незадолго до сдачи крови;
  • в течение часа до анализа необходимо воздержаться от курения;
  • за 20 минут до сдачи крови нужно отвлечься, успокоиться и выровнять дыхание.

Если исследование проходит ребенок до 5 лет, родители должны проследить, чтобы он пил кипяченую воду каждые 10 минут в течение получаса до забора биоматериала.

Расшифровка анализа может быть представлена словами (в случае качественного исследования), например, «не обнаружено» или «ниже диапазона изменений». В первом случае, это свидетельствует о том, что инфекция не обнаружена. Во втором – что вирус присутствует, но в незначительном количестве. Такая ситуация требует проведения повторного исследования.

Вирусная нагрузка определяется по количеству инфекционного РНК и обозначается как МЕ/мл или копии/мл.

Нормальным показателем (нормой) количественного анализа на гепатит C является диапазон от 1,8х102 до 2,4х107 МЕ/мл.

Концентрация вируса в крови может быть:

  • низкой: от 600 МЕ/мл до 3х10 4 /мл;
  • средней: от 3х10 4 МЕ/мл до 8х10 5 МЕ/мл;
  • высокой: более 8х10 5 МЕ/мл.

Количественны и качественны анализ ПЦР на гепатит позволяет определить наличие вируса в организме и уровень его концентрации. Полиразмерная цепная реакция способна диагностировать заболевание на ранних стадиях, но для этого необходимо, чтобы больные как можно раньше обращались в медицинские учреждения за помощь и строго следовали рекомендациям лечащего врача.

Вирус гепатита С способен размножаться в клетках крови и вызывать лимфопролиферативные болезни. Благодаря множественным мутациям иммунная защита организма ослабевает, возникают генотипы и субтипы вируса. При правильном и своевременном определении конкретного вида зависит эффективность противовирусной терапии. Опасность инфицирования состоит в том, что болезнь протекает бессимптомно. Всего в 15 процентах из 100 могут наблюдаться тошнота и рвота, похудением и повышением температуры.

Стандартная норма гепатита С – это размеры от 40 до 60 нм, с большинством липидов, поражение печени в результате острого или хронического течения болезни. Гепатит С, а именно РНК-вирус семейства Togaviridae, крайне стойкий, передается путем переливания крови или использования нестерильных предметов, неправильная гигиена ванных принадлежностей и др. Количественный анализ позволяет исследовать кровь и выявить генетическую структуру инфицируемого вируса.

Чтобы гепатит С и его генотипы были определены, проводят количественный анализ. В зависимости от анализатора могут определить три уровня заболеваемости РНК-вирусом.

Субтипы могут производить различные модификации, поэтому специфика и чувствительность анализатора должна быть на сто процентов. Помимо обнаружения болезни у пациента, необходимо определить степень его тяжести. Некоторые лаборатории не имеют полностью всех данных по расшифровкам РНК-вируса, есть вероятность ложноположительного ответа.

Исследование на гепатит С будет точнее при изучении таких показателей:

Обратив внимание на результаты этих показателей и общее состояние организма, выводится результат, показывающий степень зараженности, форму, а также количество клеток гепатита С в крови. Это способствует процессу выздоровления и эффективности противовирусной терапии.

Полиразмерная цепная реакция (ПЦР) дает представление о количестве частиц ДНК во взятых у пациента анализах, при этом правильно определит возбудителя инфекции.

Могут проявиться возбудители инфекционных заболеваний. Такое инфекционное заболевание печени, как гепатит С, в наше время поддается лечению, когда его своевременно обнаруживают. При подозрении на наличие вируса делают ПЦР анализ.

При том, что длительное время симптомы вируса могут маскироваться, человек может не ощущать начала течения болезни. Но при тщательном обследовании в 60–70% случаев выявляется гепатит С, первоочередный анализ, при котором – это ИФА, затем следует ПЦР диагностика. Анализ проводится в определенные периоды, чтобы определить стадию заболевания и назначить соответствующее лечение. Обойтись без этого, не применяя все эти процедуры, можно, прививаясь от гепатита.

Качественный и количественный анализ

Различают анализ качественный и количественный. Суть первого в том, что он определяет присутствие инфекции в крови. А это значит вирус поражает здоровые клетки печени. При обнаружении у больного антител к гепатиту С сразу проводят качественный тест. Норма, которую должен выдать результат – это «в крови не обнаружено». При определении концентрации вируса есть необходимость в знании чувствительности диагностической системы, так как анализ могут делать люди, проходящие противовирусную терапию. Степень чувствительности анализатора не должна быть менее 50 МЕ/мл.

При обнаружении вируса делают количественный анализ, другими словами, вирусную нагрузку, определяющую концентрацию вируса в крови и тяжесть заболевания.

Вирусная РНК, находящаяся в определенном количестве крови, определяется как норма из расчета 1 мл на 1 сантиметр кубический. После количественного определения вирусной нагрузки можно судить о степени заражения еще неинфицированного окружения. Как только концентрация гепатита С повышается в крови, от окружения нужно изолироваться.

Важно на первых этапах обнаружить степень концентрации гепатита, чтобы определиться с темпами реабилитации. Если норма гепатита С превышена на более, чем 800 тысяч МЕ/мл, она считается завышенной, при увеличении до одного миллиона – критической. Если количественный диапазон менее 400 тысяч МЕ/мл, считается, что заражение окружающих произойдет с меньшей вероятностью. Такая цифра дает понять, что гепатит С в организме присутствует в очень маленьких дозах. Анализ не смог определить количественное значение РНК частиц вируса, поэтому его назначают повторно несколько раз для точности диагноза.

Задача определения количества вирусной нагрузки в крови пациента – это выявление степени заражения для окружающих.

  1. Ответ положительный означает наличие в биологическом материале инфекции. Анализ позволяет определить точное количество инфицированных клеток.
  2. Отрицательный ответ говорит об отсутствии инфекции, которую тщательно искали в организме.

Метод количественного определения на гепатит С является точным и информативным, проводится на оборудовании с высокой чувствительностью. Расшифровка результатов анализа позволяет узнать есть ли инфекция и ее специфику, увидеть наименьшее количество инфицированных клеток на высокочувствительных анализаторах.

Ложноположительные или противоположные результаты анализ редко выдает, чаще это случается при исследованиях иммуноферментного исследования.




Вирус гепатита С — это вирус, который содержит молекулу РНК. Он способен избегать иммунного ответа организма благодаря высоким способностям к мутации. Различают шесть основных генотипов вируса и множество субтипов. В нашем регионе в основном распространены 1, 2 и 3 генотипы.

У 75–80 % болезнь переходит в хроническую форму, что вызывает фиброз печени — состояние, при котором ткани печени заменяются соединительной тканью. Фиброз, в свою очередь, приводит к раку или циррозу. Основной путь передачи заболевания — через кровь. Если у человека имеются показания к проведению теста на гепатит С, ему проводят два основных теста. Определяют антитела к вирусу, и при их отсутствии считается, что гепатита у него нет. Если же в крови обнаруживается наличие антител к вирусу гепатита, проводится анализ методом ПЦР.

РНК таким методом определяется в крови уже через 10–12 дней после инфицирования и свидетельствует о том, что вирус активно размножается в организме. В этот период обнаружить вирус другим способом просто невозможно, так как специфических антител он еще не вырабатывает и поражения печени еще незаметны при биохимических анализах и биопсии.

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

  1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
  2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
  3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

  • для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
  • для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
  • для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

  • гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
  • при микст-гепатитах;
  • если планируется проведение противовирусной терапии;
  • во время и после лечения от гепатита С;
  • при наличии хронического и острого гепатита С.
Читайте также:  Что такое количественный анализ гепатит с

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом:

источник

Анализ ПЦР на гепатит С: где и как правильно сдать, что означает положительный и отрицательный результат

ПЦР на гепатит С – обязательный анализ при обследовании пациента с симптомами поражения печени. Исследование назначают для подтверждения диагноза и получения максимально полной информации о возбудителе болезни, активности вирусной инфекции. Результаты служат основанием для назначения противовирусной терапии, определения ее продолжительности и оценки эффективности.

Диагностика с применением методики полимеразной цепной реакции получила распространение сравнительно недавно. Исследования на эту тему велись с середины 1970-х годов. Но первые публикации относительно возможности использования ПЦР в практической медицине появились только в середине 1980-х гг.

При объяснении, что такое ПЦР, врачи подчеркивают, что это самый надежный и достоверный анализ при гепатите С. Данный тест позволяет не только выявить частицы РНК вируса, но и установить его концентрацию (указывает на активность инфекционного процесса) и генотип. Полученные результаты играют ключевую роль для определения тактики и схемы дальнейшей терапии.

В чем состоит суть постановки реакции? При помощи определенных биологически активных веществ добиваются увеличения количество частиц РНК вируса в небольшом объеме крови. Впоследствии участки генома определяются разнообразными физико-химическими методами.

Постановка ПЦР осуществляется при помощи нескольких компонентов:

  • Праймер. Это искусственно синтезированное соединение, в котором последовательность нуклеотидов полностью идентична конкретному участку РНК вируса, не подвергающегося мутациям и изменением в зависимости от генотипа. Определение РНК вируса гепатита С выполняется с использованием строго специфичного праймера.
  • РНК-полимераза. Фермент, отличающийся устойчивостью и структурной стабильностью на фоне изменений температуры, необходимых для правильного протекания химической реакции. Обеспечивает построение цепочки РНК на одном из этапов ПЦР.
  • Смесь протеинов. Для построения дополнительных участков РНК необходим «строительный материал», для чего к биологическому образцу добавляют определенные соединения белковой структуры.
  • Буфер. Смесь, поддерживающая оптимальный уровень рН для обеспечения протекания полимеразной цепной реакции.
  • Образец биологического материала, предположительно содержащий образец РНК HCV (Hepatitis C Virus).

При некоторых способах постановки ПЦР дополнительно используются РНК-зонды и другие внутренние контроли, используемые в качестве контрольных образцов при выявлении результатов.

Сам процесс увеличения участков вирусной РНК при помощи матрицы именуют амплификацией. Реакция протекает в несколько этапов:

  1. Денатурирование. Процесс «раскручивания» нитей РНК обеспечивается повышением температуры до определенного уровня.
  2. Отжиг. После снижения температуры до необходимых показателей происходит присоединение праймеров к РНК. Данная стадия возможна только при наличии в образце крови искомых вирусных частиц.
  3. Непосредственный синтез участков вирусной РНК с участием ферментов.

Перечисленные циклы постановки ПЦР повторяются несколько десятков раз, что обеспечивает многократное увеличение количества участков РНК возбудителя гепатита С уровня, определяемого лабораторными способами.

Перед проведением анализа образец забора крови соответствующим образом подготавливается. Содержащиеся РНК адсорбируются на буфере-носителе, затем смываются и используется для постановки полимеразной цепной реакции.

Детекция результатов проводится либо методом электрофореза (горизонтального или вертикального), либо способом гибридизации. Способ расшифровки результатов реакции выбирается исходя из целей проведения исследования (просто выявление РНК, либо определение ее ориентировочного количества).

Перечень предлагаемых исследований на HCV включает несколько пунктов, отличающихся по стоимости, срокам готовности и способу выполнения.

Если обратиться к протоколам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), порядок диагностики инфекции включает несколько последовательных этапов.

Для начала сдают:

  • общий анализ крови и мочи;
  • биохимия крови;
  • исследование на содержание глюкозы (строго натощак);
  • анализ на ВИЧ;
  • флюорография;
  • иммунограмма (при подозрении на наличие аутоиммунных патологий).

При отклонении показателей биохимического анализа крови от физиологической нормы пациенту назначают тест, основанный на обнаружении специфических антител, вырабатываемых при контакте вируса с кровью (ИФА).

Но подобный анализ крови на гепатит С имеет существенный недостаток. Процесс синтеза антител зависит от функционирования и выработки иммунокомпетентных клеток. Индивидуальные особенности организма могут стать причиной как ложноотрицательного, так и ложноположительного ответа.

Перед назначением теста ИФА врач рассказывает пациенту о возможной ошибке, что вызывает ответный вопрос: «Какой анализ крови показывает гепатит С с минимальным риском получения неверных результатов?» Для подтверждения или опровержения диагноза самым точным лабораторным тестом является проведение ПЦР методом real time.

Дальнейшая тактика действий зависит от того, что покажет исследование. В случае подтверждения диагноза, пациенту сразу же назначают гепатопротекторы, предупреждают о важности правильного питания и здорового образа жизни. Но таргетная терапия невозможна без определения уровня вирусной нагрузки и генотипа гепатита С.

Некоторые лекарственные препараты могут спровоцировать обострение гепатита В. Поэтому для исключения осложнений, дополнительно назначают анализы на HBsAg. HCV лечат только после получения отрицательного результата исследования.

При первичной диагностике гепатита С серологическим методом определяется титр вырабатываемых антител. Такой результат приблизительно показывает активность патологического процесса. Но максимально точную информацию доктор может получить только после изучения данных ПЦР.

В настоящее время практически во всех лабораториях анализ выполняют ультрачувствительным методом. Таким образом диагностика HCV возможно уже через 10–14 дней после заражения, реже – спустя 2,5–3 недели. В зависимости от целей, преследуемых в ходе исследования, доктор назначает конкретный тип теста.

Существуют следующие разновидности ПЦР:

  1. Качественный. При назначении диагностических тестов, у пациентов возникает вопрос, что показывает подобный метод исследования. Качественный анализ способом ПЦР – высокочувствительный тест, определяющий наличие РНК вируса в крови в минимальной концентрации. Обычно подобная разновидность полимеразной цепной реакции ставится по технологии обратной транскрипции. Это один из немногих способов ПЦР, в ходе которого в качестве мишени можно использовать РНК.
  2. Количественный. Количественный анализ на гепатит С позволяет определить точный уровень РНК HCV в крови. Проведение исследования возможно только одним способом – методом real-time. В ходе подготовки материала к постановке ПЦР в образец добавляют краситель. После каждого цикла амплификации проводится автоматизированное количественное исследование в режиме реального времени. Нередко методику проводят в сочетании с обратной транскрипцией. Таким образом возможно качественное определение малого количества копий РНК вируса. Устанавливать уровень РНК HCV количественно имеет смысл, если получен положительный результат качественной ПЦР.
  3. Генотипирование. Анализ сдается проводится на конечной стадии диагностического процесса. Принцип исследования построен на разнице в последовательности нуклеотидов, что отличает один генотип вируса гепатита С от другого. Обычно анализ делают методом мультипраймерной (мультиплексной) ПЦР.

При подозрении на носительство вируса, необходимо выполнить качественную ПЦР. Если результат отрицательный, человек скорее всего здоров. Но для полного исключения заражения рекомендуют повторить исследование через 7–10 дней. Если же РНК вируса обнаружена, проводят дальнейшие тесты (количественный и генотипирование).

Основным показанием к сдаче крови на гепатит С методом полимеразной цепной реакции является положительный результат иммуноферментного анализа (вне зависимости от разновидности: Total, дифференцированный тест на IgG и IgM).

Кроме того, провериться нужно:

  • в период беременности (тест делают дважды – в первом триместре и за 7–10 недель до родов);
  • при работе, связанной с повышенным риском инфицирования (медсестры, лаборанты, работники донорских центров, косметологи и т.д.);
  • при беспорядочных половых связях и незащищенном контакте с малознакомым человеком;
  • на фоне ВИЧ, онкологических заболеваний, приема определенных медикаментозных средств и т.д.;
  • пациентам, зависимым от внутривенных наркотиков;
  • при постоянном проведении инвазивных диагностических или лечебных процедур;
  • при проведенном до 1992 года переливании крови (ранее не существовало достоверных способов проверки донорского биологического материала на наличие вируса).
  • при соприкосновении открытой раны с чужой кровью, нестерилизованным медицинским инструментарием.

Рост заболеваемости растет с каждым годом. Поэтому для раннего выявления инфекции лабораторные тесты на HCV рекомендуют сдавать один раз в год.

При обращении в поликлинику, пациент имеет право на бесплатные анализы. Но сначала сдают тест ИФА. И только при положительном либо сомнительном результате показано исследование методом ПЦР. Поэтому провести срочную диагностику можно обратившись в платную лабораторию, где сдать кровь на ПЦР можно в удобное для пациента время. Одновременно рекомендуют сразу проверить показатели печеночных ферментов, стандартные клинические параметры крови.

Как правило, изучение крови методом ПЦР доступно практически в любой лаборатории. Если пункт забора крови не оснащен должным оборудованием, биологический материал транспортируют для проведения исследования с соблюдением температурного режима и других условий. Проведение ПЦР в поликлинике возможно только после других обследований, результаты которых косвенно укажут на наличие гепатита С.

Перед тем, как сдавать кровь на обнаружения возможного вируса, следует соблюсти ряд правил подготовки к анализу.

Основные аспекты указаны в памятке:

  1. За 5–7 дней отказаться от потребления жирной, жареной пищи, алкоголя. В целом, доктора рекомендуют придерживаться правил питания по диете №5.
  2. За 12–14 часов до проведения исследования не есть. Пить можно только воду.
  3. Сдать кровь лучше в первой половине дня.
  4. До процедуры не курить.

Также следует предупредить доктора о принимаемых лекарственных препаратах, возможных проблемах со здоровьем, хронических заболеваниях.

Забор крови выполняется из вены. После окончания процедуры место прокола медсестра заклеивает стерильным пластырем, предупреждает о необходимости согнуть руку и держать ее в таком положении 10–15 минут. В противном случае высока вероятность появления болезненной гематомы.

Сколько делается анализ, зависит от лаборатории. Средний срок выполнения колеблется в пределах 1–3 дней. Некоторые клиники предоставляют платную услугу быстрой постановки ПЦР, однако время проведения ограничивается возможностями медицинской аппаратуры.

В поликлинике результаты могут передаваться врачу в течение 7–10 дней. Это связывают с большим наплывом пациентов. При этом биологический материал хранится в соответствии со всеми требованиями.

Как правило, расшифровка качественной ПЦР не представляет сложности. Но во избежание ошибочной трактовки, с полученным из лаборатории бланком следует обратиться к врачу. Варианты, что означает та или иная разновидность ПЦР, приведены в таблице.

Отрицательный: человек здоров либо концентрация вирусной РНК в крови слишком мала для детекции.

Положительный: человек инфицирован

Проводится, если обнаружено РНК вируса качественным методом исследования.

В зависимости от того, какие результаты анализов получены, определяется уровень вирусной нагрузки

Проводится при гепатите С, подтвержденном другими методами исследования.

Анализ позволяет установить точный генотип возбудителя патологии

Но нередко возникает ситуация, когда ИФА на гепатит С положительный, а ПЦР отрицательный. Расшифровать такие результаты анализов может только врач.

Однако подобные данные возможны в следующих случаях:

  • беременность;
  • перенесенный в острой форме гепатит С;
  • пройденный курс лечения от HCV;
  • наличие инфекций, повышающих вероятность ложноположительного результата ИФА.

Только полимеразная цепная реакция показывает точное наличие вирусной инфекции в организме. На фоне отрицательной ПЦР положительный ИФА в большинстве случаев говорит о том, что человек не инфицирован. Но врачу следует точно установить причину ложноположительного результата.

Анализ ПЦР качественный на гепатит С подтверждает присутствие возбудителя заболевания в крови. Если РНК вируса не обнаружена, человек здоров. Но при подозрении на инфицирование рекомендуют повторно пройти исследование. Положительный результат свидетельствует об инфицировании. Но этот анализ не позволяет дифференцировать хронический гепатит С от острого, и не может показать, насколько активен патологический процесс.

Количественный анализ методом ПЦР проводится после подтверждения диагноза и его расшифровка важна для определения тактики лечения. В зависимости от концентрации частиц возбудителя гепатита С выделяют несколько степеней вирусной нагрузки: средняя, высокая и низкая. Чем больше показатель, тем тяжелее протекает инфекция и сложнее терапия. В норме вирусная РНК отсутствует в крови.

Многие лаборатории проводят генотипирование в комплексе с количественной ПЦР, что позволяет сэкономить. Подобное исследование делают только один раз, перед началом лечения. Обычно выполняют анализ на один из четырех наиболее распространенных генотипов (1, 2, 3 или 4). Одновременно определяют и подтип HCV. Генотипирование на 5 и 6 подвид гепатита С возможно не в каждой лаборатории.

Диагностика методом ПЦР получила широкое распространение благодаря:

  • высокой точности (при условии использования тест-систем последнего поколения);
  • простоте забора биоматериала;
  • быстроте получения результатов (максимум 5 дней).

Но основное преимущество состоит в широких диагностических возможностях исследования. Анализ позволяет не только выявить вирус, но и точно определить его концентрацию в организме и установить генотип инфекции. Кроме того, количественное исследование необходимо для оценки эффективности противовирусной терапии. Основная цель лечения – достижение нормы анализов (т. е. неопределяемого уровня РНК HCV) на 4, 12 или 24 неделе противовирусного курса и сохранение этого результата.

Стоимость анализа ПЦР колеблется в зависимости от региона. Так, в Москве цены выше. Качественная ПЦР обойдется в 600–800 рублей, количественная – в 2200–3000 рублей, генотипирование – от 1000 рублей. Узнать точно, сколько стоит конкретное исследование, можно непосредственно в лаборатории, на сайте медицинской организации или по телефону.

источник

Вид исследования Возможный результат и предполагаемая расшифровка
Качественная ПЦР