Меню Рубрики

Рнк гепатит с количественный анализ расшифровка

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Проводимое исследование Цели выполнения
Биохимический анализ крови и печеночные пробы Позволяет оценить функциональную активность печени, уровень билирубина, показатели печеночных трансаминаз. Превышение нормы в 2 раза и более указывает на наличие заболевания
Клинические анализы крови, мочи и кала Данные исследования неспецифичны, но по результатам можно установить наличие воспалительного процесса, оценить общее состояние пациента. Обнаружение билирубина в моче, изменение оттенка кала говорит в пользу поражения печени
Иммуноферментный анализ (ИФА) Позволяет определить как наличие вирусной инфекции в организме, так и ее форму (острую или хроническую). Недостатком исследования является вероятность ложных результатов
Полимеразная цепная реакция Дорогостоящий, сложный в проведении, но вместе с тем наиболее точный метод диагностики HCV. Позволяет подтвердить наличие вируса в организме человека, количественно установить уровень копий РНК, определить генотип HCV
Инструментальные обследования печени Необходимо проведение УЗИ органов брюшной полости, установление стадии фиброза, оценка тяжести цирроза, исключение гепатоцеллюлярной карциномы

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

  1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
  2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
  3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

  1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
  2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
  3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

  • вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
  • эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
  • риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
  • риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

  • положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
  • положительный результат качественной ПЦР;
  • контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

  • до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
  • 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
  • последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
  • 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

  • сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
  • процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
  • в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
  • за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
  • если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Значение показателя Уровень вирусной нагрузки
РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы) Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии
1,8×102–7,9×105 МЕ/мл Низкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов
8×102–2,3×107 МЕ/мл Умеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача
2,4×107 МЕ/мл и выше Высокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени)

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

  • самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
  • раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
  • при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

  • позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
  • позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
  • определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

Гепатит С часто протекает скрыто, без очевидных клинических проявлений. Чтобы определить наличие вируса в организме и поражение им печени требуется пройти соответствующее исследование — ПЦР количественный на гепатит С.

Количественный ПЦР — исследование крови или другой физиологической жидкости, которое позволяет определить количественную вирусную нагрузку на организм.

Заболевания, в зависимости от тяжести протекания, отражаются присутствием в крови определённого количества (мл на 1 см3) возбудителя инфекции. Каждый живой организм имеет в своём составе белки, рибонуклеиновую (РНК) и дезоксирибонуклеиновую (ДНК) кислоты.

Читайте также:  Почему анализ на гепатит сдают натощак

Каждый вирус имеет характерные только для него РНК, ДНК, белки. Суть метода полимеразной цепной реакции в том, что он указывает количество РНК конкретного организма (например, вируса определённого генотипа) в 1 мл жидкости. Таким образом, выясняется степень и тяжесть заболевания.

При гепатите С, количественный ПЦР показывает сколько в исследуемом материале РНК вируса. Предварительно проводят качественный анализ, выясняя его наличие.

Из всех существующих способов определения возбудителя, а также его количества, полимеразная цепная реакция — наиболее точный метод. Он призван обнаружить сам вредоносный организм, а не последствия его пребывания (антитела).

Терапия любого заболевания допустима только после установления точного диагноза. Врач сбирает анамнез, оценивает клинические проявления недомогания, а также назначает дополнительные лабораторные обследования.

Прежде чем доктор поставит диагноз, подберёт лечение, необходимо количественное определение РНК вируса гепатита С. Этот анализ назначается не всем пациентам, а при конкретных показаниях:

  • контакт с больным гепатитом С;
  • симптомы заболевания печени;
  • клинические проявления цирроза;
  • в биохимическом анализе крови показатели активности АЛТ, АСТ выше нормы;
  • подозрение на инфицирование гепатитом С;
  • выявлены антитела к HCV при иммуноферментном исследовании крови;
  • уточнение диагноза;
  • определение вирусной нагрузки, чтобы доктор мог выбрать тактику, правильно составить схему лечения;
  • контроль эффективности проводимой терапии в динамике (1, 4, 12, 24 недели после начала лечения);
  • динамика протекания заболевания;
  • при подозрении на смешанные поражения железы;
  • по окончании лечения гепатита для периодической проверки, чтобы исключить рецидив.

Чтобы сделать количественный ПЦР вирусной РНК гепатита С, надо соблюдать методику выполнения исследования:

  1. Лучше всего для тестирования подходит венозная кровь. Анализы сдаются натощак. Пациенту не рекомендуют есть жирную и жареную пищу, пить спиртное за два дня до манипуляции.
  2. После забора биологического материала, его доставляют в лабораторию, обрабатывают.
  3. ПЦР состоит из трёх этапов (подготовка, увеличение копий ДНК возбудителя, идентификация) на каждом из которых используется определённое оборудование и реактивы.
  4. Образцы, взятые для исследования, маркируются. Из них с помощью реагентов выделяют РНК вируса, обозначенного качественным ПЦР.
  5. Процесс амплификации (создание и увеличение копий) проходит несколько раз посредством изменения температуры материала (нагревания, охлаждения) с использованием реактивов.
  6. На последнем этапе происходит определение вирусной нагрузки. Результат исследования интерпретирует лечащий врач, у которого есть расшифровка, таблица значений и итоги предварительной диагностики.

После количественной полимеразной цепной реакции, данные о вирусной нагрузке на печень и организм в целом отображают в бланке. Количество РНК возбудителя выражается как МЕ/мл (международные единицы/миллилитры). Данные обычно выводятся в виде таблицы, в которой представлены:

  • норма количественного ПЦР при гепатит С;
  • полученный результат;
  • другие параметры.

Значения показателей вирусной нагрузки при гепатите С

Показатель Интерпретация
Отрицательный РНК возбудителя в биологическом материале не обнаружено
0 — 1,8Х10^2МЕ/мл Количество генетического материала вируса ниже установленного референтного значения
1,8Х10^2МЕ/мл — 8Х10^5МЕ/мл Невысокая вирусная нагрузка.
8Х10^5МЕ/мл — 2,4Х10^7МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка
2,4Х10^7МЕ/мл и более Превышена верхняя граница значений.

Показатели отчасти зависят от типа и чувствительности теста. Поэтому расшифровать результат анализа может только доктор, который учитывает все параметры.

Лечащий врач, исходя из результатов анализов, собранного анамнеза, клинических признаков подберёт противовирусную терапию. Интенсивность её будет зависеть от количества найденного генотипа вируса в образце.

Любое лабораторное исследование может иметь погрешность, если не будут соблюдены условия его проведения на всех этапах (от подготовки к процедуре до интерпретации результатов). Количественная полимеразная цепная реакция – один из наиболее достоверных методов определения вирусной нагрузки. Но при нарушении методики она может давать ошибочные результаты, так как присутствует человеческий фактор.

Чтобы максимально избежать ложноположительных или неверных данных, требуется выполнять все необходимые требования диагностики:

  1. Прежде чем проводить количественный ПЦР рекомендуется провести иммунологическое исследование крови на выявление антител к гепатиту С. Кроме этого, требуется определить генотип вируса.
  2. Пациенту важно подготовиться к сдаче анализов в соответствии с рекомендациями. Чтобы уменьшить вероятность ошибки в тесте, надо сообщить лаборанту о приёме лекарств (если такой момент имеет место). На прохождение ПЦР влияет употребление запрещённой пищи, стресс, вредные привычки, физические нагрузки, различные заболевания.
  3. Лаборант, который обрабатывает образец биологического материала должен быть компетентен, знать методику проведения количественного ПЦР, а также работу оборудования. Правильная идентификация, подсчёт копий – основа верного результата
  4. Качество, способ, сроки хранения реактивов должны соответствовать заявленным требованиям.
  5. Соблюдение температурного режима на всех этапах реакции обязательно.

Правила и рекомендации по подготовке, сбору материала, проведения количественного ПЦР необходимо соблюдать для достижения 100% точности полученного результата. Ошибочные данные приводят к неправильному выбору тактики лечения и неэффективности терапии.

При подозрении на инфицирование гепатитом С надо обязательно проконсультироваться с врачом. Если проведена диагностика, а ПЦР положительная или её количественные показатели говорят о наличии вирусной нагрузки, это однозначно повод безотлагательно посетить медучреждение.

Доктор, расшифровав результаты анализов, назначит лечение. Правильно выбранные лекарства, техника терапии, своевременное начало приёма медикаментов помогут избежать патологических изменений структуры и работы печени.

Гепатит С — тяжёлое вирусное заболевание, которое может привести к необратимым последствиям для человека. Ранняя, точная диагностика (количественный ПЦР) даёт возможность увеличить вероятность выздоровления в несколько раз.

источник

В последнее время в поисковиках интернет-ресурсов все чаще появляется запрос «количественный анализ на гепатит с расшифровкой».

Действительно, вирус гепатита распространен и опасен, заболевание поражает печень. Название его произошло от лат. hepatitis — воспаление печени. Заражение происходит через кровь либо половым путем, чаще болеют взрослые люди в возрасте от 25 до 50 лет.

Выделяют несколько типов этого заболевания. Гепатит С не имеет яркой выраженности, но в 40–70% случаев переходит в хроническую форму, способен вызвать цирроз печени и рак. Это заболевание требует точного диагностирования и расшифровки полученных данных, для чего разработаны методики. Одна из них — РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР.

РНК (рибонуклеиновая кислота) — вид макромолекулы, одна из составляющих живой клетки. РНК отвечает за кодировку генетической информации. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет обыкновение мутировать. Известны 6 его подтипов, а также много субтипов.

Болезнь в своей хронической стадии приводит к фиброзу печени — разрастаются соединительные ткани, структура органа постепенно нарушается. Фиброз поддается своевременному лечению, так как печень не подверглась еще разрушительным процессам. В отличие от цирроза, тяжелого необратимого заболевания печени, в который может перерасти фиброз без принятия необходимых мер вовремя.

Человеку с подозрением на наличие у него вируса гепатита, определяют антитела к нему. Если их нет — заболевание исключается, при их наличии прибегают к методу ПЦР (полимеразной цепной реакции). В молекулярной биологии он является экспериментальным, но занимает ведущее место среди методик диагностирования инфекционных болезней. С помощью него можно значительно увеличить концентрацию фрагментов молекул в пробе. Через 10 дней после инфицирования РНК уже возможно определить в крови.

Этот метод является единственным, позволяющим выявить заболевание на ранних стадиях. Другими способами (напр., биохимическим исследованием крови) это сделать невозможно, так как печень еще не поражена.

Открыл метод в 1993 году биохимик Кэрри Муллис, за что получил Нобелевскую премию. ПЦР стал прорывом в медицине и науке, так как позволил быстро и точно определять инфекции в крови и других биологических материалах человека. Иными словами, метод ускорил развитие диагностики инфекционных заболеваний.

РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР является эффективным по следующим причинам:

  • имеет хорошую чувствительность — определяется даже малое количество вируса в крови;
  • определяется сам вирус, а не побочные продукты, создаваемые им;
  • определяется вид возбудителя.

Метод ПЦР включает два основных способа исследования биологического материала на поиск вируса гепатита С:

Эти исследования имеют различные задачи.

Качественный анализ на гепатит с расшифровкой подтверждает наличие вируса после того как в крови уже найдены антитела к этому заболеванию. Если исследование дало положительный результат, значит, болезнь обнаружена. Иными словами, человек инфицирован. Если получен отрицательный результат, это означает, что человек не инфицирован, либо в наличии слишком маленькая концентрация вируса. Эта концентрация не обнаруживается таким способом.

Помимо этого клиническая картина заболевания строится на основании маркеров гепатита С и расшифровки анализа. Основные маркеры — иммуноглобулины (антитела) M и G. Наличие их в крови пациента указывает на нехарактерный процесс для здорового организма. На основании наличия этих антител больному, как правило, устанавливается первичный диагноз.

Количественный анализ назначается при первичном обнаружении антител и при необходимости проведения лечения.

Также количественный анализ на гепатит С назначают при выявлении микст-гепатитов (заражение сразу несколькими вирусами).

Количественный анализ с расшифровкой проводится с целью:

  • прояснения окончательного диагноза;
  • выстраивания прогнозов относительно течения заболевания и его лечения — продление, сокращение лечения либо изменение тактики;
  • мониторинга терапии.

Чтобы результаты были верными, нужно соблюдать установленный режим перед тем как сдавать кровь:

  • прийти в лабораторию натощак, последний раз принять пищу можно за 8 часов до процедуры;
  • за два дня до исследования запрещен алкоголь, жирные и жареные продукты;
  • ультразвуковые исследования, массаж, физиотерапию перед исследованием проводить нельзя;
  • за день запрещен прием лекарств, если прием отдельных препаратов невозможно отменить, об этом сообщается до забора крови;
  • перед процедурой рекомендуется снизить по возможности физические и нервные нагрузки.

Выполнение этих требований будет залогом получения верных результатов количественного анализа на гепатит С.

После получения показателей количественного анализа необходимо сделать расшифровку результатов анализов на гепатит С. Результаты вычисляются и в единицах МЕ/мл, и в копиях на мл. Для получения результатов, пересчитанных в копии, применяют несколько методик.

  • HCV Monitor (коэффициент пересчета на МЕ — 2,7);
  • LCX HCV RNA (коэффициент пересчета на МЕ — 3,8).

Таблица. Расшифровка количественного анализа HCV RNA методом ПЦР.

Показатель, МЕ/мл Результаты обнаружения вируса
Не обнаружено Является нормой для здорового человека
Ниже 180 Минимальная концентрация ниже диапазона измерений, не обнаружен
Ниже 800 000 Обнаружен, виремия (концентрация вируса) низкая
Выше 800 000 Обнаружен, виремия высокая
Выше 25 000 000 Обнаружен, виремия выше диапазона измерений

Такая расшифровка результатов анализов на гепатит С помогает определить степень опасности заболевания в плане возможности его передачи. Чем больше обнаружена концентрация вируса в крови при расшифровке, тем выше вероятность заразить другого человека. Также концентрация влияет на успешность назначаемого лечения.

Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу.

Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. МЕ/мл, можно говорить о минимальной концентрации вируса в крови, но не об отсутствии заболевания. Нагрузку более 800 тыс. МЕ/мл определяют как высокую. Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций. Границей считают 400 тыс. МЕ/мл.

Получение ошибочного результата возможно. Это может быть объяснено несколькими причинами.

  1. Ошибка работы диагностического центра — лаборатории. Иногда нарушаются правила проведения исследования, неверно подготавливаются образцы.
  2. Исследуемый образец загрязнен.
  3. Определение в крови гепарина — вещества, которое препятствует свертыванию крови.
  4. Определение в крови ингибиторов — веществ, задерживающих физико-химические процессы.
  5. Применение различных способов и реактивов в разных лабораториях.

Лучше проводить исследование в современной, хорошо себя зарекомендовавшей лаборатории. Для получения правильного результата важна чувствительность системы диагностики. Это нужно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой. Желательно, чтобы чувствительность была не ниже 50 МЕ/мл.

Сдача анализов на гепатит с расшифровкой — надежный современный способ диагностики. Исследования проводятся до лечения, во время и после него, при наличии как острой, так и хронической форм заболевания. Диагностика, проведенная до терапии, определяет его эффективность в дальнейшем.

Во время лечения забор крови делают на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Уже на 12-й неделе показатель виремии должен значительно снизиться. Если этого не происходит, лечение неэффективно и нужно подыскивать новое. Например, с 1 млн МЕ нагрузка должна уменьшиться до 100 тыс. МЕ. После окончания лечения проводят расшифровку анализа гепатита С для исключения рецидивов.

Общее представление о том, что такое анализ ПЦР можно составить, посмотрев следующее видео:

источник

Существует множество субтипов HCV, из-за чего не всегда удается подобрать эффективные противовирусные лекарства и достичь желаемых результатов в лечении. Разнообразие возбудителей обусловлено их способностью изменять свою структуру, то есть мутировать. Вследствие этого иммунитет не успевает сформировать мощный ответ против патогенного агента, а медикаменты оказываются неэффективными.

Читайте также:  Почему бывает анализ на гепатит сомнительный

Зачастую гепатит диагностируется на стадии цирроза, чему предрасполагает позднее выявление болезни из-за отсутствия клинических признаков. Только путем лабораторного исследования удается обнаружить HCV в инкубационном периоде.

Количественный анализ на гепатит С дает возможность не только установить факт присутствия возбудителя в крови, но и подсчитать его концентрацию.

Специфической подготовки к лабораторной диагностике не требуется. Достаточно придерживаться следующих рекомендаций:

  1. количественный анализ проводится натощак, при этом последний прием пищи – за 8 часов до забора крови;
  2. за двое суток следует отказаться от спиртного и «тяжелых» блюд;
  3. особое значение имеют лекарственные средства, которые принимает пациент. Они могут повлиять на результат исследования, поэтому врач должен знать о них.

Также не желательна тяжелая физическая нагрузка и физиотерапевтические процедуры накануне забора крови. Чтобы расшифровка количественного анализа на гепатит С получилась достоверной, не стоит пренебрегать вышеперечисленными рекомендациями.

Зачастую результат анализа пациент получает через сутки. Цена исследования на определение концентрации возбудителя в крови зависит от лаборатории и качества реактивов и может достигать 4 тысяч рублей.

К числу первостепенных методов диагностики относится ИФА, или иначе иммуноферментный анализ. Он назначается для обнаружения специфических антител к HCV. Его эффективность достигает 95%. Если расшифровка исследования дает положительный результат, стоит заподозрить присутствие возбудителя в крови.

Заметим, что у половины обследуемых при «+» тесте в ходе дальнейшей диагностики вирусный агент в крови не выявляется. ИФА в данном случае указывает на перенесенный контакт с HCV в прошлом, что подтверждается циркулирующими антителами.

Более точным исследованием является полимеразная цепная реакция, или иначе ПЦР. Она позволяет определить концентрацию РНК возбудителя в крови. Обнаружив генетический набор вируса в биологическом материале, врач подтверждает гепатит С.

ПЦР назначается пациенту для верификации диагноза. Она дает возможность выявить РНК на стадии, когда антитела еще отсутствуют. Существует несколько видов генетических исследований:

  1. количественный анализ ПЦР на гепатит С, который не только устанавливает факт присутствия возбудителя в крови, но и предоставляет информацию о его концентрации;
  2. качественный – подтверждает инфицирование;
  3. генотипирование – позволяет определить генотип патогенного агента и подобрать наиболее эффективные лекарства против него.

Как уже было сказано, существует несколько видов лабораторного исследования:

  • качественный анализ – свидетельствует о присутствии патогенного агента в крови. Данный вид диагностики имеет определенный «уровень реагирования», поэтому не всегда оказывается достоверным. Чтобы правильно расшифровать результаты и получить реальные показатели, для исследования рекомендуется использовать тест-систему с чувствительностью — не ниже 50 МЕ/мл. Норма анализа – это «отрицательный ответ» или «вирус не обнаружен». Это указывает на отсутствие генетического набора возбудителя в исследуемом материале. Если результат оказался положительный, требуется дальнейшее обследование пациента;
  • количественный анализ ПЦР на гепатит С определяет вирусную нагрузку, то есть концентрацию патогенного агента в крови. Результат исследования показывает число единиц РНК в фиксированном объеме биологической жидкости;

Вирусная нагрузка – это подсчет инфекционной РНК в одном миллилитре крови исследуемого. Единицы измерения – МЕ/мл, однако некоторые лаборатории определяют «копии/мл», при этом указывая на бланке нормы анализа для сравнения и оценки результатов.

  • генотипирование. Из-за способности возбудителя изменяться выбор эффективных противовирусных лекарств для терапии должен осуществляться на основании его генотипа. От него зависит не только результат, но и длительность лечебного курса. Так, гепатит HCV 1 требует назначения медикаментов на год, однако положительная динамика наблюдается лишь в 60% случаев. Что касается второго и третьего генотипов, то они являются менее стойкими к действию противовирусных средств, из-за чего эффективность терапии превышает 85%. При получении такого результата исследования – «вирус не типируется», стоит заподозрить присутствие возбудителя, который не распознается стандартными тест-системами.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С необходима для:

  1. дальнейшего обследования пациента, когда при ИФА были обнаружены антитела к HCV;
  2. подтверждения диагноза;
  3. установления вирусной нагрузки при микст-инфекции, когда человек заражен несколькими видами возбудителя;
  4. определения тактики лечения (выбора противовирусных медикаментов, их замены или завершения терапии);
  5. оценки динамики прогрессирования заболевания, а также эффективности лекарств;
  6. определения стадии патологии (острая, хроническая).

ПЦР имеет следующие преимущества:

  1. хорошая чувствительность, благодаря чему удается подсчитать даже небольшое количество вируса;
  2. определение самого возбудителя (РНК), а не антигенов;
  3. специфичность методики — установление определенного типа патогенного агента;
  4. быстрота получения результатов, ведь для анализа не требуется выращивание культур на питательной среде. Ответ готов через 5 часов;
  5. универсальность – позволяет выявить генетический набор различных возбудителей, как РНК, так и ДНК-содержащих (гепатит В);
  6. обнаружение скрытой инфекции.

Лабораторное исследование помогает подтвердить диагноз и является неотъемлемой частью комплексного обследования (анализа клинических симптомов, результатов ИФА и биохимии).

Кроме того, ПЦР широко используется в аллергологии, генетике, а также для установления факта отцовства.

Оценка результатов лабораторной диагностики осуществляется врачом путем сравнения полученных данных с нормой.

Ответ анализа (МЕ/мл) Что означает
Не обнаружено Это норма количественного анализа на гепатит С, что свидетельствует о том, что возбудитель не найдет, или его концентрация находится ниже уровня чувствительности методики
До 1,8*10^2 Содержание патогенного агента ниже нормы
До 8*10^5 Низкая вирусная нагрузка, что указывает на благоприятный прогноз и эффективную терапию
Более 8*10^5 Возбудитель обнаружен — большая нагрузка.
Выше 2,4*10^7 Концентрация вируса значительно превышает линейный диапазон

Концентрация патогенного агента определяется амплификатором и сравнивается с диапазоном, границы которого от 1,8*10^2 до 2,4*10^7. Благодаря регулярному обследованию вирусоносителя удается своевременно обнаружить увеличение вирусной нагрузки, что подтверждает активацию возбудителя и обострение болезни.

На результаты ПЦР могут влиять некоторые факторы:

  • некачественный сбор материала;
  • введение гепарина накануне исследования. Он относится к лекарственным средствам, которые уменьшают свертываемость крови, тем самым замедляя действие реактивов ПЦР;
  • несоблюдение правил транспортировки материала;
  • низкий уровень профессионализма врачей-лаборантов;
  • несоблюдение техники проведения анализа.

Норма количественного исследования на определение РНК вируса гепатита С может несколько отличаться в разных лабораториях, однако эти погрешности зачастую не влияют на конечный результат обследования. Не последнюю роль играет вид тест-систем, а именно их чувствительность. Это особенно важно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой, которую некоторые лаборатории могут не обнаружить.

Лабораторная диагностика проводится на этапе обнаружения гепатита С, в процессе лечения, а также после проведенной терапии. Это дает возможность правильно установить субтип возбудителя, подобрать эффективные лекарства и отследить динамику изменений на фоне их приема.

Кроме того, исследование крови позволяет подтвердить выздоровление или хронизацию инфекционно-воспалительного процесса. Обязательным считается анализ перед началом терапии и спустя 3 месяца, что необходимо для оценки динамики и эффективности выбранных противовирусных средств.

Дополнительно врач назначает ПЦР на 4 и 24 неделях терапии. О благоприятном прогнозе можно говорить при снижении вирусной нагрузки к концу третьего месяца. Например, при ее уменьшении с 1 млн МЕ/мл до 100 тысяч. Если концентрация возбудителей остается на прежнем уровне или несколько увеличивается, значит, противовирусные медикаменты неэффективны, и требуется их замена или добавление новых.

В случае медленного снижения уровня патогенных агентов в крови врач может продлить лечение или наоборот, отменить препараты, получив отрицательный ответ ПЦР.

При получении положительного результата лабораторной диагностики следует немедленно обратиться к инфекционисту, поскольку успех в лечении напрямую зависит от стадии, на которой был поставлен диагноз гепатита С и начата терапия. Кроме того, необходимо помнить о риске заражения окружающих, поэтому прием противовирусных препаратов важен не только для инфицированного, но и для его родственников.

источник

Вирус гепатита С способен размножаться в клетках крови и вызывать лимфопролиферативные болезни. Благодаря множественным мутациям иммунная защита организма ослабевает, возникают генотипы и субтипы вируса. При правильном и своевременном определении конкретного вида зависит эффективность противовирусной терапии. Опасность инфицирования состоит в том, что болезнь протекает бессимптомно. Всего в 15 процентах из 100 могут наблюдаться тошнота и рвота, похудением и повышением температуры.

Стандартная норма гепатита С – это размеры от 40 до 60 нм, с большинством липидов, поражение печени в результате острого или хронического течения болезни. Гепатит С, а именно РНК-вирус семейства Togaviridae, крайне стойкий, передается путем переливания крови или использования нестерильных предметов, неправильная гигиена ванных принадлежностей и др. Количественный анализ позволяет исследовать кровь и выявить генетическую структуру инфицируемого вируса.

Чтобы гепатит С и его генотипы были определены, проводят количественный анализ. В зависимости от анализатора могут определить три уровня заболеваемости РНК-вирусом.

Исследование на гепатит С будет точнее при изучении таких показателей:

Обратив внимание на результаты этих показателей и общее состояние организма, выводится результат, показывающий степень зараженности, форму, а также количество клеток гепатита С в крови. Это способствует процессу выздоровления и эффективности противовирусной терапии.

Полиразмерная цепная реакция (ПЦР) дает представление о количестве частиц ДНК во взятых у пациента анализах, при этом правильно определит возбудителя инфекции.

При том, что длительное время симптомы вируса могут маскироваться, человек может не ощущать начала течения болезни. Но при тщательном обследовании в 60–70% случаев выявляется гепатит С, первоочередный анализ, при котором – это ИФА, затем следует ПЦР диагностика. Анализ проводится в определенные периоды, чтобы определить стадию заболевания и назначить соответствующее лечение. Обойтись без этого, не применяя все эти процедуры, можно, прививаясь от гепатита.

Сначала идет качественный анализ, который лишь подтверждает гипотезу насчет инфицирования, а затем количественный, определяющий нагрузку на печень. Идеальным вариантом будет отрицательный результат на гепатит С в генетическом материале пациента.

Качественный и количественный анализ

Различают анализ качественный и количественный.

При обнаружении вируса делают количественный анализ, другими словами, вирусную нагрузку, определяющую концентрацию вируса в крови и тяжесть заболевания.

Вирусная РНК, находящаяся в определенном количестве крови, определяется как норма из расчета 1 мл на 1 сантиметр кубический. После количественного определения вирусной нагрузки можно судить о степени заражения еще неинфицированного окружения. Как только концентрация гепатита С повышается в крови, от окружения нужно изолироваться.

Важно на первых этапах обнаружить степень концентрации гепатита, чтобы определиться с темпами реабилитации. Если норма гепатита С превышена на более, чем 800 тысяч МЕ/мл, она считается завышенной, при увеличении до одного миллиона – критической. Если количественный диапазон менее 400 тысяч МЕ/мл, считается, что заражение окружающих произойдет с меньшей вероятностью. Такая цифра дает понять, что гепатит С в организме присутствует в очень маленьких дозах. Анализ не смог определить количественное значение РНК частиц вируса, поэтому его назначают повторно несколько раз для точности диагноза.

Нынче существует огромное количество самых различных болезней. И не меньшее число методов их определения. Так как агенты инфекций научились с легкостью приживаться в окружающей среде и эволюционировать, то чтобы их диагностировать, применяются новейшие технологии. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это более быстрый и точный метод, что направлен на поиск возбудителя заболевания, путем существенного повышения части ДНК вируса гепатита в образце. О нем часто пишут: ищет иглу в стогу сена, а потом из игл строит стог.

Выделяют качественный и количественный анализ на гепатит. Чтобы определить, находится ли вирус в организме, и тем, у кого нашли антитела к гепатиту С, проводят качественное тестирование. Расшифровка анализа выдает итог: «положительно»; «отрицательно». Негативное значение означает: либо человек здоров, либо агентов в крови еще недостаточно и их невозможно найти. Поэтому стоит провести повторное исследование через некоторое время.

Положительный результат говорит о существовании инфекции. Это практически всегда точное значение. Ошибочные результаты зависят обычно от человеческого фактора (неправильное хранение или несоблюдение правил проведения методики). Когда норма, итог — отрицательный. Перед проведением тестирования особых правил нет, просто берут кровь с вены.

Ежели нашли, проводят количественный анализ (вирусная нагрузка) — он дает числовые значения: сколько РНК вируса гепатита находится на данное время в установленном объеме исследуемого материала. При активном развитии инфекции ее можно обнаружить на 1−2 неделе у зараженного человека. Обычно исследуют также кровь, потому что агенты в ней свободно циркулируют.

Отличием количественного анализа есть то, что не все его проходят. Качественный — определяет наличие, а количественный — помогает с подтверждением заключения «вирус гепатита», прогнозом протекания болезни и определения хода лечения. Насколько эффективна терапия, смотрят по числу РНК до и во время лечения. Также с его помощью определяют назначение доз препаратов.

Читайте также:  Почему анализ на гепатит положительный

Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть:

Также смотрят, какая вирусная нагрузка при гепатите: низкая — терапия проводится успешно; повышенная — лечение не эффективно и его нужно менять.

На разных фазах заболевания исследование проводят, чтобы дать рецензию пользы лечения и планированию срока его дальнейшего проведения.

После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена. «Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему. Таблица 1. Расшифровка количественного анализа РНК вируса

Посредством этого исследования провести диагностику могут каждому для удостоверения факта отсутствия болезни. Но для достоверных фактов нужно четко соблюдать инструкции. ПЦР используют в разных отраслях: криминалистике, для установления отцовства, для диагностирования различных вирусов, для выявления аллергии на лекарства, клонировании генов, мутагенезе, секвенирование ДНК.

Данное исследование назначается врачом в случае положительного ответа при диагностике гепатита С. Как правило, оно назначается одновременно с анализом на определение генотипа вируса гепатита С. О чем говорит расшифровка количественного анализа на гепатит С? В первую очередь, этот анализ говорит о том, насколько пациент инфицирован и, соответственно, заразен. Количественное определение вируса в крови позволяет также определить, насколько эффективна применяемая схема терапии. Врачи назначают его после 4, 12 и 24 недель лечения. Снижение уровня вирусной нагрузки говорит о том, что терапия выбрана правильно. Также анализ назначается после 24 недель от момента завершения терапии.

Исследования показали, что степень вирусной нагрузки не всегда влияет на скорость развития патологических процессов в печени. Случаи носительства вируса свидетельствуют о том, что сам человек может и не болеть гепатитом С, но являться источником заражения других людей. Кроме того, носители в любой момент могут стать и больными. Вирус гепатита С активизируется при снижении иммунитета, например, после перенесенного ОРВИ, гриппа, сильного стресса или переохлаждения.

Заразиться гепатитом С можно:

  • через кровь. Возможно инфицирование при переливании зараженной крови, при проведении операций и манипуляций с кровью, лечении зубов, удалении родинок и бородавок, если были допущены погрешности в стерилизации инструментов;
  • в салонах красоты при выполнении тату, пирсинга, обрезного маникюра и педикюра, косметологической чистки лица и др.;
  • от матери к ребенку во время родов (5%);
  • во время незащищенного секса с инфицированным человеком;
  • во время принятия инъекционных наркотических средств не одноразовыми шприцами;
  • во время оказания первой помощи инфицированному вирусом человеку, если не соблюдать меры безопасности

В отличие от других гепатитов способы передачи гепатита С в основном связаны с кровью. Бытовым путем заразиться гепатитом С невозможно! Ни рукопожатия, ни обычные поцелуи (несексуального характера) и общение, ни пользование предметами бытового назначения не могут передать гепатит С! Не стоит только брать маникюрные и бритвенные принадлежности у человека, который страдает гепатитом С! При оказании первой помощи при травмах пациентам с гепатитом С нужно обязательно надевать перчатки! Вирус погибает при кипячении через пару минут, а при стирке при температуре 60 °С – через тридцать минут. Замораживание не убивает вирус. Убийственно воздействует на вирус УФ-излучение. Через 16 часов вирус при комнатной температуре погибает!

ПЦР – наиболее распространенный и точный метод определения вируса и его количественных возможностей. Метод способен определять вирусы в разных формах и диагностировать малоизвестные заболевания.

Анализ ПЦР (полимеразной цепной реакции) осуществляется путем забора крови и определения в ней вирусной РНК.

В образцы крови добавляются специфические ферменты и определяются в специальный реактор. Там происходит клонирование клеток.

Сначала одна клетка делится на две копии, потом каждая из копий делится еще на две. Таким образом, после синтеза копий появляются сотни клеток ДНК.

ДНК можно сравнить с базой информации о всевозможных возбудителях и выявить инфекцию на ранних сроках заболевания.

  • многие методы диагностики выявляют только наличие вируса путем выделения в крови продуктов жизнедеятельности инфекционных микроорганизмов. Метод ПЦР напрямую указывает на возбудителя инфекции;
  • специфика ПЦР заключается в том, что в исследуемой пробе крови выявляется уникальный фрагмент ДНК. Это исключает шанс на ложный результат;
  • ПЦР способно выявить даже единичные клетки инфекции и диагностировать несколько возбудителей в одной пробе крови.

Помогает обнаружить вирус в крови. При положительном результате следует продолжить обследование и провести количественный анализ, который определит стадию болезни, и предоставит врачам возможность спланировать наиболее благоприятную тактику лечения. При проведении данного анализа допускаются только два заключения:

  • «Обнаружено». Свидетельствует о наличии вируса в крови. Подобный результат считается положительным. В крови уже выявлен РНК вируса, который уже начал развиваться, заражая здоровые клетки и поражая печень.
  • «Не обнаружено». Говорит о том, что в пробе крови отсутствуют РНК гепатита С. Также существуют случаи, что в исследуемом образце концентрация вируса ничтожно мала и не попадает в рамки чувствительности анализа. Стоит заметить, что анализ выявляет инфекцию на 10-й день после инфицирования, что дает возможность определить вирус еще до его существенных внешних проявлений.

Выявляет концентрацию генетического материала вируса в определенном объеме крови. Это не только дает возможность определить тяжесть болезни, но и позволяет увидеть полную клиническую картину заболевания (в том числе при лечении). В результате проведения данного анализа могут быть только 3 заключения:

Результат «Положительный». Результат в числовом показателе отражает вирусную нагрузку. Концентрация вируса определяет количество вируса в 1 миллилитре, что равно 1 кубическому сантиметру крови. Единицы измерения данного анализа МЕ/мл (международные принятые единицы на миллилитр). Если концентрация вирусных частиц меньше 8х10 000 МЕ/мл, то лечение эффективно, если же наоборот, то стоит изменить тактику лечения.

Если вирусная нагрузка в течение первых недель терапии падает до 60 %, то эффективность лечения является высокой. Низкий уровень равен до 400 000 МЕ/мл, а высокий от 1 000 000 МЕ/мл. Вирусная нагрузка определяет степень заболевания и возможность его передачи. При высоком уровне концентрации вирусных клеток в крови риск передачи заболевания вертикальным или же половым путем достаточно велик.

  • Результат «Недействительный». Этот результат означает, что при качественном анализе вирус в организме был обнаружен, но количественный анализ не смог определить его концентрацию в крови. Такое происходит, когда количество частиц РНК вируса в крови ниже диапазона определения.
  • Результат «Не обнаружено». Расшифровка анализа означает отсутствие РНК клеток гепатита С в образце крови.

Количественный анализ ПРЦ проводится на всех стадиях болезни. Для выявления оптимального лечения анализы проводятся на сроках: (4-я, 12-я, 16-я, и 24-я неделя). Если по результатам наблюдается снижение вирусной нагрузки, то лечение можно считать эффективным. После завершения терапии количественный анализ проводится для обнаружения рецидива, то есть, обнаружения вируса после снижения его активности до минимума.

Серологическая диагностика гепатита С основана на обнаружении в образцах плазмы крови человека уникальных маркеров вируса гепатита С: антител к антигенам ВГС, относящихся к иммуноглобулинам классов G и M (анти-ВГС-IgG и анти-ВГС-IgM), и нуклеиновой кислоты возбудителя (РНК ВГС).

Принцип метода основан на обнаружении в исследуемом материале специфичных фрагментов ДНК (РНК) различных биологических объектов, их избирательном синтезе и дальнейшей детекции продуктов реакции амплификации этих фрагментов.

Количественные модификации ПЦР дают представление о ВН, имеющей решающее значение для прогноза и контроля терапии вирусного гепатита С.

Обычно РНК ВГС может определяться в крови уже в первую неделю после заражения, до появления анти-ВГС (анти-HCV), которые могут не выявляться в течение первых 8–12 недель. Оба маркера ВГС-инфекции могут обнаруживаться в крови в различных сочетаниях, что требует правильной клинической интерпретации.

Поэтому для формирования окончательного диагноза целесообразно, особенно при выявлении только одного из двух маркеров ВГС, проводить повторное тестирование образца крови на анти-ВГС и РНК ВГС.

В ходе исследования выполняется детекция и подсчет числа копий РНК ВГС методом ПЦР в реальном времени.

В клинической практике наиболее совершенным методом ПЦР-диагностики является REAL-TIME ПЦР, которая исключает загрязнение образцов и дает заключение о наличии и количестве РНК ВГС через две недели после предполагаемого инфицирования. Эта методика, кроме прочего, определяет генотип вируса с вирусной нагрузкой за одно исследование. Клиническая специфичность теста составляет 100%. Стандартный интервал значений теста от 15 до 100000000 МЕ/мл. Выявляются генотипы вируса 1-6 (1, 2, 3, 4, 5, 6). Порог положительного теста, когда может быть обнаружена РНК вируса, составляет 15 МЕ/мл. Основным преимуществом метода ПЦР является очень высокая чувствительность анализа – до 1 копии геномной ДНК возбудителя инфекции в исследуемой пробе в nested-модификации ПЦР.

ПЦР – современный, высокочувствительный метод. Но его достоинство – высокая чувствительность — является одновременно и его уязвимостью, т. е. приводит к ложным результатам даже при выполнении анализа высококвалифицированными специалистами в хорошо оснащенных лабораториях. Результаты исследований в разных лабораториях часто не совпадают, что указывает на необходимость стандартизации диагностических систем для ПЦР-диагностики и повышенного внимания к проведению данного вида исследований. Высокая стоимость, длительность анализа, сложность метода и несовпадение результатов, полученных в разных лабораториях, ограничивают использование ПЦР в широкой практике.

Результаты исследования выдаются на бланке с таблицей, в которой указан выявленный уровень РНК вируса (количество копий или концентрация в МЕ/мл). Для выражения величины МЕ/мл могут быть использованы и другие математические символы, например, 1. 9*10^5 (1. 9 на 10 в 5 степени).

Основными показаниями к определению вирусной нагрузки при вирусном гепатите С являются:

  • лабораторно подтвержденное качественное наличие РНК возбудителя в сыворотке крови;
  • наличие у лечащего врача вопросов в выборе схемы применения противовирусных препаратов;
  • необходимость в точной оценке эффективности лечения.

Исследование не требует специальной подготовки пациента.

В норме у здорового человека отсутствует РНК возбудителя, то есть ВН равна нулю. ВН выражается в Международных единицах на мл. Выделяют большую ВН (>400 000 МЕ/мл) и маленькую ВН ( 100000000 МЕ/мл

Анализ резко положительный. РНК вируса гепатита С выявлена в концентрации, выходящей за пределы референсного диапазона

Для мониторинга эффективности противовирусной терапии следует использовать ПЦР-анализ в режиме реального времени с минимальным уровнем определения 15 МЕ/мл. Для разграничения низкой ВН от высокой используют уровень вирусной РНК 500 000 МЕ/мл.

Контроль уровня вирусной нагрузки проводится как при остром, так и при хроническом гепатите С. Уровень вирусной нагрузки фиксируют во время лечения, по его завершении и через 24 недели после проведенного лечения.

У беременных этот показатель фиксируют с диагностической целью, так как противовирусная терапия при беременности не проводится.

Данные об уровне вирусной нагрузки используются для выбора и контроля противовирусной терапии, но ни в коем случае не дают представление об исходе болезни, особенно в случае хронических форм ВГС с нормальной функцией печени.

При диспансерном наблюдении пациентам один раз в году проводится качественное определение РНК ВГС в крови. Если качественный результат положительный, то далее проводится количественный анализ с определением вирусной нагрузки.

На сегодняшний день для диагностики ВГС используется множество различных методов, среди них количественный подсчет уровня вирусной нагрузки является ключевым для успешного лечения пациента. Достоинствами этого метода являются высокая надежность, чувствительность и клиническая специфичность. Кроме того, уровень вирусной нагрузки является очень четким индикатором эффективности лечения противовирусными препаратами как в монотерапии, так и в комбинациях.

Но на основании уровня вирусной нагрузки ни в коем случае нельзя судить о течении и исходе болезни. Поэтому данный показатель информативен для лечащего врача лишь в сочетании с другими данными — результатами фибросканирования и биопсии с микроскопией клеток печени. Таким образом, подсчет уровня вирусной нагрузки ни в коем случае не заменяет, а лишь дополняет существующие методы диагностики, используемые в клинической практике.

Уровень вирусной нагрузки — наиболее надежный показатель, позволяющий достоверно установить наличие вируса у пациента и провести контроль терапии.

источник