Меню Рубрики

Методы качественного и количественного анализа гормонов

Химические методы анализа веществ делятся на качественные и количественные.

Качественный анализпозволяет установить, из каких ионов, атомов и молекул состоит анализируемое вещество.

Количественный анализпозволяет установить, сколько процентов или грамм ионов, атомов или молекул содержится в анализируемом веществе.

Количественные и качественные методы анализа делятся на следующие:

химические. В основе методов лежат химические реакции, которые сопровождаются каким-либо внешним эффектом;

физические. Это методы, при помощи которых можно определить состав вещества, не прибегая к химическим реакциям, они основаны на изучении электрических, магнитных, тепловых и др. физических свойств веществ;

физико-химически. Основаны на изучении физических явлений, которые происходят при химических реакциях.

Качественный химический анализ – это определение (открытие) химических элементов, ионов, атомов, атомных групп, молекул в анализируемом веществе.

Целью качественного анализа является обнаружение элементов или ионов, входящих в состав вещества. Для решения этой задачи аналитическая химия использует химические реакции и физические свойства веществ. Из множества химических реакций для обнаружения элементов или ионов используются лишь те реакции, которые сопровождаются внешним эффектом (выделением газа, образованием осадка или окрашенного соединения). Такие реакции называются аналитическими. Реакции с внешними эффектами, характерными только для одного иона или соединения, называются специфическими. Как правило, химические реакции не специфичны и, в лучшем случае, селективны, т. е. дают внешний эффект, характерный для нескольких ионов, соединений или элементов.

Требования к реакциям, используемым в качественном анализе:

– должны протекать быстро и необратимо;

– должны сопровождаться каким-либо внешним эффектом (появление или исчезновение окрашивания, выделение или растворение осадка, выделение газа и т.п.);

– должны обладать специфичностью и отличаться высокой чувствительностью.

Специфические реакции – специальные реакции, позволяющие обнаруживать данный элемент даже при небольших его концентрациях в присутствии большого числа других элементов.

Чувствительностьвыражается наименьшим количеством обнаруживаемого элемента или же наименьшей концентрацией раствора, при которой данный элемент может быть однозначно обнаружен без предварительного обогащения. Чем меньше количество вещества можно обнаружить в 1 капле раствора, тем чувствительнее реакция.

Методы качественного анализа.

1. По виду идентифицируемых частиц различают элементный, молекулярный, функциональный, изотопный и фазовый анализы.

2. По количеству вещества, взятого на анализ, различают следующие виды:

макро- (количество вещества, взятого на анализ >100 мг, объем раствора >5 мл);

полумикро-(количество вещества, взятого на анализ 100–10 мг, объем раствора 5–0,5 мл);

микро-(количество вещества, взятого на анализ 10–0,1 мг, объем раствора 0,5–0,05 мл;

ультрамикрометоды (количество вещества, взятого на анализ

Дата добавления: 2015-01-12 ; просмотров: 15 | Нарушение авторских прав

источник

Классификация гормонов, их химическое строение. Получение, применение механизм действия гормонов. Влияние гормонов на физиологические процессы в организме. Анализ строения молекулы прогестерона. Методы количественного и качественного анализа гормонов.

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Взаимодействие гормонов с 7-ТМС-R — интегральными мембранными белками с 7 трансмембранными спиральными сегментами. Сигнальные G-белки как универсальные посредники при передаче гормональных сигналов от рецепторов клеточной мембраны к эффекторным белкам.

презентация [254,5 K], добавлен 27.11.2013

Гормональные препараты в продуктах питания. Инструкция по определению остаточных количеств гормонов в продуктах животноводства. Химические методы обнаружения и идентификации гормонов. Основные белковые и пептидные гормоны. Тривиальные названия стероидов.

реферат [509,9 K], добавлен 22.10.2011

Исходное сырье для получения стероидных гормонов, основные требования к их качеству и содержанию. Главные микробиологические превращения стероидов: введение гидроксильной группы, дегидрогенизация, микробиологическое восстановление, гидролиз эфиров.

контрольная работа [29,3 K], добавлен 19.02.2014

Понятие о гормонах, механизм их действия и классификация по химической природе и по выполняемым функциям. Гормональная регуляция обмена веществ и гипоталамо-гипофизарная система. Взаимопревращение гликоген-фосфорилазы. Гормоны периферических желез.

презентация [5,9 M], добавлен 29.10.2014

Определение белков и их составных частей – аминокислот. Структура и функции белков в организме. Роль в обеспечении воспроизводства основных структурных элементов органов и тканей, а также образовании таких веществ, как, например, ферментов и гормонов.

курсовая работа [735,6 K], добавлен 16.12.2014

Класс органических соединений, содержащих карбоксильные и аминогруппы, обладают свойствами и кислот, и оснований. Участвуют в обмене азотистых веществ всех организмов (исходное соединение при биосинтезе гормонов, витаминов, алкалоидов).

доклад [20,6 K], добавлен 06.10.2006

Понятие и классификация липидов как сборной группы органических соединений, не имеющих единой химической характеристики, их типы и сравнительное описание: простые и сложные. Фосфолипиды как главные компоненты биологических мембран. Назначение гормонов.

презентация [2,8 M], добавлен 04.02.2017

Амфетамин, эфедрин, катехоламины — психоактивные вещества группы фенилэтиламинов — стимуляторы центральной нервной системы, аналоги гормонов адреналина и норадреналина: характеристика, история синтеза, физические свойства и биологическое действие.

курсовая работа [1,2 M], добавлен 20.04.2012

Воздействие витаминов на обмен веществ через систему ферментов и гормонов. Алифатические, алициклические, ароматические и гетероциклические витамины. Система антиоксидантной защиты организма. Анализ пищевого рациона учащихся средней образовательной школы.

курсовая работа [760,4 K], добавлен 22.01.2013

Понятие количественного и качественного состава в аналитической химии. Влияние количества вещества на род анализа. Химические, физические, физико-химические, биологические методы определения его состава. Методы и основные этапы химического анализа.

презентация [59,0 K], добавлен 01.09.2016

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.

источник

Министерство образования Республики Беларусь

МОГИЛЕВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ПРОДОВОЛЬСТВИЯ

Кафедра химической технологии высокомолекулярных соединений

МЕТОДЫ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

Методические указания по курсу «Органическая химия»
для студентов всех технологических специальностей

Методические указания рассмотрены и утверждены

на заседании кафедры ХТВМС.

протокол № «___» от «___»___________2003 г.

д.х.н., профессор ___________________ Роганов Г. Н.

Методические указания рекомендованы к утверждению секцией выпускающих кафедр.

Протокол от ___________________ 2003 г. № _____

к.т.н., доцент ______________________ Шингарева Т.И.

Составитель: доцент О.М.Баранов

Рецензент доцент Жогальский А.Н.

© Могилевский государственный университет продовольствия

1. ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ.. 5

1.1 Основы метода. Качественный и количественный анализ в ТСХ. 5

1.2 Сорбенты и элюенты в ТСХ.. 7

1.3 Техника анализа методом ТСХ.. 8

1.4 Детектирование исследуемых соединений на хроматограмме. 9

2. ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ. 10

2.1 Основы количественного и качественного анализа в ГЖХ. 10

2.2 Сорбенты и неподвижные жидкие фазы в ГЖХ. 12

2.3 Принципиальная схема и принцип работы газового хроматографа. 13

4. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.. 16

Хроматографией называют группу аналитических и препаративных методов, основанных на том, что компоненты смеси в разной степени удерживаются поверхностью специально подобранного тела, называемого сорбентом (неподвижная фаза). Разделяемая смесь при этом продвигается по сорбенту, увлекаемая подвижной фазой (элюентом).

Существует несколько способов классификации хроматографических методик в зависимости от того, какой признак положен в его основу. Так, в зависимости от агрегатного состояния элюента все хроматографические методики сводят к двум разновидностям: жидкостная и газовая. Тип сорбента определяет отнесение методики к адсорбционной (удерживание анализируемых молекул твердой поверхностью пористого тела) или распределительной (распределение молекул анализируемого соединения между подвижной фазой и нерастворимой в ней (или не летучей) жидкостью, закрепленной на пористом инертном носителе). Сорбентами могут быть также ионообменные смолы (иониты), способные обменивать содержащиеся в них катионы или анионы на соответствующие ионы в элюенте. В этом случае говорят о процессе хемосорбции, а хроматографическая методика получила название ионообменной хроматографии.

За последние годы в лабораторную практику интенсивно внедряются методы молекулярно-ситовой хроматографии, в которой сорбентами являются материалы с заданной пористостью, фильтрующие только молекулы определенных размеров. Такие сорбенты готовят из гелей пространственных («сшитых») полимеров, поэтому такую разновидность хроматографии называют также гель-проникающей, или гель-фильтрационной.

По признаку аппаратурного оформления метода хроматографию делят на колоночную и плоскостную; в последнем случае разделение происходит в тонком слое сорбента (бумажная и тонкослойная хроматографии). Колоночную хроматографию используют преимущественно в препаративных целях.

Вместе с тем, хроматографические методики используют не только для чисто аналитических или препаративных целей, но и для определения некоторых физико-химических констант соединений (например, удельной поверхности тела – обращенная хроматография).

В настоящее время хроматография во всех ее разновидностях получила широкое развитие и признание; она является эффективным методом аналитического контроля в научных и заводских лабораториях, а также непосредственно в условиях промышленного производства.

ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

Важным методом, позволяющим разделить и идентифицировать вещества в микро-количествах, является хроматография в тонком слое, или тонкослойная хроматография (ТСХ). Этот метод был открыт в СССР Н.А. Измайловым и Г.С. Шрайбером в 1938 году на примере разделения смеси растительных экстрактов непосредственно на покровных стеклах микроскопов, на которые предварительно наносили тонкий слой неорганического сорбента. В 1944 году Р.Кондсен и др. разработали метод хроматографии на бумаге, который вскоре получил чрезвычайно широкое распространение, в особенности в биохимических исследованиях и в анализе красителей. В этом методе в качестве сорбента используют специально приготовленные сорта фильтровальной бумаги. В отличии от ТСХ бумажная хроматография относится не к адсорбционной, а к распределительной хроматографии, так как в ней используется различие в распределении гидрофильных веществ между подвижной водной фазой и водой, удерживаемой целлюлозным носителем. В современной же ТСХ применяются специальные методы и специальная, хоть и достаточно простая, аппаратура.

Основы метода. Качественный и количественный анализ в ТСХ.

В ТСХ используют стеклянные, металлические или пластмассовые пластинки, покрытые тонким слоем сорбента, обычно толщиной 100-300 мкм. Образцы, как правило 2-10 мкг, наносят в виде 0,1-1%-ных растворов на слой вблизи основания пластинки (стартовая линия). Пластинку помещают в камеру (кювету), содержащую небольшое количество соответствующей жидкой подвижной фазы (элюента), которая перемещается по слою под действием капиллярных сил. При этом компоненты образца перемещаются через слой с различными скоростями, зависящими от адсорбционных коэффициентов компонентов смеси. Проявление заканчивают, удаляя пластинку из камеры и испаряя подвижную фазу.

Количественной мерой скорости переноса вещества при использовании определенного сорбента и элюента является величина Rf (oт английского retention factor) – фактор задержки. Величину Rf рассчитывают как частное от деления расстояния от центра пятна до линии старта (а) на величину пробега растворителя от стартовой линии (в) (рисунок 1):

В соответствии с определением, Rf всех адсорбированных компонентов смеси всегда меньше 1.00. Иногда вместо Rf используют величину hRf , причем

Величина Rf, зависит от природы сорбента и элюента. Для идентификации конкретных соединений смеси удобно использовать т.н. «свидетель», в качестве которого берут один из предполагаемых компонентов исследуемой смеси. Тогда совпадение Rf «свидетеля» и одного из компонентов может говорить об их идентичности. Однако для большей достоверности этого заключения необходимо провести эксперименты, взяв различные сорбенты и элюенты.

Количественный анализ методом ТСХ выполняется посредством хроматографирования стандартных растворов исследуемых компонентов вместе с исследуемым образцом. Количество вещества в пятне связывают с площадью и интенсивностью выявленного пятна; стандарты и образцы можно сравнить визуально, но это недостаточно точный и объективный способ. Лучшие результаты дают методы спектроскопии, денситометрии и т.п.

Материал пятна можно вымыть из неподвижной фазы и использовать для дальнейшего исследования. Его можно количественно измерить спектрофотометрически. Неизвестные вещества идентифицируют методом ИК спектроскопии или масс-спектроскопии или подвергают дальнейшему разделению с помощью газовой хроматографии (см. раздел 2). Для этих целей величины образцов могут быть увеличины путем использования слоев большой толщины (до 2 мм), нанесением образца в виде полосы и применением более широких пластинок.

а – расстояние от стартовой до фронтальной линии; b – расстояние от стартовой линии до центра пятна исследуемого соединения; c – расстояние от стартовой линии до центра пятна «свидетеля».

Рисунок 1. – Рассчет коэффициента задержки (Rf) соединения и идентификации соединения.

Сорбенты и элюенты в ТСХ

Правильный подбор неподвижной и подвижной фаз часто оказывается решающим в задаче хроматографического разделения компонентов исследуемой смеси. Другие факторы (материал подложки, температура, конструкция аппарата и т.п.) являются менее существенными. В ТСХ в качестве адсорбентов используются тонкоизмельченные пористые материалы с удельной поверхностью обычно больше 50 м 2 ×г -1 . Наибольшее применение в лабораторной практике нашли неподвижные фазы, по химическому составу представляющие собой оксид алюминия, диатомитовые земли, двуокись кремния (силикагель), оксид или силикат магния, а также активированный уголь, цеолиты («молекулярные сита»), высокополимеры и ионообменные смолы. Важнейшее свойство адсорбента – его активность по отношению к исследуемым соединениям. Активные адсорбенты, то есть адсорбенты с относительно высокой концентрацией высокоактивных центров, предпочтительны для разделения слабо адсорбируемых химически инертных соединений, таких, как углеводороды, тогда как инертные адсорбенты предпочтительны для разделения нестойких или сильно адсорбируемых соединений. Но даже один и тот же адсорбент, в зависимости от условий его приготовления, может проявлять сильно различающуюся активность. Так, термическая обработка оксида алюминия позволяет получить адсорбент с пятью степенями активности, что связано с различным содержанием в нем адсорбированной воды: увеличение её содержания приводит к падению активности адсорбента.

Читайте также:  Минск сделать анализы на гормоны

Активность подвижной жидкой фазы отражена в его т.н. «элюирующей силе». Расположение растворителей в порядке возрастания элюирующей силы дает элюотропные ряды по отношению к определённым типам адсорбентам. Для всех полярных адсорбентов (а таких большинство) наблюдается одинаковый порядок изменения элюирующей силы:

Дата добавления: 2018-02-18 ; просмотров: 857 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник

Качественный и количественный анализ — два фундаментальных метода сбора и интерпретации данных в исследованиях. Эти методы могут использоваться независимо или одновременно, поскольку все они имеют одни и те же цели. У них есть некоторые ошибки, и поэтому одновременное использование их может компенсировать ошибки, которые каждый из них имеет, а затем дает качественные результаты.

Более того, в количественном и качественном анализе имеются совпадения. В этой статье раскрываются ключевые различия между этими двумя методами анализа исследований.

Количественный анализ часто связан с численным анализом, когда данные собираются, классифицируются, а затем вычисляются для определенных результатов с использованием набора статистических методов. Данные выбираются случайным образом в больших образцах и затем анализируются. Преимущество количественного анализа результатов может быть применено в общей популяции с использованием моделей исследований, разработанных в образце. Это является недостатком качественного анализа данных из-за ограниченного обобщения результатов.

Количественный анализ носит более объективный характер. Он стремится понять возникновение событий, а затем описать их с использованием статистических методов. Однако более ясность может быть получена путем одновременного использования качественных и количественных методов. Количественный анализ обычно оставляет случайные и скудные события в результатах исследований, тогда как качественный анализ их рассматривает.

Количественный анализ обычно касается измеряемых величин, таких как вес, длина, температура, скорость, ширина и многое другое. Данные могут быть выражены в табличной форме или в любом графическом представлении с использованием графиков или диаграмм. Количественные данные можно классифицировать как непрерывные или дискретные, и их часто получают с помощью обследований, наблюдений, экспериментов или интервью.

Однако в количественном анализе имеются ограничения. Например, может быть сложно выявить относительно новые концепции, используя количественный анализ, и именно там, где качественный анализ входит в уравнение, чтобы выяснить «почему» возникает определенное явление. Вот почему методы часто используются одновременно.

Качественный анализ связан с анализом данных, которые не могут быть количественно определены. Этот тип данных касается понимания и понимания свойств и атрибутов объектов (участников). Качественный анализ может получить более глубокое понимание «почему» происходит определенное явление. Анализ может использоваться в сочетании с количественным анализом или предшествующим ему.

В отличие от количественного анализа, который ограничен определенными правилами или цифрами классификации, анализ качественных данных может быть широким и многогранным. И это субъективно, описательно, нестатистическое и исследовательское по своей природе.

Поскольку качественный анализ стремится получить более глубокое понимание, исследователь должен быть хорошо округлен с учетом каких-либо физических свойств или атрибутов, на которых основано исследование. Часто исследователь может иметь отношения с участниками, где раскрываются их характеристики. В количественном анализе характеристики объектов часто не раскрываются. Типичные проанализированные данные качественно включают цвет, пол, национальность, вкус, внешний вид и многое другое, пока данные не могут быть вычислены. Такие данные получены с помощью интервью или наблюдений.

В качественном анализе есть ограничения. Например, он не может быть использован для обобщения населения. Небольшие образцы используются в неструктурированном подходе, и они не являются репрезентативными для общей популяции, поэтому этот метод не может быть использован для обобщения всей популяции. Вот где количественный анализ в фактор.

Анализ качественных данных основан на классификации объектов (участников) в соответствии со свойствами и атрибутами, тогда как количественный анализ основан на классификации данных на основе вычислимых значений. Качественный анализ субъективен, тогда как количественный является объективным.

В качественном анализе данные собираются небольшими нерепрезентативными образцами неструктурированным способом. Типичные собранные данные включают цвет, расу, религию, национальность и многое другое. В количественном анализе, с другой стороны, данные собираются в больших репрезентативных выборках, которые могут обобщать всю популяцию.

Методика качественного анализа является исследовательской, где анализ стремится получить более глубокое понимание того, почему происходит определенное явление. Методология количественного анализа может быть убедительна, например, сколько или сколько раз происходит определенное явление, а не почему это происходит.

В качественном анализе результаты исследований специфичны для изучаемых объектов и не применимы к общей популяции, тогда как в количественном анализе результаты могут быть применимы для населения в целом.

В качественном анализе исследователи часто задают открытые вопросы, проводят собеседования и наблюдения, тогда как в количественном анализе исследователи проводят измерения, проводят опросы, эксперименты и наблюдения.

Качественный анализ направлен на более глубокое понимание социальных взаимодействий, в то время как количественный анализ направлен на проверку гипотез и даже дает будущие прогнозы

источник

Выделение и качественный анализ гормонов производят многими методами.

Их подразделяют на четыре основные группы: биологические, химические, иммунологические и методы сатур анионного анализа. Классификация методов определения гормонов в значительной мере условна, так как многие из них являются комбинированными.

Биологические методы определения гормонов базируются на учете специфичности их влияния при тестировании на лабораторных животных или in vitro. Эффект действия гормонов оценивается по изменению массы органов, их гистологического строения, физиологических, биохимических и других показателей. Например, активность андрогенов определяют по изменениям массы гребня у кастрированных петухов, эстрогенов — по изменениям вагинального эпителия у овариоэктомированных мышей, прогестерона — по сохранению беременности у крольчих и т. п. Распространенным является метод суммарного определения действия гонадотропинов (ФСГ и ЛГ) по увеличению массы матки у неполовозрелых мышей. Применяют и другие методы, в которых учитывается увеличение массы яичников у неполовозрелых крыс, овуляция у крольчих и т. д. Определение гонадотропного гормона в СЖК осуществляют на самцах лягушек. Общую активность гонадотропина выражают в мышиных или крысиных единицах по минимальной дозе, которая вызывает на 50% увеличение матки инфантильных мышей или крыс, и сравнивают с международным стандартом. Согласно международному стандарту фоллитропную активность СЖК определяют по увеличению массы яичников у инфантильных крыс, а лютропную — по уменьшению количества аскорбиновой кислоты в яичниках.

Для учета эффекта действия тиротропина (ТТГ) применяют гравиметрический метод, основанный на определении изменения массы щитовидной железы. Более чувствительным является гистологический метод оценки по изменениям высоты клеток тиреоидного эпителия, размеров фолликулов и состояния коллоида. Биологическую активность пролактина определяют по увеличению зобной железы голубя и т. д.

Методы определения гормонов in vitro зачастую более чувствительны и экономичнее других биологических методов. Поэтому, в последние годы тестирование активности гормонов, особенно гормонов гипофиза и гипоталамуса, производится in vitro в биологических средах (тканях, гомогенатах, клеточных суспензиях), с последующим определением их содержания флюориметрическим или радиоиммунологическим методами.

Химические и физико-химические методы количественного анализа гормонов в биологических жидкостях и тканях получили широкое распространение. Большинство химических методов определения гормонов основано на использовании реакций, с помощью которых выявляют и учитывают особенности их химической структуры. Очень часто определение содержания гормонов возможно лишь после их предварительного извлечения и очистки, которые достигаются экстракцией, ультрацентрифугированием, хроматографией, осаждением белков и т. д. Для разделения смеси белковых гормонов часто применяют электрофорез в полиакриламидном геле. Под действием электрического поля заряженные молекулы гормонов перемещаются в геле. При этом поры геля выполняют функцию «молекулярного сита».

Эффективным методом очистки белковых и пептидных гормонов является ионно-обменная хроматография с применением специальных смол и других компонентов. Для разделения катехоламинов и стероидных гормонов применяют адсорбционную (молекулярную) колоночную хроматографию. Чаще всего в различных методах хроматографии используют растворители с определенной полярностью, которые под действием капиллярных сил обеспечивают перемещение в слое сорбента исследуемых гормонов. В последние годы для количественного анализа стероидных гормонов применяют газожидкостную хроматографию. Через колонку газового хроматографа, заполненную гранулами адсорбента с растворителем, с помощью газа-носителя (аргон, водород, азот) продувают нагретую в испарительной камере исследуемую смесь. Выход гормонов из колонки в потоке газа регистрируется детектором. Для газо-жидкостной хроматохрафии требуется предварительная очистка экстрактов стероидов и их разделение с помощью тонкослойной и других видов хроматографии.

Значительная часть химических методов основана на применении колориметрического и флюоресцентного анализов, которые особенно широко используются для определения содержания стероидов. Поглощение света растворами исследуемых гормонов находится в прямой зависимости от их концентрации. Чувствительность флюориметрических методов определения гормонов в 10—20 раз выше чувствительности спектрофотометрии. В последние годы химические и биологические методы определения гормонов частично вытесняются радиоиммунологическими методами, которые оказались менее громоздкими, более чувствительными и специфичными.

Иммунологические методы основаны на способности белковых и полипептидных гормонов индуцировать выработку антител при гетероиммунизации. Для иммунологического тестирования гормонов применяют реакции связывания комплемента, преципитации и торможения пассивной гемагглютинации. В связи с наличием иммунологической специфичности белковых гормонов иммунологические методы, разработанные для гормонов одного вида животных, как правило, не могут использоваться для определения тех же гормонов у других видов животных.

В основе методов сатурационного или радиолигандного анализа лежит конкурентное взаимодействие молекул гормона и специфических антител или другого связывающего белка. При введении в систему для тестирования меченого лиганда — гормона, маркированного радиоактивным изотопом или конъюгированного с каким-либо ферментом, происходит насыщение (сатурация) связывающего белка. При последующем добавлении немеченного гормона (антигена) часть молекул лиганда вытесняется из комплекса с белком. Содержание исследуемого гормона методами сатурационного анализа определяют по калибровочной кривой для различных концентраций стандарта. В методах сатурационного анализа используют специфические белки, обладающие высоким сродством к соответствующим гормонам. С учетом применения специфических белков (антитела, рецепторные белки тканей, транспортные белки плазмы крови) различают следующие методы: радиоиммунологические (ферментноиммунологические), радиолигандно-рецепторные (радиорецепторные) и конкурентного связывания с белками плазмы.

Чувствительность иммунологических методов при применении специфических антител к гормону, меченных радиоактивным изотопом, значительно увеличивается. В связи с этим их выделяют в отдельную группу и называют радиоиммунологическими. Эти методы основаны на свойствах немеченного антигена вытеснять меченный антиген из соответствующего комплекса антиген — антитело. В последние годы, в основном в медицине, радиоиммунологические методы широко применяются для определения инсулина, глюкагона, соматотропина, гонадотропинов (ФСГ, ЛГ) и других гормонов.

Для анализа белковых гормонов перспективен ферментноиммунологический метод. В сравнении с радиоиммунологическим он имеет преимущества, так как в данном случае не требуются радиоактивные изотопы, а гормоны, меченные ферментами, имеют более высокую устойчивость при хранении. Применяемые меченные йодом-125 гормоны можно использовать только в течение 20 дней, с условием их хранения при температуре —20° С, а меченные ферментами гормоны при стерильном приготовлении не теряют активности в течение 6 мес. Ферментоиммунологический метод в настоящее время успешно применяется для определения гипофизарных гормонов в крови молодняка крупного рогатого скота.

В последние годы получили применение радиорецепторные методы, которые дают возможность определить содержание активной части гормонов, в то время как радиоиммунологическими методами определяют только их общее содержание. Клеточные рецепторы приготовляют из матки кроликов, крыс или овец — для определения эстрогенов, из молочной железы кроликов — для определения ЛТГ и СТГ и т. д. Радиорецепторные методы разработаны и используются для определения эстрогенов, АКТГ, пролактина и других гормонов.

Методы конкурентного связывания с белками плазмы базируются на избирательном сродстве их с соответствующими гормонами и широко применяются для определения количества стероидных и тиреоидных гормонов.

В настоящее время разработаны и широко применяются высокоэффективные радиобиологические методы определения ТТГ-активности, основанные на измерении накопления и выделения радиоактивного йода в щитовидной железе после введения ТТГ и измерении радиоактивности крови и ее сыворотки. Концентрация ТТГ определяется в нанограммах в I мл сыворотки (нг/мл). Для функциональной характеристики щитовидной железы определяется количество свободного тироксина и трийодтиронина в сыворотке крови с помощью радиоиммунологических и других методов. Однако в связи с их трудоемкостью часто используют метод определения в сыворотке (плазме) связанного с белком йода (СБИ), так как основная часть СБИ сыворотки крови принадлежит тиреоидным гормонам. Для определения активности щитовидной железы применяют также пробы поглощения индикаторных доз радиоактивного йода.

Читайте также:  Можно кушать перед анализами на гормоны

Важным условием оценки методов определения гормонов является адекватность их показателей с фактическим содержанием гормонов в организме. Определение содержания белковых, полипептидных гормонов и производных аминокислот в гипофизе, щитовидной и других железах должно осуществляться с учетом концентрации гормонов в инкретирующих органах и в крови, так как синтез, депонирование и инкреция упомянутых гормонов регулируются разными механизмами. Синтезирующиеся в надпочечниках и гонадах стероидные гормоны не депонируются, содержание этих гормонов в железах адекватно отражает их биосинтез и инкрецию. Методы прямого определения гормонообразования в соответствующих органах имеют преимущества, однако для исследований чаще применяют более доступные косвенные методы определения гормонов и их метаболитов в крови и моче.

Для более полной характеристики функциональной деятельности эндокринных желез, некоторые авторы рекомендуют применять комплексную оценку с учетом их функциональной активности, состояния механизмов регуляции и интенсивности инактивации и выделения гормонов из организма. Гормональный статус у сельскохозяйственных животных необходимо определять с учетом их вида, породы, типов конституции, продуктивности, возраста, пола, условий кормления и содержания. Это важно для более эффективного применения гормонов и их аналогов в различных областях животноводства и ветеринарии.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

источник

Исследование гормонального статуса имеет большое значение в клинике для:

  • диагностики эндокринных расстройств;
  • оценки функционального состояния организма при другой патологии;
  • изучение эффективности лечебных мероприятий.

Определение гормонального спектра в методическом отношении — наиболее сложный раздел клинической биохимии, которым занимаются специальные лаборатории или отделения крупных лечебных учреждений. В рядовых КДЛ выполняют лишь некоторые наиболее простые химические методы.

При подготовке к данным исследованиям следует учитывать два важных момента: необходимость соблюдения стандартных условий взятия биологического материала и предотвращения деградации гормонов в образцах.

Определение гормонов производят в плазме или сыворотке крови, моче, желчи, слюне, ликворе, биоптатах тканей.

Если не преследуется специальная цель изучить суточный ритм гормональной активности, взятие периферической венозной крови у пациентов производят в условиях физиологического покоя (что особенно важно при исследовании катехоламинов, а также гормонов гипофиза и надпочечников), утром, натощак в одно и то же время в предварительно охлажденные стеклянные пробирки, которые немедленно помещают в ледяную баню. Структура стероидных гормонов устойчивее пептидных, поэтому кровь для их определения можно брать без охлаждения.

При получении сыворотки возникает опасность того, что при отстаивании и центрифугировании крови из форменных элементов интенсивно освобождаются протеолитические ферменты, разрушающие определяемое вещество. Поэтому для исследования содержания пептидных и белковых гормонов предпочтительнее готовить плазму.

При получении плазмы в клинике обычно используют гепарин, но он блокирует связывание антигена с антителом, а значит, не позволяет использовать радиоиммунохимичесие методы, или цитрат, который существенно меняет кислотность среды. Учитывая это, лучше использовать натриевую соль ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислоты) в конечной концентрации 20 мкмоль/л. Препарат в указанной концентрации не влияет на образование комплекса антиген-антитело, и в то же время достаточно эффективно ингибирует протеолиз и активность фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов.

С другой стороны, некоторые исследователи предпочитают сыворотку, так как, например, стероиды экстрагируются из нее легче и полнее, чем из плазмы. Кроме того, плазма нередко образует эмульсию с органическими растворителями во время экстракции гормонов, а также после процедуры замораживания-оттаивания в ней появляются хлопья фибрина, мешающие определению.

Воэможен синтез биологически активных веществ в пробирке, поэтому при взятии крови в таких случаях используют определенные ингибиторы. Например, для предотвращения синтеза простагландинов в пробирку вносят 10 мкл индометацина в конечной концентрации 50 мкмоль/л и гепарина 10 ЕД/мл.

После взятия крови пробы центрифугируют при 2-3 тыс. g в течение 15 минут при температуре 4°С. Немедленно после центрифугирования плазму разливают на аликвоты согласно количеству разных типов тестирования, так, чтобы хватило на два-три параллельных определения. Для предотвращения протеолитического расщепления пептидных гормонов к 2 мл плазмы добавляют 0,1 мл тросилола. Замораживание проб следует проводить очень быстро, лучше в жидком азоте, помещая их в полиэтиленовые пробирки. Чаще плазму замораживают и хранят в низкотемпературных холодильниках при температуре не выше −20°С. Срок хранения биологического материала — около месяца, для стероидов — до нескольких месяцев. Иногда для хранения плазмы используют морозильные камеры бытовых холодильников, в этом случае срок хранения снижается до нескольких суток.

Размораживание и повторное замораживание повреждает практически все биологические пробы. Существует ошибочнон мнение, что такое воздействие не влияет на тиреоидные и стероидные гормоны. Действительно, их структура более устойчива, но основной пул этих гормонов циркулирует в комплексе с транспортными белками, которые очень чувствительны к температурным воздействиям, разрушаются и перестают защищать гормоны от метаболических преобразований.

Определению гормонов часто предшествуют процедуры экстракции анализируемого лиганда из опытного образца и его концентрирования (чаще всего путем высушивания экстракта в вакуумном шкафу при 45‑50°С, желательно в токе азота или какого-то инертного газа). Поскольку при экстрагировании гормонов используют органические растворители, все процедуры проводят в стеклянных, а не в пластиковых пробирках.

Сухие экстракты хранят при температуре −2-8°С до определения. В случае предполагаемого длительного хранения в пробирку с экстрактом перед высушиванием добавляют спиртовый раствор азида натрия в конечной концентрации 0,2 % (1 капля). Препарат обладает мощным бактерицидным действием и не влияет на результаты иммунологического, радиолигандного анализов.

Сбор мочи для количественного определения гормонов проводят в течение заданных интервалов времени. На протяжении суток скорость образования и экскреции гормонов с мочой колеблется весьма значительно, но эти колебания нивелируются при исследовании порции суточной мочи.

Мочу собирают без консервантов и хранят в холодильнике при 0-8°С. Если моча не содержит стабилизаторов, как, например, при определении стероидов и их метаболитов, она должна храниться до анализа не более 10 дней в замороженном виде. Для консервации мочи в нее добавляют бактериостатические агенты из расчета на 100 мл мочи — 10 мг тиомерсала, 1 мл водного раствора мертиолата (10 мг/100 мл), 1 мл хлороформа, 10 мл толуола. В лабораториях чаще всего применяют хлороформ. Считают, что в таких условиях пробы могут сохраняться несколько недель.

При определении катехоламинов мочу собирают в сосуд из темного стекла с добавлением кислоты (серной, соляной) или другого стабилизатора (например, фторида натрия). Замороженную мочу со стабилизатором, предназначенную для определения катехоламинов, допускается хранить не более трех дней.

Из рациона пациента, по меньшей мере, за трое суток до сбора мочи, необходимо исключить продукты и лекарственные препараты, являющиеся источником пигментов мочи (свеклу или амидопирин), а также влияющие на мочеотделение. Присутствие в моче некоторых веществ эндо- и экзогенного происхождения может искажать результаты определения гормонов. Например, стильбены мешают определению стероидов мочи. Результаты определения эстриола и 17-ОКС химическими методами в моче больных сахарным диабетом в ряде случаев не отражают истинного содержания этих гормонов из-за влияния глюкозы.

Клиническая химия гормонов располагает широчайшим спектром методов исследования:

  • прямые физико-химические методы (спектрофотометрические, колориметрические, газо- и жидкостно хроматографические, флюориметрические, полярографические и др.),
  • биологические пробы in vivo и in vitro (требуют наличия вивария и спецоборудования),
  • методики, основанные на связывании гормонов с антителами, транспортными белками крови, рецепторным аппаратом клеток-мишеней (обеспечивают высокую специфичность исследования).

Для количественной характеристики гормонов в настоящее время используется принцип мечения радиоактивным изотопом, ферментом, флюорофором (радиоконкурентные, иммуноферментные, иммунохимические и др. исследования).

Выделяют несколько типов радиолигандного тестирования in vitro:

  • РИА (радиоиммунологический анализ) наиболее известен и этот термин часто используют для всех вариантов подобных in vitro методов, что не вполне корректно;
  • ИРМА (иммунорадиометрический анализ);
  • КБС (конкурентное белковое связывание);
  • РРТ (радиорецепторное тестирование);
  • РЭА (радиоэнзиматический анализ) и РРА (радиореагентный анализ).

В основу этой терминологии положено обозначение используемых реагентов. Общей основой исследований является конкуренция немеченых («холодных») молекул определяемого вещества и молекул этого же вещества, соединенных с радиоактивной меткой (125I,3H и др.), за связывание специфическими биндинг-системами. В качестве биндинг-систем могут выступать: иммунная антисыворотка (РИА), специфические тканевые рецепторы (РРТ), белки разных тканей (КБС) и др.

Радиоиммунологические оказались наиболее чувствительными (позволяют определять пикограммовые количества вещества), менее громоздкими (особенно при наличии коммерческих наборов), более воспроизводимыми и достаточно специфичными. Поэтому они чаще всего используются в клинике.

Методические детали проведения радиоиммунного анализа описаны в инструкциях фирм-изготовителей для каждого РИА-комплекта. К ним прилагается истинная калибровочная кривая для каждого конкретного набора на момент его изготовления.

Метод радиоиммунного анализа подразумевает следующие основные этапы:

  1. Внесение в пробирку исследуемой пробы или раствора стандарта, меченого антигена, антисыворотки или другого специфического связывающего компонента в присутствии буфера. Для достижения максимальной воспроизводимости результатов гормон всегда определяется в дублях, а калибровочную кривую строят как можно ближе к истинной, для чего используют три параллельные пробы для каждого стандарта. Рекомендуется при выполнении процедур раскапывания сыворотки и компонентов РИА-набора пользоваться автоматическими дозаторами.
  2. Инкубация проб в оптимальных для каждого набора условиях, что необходимо для установления динамического равновесия между процессами образования и распада иммунных комплексов;
  3. Сепарация связанной и свободной фракции немеченого лиганда с последующим центрифугированием и аспирацией или декантированием супернатанта. Здесь используют широкий спектр методов разделения клиплексов антиген-антитело от непрореагировавших компонентов смеси: фракционное осаждение (этанол, диоксан, полиэтиленгликоль, сульфит натрия, сульфат аммония, трихлоруксусная кислота), адсорбция (активированный уголь, силикаты, гидроксиаппатит), гель-фильтрация (на колонках или добавлением геля в пробирку), электрофорез (крахмальный гель, ацетат целлюлозы. полиакриламидный гель), метод двойных антител (растворимая и твердая фазы), иммобилизованные антитела (на стенках пробирки или на специальных вкладышах).
  4. Радиометрия проб и математическая обработка результатов. Большинство наборов для определения гормонов и их метаболитов предполагают осаждение комплекса антиген-антитело и радиометрию осадка (например, при изучении инсулина, кортизола и т. д.) В некоторых случаях иммунный комплекс не осаждается, а адсорбируется на оставшийся свободным лиганд. поэтому определяется радиоактивность надосадочной жидкости (например, при исследовании простагландинов). Радиометрию проб часто совмещают с математической обработкой информации (перевод числа импульсов счета каждой пробы в единицы концентрации) и проводят на гамма-счетчиках, гамма-спектрометрах (при использовании в качестве метки 131 I, 125 I), а также на бета-сцинтилляционных счетчиках (при использовании в качестве метки 3 Н), снабженных пакетом специальных программ компьютерной обработки данных.

Конечные результаты выражают в единицах, рекомендованных фирмами-изготовителями наборов для построения калибровочных кривых из стандартных навесок определяемых веществ.

Пересчет результатов радиометрии проб в единицах концентрации или активности производятся методом построения калибровочной кривой, для чего используются стандарты с известным количеством немеченого соединения. По мере увеличения концентрации лиганда в стандарте количество радиоактивных комплексов уменьшится и, следовательно, снижается радиоактивность получаемого осадка (обозначают стандарты — В). Наибольшей радиоактивностью обладает осадок в пробирках, не содержащих немеченый антиген (так называемый нулевой стандарт — ВО). При построении калибровочного графика по оси ординат откладывают процент связывания метки — отношение (В/ВО)´100 %, по оси абсцисс — единицы концентрации (активности) стандартов. Существует несколько способов построения стандартной кривой, из них методом выбора в обработке результатов РИА считается сплайн-интерполяция.

Помимо нулевого стандарта и стандартов гормона используются еще две пробы: Т- тотальная, которая содержит только метку и характеризует ее активность; НСВ — проба на неспецифическое связывание, которая содержит все составные части РИА-набора, кроме антитела, и позволяет определить неспецифическое связывание метки разделяющими компонентами и стенками пробирки.

Неспецифическим связыванием определяемого гормона очень часто обладает сама сыворотка или плазма крови. Если процент неспецифического связывания (отношение НСВ/Т´100 %) не превышает 5, то его можно не учитывать, если же он в неизвестных пробах больше 5, то его нужно вычислять для каждой пробы (что очень удорожает исследование) или проводить экстракцию гормона из плазмы крови. Это делается при определении вазопрессина, соматостатина, циклических нуклеотидов, тестостерона, простагландинов и ряда других гормонов и биологически активных веществ.

Однако метод РИА не в состоянии заменить все остальные аналитические методы, а для большой группы стероидных гормонов и их метаболитов химические методы по-прежнему остаются актуальными. Не утратили значения в силу своей специфичности и отдельные биологические методы определения гормонов. В клинической практике просматривается тенденция к комплексным исследованиям, поскольку отдельно взятый тест часто малоинформативен и позволяет судить лишь об одном звене гормональной системы.

Читайте также:  Можно анализ на гормоны не натощак

источник

Гормональный скрининг— метод диагностики эндокринных нарушений. Задача гормонального обследования — оценка уровня базальной секреции тропных и стероидныхгормоновв плазме крови в раннюю фолликулиновую фазу менструального цикла, которой соответствуют 2–3й дни от начала менструации. Изучают концентрацию пролактина, гонадотропинов (ФСГ, ЛГ), эстрадиола, тестостерона, ДГЭАС, кортизола, ТТГ, свободных фракций гормоновщитовидной железы: Т3, Т4 — определяют уровень АТ к тиреоидной пероксидазе и тиреоглобулину (табл. 6-1).

Кровь для исследования (анализа на гормоны) берут из локтевой вены с 9 до 12 ч натощак. Перед этим пациентке не рекомендуют проводить гинекологическое обследование, осмотр и пальпацию молочных желёз. При нарушении менструального цикла по типу олигоменореи гормональное обследованиепроводят на 2–3й день менструальноподобной реакции, вызванной гестагенами.

Таблица 6-1. Нормативные показатели концентрации гормонов в плазме крови женщин репродуктивного возраста

АТ к тиреоидной пероксидазе, АТ к тиреоглобулину

0,069. Проба с дексаметазоном основана на способности препарата подавлять выделение АКТГ передней долей гипофиза, вследствие чего тормозится образование и выделение андрогенов надпочечниками. Малая дексаметазоновая проба: назначают дексаметазон 5 мг каждые 6 ч в течение 3 сут. За 2 дня до проведения пробы берут кровь для исследования тестостерона, 17ОП и дегидроэпиандростерона. Повторный забор крови проводят на следующие сутки после окончания приёма дексаметазона. При положительной пробе исследуемые показатели снижаются на 50% и более, что указывает на надпочечниковый показатель гиперандрогении. Отсутствие снижения уровня гормонов указывает на органический характер гиперандрогении, незначительное снижение на 30–25% позволяет предположить их яичниковое происхождение.

Большую дексаметазоновую пробу проводят при подозрении на органическое поражение надпочечников. Дексаметазон назначают в дозе 2 мг каждые 6 ч в течение 3 сут. Определение уровня гормонов проводят так же как при малой дексаметазоновой пробе. Отрицательный результат пробы указывает на наличие вирилизирующей опухоли коры надпочечников.

Проба с ХГЧ позволяет уточнить источник гиперпродукции андрогенов у женщин с СПКЯ. Оценивают исходные показатели секреции тестостерона, 17ОП и дегидроэпиандростерона, после чего вводят внутримышечно 4500 МЕ ХГЧ. Кровь для исследования гормональных показателей повторно берут через 24–36 ч. Увеличение концентрации гормонов указывает на яичниковый характер гиперандрогении. Оценку углеводного обмена у пациенток с гиперандрогенией проводят с целью диагностики инсулинрезистентности. На первом этапе обследования проводят определение гликемического профиля в течение суток: кровь для исследования берут натощак в 9 ч утра, затем каждые 3 ч при обычной пищевой нагрузке. В исходном анализе кровив 9 ч утра наряду с уровнем глюкозы определяют концентрацию инсулина.

На втором этапе обследования женщинам с нормальными показателями гликемического профиля проводят стандартный упрощённый тест на толерантность к глюкозе. В течение 3 сут перед пробой пациентка получает 150–200 мг углеводов в сутки без ограничения потребления воды. Пробу проводят утром натощак не позднее чем за 10 ч после последнего приёма пищи. Назначают глюкозу в дозе 75 мг в 200–300 мл воды, забор крови осуществляют через 30, 60, 90, 120 мин после приёма. Оценка результатов теста (табл. 6-2).

Таблица 6-2. Оценка результатов классического двухчасового теста толерантности к глюкозе (критерии Американской диабетической ассоциации, 1998)

Концентрация глюкозы в плазме крови, ммоль/л

источник

Качественный и количественный анализ являются предметом аналитической химии. Аналитическая химия занимается исследованием экспериментальных методов определения состава веществ. Определение состава веществ включает выявление природы компонентов, из которых состоит исследуемое вещество, и установление количественных соотношений этих компонентов.

Сначала устанавливают качественный состав исследуемого объекта, т.е. решают вопрос, из чего он состоит, а затем приступают к определению количественного состава, т.е. узнают, в каких количественных соотношениях обнаруженные составные части находятся в объекте исследования.

Качественный анализ вещества можно проводить химическими, физическими, физико-химическими методами.

Химические методы анализаоснованы на применении характерных химических реакций для установления состава анализируемого вещества.

Химический анализ вещества проводят двумя способами: «сухим путем» или «мокрым путем». Анализ сухим путем — это химические реакции, происходящие с веществами при накаливании, сплавлении и окрашивании пламени.

Анализ мокрым способом — это химические реакции, протекающие в растворах электролитов. Анализируемое вещество предварительно растворяют в воде или других растворителях. В зависимости от массы или объема взятого для анализа вещества, от применяемой техники различают макро-, полумикро- и микрометоды.

Макрометод. Для проведения анализа берут 1-2 мл раствора, содержащего не менее 0,1 г вещества, и добавляют не менее 1 мл раствора реактива. Реакции проводят в пробирке, осадок отделяют фильтрованием. Осадок на фильтре промывают от примесей.

Полумикрометод. Для анализа берут в 10-20 раз меньше вещества (до 0,01 г). Так как в этом методе работают с малыми количествами вещества, то пользуются микропробирками, часовыми или предметными стеклами. Для отделения осадка от раствора применяют центрифугирование.

Микрометод. При выполнении анализа данным методом берут одну-две капли раствора, а сухого вещества — в пределах 0,001г. Характерные реакции проводят на часовом стекле или фарфоровой пластинке.

При проведении анализа пользуются следующими операциями: нагревание и выпаривание, осаждение, центрифугирование, проверка полноты осаждения, отделение раствора (центрифуга) от осадка, промывание и растворение осадка.

Нагревание растворов можно вести непосредственно пламенем газовой горелки, на асбестовой сетке или водяной бане. Небольшое количество раствора нагревают до температуры, не превышающей 100°С, на водяной бане, вода в которой должна кипеть равномерно.

Для концентрирования растворов применяют водяную баню. Выпаривание раствора до сухого остатка проводят в фарфоровых чашках или тиглях, нагревая их на асбестовой сетке. Если сухой остаток после выпаривания необходимо прокалить для удаления летучих солей, то тигель ставят на фарфоровый треугольник и нагревают пламенем газовой горелки.

Осаждение. Реакцию осаждения проводят в конических колбах или цилиндрической пробирках. В исследуемый раствор приливают пипеткой реактив-осадитель. Осадитель берут в избытке. Смесь тщательно перемешивают стеклянной палочкой и потирают о внутренние стенки пробирки, это ускоряет процесс образования осадка. Осаждение часто ведут из горячих растворов.

Центрифугирование. Осадок отделяют от раствора центрифугированием, используя ручную или электрическую центрифугу. Пробирку с раствором и осадком помещают в гильзу. Центрифуга должна быть загружена равномерно. При быстром вращении центробежная сила отбрасывает частицы осадка на дно и уплотняет его, а раствор (центрифугат) становится прозрачным. Время вращения составляет от 30 с до нескольких минут.

Проверка полноты осаждения. Пробирку осторожно вынимают из центрифуги и добавляют по стенке 1-2 капли реактива-осадителя к прозрачному раствору. Если раствор не мутнеет, значит осаждение полное. Если же наблюдается помутнение раствора, то в пробирку еще добавляют осадитель, содержимое перемешивают, нагревают и вновь центрифугируют, затем повторяют проверку полноты осаждения.

Отделение раствора (центрифугата) от осадка. Убедившись в полноте осаждения, отделяют раствор от осадка. Раствор от осадка отделяют капельной пипеткой. Пипетку закрывают указательным пальцем и осторожно вынимают из пробирки. Если отобранный раствор необходим для анализа, то его переносят в чистую пробирку. Для полного отделения операцию повторяют несколько раз. При центрифугировании осадок может плотно осесть на дно пробирки, тогда раствор отделяют декантацией (осторожно сливают).

Промывание осадка. Осадок (если он исследуется) необходимо хорошо отмыть; для этого приливают промывную жидкость, чаще всего дистиллированную воду. Содержимое тщательно перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют, затем промывную жидкость отделяют. Иногда в работе эту операцию повторяют 2-3 раза.

Растворение осадка. Для растворения осадка в пробирку добавляют растворитель, помешивая стеклянной палочкой. Нередко растворение осадка ведут при нагревании на водяной бане.

Для определения количественного состава вещества или продукта используются реакции нейтрализации, осаждения, окисления — восстановления, комплексообразования. Количество вещества можно определить по его массе или объему раствора, затраченного на взаимодействие с ним, а также по показателю преломления раствора, его электрической проводимости или интенсивности окраски и т.п.

По количеству взятого для исследования вещества аналитические методы количественного анализа классифицируются следующим образом: макроанализ — 1-10 г твердого вещества, 10-100 мл анализируемого раствора; полумикроанализ — 0,05-0,5 твердого вещества, 1-10 мл анализируемого раствора; микроанализ — 0,001-1-10- 4 г твердого вещества, 0,1-1*10- 4 мл анализируемогораствора. В товароведной практике часто пользуются гравиметрическим (весовым) и титриметрическим (объемным) методами.

Гравиметрический (весовой) анализ — один из методов количественного анализа, который позволяет определять состав анализируемого вещества путем измерения массы. Измерение массы (взвешивание) выполняется на аналитических весах с точностью 0,0002 г. Этот метод часто используется в пищевых лабораториях для определения влажности, зольности, содержания отдельных элементов или соединений. Анализ может быть выполнен одним из следующих способов.

1. Определяемую составную часть количественно (полностью, насколько это возможно) выделяют из исследуемого вещества и взвешивают. Так определяют зольность продуктов. Взвешенный на аналитических весах исходный продукт (навеску) сжигают, полученную золу доводят до постоянной массы (прокаливают до тех пор, пока не перестанет изменяться масса) и взвешивают.

Зольность продукта х (%) рассчитывают по формуле

,

где В — масса прокаленной золы, г;

А — исходная навеска продукта, г.

2. Из навески исходного вещества полностью удаляют определяемую составную часть и остаток взвешивают. Так определяют влажность продуктов, при этом навеску исходного вещества высушивают в сушильном шкафу до постоянной массы.

Влажность продукта х (%) рассчитывают по формуле

где А – исходная навеска продукта, г;

В – масса навески после высушивания, г.

Объемный анализ — метод количественного анализа, где искомое вещество определяют по объему реактива с точно известной концентрацией, затраченному на реакцию с этим веществом.

При определении объемным методом к известному объему раствора определяемого вещества малыми порциями (по каплям) добавляют реактив с точно известной концентрацией до тех пор, пока его количество не будет эквивалентно количеству определяемого вещества. Раствор реактива с точно известной концентрацией называется титрованным, рабочим или стандартным раствором.

Процесс медленного прибавления титрованного раствора к раствору определяемого вещества называется титрованием. Момент, когда количество титрованного раствора будет эквивалентно количеству определяемого вещества, называется точкой эквивалентности или теоретической точкой конца титрования. Для определения точки эквивалентности пользуются индикаторами, которые вблизи ее претерпевают видимые изменения, выражающиеся в изменении цвета раствора, появлении помутнения или выпадении осадка.

Важнейшие условия для правильного проведения объемно-аналитических определений: 1) возможность точного измерения объемов растворов; 2) наличие стандартных растворов с точно известной концентрацией; 3) возможность точного определения момента окончания реакции (правильный выбор индикатора).

В зависимости от того, на какой реакции основано определение, различают следующие разновидности объемного метода:

· метод окисления — восстановления

· метод осаждения и комплексообразования.

В основе метода нейтрализации лежит реакция взаимодействия ионов Н + и ОН — . Метод применяется для определения кислот, оснований и солей (которые реагируют с кислотами или основаниями) в растворе. Для определения кислот используют титрованные растворы щелочей КОН или NаОН, для определения оснований — растворы кислот НС1, Н2SO4.

Для определения содержания, например, кислоты в растворе точно отмеренный пипеткой объем раствора кислоты в присутствии индикатора титруют раствором щелочи точно известной концентрации. Точку эквивалентности определяют по изменению цвета индикатора. По объему щелочи, израсходованной на титрование, вычисляют содержание кислоты в растворе.

Метод окисления — восстановления основан на окислительно-восстановительных реакциях, происходящих между стандартным раствором и определяемым веществом. Если стандартный раствор содержит окислитель (восстановитель), то определяемое вещество должно содержать соответственно восстановитель (окислитель). Метод окисления-восстановления подразделяется, в зависимости от используемого стандартного раствора на метод перманганатометрии, метод иодометрии и др.

В основе метода осаждения лежат реакции, сопровождающиеся выпадением осадка. В отличие от гравиметрического метода обработку осадка здесь не производят, массу исследуемого вещества определяют по объему реактива, израсходованному на реакцию осаждения.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Как то на паре, один преподаватель сказал, когда лекция заканчивалась — это был конец пары: «Что-то тут концом пахнет». 8104 — | 7776 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

источник