N 2 H 4 + 2CH 3 COCH 3 → + 2CH 3 COCH 3 → (2-
Для разделения производных используют капиллярные колонки с силиконовыми неподвижными фазами и ТИД. Определение гидразинов можно проводить в интервале концентраций мккмоль/л с относительным стандартным отклонением менее 0,05.
Сочетание ГХ и – один из наиболее эффективных методов анализа сложных смесей в объектах окружающей среды. Аналитические возможности ГХ иидеально дополняют друг друга, и сочетание методов позволяет получать большой объем информации. На рис. 12 приведена схема компьютеризированойустановки, которая позволяет провести все стадии анализа самых сложных смесей органических веществ .
ГХ и МС присущи общие особенности – в обоих методах:
– анализ вещества проводится в газовой фазе;
– количество вещества, необходимое для одного анализа, составляет г;
– скорости выполнения анализов в обоих методах могут быть согласованы таким образом, что в процессе элюирования одного хроматографического пика можно измерить несколько полных массспектров.
Селективное ионное детектирование
Времена (индексы) удерживания
Рис.12. Основные элементы системы: газовый хроматограф – масс-
Различие состоит в том, что в ионном источнике поддерживается высокий вакуум Па), тогда как давление в хроматографической колонке 10 5 Па. Для понижения давления используют молекулярный сепаратор, который одним концом соединен с хроматографической колонкой, а другим с ионным источником массспектрометра. Сепаратор удаляет из газового потока, выходящего из колонки, основную частьа органическое вещество пропускает вДавление при этом понижается до рабочего давленияДля этого используют следующие процессы массопереноса:
– эффузию через узкие поры и щели;
– диффузию в расширяющейся газовой струе;
– диффузию через полупроницаемые мембраны.
Эти процессы используются в эффузионном, струйном и мембранном молекулярных сепараторах, соответственно.
Для ионизации используют ионный удар, но более интересен другой способ ионизации – химическая ионизация. При этом способе источник ионов заполняется который ионизируется электронным ударом, а молекулы определяемых органических соединений превращаются в ионы за счет взаимодействия с ионамиили «медленными» электронами. Такая ионизация является «мягкой», то есть образовавшиеся ионы не разваливаются на мелкие фрагменты, а остаются в виде «молекулярного иона». Для ионизации лабильных органических соединений (в том числе биологически активных) разработаны специальные методы ионизации: ионизация в электроспрее (ESI) и ее подвид – химическая ионизация при атмосферном давлении (MALDI). Развитиюспособствовало также создание «быстрых» квадрупольных
Применение для решения экологических задач . Оснащенные современными компьютерами позволяют обнаружить в объектах окружающей среды множество химических веществ, в том числе, и токсичных. Впечатляющим примером достижений этого метода является его использование в работе космического аппарата, исследовавшего Марс с целью обнаружения жизни на этой планете. Массспектрометрическая установка выполнила анализ 14 образцов почвы с поверхности Марса. Никакой жизни обнаружено не было, несмотря на то, что предел обнаружения органических веществ составлял
широко используется для определения ЛОС в городском воздухе и воздухе рабочей зоны промышленных предприятий. Только с использованием этого метода можно получить детальную информацию о содержании приоритетных загрязнителей, к которым относятся ЛОС, в городском воздухе, их ПДК весьма низки и другие методы не могут справиться со столь сложной задачей.
Наиболее ярким примером, характеризующим возможности является определение полихлорированныхи родственных им полихлордибензофуранов. В настоящее время хромато-является практически единственным приемлемым методом для определения в объектах окружающей среды этих чрезвычайно токсичных веществ.
Сильное загрязнение поверхностных вод, попадание опасных соединений в подземные источники и водопроводную воду заставило экологов ужесточить контроль качества питьевой воды. спектрометрия – один из главных методов анализа воды, позволяющий идентифицировать большинство загрязнителей и определить их на уровне ПДК и ниже. На рис.13 показан один из примеров разделения сложной смеси веществ методомразделенные вещества и соответстуюшие им пики на хроматограмме показаны в табл.10 . При контроле качества
воды наиболее важно определять ЛОС, диоксины, ПАУ, фенолы, пестициды. При определении ПАУ надежность их идентификации с помощью не менееа чувствительность рутинных анализов составляет 0,1 мкг/л. При определении фенолових предварительно экстрагируют жидкостной или твердофазной экстракцией и затем переводят в ацетаты. Предел обнаружения фенолов и хлорфенолов составляетнг/л.относится к немногим методам, с помощью которых можно в сложной смеси органических загрязнений идентифицировать металлорганические соединения (на фоне других ЛОС).
Рис. 13. Хроматограмма по полному ионному току смеси полициклических ароматических углеводородов, полихлорированных бифенилов, полинитроуглеводородов и хлорированных инсектицидов, экстрагированных из воды
Определяют металлоорганические соединения олова, свинца, ртути и других тяжелых металлов. Обычно эти соединения переводят в летучие производные и обнаруживают с высокой чувствительностью.
Таблица 10. Перечень летучих соединений на хроматограмме, показанной на рис.13
источник
Хромато-масс-спектрометрия — аналитический метод, основанный на сочетании возможностей хроматографа и масс-спектрометра, использующийся для количественного и качественного определения отдельных компонентов в сложных смесях. В этой статье будут рассмотрены основные вопросы, касающиеся сути хромато-масс-спектрометрии и ее особенностей:
Прибор, с помощью которого проводится исследование, получил название хромато-масс-спектрометра или ХМС. Проходя через хроматограф, проба разделяется на компоненты, а масс-спектрометр отвечает за их идентификацию и анализ. В зависимости от особенностей исследуемого состава и требований к точности результата, используется одна из двух методик: или высокоточная жидкостная хроматография, или газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектированием ГХ-МС.
Исследуемый состав вводится в испаритель хроматографа и моментально переводится в газообразную форму, смешивается с инертным газом-носителем и под давлением подается в колонку. Проходя через хроматографическую колонку, проба разделяется на компоненты, которые подаются в МС и пропускаются через спектрометрическую составляющую устройства.
Для получения спектра, молекулы компонентов пробы ионизируются, специальный датчик считывает изменение ионного тока, на основании чего записывается хроматограмма. Программное обеспечение для обработки хроматограмм позволяет сверить полученные пики с зарегистрированными ранее, и тем самым, проводя их точное качественное и количественное определение. Одновременно с этим делается снимок масс-спектра, дающий представление о строении компонентов, в том числе и не идентифицированных ранее.
Хромато-масс-спектрометрия была разработана в 50-х годах прошлого века, а первый прибор собран и протестирован в 60-х годах.
Эффективность и результативность хромато-масс-спектрометрии задается чувствительностью ХМС, которые постоянно совершенствуются, что позволяет расширять применение системы ГХ-МС.
Высокую точность показывает селективное детектирование. Его суть сводится к записи показаний не по всему объему поступающего ионного тока, а по максимальным для предполагаемых молекул ионам. Это удешевляет метод и позволяет обнаруживать минимальное содержание заданного вещества в любых составах. Поэтому хромато-масс-спектрометрия активно применяется в медицине и фармакологии для поиска конкретных маркеров: например, гормонов или наркотиков в биологических жидкостях.
Высокой чувствительностью обладает хромато-масс-спектрометр с МСД ISQ. Особенности применяемого в нем детектора заключаются в:
- использовании специальных материалов, обеспечивающих высокий ионный выход в любых рабочих режимах;
- системе автоматической обработки сигнала посредством возможностей ПО;
- системе автоматической настройки МС;
- системе автоматической диагностики МС;
- сочетании высококачественных электродов с цифровой системой детектирования, позволяющим повысить скорость сканирования;
- специальной системе подавления шумов от остаточного гелия.
Высокая чувствительность и широкая сфера применения хроматомасс-спектрометра, вполне оправдывает его цену.
На качество результата влияет еще и скорость записи масс-спектра, которая должна быть значительно выше, чем построение хроматографического пика. Если скорость снижается, появляются пиковые наложения и искажения результата анализа.
Этот параметр зависит от установленного масс-анализатора. Оптимальной в настоящее время является квадрупольная система, функционирующая по следующему принципу. Поток проходит через четыре магнита, создающих высокочастотное поле. Попадая в него, частицы с определенным отношением массы и заряда попадают в уловитель, все остальные «отсеиваются».
МС через равные промежутки времени сканирует спектры анализируемых веществ. Затем каждый статистический снимок обрабатывается, и суммарная величина дает представление о совокупности спектров в каждый момент времени. На большинстве современных МС (например, на агрегатах с МСД ISQ, о которых рассказывалось выше), установлен именно этот тип анализаторов.
Оборудование для масс-хроматографии отличается своими параметрами и возможностями. Чтобы подобрать технику, отвечающую потребностям современного пользователя, необходимо учитывать следующие параметры:
- используемый источник ионизации (электронный удар, химическая ионизация);
- чувствительность наиболее распространенных МС позволяют достичь 10–9…10–12 г на разных режимах сканирования;
- возможность сканирования: желательно, чтобы хромато-масс-спектрометр поддерживал селективный поиск по указанным группам частиц (режим SIM) , а также выполнял полное сканирование в заданном диапазоне (режим Full scan).
Большое значение для хромато-масс-спектрометрии приобретает программное обеспечение, поставляющееся в комплекте. Оно определяет возможность построения хроматограммы в режиме реального времени, контроль над стабильностью заданных параметров, автоматическое получение отчетности в удобной для специалиста форме. От ПО зависит, насколько удобен в работе хромато-масс-спектрометр. Дополнительно разработчики предлагают набор библиотек, в которых содержатся спектры для различных промышленных и научных сфер: медицины и фармакологии (гормоны, наркотики, лекарственные препараты), нефтедобывающей отрасли (углеводороды), экологии (пестициды и другие органические загрязнители) и др.
Подбирая хромато-масс-спектрометр, необходимо учитывать все спецификации. Тогда приобретенное устройство будет полностью отвечать потребностям пользователя.
источник
Определение микроэкологического статуса человека и его отклонений от нормы, в ходе которого осуществляется выявление (уточнение) этиологии инфекционно-воспалительных процессов при любых заболеваниях. Относится к новому направлению в микробиологических исследованиях — диагностике инфекции, дисбиозов и воспалительных процессов по специфическим микробным химическим веществам — маркерам. Исследование универсально в отношении разных групп микроорганизмов: не только бактерий, но и микроскопических грибов и вирусов, в том числе анаэробных микроорганизмов, которые составляют основной микробный массив (до 60 % и более).
Микроэкологический статус человека, микробиом человека, микроэкология человека.
Газовая хроматография масс-спектрометрия (ГХ-ХМС).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь, капиллярную кровь, мазок из зева (ротоглотки), мазок с кожных покровов, мазок с конъюнктивы, мазок из носоглотки, мазок из уретры, мокроту, ногти, отделяемое влагалища, отделяемое раны, секрет простаты, слюну, первую порцию утренней мочи, среднюю порцию утренней мочи.
Для исследования почек и мочевого пузыря необходима средняя порция мочи, для исследования воспалительных процессов уретры – первая порция утренней мочи.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
- Исключить (по согласованию с врачом) прием мочегонных препаратов в течение 48 часов до сбора мочи.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Микроэкологический статус человека является необходимым условием стабильного функционирования всех его органов и систем. Нормальная микробиота — по сути совокупность микробных сообществ локусов, характеризующихся определенным составом и колонизирующих кожу и слизистые оболочки. Это первичный неспецифический барьер, предшествующий активации неспецифических и специфических факторов защиты макроорганизма. Он покрывает кишечную стенку, слизистые оболочки и кожу человека, насчитывая около ста биллионов клеток микроорганизмов. Микробиота выступает как зеркальный показатель физиологического состояния организма в зависимости от воздействия на него различных факторов. Поэтому так важен контроль — и восстановление микробиоценоза, если он оказывается нарушенным.
Микробиота человека сконцентрирована в основном в кишечнике. Известные сведения о природе микробиоценоза кишечника достаточны для понимания его функционирования как физиологически активного органа человека. Однако при патологиях, связанных с дисбиозом, одних их недостаточно — в таких случаях необходимо количественное определение и контроль изменений в составе микроорганизмов. Отсутствие баланса в их продукции связано с патологическими проявлениями самого разного характера: кишечными расстройствами, кожными заболеваниями, половой дисфункцией, сердечной недостаточностью и др.
Исследование относится к новому направлению в микробиологии – диагностике инфекции, дисбиозов и воспалительных процессов по специфическим микробным химическим веществам (маркерам). Эти вещества содержатся в клеточных стенках микроорганизмов или производятся ими в процессе жизнедеятельности. Маркеры отличаются по химическому строению от вещества клеток человека. В данном случае речь идет о разнообразных жирных кислотах, которых у человека немногим более 20 видов, а у микробов – более 200. Поэтому есть возможность определить наличие микробов в организме человека, если имеется достаточно чувствительный метод анализа. Таким методом является газовая хроматография, совмещенная с масс-спектрометрией (ГХ-МС) — с его помощью можно точно определить химическую природу вещества по его масс-спектру. Современное компьютерное обеспечение в совокупности с разработанными методиками позволяет быстро и надежно определять малые доли веществ микробного происхождения в любых биологических жидкостях человека. Исследование используется для определения инфекционных агентов воспалений и оценки дисбиозов различных локализаций. Суть исследования состоит в прямом извлечении высших жирных кислот из образца биоматериала, их разделения на хроматографе в капиллярной колонке высокого разрешения и анализе состава на масс-спектрометре. На основании этих измерений расшифровывается состав микробиоты.
Применение данного метода для изучения микроэкологии человека дает качественно новый вариант микробиологического исследования благодаря возможности одновременного количественного определения большого количества микробных маркеров непосредственно в биологических пробах без предварительного культивирования микроорганизмов и использования биохимических тестовых материалов и генетических праймеров. Получение в реальном времени расширенной информации об анаэробах и труднокультивируемых аэробах, а также актинобактериях, вирусах, дрожжах и микроскопических грибах из одной пробы обеспечивает полную картину микробной этиологии заболевания. Количественные измерения позволяют изучать динамику изменения микробиоты при лечебных мероприятиях, в том числе влияние антибиотиков и пробиотиков на пристеночную микробиоту кишечника.
В ходе исследования определяется более 56 микроорганизмов одновременно в одном анализе; при этом используется количественный экспресс-метод диагностики дисбактериозов и определения возбудителей инфекции. Анализ универсален в отношении разных групп микроорганизмов: бактерий, грибов, вирусов. Чувствительность составляет 10 4 -10 5 клеток в пробе; селективность – до вида при наличии маркера. Анализ осуществляется непосредственно в материале без высевания микрофлоры и не требует биологических и биохимических тестовых материалов – культуральных сред, ферментов, праймеров и т.п.
Когда назначается исследование?
- При определении микроэкологического статуса организма и его отклонений;
- при выявлении или уточнении этиологии инфекционно-воспалительного процесса при любых нозологических формах заболеваний в клинической практике:
- ОРИТ: сепсис, гнойно-воспалительные очаги, лихорадка неясной этиологии, менингит, бактериурия, полиорганная недостаточность;
- хирургия: инфекция вследствие хирургического вмешательства, абсцессы почек и печени, воспалительные процессы респираторных органов, воспаление внутренних половых органов, ожоговая инфекция, гангрена, перитонит, синовит;
- гинекология: хронический вагинит, цистит, воспаление матки и придатков, кандидоз;
- урология и андрология: пиелонефрит, буллезный цистит, уретрит, простатит, орхит, гонорея;
- репродуктология: мужское и женское бесплодие, связанное с инфекциями половых органов, невынашивание беременности, бесплодие, хронические воспалительные заболевания;
- гастроэнтерология: синдром раздраженного кишечника, гастрит, дисбактериоз, диарея, запор, болезнь Крона;
- пульмонология: муковисцидоз, пневмония, туберкулез, плеврит, лихорадка неясного генеза;
- ЛОР: гайморит, синусит, фарингит, отит;
- гепатология: асцит, дисбактериоз, спонтанный бактериальный перитонит;
- дерматовенерология: угревая болезнь, атопическая экзема, себорея, онихомикоз, псориаз, дерматиты неясной этиологии, сифилис.
Результат исследования выдается в виде списка исследуемых микроорганизмов, допустимых значений нормы и отклонений от нормы, а также диаграммы в сопоставлении с нормой.
+ Прилагается заключение в виде справочной информации по результатам анализа.
- Исследование может применяться в оценке репродуктивного статуса, в лечении бесплодия и других серьезных заболеваний.
Кто назначает исследование?
Гинеколог, уролог, хирург, гастроэнтеролог, инфекционист, пульмонолог, отоларинголог, реаниматолог.
[10-008] Дисбактериоз кишечника с определением чувствительности к антибиотикам [10-049] Посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам и бактериофагамисточник
2.3.1. Методические указания по хромато-масс-спектрометрическому определению летучих органических веществ в воде
Настоящие методические указания устанавливают количественный хромато-масс-спектрометрический анализ воды водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водоснабжения для определения в ней содержания ЛОС (ацетона, бензола, толуола, этилбензола, изомерных ксилолов, стирола, дихлорметана, 1,2-дихлорэтилена, 1,2-дихлорэтана, хлороформа, четыреххлористого углерода, бромдихлорметана, диб- ромхлорметана, трихлорэтилена, тетрахлорэтилена, бромоформа) в диапазоне концентраций 0,001—0,2 мг/дм 3 .
Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей ±25%, при доверительной вероятности 0,95.
Измерение концентраций ЛОС основано на извлечении их из воды газовой экстракцией, концентрации на твердом полимерном адсорбенте, последующей термической десорбции, криогенном фокусировании в капилляре, газохроматографическом разделении на стеклянной капиллярной колонке и идентификации по масс-спектрам.
Нижний предел измерения ароматических углеводородов в объеме пробы 0,05 мкг; галогенсодержащих соединений 0,07 мкг; четыреххлористого углерода 0,1 мкг; кислородсодержащих соединений 0,1 мкг.
Определению не мешают присутствие диоксида углерода, этанола, пентана, гексана, 2- и 3-метилоктанов, нонана.
Пробы воды объемом 150—180 см 3 отбирают согласно ГОСТу 4979-49, 2874-87-4, 17.1.5.04-81 в тщательно промытые и просушенные стеклянные емкости темного стекла с навинчивающимися пробками, не оставляя воздушного пространства под пробкой. Отобранные пробы воды хранят при 4 °С, срок хранения 5 дней.
Приготовление сорбционных трубок
Сорбционную трубку заполняют полимерным сорбентом тенаксом, закрывают концы тампонами из стекловаты, помещают в нагретую до 300 °С трубчатую электропечь и выдерживают в токе гелия при скорости 15 см 3 /мин в течение 24 ч. По окончании кондиционирования трубки с заглушенными концами помещают для хранения в промытый и тщательно просушенный эксикатор, на дно которого насыпан слой сухого силикагеля КСК, а по бокам расположены марлевые мешочки с активированным углем.
Исходный раствор ацетона в воде (с = 1 мг/мл). 50 мг ацетона вносят в мерную колбу вместимостью 50 см 3 , доводят артезианской водой до метки и перемешивают. Срок хранения 1 месяц при 4 °С.
Рабочий раствор ацетона в воде (с = 4 мг/мл). 1 см 3 исходного раствора вносят в мерную колбу вместимостью 250 см 3 , доводят артезианской водой до метки и перемешивают. Срок хранения 1 месяц при 4 °С.
Исходный раствор бензола, толуола, этилбензола, о-, м-, л-ксилолов и стирола (с = 1 мг/мл). 50 мг каждого из ароматических соединений вносят в мерную колбу вместимостью 50 см 3 , доводят этиловым спиртом до метки и перемешивают. Срок хранения 1 месяц при 4 °С.
Рабочий раствор бензола, толуола, этилбензола, о-, м-, л-ксилолов и стирола (с = 4 мг/л). I см 3 исходного раствора вносят в мерную колонку вместимостью 250 см 3 , доводят артезианской водой до метки и перемешивают. Срок хранения 1 месяц при 4 °С.
Исходный раствор галогенсодержащих веществ (с = 1 мг/мл). 50 мг каждого из соединений вносят в мерную колбу вместимостью 50 см 3 , доводят этиловым спиртом до метки и перемешивают. Срок хранения 1 месяц при 4 °С.
Рабочий раствор галогенсодержащих веществ (с = 4 мг/л). 1 см 3 исходного раствора вносят в мерную колбу вместимостью 250 см 3 , доводят артезианской водой до метки и перемешивают. Срок хранения 1 месяц при 4 °С.
Подготовка хроматографической системы
На крышке термостата газового хроматографа устанавливают штатив с вертикально закрепленной на нем трубчатой электропечью, внутри которой помещают толстостенный стеклянный капилляр, к которому подводят газ-носитель гелий. Выход капилляра с помощью накидных гаек с прокладками из витона соединяют с U-образным стеклянным капилляром, который, в свою очередь, подсоединяют непосредственно к стеклянной капилярной хроматографической колонке. После того как газовая линия хроматографической системы проверена на отсутствие утечек гелия, закрывают дверцу термостата хроматографа и проводят кондиционирование хроматографической колонки в токе гелия, поднимая температуру термостата со скоростью 6 °С/мин до 250 °С. Колонку выдерживают при этой температуре в течение суток. После охлаждения термостата хроматографа до комнатной температуры выход колонки подсоединяют к молекулярному сепаратору масс-спектрометра и записывают нулевую линию. При отсутствии заметных флуктуаций система готова к работе.
Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику устанавливают на градуировочных растворах ЛОС в воде. Она выражает зависимость площади пика (безразмерные компьютерные единицы) от концентраций (мг/л) каждого соединения и строится по четырем сериям градуировочных растворов. Для этого в мерную колбу вместимостью 1000 см 3 в соответствии с табл. III. 16 помещают исходные растворы каждого из соединений, доводят артезианской водой до метки и перемешивают.
Таблица III.16. Градуировочные растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентраций ЛОС
Объем рабочего р-ра (с = 4 мг/л), см 3
Концентрация вещества, мкг/л
Учитывая нелинейность детектора полного ионного потока в диапазоне концентраций 0,001—0,2 мг/л, градуировочный график разбивают на 2 поддиапазона: а) 0,001—0,02 мг/л и б) 0,02—0,2 мг/л.
При построении градуировочного графика (а) в стеклянный прибор с пористой пластинкой с помощью стеклянного шприца вносят 100 см 3 градуировочного раствора, подсоединяют к выходному патрубку прибора сорбционную трубку с тенаксом, к входному — газ-носитель гелий и при температуре 20 °С в течение 10 мин проводят газовую экстракцию, пропуская гелий со скоростью 200 см 3 /мин. При построении градуировочного графика (б) газовую экстракцию проводят из объема 20 см 3 .
Градуировку детектора полного ионного тока хромато-масс-спектроме- тра проводят при следующих условиях:
Температура хроматографической колонки в течение 5 мин комнатная, а затем программируемая до 240 °С со скоростью 6 °С/мин
Шкала усилителя детектора полного ионного тока
Ионизирующее напряжение в момент записи хроматограммы
Ионизирующее напряжение в момент записи масс-спектра
Температура ионного источника
Диапазон сканируемых масс
Скорость сканирования магнитного поля магнита
Находящийся внутри термостата и соединенный с хроматографической колонкой U-образный стеклянный капилляр погружают в сосуд Дьюара с жидким азотом. Затем, ослабив обжимные гайки, из холодной электропечи извлекают постоянно находящийся в ней толстостенный стеклянный капилляр и вместо него в направлении, обратном движению газа при проведении газовой экстракции, герметично закрепляют сорбционную трубку. В пространство между наружной стенкой сорбционной трубки и внутренней стенкой электропечи помещают термопару от испарителя хроматографа для контроля за температурой термодесорбции. Через 2—3 мин после вытеснения воздуха из сорбционной трубки включают электропечь, которая постепенно (за 8—10 мин) нагревается от комнатной температуры до 300 °С. Эту температуру выдерживают еще 1—2 мин, после чего нагрев отключают. В течение этого времени газ-носитель полностью освобождает трубку от сконцентрированного в ней вещества и переносит его в U-об- разный охлажденный капилляр. По завершении термодесорбции и криогенного фокусирования жидкий азот убирают и U-образный капилляр на 15 с погружают в стаканчик с налитой в него кипящей водой, в результате чего вещества переносятся в капиллярную хроматографическую колонку. После появления на хроматограмме всех хроматографических пиков нагрев термостата хроматографа отключают, охлаждают хроматографическую колонку до комнатной температуры и извлекают охлажденную сорбционную трубку из электропечи, вставляя вместо нее толстостенный капилляр.
На полученных хроматограммах рассчитывают площади пиков соединений и по средним результатам из четырех серий строят градуировочную характеристику для каждого из компонентов. Градуировку проверяют 1 раз в полгода, либо сразу после юстировки или ремонта хромато-масс- спектрометра.
Стеклянные емкости с отобранными пробами воды извлекают из холодильника и выдерживают 2—3 ч при комнатной температуре. Затем с ними проводят все операции, описанные выше. Одновременно с нагреванием стеклянного U-образного капилляра и переносом компонентов пробы в хроматографическую колонку включают компьютерную программу автоматического сканирования магнитного поля масс-спектра и сбора масс- спектрометрической информации. По окончании хроматографического анализа из массива масс-спектров формируют хроматограмму полного ионного тока, по которой проводят идентификацию обнаруженных соединений. Идентификация состоит в сравнении записанных масс-спектров со стандартными.
Вычисление результатов измерений
Концентрацию каждого идентифицированного вещества (мг/дм 3 ) определяют по его градуировочной характеристике после компьютерного интегрирования хроматограммы полного ионного тока.
В отсутствие российских методик для определения широкого круга ДОС (50—100 соединений) в питьевой и природных водах (галогенуглево- дороды и алкилбензолы) можно воспользоваться методикой, предлагаемой авторами этой монографии и представляющей собой компиляцию методик ЕРА 502.2 и 524.2 и российской методики МУК 4.1.646-96 [12] для определения галогенуглеводородов в природных водах [2] .
Предлагаемая методика позволяет на отечественных серийных газовых хроматографах с мультидетекторными системами определять в одной пробе воды 64 ЛОС в варианте парофазного анализа. Для этой цели используют одновременное хроматографирование пробы с двумя детекторами в системе ПФА/ГХ/ЭЗД/ ФИД, оснащенной капиллярной колонкой. Ниже приводится полный текст этой методики.
источник
Курсовая работа: Хромато-масс-спектрометрия и ее использование в идентификации загрязнителей природных сред
Название: Хромато-масс-спектрометрия и ее использование в идентификации загрязнителей природных сред Раздел: Рефераты по экологии Тип: курсовая работа Добавлен 22:05:46 05 января 2010 Похожие работы Просмотров: 2973 Комментариев: 9 Оценило: 3 человек Средний балл: 5 Оценка: неизвестно Скачать | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Хромато-масс-спектрометры. ГХ и ЖХ системы. | Масс-спектрометры для анализа стабильных изотопов в газовой фазе | Термоионизационные масс-спектрометры | Масс-спектрометры с индуктивно-связанной плазмой | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Интерферирующий ион | Изотоп анализируемого элемента | Разрешение |
R 16 O2 + | 32 S + | 1801 |
35 Cl 16 O + | 51 V + | 2572 |
40 Ar 14 N + | 54 Fe + | 2088 |
40 Ar 16 O + | 56 Fe + | 2502 |
40 Ar 16 O +1 H + | 57 Fe + | 1916 |
40 Ar 18 O + | 58 Fe + | 2213 |
58 Ni + | 58 Fe + | 28033 |
R = 3000 – 7500 | ||
32 S 16 O + | 48 Ti + | 2519 |
32 S2 | 64 Zn + | 4261 |
R = 7500 – 10000 | ||
40 Ar 35 Cl | 75 As + | 7778 |
40 Ar2 | 80 Se + | 9688 |
Таблица 2. Некоторые применения ИСП/МС высокого разрешения
Матрица | Измеряемые элементы |
Биологические образцы | |
Плазма крови человека | V, Fe, Cu, Zn, Ag, Al, Si, P, S, Ti, Cr, Mn, Cd, Sn, U |
Биологические стандарты | I, As, Se, редко-земельные элементы |
Моча | Pt, Rh, Pd, Ag |
Объекты окружающей среды | |
Осадки пылевые частицы воздуха | Pb |
Вода | Si, As, Cd, Cr, Co, Ni, Cu, Pb, Zn, Mo |
Геологические образцы | Tc |
Растения | Pt |
Материаловедение, пищевые продукты, ядерная энергетика | |
Высокочистые Y2 О3 и Gd2 О3 | Редко-земельные элементы |
Al2 О3 | V, Cr, Mn, Fe, Ga, C, Ni, Cu, Zn, Ce |
Радиоактивные отходы | Tc, Th, U, Np |
Вина | Редко-земельные элементы |
Хромато-масс-спектрометрия – метод анализа смесей главным образом органических веществ и определения следовых количеств веществв объеме жидкости. Метод основан на комбинации двух самостоятельных методов – хроматографии и масс-спектрометрии. С помощью первого осуществляют разделение смеси на компоненты, с помощью второго – идентификацию и определение строения вещества, количественный анализ. Известны 2 варианта хромато-масс-спектрометрия , представляющие собой комбинацию масс-спектрометрии либо с газо-жидкостной хроматографией (ГЖХ), либо с высокоэффективной жидкостной хроматографией.
Первые исследования аналитических возможностей хромато-масс-спектрометрии были проведены в 1950-х гг., первые промышленные приборы, объединяющие газо-жидкостной хроматограф и
масс-спектрометр, появились в 60-х гг. Принципиальная совместимость этих двух приборов обусловлена тем, что в обоих случаях анализируемое вещество находится в газовой фазе, рабочие температурные интервалы одинаковы, пределы обнаружения (чувствительность) близки. Различие состоит в том, что в ионном источнике масс-спектрометра поддерживается высокий вакуум (10 -5 – 10 -6 Па), тогда как давление в хроматографической колонке 10 5 Па. Для понижения давления используют сепаратор, который одним концом соединен с выходом хроматографической колонки, а другим – с ионным источником масс-спектрометра. Мол. сепаратор удаляет из газового потока, выходящего из колонки, основная часть газа-носителя, а органическое вещество пропускает в масс-спектрометр. При этом давление на выходе колонки понижается до рабочего давления в масс-спектрометре.
Принцип действия сепараторов основан либо на различии подвижности молекул газа-носителя и анализируемого вещества, либо на их различной проницаемости через полупроницаемую мембрану. В промышленности чаще всего применяют эжекторные сепараторы, работающие по первому принципу. Одностадийные сепараторы этого типа содержат две форсунки с отверстиями небольшого диаметра, которые установлены точно напротив друг друга. В объеме между форсунками создается давление 1,33 Па. Газовый поток из хроматографической колонки через первую форсунку со сверхзвуковой скоростью попадает в область вакуума, где молекулы распространяются со скоростями, обратно пропорциональными их массе. В результате более легкие и быстрые молекулы газа-носителя откачиваются насосом, а более медленные молекулы органического веществава попадают в отверстие второй форсунки, а затем в ионный источник масс-спектрометра. Некоторые приборы снабжены двухстадийным сепаратором, снабженным еще одним подобным блоком форсунок. В объеме между ними создается высокий вакуум. Чем легче молекулы газа-носителя, тем эффективнее они удаляются из газового потока и тем выше обогащение органическим веществом.
Наиболее удобный для хромато-масс-спектрометрии газ-носитель – гелий. Эффективность работы сепаратора, т.е. отношение кол-ва органического вещества в газовом потоке, выходящем из колонки, к его количеству, поступающему в масс-спектрометр, в значительной степени зависит от расхода газа-носителя, попадающего в сепаратор. При оптимальном расходе 20–30 мл/мин удаляется до 9 (3% газа-носителя, а в масс-спектрометр поступает более 60% анализируемого вещества. Такой расход газа-носителя типичен для насадочных колонок. В случае использования капиллярной хроматографической колонки расход газа-носителя не превышает 2–3 мл/мин, поэтому на ее выходе в газовый поток добавляют дополнительное количество газа-носителя, чтобы скорость потока, поступающего в сепаратор, достигла 20–30 мл/мин. Тем самым обеспечивается наилучшая эффективность сепаратора. Гибкие кварцевые капиллярные колонки могут вводиться непосредственно в ионный источник. В этом случае ионный источник должен быть обеспечен мощной откачивающей системой, поддерживающей высокий вакуум.
В масс-спектрометрах, соединенных с газовыми хроматографами, применяется ионизация электронным ударом, химическая или полевая. Хроматографические колонки должны содержать труднолетучие и термостабильные стационарные жидкие фазы, чтобы масс-спектр их паров не налагался на спектр анализируемого вещества.
Анализируемое вещество (обычно в растворе) вводится в испаритель хроматографа, где мгновенно испаряется, а пары в смеси с газом-носителем под давлением поступают в колонку. Здесь происходит разделение смеси, и каждый компонент в токе газа-носителя по мере элюирования из колонки поступает в сепаратор. В сепараторе газ-носитель в основном удаляется и обогащенный органическим веществом газовый поток поступает в ионный источник масс-спектрометра, где молекулы ионизируются. Число образующихся при этом ионов пропорционально количеству поступающего вещества. С помощью установленного в масс-спектрометре датчика, реагирующего на изменение полного ионного тока, записывают хроматограммы. Таким образом, масс-спектрометр можно рассматривать как универсальный детектор к хроматографу. Одновременно с записью хроматограммы в любой ее точке, обычно на вершине хроматографического пика, может быть зарегистрирован масс-спектр, позволяющий установить строение вещества.
Важное условие работы прибора – быстрая запись масс-спектра, который должен регистрироваться за время, гораздо меньшее, чем время выхода хроматографического пика. Медленная запись масс-спектра может исказить соотношение интенсивностей пиков в нем. Скорость регистрации масс-спектра (скорость сканирования) определяется масс-анализатором. Наименьшее время сканирования полного масс-спектра (несколько миллисекунд) обеспечивает квадрупольный анализатор. В современных масс-спектрометрах, снабженных ЭВМ, построение хроматограмм и обработка масс-спектров производится автоматически. Через равные промежутки времени по мере элюирования компонентов смеси регистрируются масс-спектры, количественные характеристики которых накапливаются в памяти ЭВМ. Для каждого сканирования производится сложение интенсивностей всех регистрируемых ионов. Так как эта суммарная величина (полный ионный ток) пропорциональна концентрации вещества в ионном источнике, то ее используют для построения хроматограммы (эта величина откладывается по оси ординат, по оси абсцисс – время удерживания и номер сканирования). Задавая номер сканирования, можно вызвать из памяти масс-спектр в любой точке хроматограммы.
Как описано выше, могут быть проанализированы смеси веществ, достаточно хорошо разделяемые на подходящих колонках хромато-масс-спектрометрии. Иногда удается исследовать и неразрешенные хроматографические пики. Исследуемые вещества должны быть термически стабильны, хроматографически подвижны в интервале рабочей температуры колонки, легко переводиться в паровую фазу при температуре испарителя. Если вещества не удовлетворяют этим требованиям, их можно химически модифицировать, например силилированием, алкилированием или ацилированием гидрокси-, карбокси-, меркапто-, аминогрупп.
Чувствительность хромато-масс-спектрометрии (обычно 10 -6 -10 -9 г) определяется чувствительностью детектора масс-спектрометра. Более чувствительна (10-12 -10 -15 г) разновидность хромато-масс-спектрометрии -м – массфрагментография, называемая также селективным ионным или многоионным детектированием. Суть ее состоит в том, что запись хроматограмм осуществляется не по полному ионному току, а по наиболее характерным для данного вещества ионам. Этот вид хромато-масс-спектрометрии используют для поиска, идентификации и количественного анализа вещества с известным масс-спектром в составе сложной смеси, например при количественном определении следов веществ в больших объемах биол. жидкостей (медицина, фармакология, токсикология, допинг-контроль, биохимия). Осуществляют масс-фрагментографию на хромато-масс-спектрометрах с использованием специального устройства – многоионного детектора либо с помощью ЭВМ, которая может строить хроматограммы по одному или нескольким ионам. Такая хроматограмма, в отличие от обычной, содержит пики лишь тех компонентов, в масс-спектрах которых есть такие ионы. Анализ проводят с применением внутреннего стандарта, в качестве которого часто используют аналог искомого вещества, меченный стабильными изотопами (2 Н, 13 С, 15 N, 18 O).
Другой вариант хромато-масс-спектрометрии заключается в сочетании высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии. Метод предназначен для анализа смесей труднолетучих, полярных веществ, не поддающихся анализу методом ГЖхромато-масс-спектрометрия Для сохранения вакуума в ионном источнике масс-спектрометра необходимо удалять растворитель, поступающий из хроматографа со скоростью 0,5–5 мл/мин. Для этого часть жидкого потока пропускают через отверстие в несколько мкм, в результате чего образуются капли, которые далее попадают в обогреваемую зону, где большая часть растворителя испаряется, а оставшаяся вместе с веществом попадает в ионный источник и ионизируется химически.
В ряде промышленных приборов реализован принцип ленточного транспортера. Элюат из колонки попадает на движущуюся ленту, которая проходит через обогреваемую ИК излучением камеру, где испаряется растворитель. Затем лента с веществом проходит через область, обогреваемую другим нагревателем, где испаряется анализируемое вещество, после чего оно поступает в ионный источник и ионизируется. Более эффективный способ сочетания высокоэффективного газо-жидкостного хроматографа и масс-спектрометра основан на электро- и термораспылении. В этом случае элюат пропускают через капилляр, нагретый до 150 °С, и распыляют в вакуумную камеру. Ионы буфера, присутствующие в растворе, участвуют в ионоооразовании. Образовавшиеся капли несут положительный, или отрицательный заряд. Вдоль капли из-за малого ее диаметра создается высокий градиент электрического поля, причем по мере распада капель этот градиент возрастает. При этом происходит десорбция из капель протонированных ионов или кластеров (молекула вещества + катион буфера).
Метод хромато-масс-спектрометрии используют при структурно-аналитических исследованиях в органической химии, нефтехимии, биохимии, медицине, фармакологии, для охраны окружающей среды и др. [16]
3. Использование хромато – масс – спектрометрии в идентификации загрязнителей природных сред
Возможности хромато-масс-спектрометрии по идентификации сточных вод и отходов накопителей промпредприятий были проверены на объектах г. Днепропетровска. С разной степенью вероятности в воде накопителя завода «Днепрпластмасс» идентифицировано 98 индивидуальных органических веществ, в воде накопителя ОАО «Днепрококс» – 71, в воде накопителя ОАО «Лакокрасочный завод» – 29. Перечень найденных веществ специфичен и отражает технологию производства.
Хромато-масс-спектрометрический анализ трех проб дренажных вод, отобранных в тоннеле метрополитена через 100 м, показал, что содержание органических веществ в них существенно различается. В одной пробе идентифицировано с вероятностью более 80% 30 индивидуальных веществ, в другой – одно, в третьей – три, что дало возможность говорить об отсутствии органической составляющей в дренажных водах на определенном участке метрополитена.
Определение летучих органических соединений в водных пробах выполняли методом парофазного статического анализа (headspase) на хромато-масс-спектрометре Agilent 6890/5973N GC-MS SYSTEM. 10 мл пробы помещали во флакон вместимостью 22 мл, содержащий 5 г безводного сульфата натрия, и герметично закрывали. Затем флаконы помещали в каретку парофазного пробоотборника и выполняли пробоподготовку при следующих параметрах: температура термостата пробоотборника 80 ºС, температура крана-дозатора – 90 ºС, температура интерфейса пробоотборника – газовый хроматограф – 110 ºС, время выдержки образца – 20 мин при интенсивном встряхивании, объем дозирования паровой фазы – 1 мл. Газохроматографический анализ выполняли на капиллярной колонке HP-5 в режиме программирования температуры, ввод пробы с делением потока в соотношении 1:80. Диапазон сканирования масс-спектрометрического детектора 45–270 а.е.м.
Анализ химического загрязнения окружающей среды методами хромато-масс-спектрометрии
В последнее время органические вещества признаны определяющими весь ход гидрогеохимических процессов и техногенеза окружающей среды в целом. Основную часть общего органического загрязнения окружающей среды составляют загрязняющие вещества нефтяного происхождения – сырая нефть, разнообразные продукты ее переработки и отходы после неполного их использования. Вследствие шипрокой вариабельности состава нефтей, многочисленности источников поступления органических загрязняющих веществ в окружающую среду аналитическим методом для корректного количественного их определения в компонентах окружающей среды и установления источников загрязнения является хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС).
В докладе приведены результаты ГХ-МС анализов при исследовании состава и поведения органических загрязняющих веществ в компонентах окружающей среды – природных водах, донных отложениях и почвах юга Западной Сибири на территориях районов с максимальной техногенной нагрузкой. В результате проведенных работ установлено, что на территории работ основным фактором, определяющим распространение органических загрязняющих веществ, является атмосферный перенос. Показана однородность компонентного состава полициклических ароматических углеводородов (ПАУ) в донных осадках бассейна р. Томь, что свидетельствует о дальнем транспорте загрязняющих веществ на взвешенных частицах. Возможности ГХ-МС по определению изомерного состава ПАУ и использование для оценки химического загрязнения природной среды «бензпиренового эквивалента» (В.А. Коптюг, А.Г. Аншиц, А.Р. Суздорф и др., Химия в интересах устойчивого развития, 1997) показали сверхнормативные уровни загрязнения этими токсичными веществами водных объектов на территории Кемеровской и Томской областей.
По результатам ГХ-МС анализов сформирована региональная база данных по органическим примесям, содержащая сведения о более чем 500 химических соединений, идентифицированных методом хромато-масс-спектрометрии в природных водах, почвах, грунтах и донных отложениях.
Маковская Т.И. , Кузьменко Л.П, Баженов Б.А., Аброськина З.В., Дьячкова С.Г.
В настоящее время для пропитки шпал и брусьев на шпалопропиточных заводах нашей страны применяют каменноугольное масло, нефтяной антисептик ЖТК, а также их смеси. При пропитке древесины и хранении готовой продукции происходит загрязнение окружающей среды токсичными и канцерогенными ароматическими углеводородами. Поэтому анализ воздуха рабочей зоны шпалопропиточных заводов (ШПЗ), несомненно, является важной производственной и экологической задачей.
На примере Тайшетского ШПЗ был впервые проведен анализ содержания токсичных и канцерогенных ароматических углеводородов (АУ) в воздухе рабочей зоны методами хромато-масс спектрометрии (ХМС) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Концентрирование химических веществ из воздуха осуществлялось на сорбент «Силохром-120» с последующей термической десорбцией АУ или экстракцией последних диэтиловым эфиром. Методом ХМС [масс-селективный детектор Hewlett-Packard 5972A MSD, капиллярная колонка HP-5 MS (50 м)] показано наличие в воздухе бензола и его производных (толуол, изомеры ксилола и др.), нафталина, антрацена, аценафтена, дибензофурана, фенола, флуорена, хризена. Количественный анализ воздуха методом ВЭЖХ показал, что содержание АУ (антрацена, аценафтена, нафталина) в воздухе рабочей зоны превышает ПДК в два раза. Пробы воздуха отбирали на фильтры АФА-ХП-20. Анализ проводили на хроматографе «Милихром-4», фотометрическое детектирование (l 250 нм), стальная колонка 2х64 мм, сорбент Nucleosil, 100–5, C18, элюирование смесью метанола и (или) ацетонитрила с водой, скорость расхода элюента 0.07 мл/мин.
Продукты пирогинетической переработки скорлупы кедровых орехов
Колосова Н.Н., Оффан К.Б., Качин С.В., Ефремов А.А.
Все возрастающие темпы переработки кедровых орехов в Сибири требуют решения вопросов крупнотоннажной утилизации образующихся отходов с получением широкого ассортимента получаемых продуктов. В связи с этим в данной работе методом ГЖХ, ХМС и химического анализа изучен состав жидких, твердых и газообразных продуктов термического расщепления лигноуглеводного комплекса исходного сырья. Выход основных продуктов пиролиза представлен в табл.
Таблица. Выход продуктов пиролиза скорлупы кедровых орехов (% масс. от а.с.н.).
Продукты пиролиза | Температура пиролиза, о С | |||||||
100 | 200 | 250 | 300 | 350 | 400 | 450 | 500 | |
Твердый остаток | 100 | 93,4 | 80,9 | 42,6 | 40,7 | 36,2 | 35,6 | 34,6 |
Жидкие продукты | — | 5,5 | 16,7 | 49,2 | 41,7 | 40,2 | 37,9 | 36,0 |
среди них: | ||||||||
органические водорастворимые продукты | — | — | 3,45 | 8,57 | 7,12 | 5,46 | 4,22 | 3,69 |
отстойная смола пиролиза | — | — | — | 5,27 | 6,80 | 10,68 | 11,79 | 13,02 |
пирогинетическая вода | — | 5,5 | 13,3 | 35,4 | 27,8 | 24,1 | 21,9 | 19,3 |
Газы пиролиза | — | 1,1 | 2,4 | 8,2 | 17,6 | 23,6 | 26,5 | 29,4 |
среди них: | ||||||||
СО | — | — | 0,21 | 2,09 | 5,93 | 8,18 | 10,00 | 11,85 |
СО2 | — | — | 2,23 | 6,12 | 11,4 | 14,4 | 14,5 | 14,6 |
СН4 | — | — | — | — | 0,20 | 1,03 | 2,02 | 2,97 |
Твердый остаток пиролиза – древесный уголь, образующийся в количестве 34,6% от исходной навески при температуре 500 о С, имеет зольность 1,92%, истинную плотность – 1,42 г./см 3 , пористость – 68% и объем пор – 1,4 см 3 /г, что практически соответствует древесным углям, получаемым при пиролизе древесины различных пород.
Укажем также, что отстойная смола пиролиза может быть с успехом использована в качестве модификатора нефтяного битума при получении органоминеральных композиционных материалов, а газы пиролиза – как исходное сырье для синтеза углеводородов в реакциях Фишера-Тропша.
Анализ и идентификация продуктов синтетического и природного происхождения
Черняк Е.И ., Морозов С.В., Вялков А.И., Зуева О.А., Коллегов В.Ф.
В настоящее время, когда на рынке появляется огромное многообразие различных промышленных и продовольственных продуктов синтетического и природного происхождения, актуальным являются анализ их состава, идентификация компонентов и выявление принадлежности анализируемого объекта к определенной группе и производителю. Изучение качественного и количественного состава различных объектов является основной частью фундаментальных и прикладных исследований в области экологии, разработки новых технологий, продуктов и материалов.
Применение современных высокоинформативных методов газовой, жидкостной хроматографии и хромато-масс-спектрометриии в сочетании с эффективным метрологическим и информационным обеспечением позволяет существенно повыситьдостоверность аналитических данных по анализу и идентификации материалов и продуктов.
На основании исследования биологически активных веществ, эфирных масел, продуктов лесохимических и нефтехимических производств, масложировой и спиртосодержащей продукции, разработаны подходы, методики и рекомендации по анализу и идентификации органических веществ, продуктов и материалов природного и синтетического происхождения, включающие
– выявление характерных признаков анализируемого объекта,
Разработанные подходы использованы для установления фактов фальсификации и контрафакции продуктов и материалов.
Влияние влажности на детектирование ароматических углеводородов и других классов веществ в воздухе с помощью масс-спектрометрии с химической ионизацией при атмосферном давлении.
А.С. Кудрявцев , А.Л. Макась, М.Л. Трошков
Масс-спектрометрия с химической ионизацией при атмосферном давлении (МС ХИАД) является одним из перспективных методов детектирования веществ в газовой фазе. В ходе ион-молекулярных реакций образуются ион-реактанты, которые участвуют в реакциях образования ионов анализируемых веществ. Использование различных ион-реактантов позволяет изменять селективноность детектирования одних классов веществ, по отношению к другим.
В работе были исследованы процессы ионообразования аминов, фосфонатов и ароматических углеводородов в осушенном воздухе (относительная влажность менее 0.05%) с помощью МС ХИАД с коронным разрядом. Показано, что кроме протонированных кластеров воды (H2 O)n H + , которые участвуют в реакциях переноса протона на молекулы анализируемых веществ M, основными ион-реактантами являются NO + , которые участвуют в реакциях переноса заряда. В ходе этой реакции образуется ассоциат MNO + . Показано, что эта реакция является основной в процессе образования ионов ароматических углеводородов. Найдено, что с увеличением влажности газа-носителя концентрация образующегося NO + уменьшается. Показано, что относительная эффективность ионизации бензола по отношению к пиридину в осушенном воздухе равна 0.11 и уменьшается при увеличении относительной влажности воздуха.
Исследование состава хинолизидиновых алкалоидов Maakia Amurensis методом ГХ-МС
Молчанова А.И., Соколова Л.И., Горовой П.Г.
Молодые побеги Maackia amurensis являются отходами при производстве лекарственного препарата «Максар», обладающего гепатозащитным действием. Однако известно, что эта часть растения богата хинолизидиновыми алкалоидами, состав которых до настоящего времени мало изучен. Целью настоящей работы является исследование состава хинолизидиновых алкалоидов M. amurensis .
Газохроматографический-масс-спектрометрический анализ выделенных алкалоидов проводили на приборе фирмы Agilent 5973N GC/MSD (США), колонка HP-5 (30 м? 0,25 мм), при программировании температуры 150° – 270° С, со скоростью 10° /мин. Фрагментацию разделенных пиков проводили в режиме электронного удара (70 эВ).Идентификацию разделенных хроматографических пиков проводили с использованием библиотеки «NIST» и литературных данных по фрагментации отдельных алкалоидов. В коре, заболони (белой древесине) и ядровой (темной) древесине идентифицированы 7 алкалоидов, относящихся к хинолизидиновому ряду: цитизин, N-метилцитизин, N-ацетилцитизин, аммодендрин, 5,6-дегидромаакиамин, анагирин (d-термопсин), спартеин (пахикарпин).
N-ацетилцитизин обнаружен в этом растении впервые, его масс-спектр представлен на рисунке. Фрагментация соединения, которое по нашему предположению является N-ацетилцитизином, соответствует известному соединению N-формилцитизин с отличием в массе молекулярного иона на 14 углеродных единиц (–CH2 -группа).
4. Современное аппаратурное оформление
Хромато-масс-спектрометр «Кристалл МС»
Аппаратно-программный комплекс «Хроматэк – Кристалл 5000» с масс-спектрометрическим детектором
Назначение и область применения
Хромато-масс-спектрометр «Кристалл МС» предназначен для обнаружения и определения веществ и соединений, входящих в состав медицинской, пищевой, сельскохозяйственной и других видов продукции, лекарственных, психотропных и наркотических средств, биологических систем, контроля экологической обстановки.
Область применения комплекса – химический и структурный анализ веществ и соединений в органической химии, медицине, судебно-медицинской экспертизе, криминалистике, токсикологии, при производстве и контроле качества различных видов пищевой, парфюмерной, фармацевтической, промышленной и сельскохозяйственной продукции, при наркотическом и экологическом контроле, а также в учебных, научно-исследовательских учреждениях и центрах санэпиднадзора Министерства Здравоохранения РФ.
Принцип действия комплекса основан на применении методов газо-адсорбционной, газожидкостной хроматографии в изотермическом режиме, режиме линейного программирования температуры колонок и методов масс-спектрометрии.
· газовый хроматограф «Хроматэк-Кристалл К5000.1» или «Хроматэк-Кристалл К5000.2» c комплектом сменных хроматографических детекторов;
· масс-спектрометрический детектор (МСД) DSQ II фирмы Thermo Electron;
· дополнительное газохроматографическое и масс-спектрометрическое оборудование, устройства для ручного и автоматического ввода жидких, газовых, парообразных, твердых проб;
· масс-спектрометрические или хроматографические колонки;
Комплекс кроме масс-спектрометрического детектора может содержать сменные хроматографические детекторы:
1. пламенно-ионизационный (ПИД);
2. пламенно-фотометрический (ПФД);
4. по теплопроводности (ДТП);
Хроматографические детекторы обеспечивают получение информации об анализируемых веществах по времени удерживания, амплитуде и площади пиков. Масс-спектрометрический детектор расширяет возможности анализа за счет получения дополнительной спектральной информации о хроматографических пиках.
Комплекс позволяет реализовывать разработанные ранее методики измерений, формировать и отрабатывать новые методики с использованием методов математической обработки результатов измерений.
Эксплуатация комплекса осуществляется в закрытых взрыво- и пожаробезопасных лабораторных помещениях при номинальных значениях климатических факторов:
· температуре окружающего воздуха от 288 до 304 К (от 15 до 31 С);
· относительной влажности не более 80%;
· атмосферном давлении от 84 до 107 кПа (от 630 до 800 мм. рт. ст.).
Электрическое питание комплекса осуществляется от сети переменного тока напряжением 220В, частотой 50Гц.
Газовое питание комплекса
· азот особой чистоты по ГОСТ 9293 (объемная доля азота не менее 99,996%; объемная доля кислорода не более 0,001%; концентрация водяных паров не более 0,005 г./м3; содержание оксида и диоксида углерода не нормируется);
· гелий газообразный марки А по ТУ 51–940 (объемная доля гелия не менее 99,995%, объемная доля азота не более 0,005%, объемная доля кислорода не более 0,0001%, объемная доля двуокиси углерода не более 0,0002%, объемная доля углеводородов не более 0,0001%, объемная доля водяных паров не более 0,0005%);
· гелий газообразный марки 60 по ТУ 2114–001 – 45905715–02 или по ТУ 0271–001–45905715–02 (объемная доля гелия не менее 99,9999%, объемная доля азота не более 0,000045%, объемная доля кислорода и аргона в сумме не более 0,000015%, объемная доля окиси и двуокиси углерода не более 0,0001%, объемная доля метана не более 0,00001%, объемная доля водяных паров не более 0,0002%) – для работы с МСД.
Питание пламенных детекторов:
· водород марки А по ГОСТ 3022 (объемная доля водорода не менее 99,99%. объемная доля кислорода не более 0,01%, концентрация водяных паров не более 0,5 г/м3, оксид и диоксид углерода отсутствуют), или от генератора водорода 214.4.464.014;
· воздух по ГОСТ 17433, класс загрязненности 1 или от компрессора 214.2.993.002.
· газа-носителя – от 0,36 до 0,44 МПа;
· водорода – от 0,14 до 0,44 МПа;
· воздуха – от 0,17 до 0,44 МПа.
В стандартную комплектацию входит масс-спектрометрический детектор DSQ II.
Название детектора происходит от английского Dual Stage Quadrupole – двустадийный квадруполь и означает, что перед основным аналитическим квадруполем в отличие от обычной схемы построения установлен квадрупольный префильтр. Это обеспечивает, с одной стороны, лучшую фокусировку пучка ионов, с другой стороны, предохраняет квадруполь от загрязнений.
Основные особенности масс-спектрометрического детектора
· Новый источник ионов DuraBrite™ выполнен из высококачественного инертного металла без какого-либо покрытия с минимальной адсорбцией, максимальным выходом ионов и оптимальной работой во всех режимах ионизации (электронный удар, химическая ионизация с детектированием положительных и отрицательных ионов).
· Новая детектирующая система DynaMax XR с современной высокоскоростной цифровой электроникой, которая в сочетании с высококачественными электродами квадруполя, обеспечивает самую высокую скорость сканирования, доступную на квадрупольных приборах.
· Стержни квадруполя выполнены из высококачественного металла с высочайшей точностью, что обеспечивает практически бесконечный срок его службы.
· Стержни квадрупольного префильтра изогнуты, что препятствует попаданию нейтральных частиц из источника ионов на детектор и, соответственно, улучшению отношения сигнал/шум.
· Детектор снабжен современной высокоскоростной цифровой электроникой, которая в сочетании с высококачественными электродами квадруполя, обеспечивает самую высокую скорость сканирования, доступную на квадрупольных приборах.
Технические характеристики масс-спектрометрического детектора
Источник ионизации | электронный удар |
Энергия электронов | регулируемая от 0 эВ до 130 эВ |
Ток эмиссии | до 850 мкА |
Диапазон масс, m/z | от 1 до 1050 а.е.м |
Разрешение | 1 а.е.м |
Стабильность масс | ± 0.1 а.е.м. за 48 часов |
Скорость сканирования | более 11000 а.е.м./с |
Температура источника ионизации | от 125 °C до 300 °C |
Температура переходной линии ГХ-МС | до 350 °C |
Режимы сканирования | полное, сегментное, сканирование по селективно выбранным ионам |
Турбомолекулярный насос с производительностью | 70 л/с, 250 л/с |
Чувствительность в режиме ионизации электронным ударом
При вводе 1 мкл раствора октафторнафталина в изооктане с концентрацией 1 пг/мкл отношение сигнал: шум для массы m/z 272 а.е.м. при сканировании от 200 до 300 а.е.м. со скоростью 5 сканирований в секунду лучше чем:
· 100: 1 (с насосом 200/200 л/сек).
Чувствительность в режиме химической ионизации – положительные ионы
При вводе 1 мкл раствора бензофенона в н-гептане с концентрацией 10 пг/мкл отношение сигнал: шум для массы m/z 183 а.е.м. при сканировании от 80 до 230 а.е.м. со скоростью 2 сканирования в секунду лучше чем (с метаном в качестве газа-реагента):
· 10: 1 (с насосом 200/200 л/сек).
Чувствительность в режиме химической ионизации – отрицательные ионы
При вводе 1 мкл раствора октафторнафталина в изооктане с концентрацией 1 пг/мкл отношение сигнал: шум для массы m/z 272 а.е.м. при сканировании от 200 до 300 а.е.м. со скоростью 5 сканирований в секунду лучше чем (с метаном в качестве газа-реагента):
· 100: 1 (с насосом 200/200 л/сек).
· Полное сканирование в заданном диапазоне (от м1 до м2).
· Сегментированное сканирование (от м1 до м2, промежуток, от м3 до м4, промежуток, от м5 до м6, и т.д.).
· Сканирование по селективно выбранным ионам (SIM) (диапазон сканирования равный одной или нескольким (2–3) массам).
· Полное сканирование и SIM (уникальная характеристика данного детектора).
Линейный динамический диапазон
Простирается примерно от 100 фемтограмм до 10 нг и составляет 10 5 .
Осуществляется нажатием одной клавиши с применением BFB (p-Bromofluorobenzene) и DFTPP (Decafluorotriphenylphosphine).
Дополнительные устройства к масс-спектрометрическому детектору
Система вакуумной откачки
Масс-спектрометрический детектор может комплектоваться системами вакуумной откачки с турбомолекулярным насосом производительностью:
· 250 литров в секунду (для работы в режиме химической ионизации и с хроматографическими колонками большого диаметра);
· или вакуумной системой с раздельной откачкой области ионизации и анализа ионов 200 + 200 литров в секунду. Изменения в производительности вакуумной системы возможны, но это влечет за собой соответствующее увеличение стоимости.
Стандартно детектор комплектуется источником ионизации электронным ударом.
Дополнительно детектор может комплектоваться источником химической ионизации. Опция химической ионизации с детектированием положительно и отрицательно заряженных ионов доступна только на системах с производительностью откачки 250 литров в секунду.
Дополнительно доступна опция импульсной попеременной регистрации положительно и отрицательно заряженных ионов при химической ионизации.
Система прямого ввода пробы
Стандартно детектор не комплектуется системой прямого ввода пробы прямо в источник ионизации.
Система «Прямой ввод» доступна в качестве опции на детекторе с любой вакуумной системой. Доступны как прямой ввод с испарением из микротигля, так и с быстро прогреваемой проволочки. Для использования прямого ввода нет необходимости отключать хроматограф. Вакуумный шлюз устанавливается спереди детектора, а ионизационные объемы меняются с использованием вакуумного шлюза без отключения вакуумной системы.
· Анализ высоко-полярных, термически лабильных компонентов или твердых проб.
· Быстрый простой способ ввода пробы непосредственно в источник ионизации масс-спектрометрического детектора минуя газовый хроматограф.
· Переключение в режим прямого ввода пробы менее чем за 3 минуты без нарушения интерфейса с хроматографом.
· Совместимость со всеми режимами ионизации и масс-спектрометрического анализа.
МСД-650 предназначен для качественного и количественного анализа токсичных компонентов смесей органических соединений как природного, так и искусственного происхождения и их идентификации.
В состав хромато-масс-спектрометрического комплекса входят масс-спектрометрический детектор (собственно МСД-650) и газовый хроматограф «КРИСТАЛЛ-2000».
МСД-650 позволяет автоматизировать процесс рутинного анализа определения токсичных компонентов смесей органических соединений при решении широкого круга задач в экологии, медицинской биохимии, сельском хозяйстве и других областях.
Особая сфера применения комплекса – выявление экологической опасности, связанной с распространением в окружающей среде диоксинов, являющихся супертоксикантами, канцерогенами и мутагенами. Диоксиновые сбросы возникают в процессе практически любого химического производства, в целлюлозно-бумажной промышленности, при уничтожении химических отходов и химического оружия и т.д. Наличие диоксинов должно контролироваться в продуктах питания, лекарствах, упаковочных материалах, практически во всем, с чем соприкасается человек.
Отечественных промышленных аналогов МСД нет.
Прибор прошёл госиспытания и сертифицирован Госстандартом Российской Федерации, номер сертификата – 1297, номер в Государственном реестре средств измерений – 14383–95.
Чувствительность масс-спектрометрического детектора:
· Не менее 10–9 кл/мкг по метилстеарату (с источником электронного удара при разрешающей способности 1000);
· не менее 5’10–9 кл/мкг (при разрешающей способности 10000).
Чувствительность ГХ-МС по метилстеарату (при прямом вводе в капиллярную колонку с источником ЭУ и разрешающей способности 1000):
· не более 500 пг в режиме сканирования;
· не более 50 пг в режиме накопления (без сканирования).
· 650 Да при полном ускоряющем напряжении 5 кВ;
Разрешающая способность (непрерывно изменяется):
· от 0,5 до 30 секунд на декаду масс.
Минимальное время циклического сканирования:
· 0.8 секунды в диапазоне масс 50–500–50.
· оригинальная конструкция источника электронного удара обеспечивает эффективную ионизацию, стабильность в широком диапазоне давлений и токов ионизирующих электронов, а также фокусировку ионного пучка в двух взаимно перпендикулярных направлениях.
· двухкаскадный секторный, геометрия Нира-Джонсона с двойной фокусировкой, коэффициент оптического увеличения 0,778;
· оригинальное решение обеспечивает высокое пропускание.
· угол поворота оптической оси 70°;
· радиус оптической оси 125 мм;
· максимальная индукция 2,2 Тл.
· регистрация ионных токов при помощи вторично-электронного умножителя;
· предусмотрена регистрация на коллектор в виде цилиндра Фарадея;
· динамический диапазон 109.
· два турбомолекулярных насоса производительностью 300 л/с;
· аварийная защита по вакууму, электропитанию и охлаждающей жидкости.
· адаптированная базовая модель хроматографа «Кристалл-2000»;
· высокая температурная стабильность; микропроцессорный блок управления; прямой ввод в капиллярную колонку; дополнительные детекторы; программирование температуры; автоматический дозатор жидких проб.
· прямая стыковка капиллярной колонки с ионным источником;
· температурный диапазон 50 – 400 °С.
· на базе микропроцессорной шины VME, с модулем ‘Master’ V486 3U, IBM PC/AT Industrial Computer;
· связь с центральной ПЭВМ IBM PC/AT 386 организована при помощи моноканала Ethernet со скоростью обмена 10 Мбит/сек;
· периферия центральной ПЭВМ комплектуется по согласованию с заказчиком.
· программный пакет «МС МАСТЕР» (работает в среде Windows), обеспечен диалоговый режим с пользователем;
· программы съёма и обработки масс-спектров низкого и высокого разрешения;
· программы регистрации и обработки хромато-масс-спектрограмм;
сервисные программы для юстировки, тестирования и контроля функциональных каналов прибора.
Хромато-масс-спектрометр POLARISQ – это новое поколение приборов с масс-анализатором типа «ионная ловушка» и внешним источником ионов. Новый высокотемпературный источник ионов, цифровой контроль газа-реагента для химической ионизации, возможность высокоэффективной откачки турбомолекулярным насосом отвечают всем потребностям лабораторного анализа. Этот прибор может решить проблемы в анализе пестицидов, лекарственных препаратов, наркотиков, допинговых средств, диоксинов и во многих других применениях.
· Инжекционный источник ионов
· — Позволяет выполнять юстировку в соответствии с требованиями ЕРА.
– Отсутствие нежелательных ионно-молекулярных реакций.
— Независимо контролируемый нагрев 100 – 300 о С.
· Квадрупольный масс-анализатор ионная ловушка
· — Независимая вакуумная откачка для стабильной работы в независимости от типа хроматографирования.
· — Режимы полного сканирования положительных и отрицательных ионов, режим Ultra-SIM (мониторинг выбранных ионов), режим MSn (n=1–5).
· — Режим интелектуального сканирования «Data dependent»
· — Диапазон массовых чисел до 1000 а.е.м.
· – Конверсионный динод с напряжением ± 10 кВ для детектирования положительных и отрицательных ионов.
· — Вторично-электронный умножитель с расширенным динамическим диапазоном.
· — Цифровая электронная дискриминация шума.
· – Диффузионный насос с воздушным охлаждением со скоростью откачки 100 л/с или турбомолекулярный насос 70 л/с или 250 л/с.
· – Электронно-охлаждаемая (Пельтье) ловушка гарантирует отсутствие фонового загрязнения вакуумного объема.
· — Интеллектуальная вакуумная защита.
· Рабочая станция (минимальная конфигурация)
· — DELL персональный компьютер с процессором Intel Pentium.
· — 256 МБ системная память, 40 ГБ жесткий диск, 1.44 МБ флоппи дисковод, 650 МБ СD ROM с SCSI II интерфейсом.
· — Microsoft Windows 2000 операционная среда.
· — Finnigan Xcalibur система обработки данных и контроля прибора.
· Высокоэффективный газовый хроматограф TRACE GC ULTRA
· Полный контроль компьютером.
· Капиллярный инжектор split/splitless с электронным контролем давления.
· Температура термостата до 450 о С.
· Быстрое охлаждение термостата. От 450 о С до 50 о С за 250 сек.
· Программирование температуры с четырьмя подъемами температуры, скорости подъема от 0.1оС/мин до 120 оС/мин, минимальный инкремент 0.1 о С, восемь независимо контролируемых температурных зон.
Альтернативная и дополнительная комплектации:
· Турбомолекулярный насос 250 л/с для повышения эффективности откачки.
· Режим химической ионизации, включающий вакуумный шлюз и приспособление для смены ионизационных камер для работы в режиме химической ионизации, с цифровым контролем и возможность автоматической оптимизации давления газа-реагента.
· PPNICI импульсная химическая ионизация с попеременной регистрацией положительных и отрицательных ионов
· Упрощенный контроль откачки вакуумного шлюза и ввода инструмента для замены ионизационных камер или прямого ввода.
· Быстрое переключение между режимами ионизации электронным ударом и химической ионизации без замены ионного источника.
· Прямой ввод, обеспечивающий экспрессный и простой ввод образца в масс-спектрометр и проведение анализов высокополярных, термолабильных и нерастворимых соединений
· Автодозатор АS3000, автоинжектор AS3000.
· Парофазный автодозатор HS 2000
· LVI инжектор для ввода больших количеств пробы
· Низкотемпературное охлаждение до -50 о С с жидким азотом или СО2 .
· Программирование температуры инжектора в режимах split/splitless и on-column с электронным контролем давления.
· Послеколоночные интерфейсы – открытый сброс и струйный сепаратор.
Техническая спецификация POLARISQ
Ионизация электронным ударом:
При вводе 10 пг декафторбензофенона в гексане хроматографический пик шириной меньше 4 с на полувысоте. При сканировании по полному масс-спектру в диапазоне 50 – 400 а.е.м. за 0.5 с соотношение сигнал: шум на молекулярном ионе с m/z 362 лучше чем 25:1.
При вводе 100 пг декафторбензофенона в гексане хроматографический пик шириной –1
диафрагменный
1. Основы аналитической химии / Под ред. Ю.А. Золотова. В 2-х т. М.: Высш. шк., 2000.
2. Основы аналитической химии. Практическое руководство / Под ред. Ю.А. Золотова. М.: Высш. шк., 2001.
3. Кунце У., Шведт Г. Основы качественного и количественного анализа / Пер. с нем. М.: Мир, 1997.
4. Пилипенко А.Т., Пятницкий И.В. Аналитическая химия. В 2-х т. М.: Химия, 1990.
5. Юинг Г.Инструментальные методы химического анализа / Пер. с англ. М.: Мир, 1989.
6. Дерффель К. Статистика в аналитической химии / Пер. с нем. М.: Мир, 1994.
7. Кузьмин Н.М., Золотов Ю.А. Концентрирование следов элементов. М.: Наука, 1988.
8. Москвин Л.Н., Царицына Л.Г. Методы разделения и концентрирования в аналитической химии. Л.: Химия, 1991.
9. Тельдеши Ю. Радиоаналитическая химия / Пер. со словац. М.: Энергоатомиздат, 1987.
10.Шараф М.А., Иллмен Л., Ковальски Б.Р. Хемометрика / Пер. с англ. Л.: Химия, 1989.
11.Айвазов Б.В. Введение в хроматографию. М.: Высш. шк., 1983.
12.Сабадвари Ф., Робинсон А. История аналитической химии / Пер. с англ. М.: Мир, 1984.
13.Скуг Д., Уэст Д. Основы аналитической химии / Пер. с англ. В 2 т. М.: Мир, 1979.
14.Гольдберг К.А., Вигдергауз М.С. Введение в газовую хроматографию. М.: Химия, 1990.
источник