Гепатит с количественные и качественные анализы

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

• вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
• эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
• риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
• риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

• положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
• положительный результат качественной ПЦР;
• контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

• до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
• 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
• последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
• 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

• сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
• процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
• в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
• за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
• если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

• самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
• раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
• при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

• позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
• позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
• определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

Гепатит С — это серьезное для любого человека заболевание, поражающее печень. Вызывается патология флавивирусом HCV, в структуре которого присутствует молекула РНК, что и несет общий генетический код вируса.

Патология может быть разной формы, все прямо зависит от общего состояния человека и особенностей каждого индивидуального организма.

Подобная структура дает возможность проводить анализ ПЦР на наличие в организме вируса категории гепатита С.

Он позволяет своевременно определить опасный для человека вирус, пройти курс лечения лекарственными препаратами и восстановить здоровье, защитив организм от разрушения печени.

Вирус HCV может проявляться, как в острой — опасной форме, так и в хронической. Если у человека в тот или иной момент был обнаружен данный вирус, ему в обязательном порядке назначается анализ ПЦР.

На основании результатов анализа врач сможет составить схему лечения

Лабораторный медицинский анализ ПЦР на гепатит С представляет собой исследование взятого биологического материала для определения флававируса. Исследование расшифровывается, как полимеразная цепная реакция.

Она показывает общее количественное значение вирусного поражения, его качественные свойства, а также можно определить генотип вируса, в котором содержится РНК.

Важно! Именно на основании данного анализа врач определяет метод, вид терапии и ее длительность. Также посредством анализа можно определить общий эпидемиологический фактор, то есть уровень риска передачи заболевания иным носителям.

Анализ в современной медицине называется еще РНК-анализом. Причина в том, что присущий для гепатита С флававирус имеет в своем составе частицу РНК, размер которой составляет примерно 30-60 нм. Одной из характерных особенностей данного вируса является некоторая склонность к мутации.

Каждый присутствующий подвид или генотип имеет разнообразную резистентность. Именно это обстоятельство становится основанием для разных методик исследования и лечения заболевания, а также дальнейший прогноз при грамотно проведенной терапии.

Проводится анализ строго натощак, то есть венозная кровь сдается до завтрака. Метод тестирования проводится посредством Real-Time PCR или высокочувствительной по современным меркам диагностики, которая проводится в режиме реального времени.

Нижний лимит определения в данном случае составляет 15 МЕ/мл. Анализ проводится строго с использованием закрытых автоматизированных систем. Определить гепатит С можно при помощи таких анализов, как COBAS AMPLICOR с его общим уровнем сенситивности 50-100 МЕ/мл.

Важно! Все виды подобного современного лабораторного исследования проводятся на основе принятия во внимание определенного порога чувствительности.

Речь идет о способности используемого реагента выявлять минимальный уровень способности реагента определять вирус в исследуемом биологическом материале. Если заболевания в организме нет, результат исследования будет выглядеть, как «не найдено».

На картинке изобажена схема анализа ПЦР:

При наличии самых незначительных недомоганий и болей в области печения, стоит сразу обратиться к врачу, который проведет тщательное исследование. Анализ ПЦР на гепатит С, строится на трех основных моментах:

1. Количественный анализ.
2. Качественный анализ.
3. Генотипирование.

Проведенные тесты предоставляют возможность определить и выявить точный характер виремии и разные генетического плана симптомы наличия возбудителя. В прямой зависимости от чувствительности, от диагностической проводимой системы, медицинское исследование можно провести один раз, а также провести определенное подтверждение.

Это нужно провести с целью уточнения ранее полученных результатов, и используется в данном случае более чувствительным реагентом.

Качественный анализ на ПЦР — это иное название такого исследования, как полимеразная цепная реакция. При стандартной чувствительности теста, который позволяет определить присутствие вирусного микроба, показатели будут находиться в пределах 10-500 МЕ/мл.

При негативном анализе на данное заболевание анализ покажет, что общий уровень концентрации в крови больного будет находиться на порядок ниже общего порога восприимчивости к диагностической системе.

Если при проведении качественного ПЦР был получен ответ «не обнаружено», для проведения последующего лечения потребуется узнать общий порог чувствительности реагента. Что касается положительного ответа, то при проведении анализа ПЦР, его можно получить уже на 4-ые сутки после проведенного заражения. Стандартные белковые фракции к установленным флававирусам могут проявиться намного позже.

Общую схему анализов ПЦР можно изобразить следующим образом:

Количественный ПЦР — это особый показатель производимой вирусной нагрузки, отображающий общий уровень концентрации РНК вируса в теле человека. Данный показатель отображает количество ферментов вирусной РНК, который присутствует на одном кубическом сантиметре взятой из вены крови.

Результаты данного исследования в системе медицинского исследования обозначаются в единицах на один миллилитр. На выданных на руках справках данный показатель может иметь вид 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.

Количественный анализ ПЦР назначается тем пациентам перед тем, как провести направленную на борьбу с вирусом терапию. Второй раз проводится на 12-ой неделе лечения, что позволяет грамотно оценить результаты проведенной терапии с гепатитом С. Говоря иными словами, анализ дает возможность определить такие важные параметры, как:

1. Уровень инфекционности, то есть определяется степень риска процесса передачи микробов от одного зараженного человека к здоровому. Чем более высокой является концентрация РНК флававируса, тем выше будет вероятность заражения иного человека, что актуально при сексуальных отношениях.
2. Общий уровень эффективности и выбранного метода лечения.
3. Это идеальная возможность определить длительность и прогноз проведенной противовирусной терапии. Как правило, чем выше нагрузка, тем больше будет длиться терапия.

Стоит знать, что количественный ПЦР зависит от определенного типа лабораторного теста и порога чувствительности. Самой нижней границей установленного норматива считается показатель, не достигающий 600.000 МЕ/мл.

Средний показатель находится в диапазоне от 600.000 до 700.000 МЕ/мл. Если были получены результаты выше 800.000 МЕ/мл, врач сразу определяет высокий уровень концентрации такого вещества, как РНК с присутствующим в составе вирусом.

Важно! Прямая связь между уровнем HCV RNA и тяжестью заболевания говорит о том, что в общем составе крови присутствует данный вирус, а также отмечает сложность протекания патологии. У пациента может присутствовать достаточно высокая вирусная нагрузка. Кроме того, данная связь свидетельствует о том, что присутствует достаточно серьезное поражение клеток.

По причине достаточно высокой мутационной активности HCV в природе, в процессе проведенного тестирования можно определить, как вид вируса присутствует в составе крови больного человека. В современной медицине известно 11 генотипов вируса такого заболевания, как гепатит С. В него входит достаточно большое количество разных подвидов или субтипов.

В России известны и распространены типы 1,2 и 3. Вообще, генотипирование — это очень важный элемент проводимого анализа. С его помощью врач понимает уровень резистентности или устойчивости патологии к выбранным лекарственным препаратам.

Практически всегда на основании данного анализа строится будущего лечения. Это важно, так как существуют такие правила лечения, как:

Еще одним преимуществом данного анализа является возможность в качестве дополнения определить общее состояние печени. Например, при третьем генотипе HCV заболевание может сопровождаться стеатозом или накоплением жира в клетках печени.

Результат анализа может определить тип гена, но также ответ может выглядеть, как «не типируется», это может говорить о том, что в составе крови присутствует вирус, который определяется именно этой тестовой системой. Это может являться свидетельством того, что генотип совершенно нехарактерен для той или иной географической зоны.

В этом случае стоит сдать анализ еще раз, используя более чувствительные системы диагностирования.

ПЦР — это специальное лабораторное исследование, которое дает возможность с максимально высоким уровнем точности проведенного исследования определить наличие в теле разных инфекционных бактерий. Стоимость данного анализа напрямую зависит от поставленной перед специалистом цели:

1. Забор крови 200 руб.
2. Взятие мазка 300 руб.
3. Проверка на одну инфекцию от 300 руб.
4. Проверка на 6 микробов 1700 руб.
5. Проверка на 9 инфекций 2500 руб.
6. Проверка на 10 бактерий 2700 руб.
7. Проверка на 12 микробов 3100 руб.
8. Проверка на 13 инфекций 3400 руб.

Все формы проведенного исследования позволяют получить максимально точные анализы для определения точного возбудителя во взятом генетическим материале. Вид медицинского обследования подбирается врачом и проводится строго под его профессиональным контролем. Кому-то достаточно самой минимальной проверки состава крови, кому-то может потребоваться более серьезное обследование.

Анализ ПЦР достаточно популярен, как метод медицинского обследования. Это важная проверка, которая позволяет не только провести диагностику патологии, но также назначить максимально эффективное лечение. Данное исследование может быть разным:

Провести анализ можно в любой современной клинике — частной и государственной. Неудобств в процессе исследования не возникает никаких, достаточно просто позаботиться о том, чтобы желудок был пустым. Только так можно получить максимально четкую картину заболевания.

источник

Гепатит С. Чем он опасен для человека. Как диагностировать инфекцию. Что нужно для проведения анализа

Вирус гепатита С или ВГС – инфекционное заболевание, которое несет в себе молекулу рибонуклеиновой кислоты.

Этот тип вируса умеет легко приспосабливаться к условиям обитания и часто трансформируется в разные формы болезни, поэтому нашей защитной системе организма так сложно с ним справиться. Классифицируют шесть главных генетических типов инфекции и десятки подтипов. В наших краях зачастую встречаются первые три типа вируса.

По статистике лишь четверть случаев заболевания ВГС протекают без осложнений, во всех остальных случаях норма, если инфекция перерастает в хронический процесс, который пагубно влияет на внутренние органы. Так гепатит может осложняться печеночным фиброзом – процесс замены печеночных клеток. Дальше осложнения развиваются по цепной реакции: вследствие фиброза появляются раковые опухоли, болезнь печени перерастает в цирроз.

В большинстве случаев инфекция попадает в организм человека по кровеносным сосудам. Диагностируют вирус гепатита С несколькими методами. Отслеживают уровень концентрации антител к ВГС. Инфицирование не произошло, если в крови пациента не будут найдены антитела к ней. В противном случае вирус изучается более глубоко, проводят еще один тест – ПЦР. Только этот метод позволяет идентифицировать РНК вируса спустя всего полторы недели после заражения, во время, когда организм не успевает начать производство антител к инфекции, и последствия заражения никак не отражены на общем состоянии, тем более в результатах других исследований, таких как БАК и биопсия.

Вирусная нагрузка или количественный анализ ПЦР – анализ на определение уровня содержания инфекции в плазме. По сути, количественный анализ – это число молекул инфекционной рибонуклеиновой кислоты в одном миллилитре крови.

Р-ДНК – быстрый, дешевый и не самый точный количественный способ определения вируса на основе выявления клеток разветвленной ДНК. Этот тест может не идентифицировать заражение, присутствующее в организме из-за плохой чувствительности – около 450 МЕ/мл.

Количественный метод транскрипционной амплификации позволяет найти в организме клетки РНК. Этот способ появился сравнительно недавно, он стоит недорого и является достаточно эффективным средством диагностики. Чувствительность теста около 10 МЕ/мл.

Попробуем объяснить результаты анализов. Ниже приведена таблица и расшифровка.

Норма для каждого случая

Результат анализа может быть предоставлен исходя и другой классификации – по концентрации копий молекул вируса в единице жидкости. Усредненно можно полагать, что в одной единице МЕ 4 копии на один миллилитр.

Чтобы определить степень активности инфекции в организме, применяют метод исследования виремии. На основе такого анализа специалист дает заключение о возможности заражения пациентом окружающих, вступающих с ним в тесный контакт. Особой значимости набирает этот анализ при опасности передачи инфекции во время беременности от матери к плоду.

Данный тест проходят пациенты, у которых в крови нашлись антитела к инфекции. Примерно четверть больных острым гепатитом С излечиваются самостоятельно, то есть при клинических исследованиях следов вируса не выявляется. По итогам теста врач прогнозирует дальнейшее протекание болезни и назначает соответственное лечение.

Лечебные процедуры назначаются после проведения исследования ПЦР. Высокие показатели по результатам ПЦР снижают шансы на беспрепятственное восстановление здорового состояния организма, низкие же наоборот – повышают.

Также данный тест проходят пациенты уже параллельно с терапевтическими процедурами: в начале первого месяца, конце первого месяца, в конце квартала и через пол года.

Если уровень заражения с течением времени, а в частности в конце первого квартала лечения, не снижается, значит, лечение малоэффективно. Врачу следует изменить вектор терапии.

Снижение активности заражения определяется понижением в десять раз количеством молекул вируса в крови. То есть если на первой неделе было найдено10000 единиц, а в конце квартала 1000 единиц, инфекция считается угасающей, а лечение стоит продолжать.

После окончания курса терапии все равно необходимо отслеживать состояние инфекции, так как существует опасность рецидивной инфекции, т.е. вирус может снова распространяться, а болезнь прогрессировать.

Результат теста может быть некорректным из-за присутствия человеческого фактора при исследовании материала. Лаборантом может быть не соблюдены условия содержания опытных проб, например:

• попадание грязи на испытуемую пробу
• присутствие в плазме гепарина
• наличие в плазме специальных веществ, действующих на реагенты, входящие в состав ПЦР.

В разных клиниках по одному и тому ж анализу могут предоставить отличающиеся результаты. Причина в различном подходе исследований, работе с разными реагентами. Это вполне обычная ситуация. Уберечь себя от неточного результата анализа можно, если сдавать анализы только в своей проверенной клинике.

В дополнение к уровню виремии необходимо идентифицировать генетический тип инфекции, особенно в период назначения и прохождения курса лечения. Стоит понимать, что характер болезни невозможно выявить путем проведения анализа ПЦР. Для этого служат и обязательны к применению другие тесты, такие как биохимический анализ крови (БАК), биопсия печени и так далее.

Материал для проведения опыта при гепатитах забирают из локтевой вены. Пациент сдает кровь рано утром до приема еды. Настоятельно рекомендуется ограничить физическую работу, организовать рациональное питание, воздержаться от вредных превычек за день до сдачи анализа. Тогда степень достоверности теста будет значительной. Как правило, исследование материала занимает не больше суток, то есть на следующий день после сдачи можно забирать результаты анализа.

источник

Метод ПЦР включает два основных способа исследования биологического материала на поиск вируса гепатита С:

Эти исследования имеют различные задачи.

Качественный анализ на гепатит с расшифровкой подтверждает наличие вируса после того как в крови уже найдены антитела к этому заболеванию. Если исследование дало положительный результат, значит, болезнь обнаружена.

Иными словами, человек инфицирован. Если получен отрицательный результат, это означает, что человек не инфицирован, либо в наличии слишком маленькая концентрация вируса.

Эта концентрация не обнаруживается таким способом.

Помимо этого клиническая картина заболевания строится на основании маркеров гепатита С и расшифровки анализа. Основные маркеры — иммуноглобулины (антитела) M и G. Наличие их в крови пациента указывает на нехарактерный процесс для здорового организма. На основании наличия этих антител больному, как правило, устанавливается первичный диагноз.

Количественный анализ назначается при первичном обнаружении антител и при необходимости проведения лечения.

Также количественный анализ на гепатит С назначают при выявлении микст-гепатитов (заражение сразу несколькими вирусами).

Количественный анализ с расшифровкой проводится с целью:

• прояснения окончательного диагноза;
• выстраивания прогнозов относительно течения заболевания и его лечения — продление, сокращение лечения либо изменение тактики;
• мониторинга терапии.

Чтобы результаты были верными, нужно соблюдать установленный режим перед тем как сдавать кровь:

• прийти в лабораторию натощак, последний раз принять пищу можно за 8 часов до процедуры;
• за два дня до исследования запрещен алкоголь, жирные и жареные продукты;
• ультразвуковые исследования, массаж, физиотерапию перед исследованием проводить нельзя;
• за день запрещен прием лекарств, если прием отдельных препаратов невозможно отменить, об этом сообщается до забора крови;
• перед процедурой рекомендуется снизить по возможности физические и нервные нагрузки.

Выполнение этих требований будет залогом получения верных результатов количественного анализа на гепатит С.

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса.

Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

• для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
• для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
• для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

• гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
• при микст-гепатитах;
• если планируется проведение противовирусной терапии;
• во время и после лечения от гепатита С;
• при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах.

Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа могут подаваться как в единицах МЕ/мл, так и в копиях на мл. При этом коэффициент перевода обычно отличается для разных лабораторий и методик. Его значения колеблются в пределах от одного до пяти, принято считать, что в среднем 1 МЕ — это 4 копии на мл.

Лабораторный анализ на гепатит подразумевает исследование биологического материала на предмет наличия или отсутствия вируса у конкретного человека.

ПЦР качественный позволяет определить наличие вирусного поражения, находящегося в пределах от 10 до 500 МЕ/мл. Негативный ПЦР свидетельствует о том, что концентрация вируса в крови человека ниже уровня восприимчивости диагностической системы. Анализ на гепатит В и С может проводиться уже на 4–5 день с момента попадания вируса в кровь человека.

Вирус обладает высокой мутационной активностью, именно поэтому в процессе выявления заболевания необходимо зафиксировать, какой именно генотип находится в крови у больного человека.

Для этого проводится РНК гепатита С. На данный момент во всем мире официально зарегистрировано 11 разновидностей вируса гепатита С.

На территории РФ чаще всего встречаются 1, 2 или 3 тип.

Определение РНК вируса — это одна из наиболее важных частей всего лабораторного исследования. Именно от результатов генотипирования зависит вид терапии, которая будет назначена врачом, а также время лечения.

Для 2 и 3 генотипа достаточно 20-дневной интенсивной терапии, лечение 1 генотипа может длиться в среднем 50 дней. Дополнительно в процессе генотипирования определяется состояние, в котором находится печень человека, так как гепатит в первую очередь поражает именно этот орган.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это наиболее современный и действенный метод изучения гена вируса и его возможностей. Такая диагностика способна установить разновидность заболевания и определить его дальнейшую мутацию в организме больного.

Анализ проводится путем забора крови, которую в последующем помещают в специальные реактивы, в которых происходит клонирование клеток.

Из одной клетки получается две, и так далее. В итоге появляются сотни ДНК, благодаря которым можно диагностировать возбудитель и выявить вирус на ранней стадии.

Поэтому ПЦР делится на несколько видов:

• качественный анализ — распознает гены инфекция в крови. Если при проведении качественного анализа у пациента подтверждается заболевание, то следует провести количественный анализ, устанавливающий степень инфекции. В результате проведения данной диагностики специалисты пишут “обнаружено/ не обнаружено”. “Обнаружено” — говорит о том, что недуг присутствует в организме и выявлен уже его РНК. “Не обнаружено” — свидетельствует об отсутствии в пробе гена вируса, то есть РНК гепатита отсутствует. Но врачи рекомендуют провести повторное исследование через 10 дней.
• количественный анализ — определяет объем генетического материала инфекции в крови. Такая диагностика помогает установить тяжесть болезни и всю клиническую историю. В результате такого анализа может быть написано только: “Положительно/Отрицательно/Недействительный”. “Положительно” — изображает инфекционную нагрузку. Доктора такой метод диагностики болезни назначают для определения действенности проводимого лечения на 4, 12, 16 и 24 неделях болезни.Если показатель вируса находится в диапазоне 8х10т МЕ/мл, то лечение эффективно, если показатели выше — то нет. “Отрицательно” — ген инфекции не обнаружен. “Недействительный” — такое бывает, если ген вируса обнаружили при качественном, но при этом не выявили при количественном анализе. Встречается подобное при условии, что объем инфекции ниже уровня.

Медиками проводится два вида ПЦР-исследований крови:

• качественный анализ
• и количественный

А также отдельно стоит подчеркнуть возможность выделения генотипа, поступившего в кровь вируса.

Метод качественного исследования назначается с целью обнаружения вируса в крови, поэтому результат анализа может быть только в двух вариациях:

Результат «Не обнаружено» является нормой. Однако возможен ложноотрицательный ответ, что связано с крайне малым количеством вируса в крови.

Но если качественный анализ имеет результат «Обнаружено», такое заключение указывает на наличие возбудителей болезни в крови обратившегося.

Количественный анализ ПРЦ служит для определения концентрации вируса в крови или, иными словами, вирусную нагрузку на организм. Анализ позволяет узнать количество вирусов на единицу взятой у больного крови, определить степень виремии.

В свою очередь, виремия – это состояние, определяемое в медицине, когда вирусы попали в ток крови и распространяются по всему организму. Также результат количественного анализа позволит судить о заразности больного.

Расшифровывается результат количественного анализа следующим образом. В результате анализа указаны цифры, это – количественный показатель вирусной нагрузки.

Для выражения концентрации вирусов используется исчисление в МЕ (международная единица) на мл, либо количество копий на мл. Наиболее часто используется шифрование в МЕ.

Как правило, 1 МЕ/мл сравнимо с 4 копиями/мл.

Соответственно, по объему обнаруженных вирусов можно судить о тяжести заболевания.

Количественный анализ ПРЦ может назначаться во время противовирусной терапии, на разных ее сроках. Как правило, это происходит на 1-й,4-й, 12-й и 14-й неделях.

Необходимо исследование, в данном случае, для понимания эффективности проводимого лечения, когда результат не оправдывает ожиданий, терапию корректируют и ждут следующего срока для проведения анализа.

В зависимости от стоимости исследования, оно может проводиться двумя способами:

• недорогим Р-ДНК методом, который наиболее часто, собственно, и используется. Его недостаток в невысоком пороге чувствительности – искомый ген обнаруживается от 500 МЕ на мл крови;
• более дорогостоящим ТМА способом, который позволяет обнаружить во взятой крови нуклеиновые кислоты вирусных клеток. Благодаря этому, его порог чувствительности начинается от 5-ти МЕ на мл. Его стоимость окупается в том плане, что ТМА диагностику достаточно провести единожды, в отличие от предыдущего метода, ведь чтобы получить достоверный результат необходимо повторять исследование.

Стоит принять во внимание, что по полученным данным исследования невозможно определить степень изменений, произошедших в печени. Эту информацию могут предоставить только биохимия, биопсия или эластометрия.

Достоверность результатов, полученных от проведения любого лабораторного исследования, зависит в некоторой степени от подготовки самого пациента, и ПЦР анализ не исключение. Многие задаются вопросом о том, что такое подготовка к анализам.

Ответ прост — это комплекс мер, рекомендованных врачом и проводимых пациентом за некоторое время до предполагаемого забора биоматериала. Перед сдачей венозной крови для выявления вируса гепатита С человеку необходимо:

• посетить лабораторию в утренние часы обязательно на голодный желудок (пищу допустимо принимать не позднее, чем за 8 часов до предполагаемого визита в лабораторию);
• рекомендовано сократить объем или полностью отказаться на 8–10 часов от употребления всевозможных напитков (чай, кофе, сок), допускается только обычная вода без газа;
• за 48 часов до забора крови необходимо обязательно отказаться от употребления алкогольных напитков, а также слишком жирной пищи;
• лучше воздержаться от курения (минимум за несколько часов);
• не рекомендуется сдавать кровь в один день вместе с другими медицинскими процедурами, например, ультразвуковой диагностикой, массажем, физиотерапией, флюорографией;
• по возможности за 24 часа следует отказаться от приема каких-либо лекарственных препаратов (если они не являются жизненно важными для человека);
• ближайшие 15 минут следует провести в спокойном состоянии, а для этого нужно прийти в процедурный кабинет немного пораньше назначенного времени.

Кроме всего вышеперечисленного, человеку лучше воздержаться от активной физической деятельности и от психоэмоциональных нагрузок.

Существуют некоторые исключения. Например, забор биоматериала можно делать в вечернее и дневное время. Только в этом случае принимать пищу запрещено ближайшие 5 часов перед проведением медицинской процедуры.

При выполнении общего анализа крови при гепатите С можно оценить состояние пациента. Изменения показателей крови не воспринимаются, как специфические симптомы гепатита, однако при данном заболевании происходят такие нарушения, как:

• снижается концентрация гемоглобина, тромбоцитов и лейкоцитов;
• повышается содержание лимфоцитов;
• нарушается свертываемость крови;
• увеличивается скорость оседания эритроцитов (СОЭ).

Если Вы хотите самостоятельно пройти данное исследование буду больным гепатитом С, то мы Вам все-таки рекомендуем посоветоваться с Вашим лечащим врачом, так как информативность вирусного показателя отмечается на 1,4,12 и 24 неделях болезни.

Благодаря такому диапазону можно проследить эффективность или неэффективность проводимого лечения. Установить график улучшения или ухудшения состояния больного способен только лечащий врач.

Поэтому доверьтесь всецело ему.

Данное исследование назначается врачом в случае положительного ответа при диагностике гепатита С. Как правило, оно назначается одновременно с анализом на определение генотипа вируса гепатита С.

О чем говорит расшифровка количественного анализа на гепатит С? В первую очередь, этот анализ говорит о том, насколько пациент инфицирован и, соответственно, заразен. Количественное определение вируса в крови позволяет также определить, насколько эффективна применяемая схема терапии.

Врачи назначают его после 4, 12 и 24 недель лечения. Снижение уровня вирусной нагрузки говорит о том, что терапия выбрана правильно.

Также анализ назначается после 24 недель от момента завершения терапии.

РНК (рибонуклеиновая кислота) — вид макромолекулы, одна из составляющих живой клетки. РНК отвечает за кодировку генетической информации. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет обыкновение мутировать. Известны 6 его подтипов, а также много субтипов.

Болезнь в своей хронической стадии приводит к фиброзу печени — разрастаются соединительные ткани, структура органа постепенно нарушается. Фиброз поддается своевременному лечению, так как печень не подверглась еще разрушительным процессам.

В отличие от цирроза, тяжелого необратимого заболевания печени, в который может перерасти фиброз без принятия необходимых мер вовремя.
.

Человеку с подозрением на наличие у него вируса гепатита, определяют антитела к нему. Если их нет — заболевание исключается, при их наличии прибегают к методу ПЦР (полимеразной цепной реакции).

В молекулярной биологии он является экспериментальным, но занимает ведущее место среди методик диагностирования инфекционных болезней. С помощью него можно значительно увеличить концентрацию фрагментов молекул в пробе.

Через 10 дней после инфицирования РНК уже возможно определить в крови.

Этот метод является единственным, позволяющим выявить заболевание на ранних стадиях. Другими способами (напр., биохимическим исследованием крови) это сделать невозможно, так как печень еще не поражена.

Открыл метод в 1993 году биохимик Кэрри Муллис, за что получил Нобелевскую премию. ПЦР стал прорывом в медицине и науке, так как позволил быстро и точно определять инфекции в крови и других биологических материалах человека. Иными словами, метод ускорил развитие диагностики инфекционных заболеваний.

РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР является эффективным по следующим причинам:

• имеет хорошую чувствительность — определяется даже малое количество вируса в крови;
• определяется сам вирус, а не побочные продукты, создаваемые им;
• определяется вид возбудителя.

После получения показателей количественного анализа необходимо сделать расшифровку результатов анализов на гепатит С. Результаты вычисляются и в единицах МЕ/мл, и в копиях на мл. Для получения результатов, пересчитанных в копии, применяют несколько методик.

• HCV Monitor (коэффициент пересчета на МЕ — 2,7);
• LCX HCV RNA (коэффициент пересчета на МЕ — 3,8).

Таблица. Расшифровка количественного анализа HCV RNA методом ПЦР.

Такая расшифровка результатов анализов на гепатит С помогает определить степень опасности заболевания в плане возможности его передачи. Чем больше обнаружена концентрация вируса в крови при расшифровке, тем выше вероятность заразить другого человека. Также концентрация влияет на успешность назначаемого лечения.

Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу.

Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. МЕ/мл, можно говорить о минимальной концентрации вируса в крови, но не об отсутствии заболевания. Нагрузку более 800 тыс. МЕ/мл определяют как высокую.

Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций. Границей считают 400 тыс. МЕ/мл.

Сдача анализов на гепатит с расшифровкой — надежный современный способ диагностики. Исследования проводятся до лечения, во время и после него, при наличии как острой, так и хронической форм заболевания. Диагностика, проведенная до терапии, определяет его эффективность в дальнейшем.

Во время лечения забор крови делают на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Уже на 12-й неделе показатель виремии должен значительно снизиться.

Если этого не происходит, лечение неэффективно и нужно подыскивать новое. Например, с 1 млн МЕ нагрузка должна уменьшиться до 100 тыс. МЕ.

После окончания лечения проводят расшифровку анализа гепатита С для исключения рецидивов.

Максимум через неделю у пациента окажутся результаты его теста на вирусную нагрузку. Если речь идет о больном, который проходит лечение от гепатита С, то следующий тест ему нужно сделать через месяц; единоразово лабораторный анализ такого типа проводится людям, в крови которых обнаружили антитела; и раз в год при наличии стабильного вирусного ответа.

По итогам разных анализов, результат может быть выдан в формате отрицательного или положительного ответа или с указанием конкретного количества РНК вируса.

Также врач может оставить запись «РНК обнаружены ниже диапазона измерений». Это означает, что РНК присутствуют у пациента, но их настолько мало, что используемый метод не смог показать конкретное количество (требуется дополнительная диагностика).

Количественные анализы хороши тем, что помогают врачам определять меру необходимости перехода на следующий этап терапии или надобность что-то в ней поменять. А также позволяют обнаружить людей, которые из-за высокого содержания в крови РНК вируса могут представлять опасность для окружающих.

Анализ сдается натощак, самой информативной является венозная кровь.

Иногда установленные результаты меняются в соответствии с тем, как хранили и обрабатывали забранную на анализ кровь. Особо стоит обратить внимание, что, одна и та же кровь может дать разные результаты в двух лабораториях.

В случае, когда кровь была загрязнена химическими или же белковыми соединениями, гепарином, хранилась ненадлежащим образом, анализ будет неточным или ошибочным.

Для того чтобы лечение по вирусной нагрузке было скорректировано правильно, необходимо периодически посещать лабораторию и сдавать кровь. Ведь именно снижение показателя в период проведения лечения свидетельствует об успешном применении препарата. В таком случае медики говорят, что терапевтический эффект привел к вирологическому ответу.

РНК может начать снижаться уже на третий день терапии, что оперативно покажет тест.

Считается, что терапия успешная, если на протяжении лечения показатель вирусной нагрузки снизился хотя бы на две единицы. Если уровень РНК остался на прежнем уровне или даже повысился, скорее всего используемый препарат не поможет избавиться от вирусного гепатита С.

Если вирусная нагрузка увеличилась по окончании курса лечения, то скорее всего речь идет о рецидиве. Именно поэтому люди, которые успешно побороли гепатит, должны в дальнейшем периодически сдавать анализ на вирусную нагрузку, чтобы следить за состоянием организма.

med-explorer.ru

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя.

Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HCV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×102 – 1,0×108копий/мл образца.

Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.

Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

>Какой биоматериал можно использовать для исследования?

>Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

>Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания.

HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой).

У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов.

У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания. Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения.

При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается.

Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса.

Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

>Для чего используется исследование?

• Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
• Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
• Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

• При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
• При остром и хроническом вирусном гепатите С.
• При микст-гепатитах.
• При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 400 МЕ/мл).

источник