Анализ пцр при вич инфекции

ПЦР на ВИЧ – один из самых информативных методов молекулярно-генетического диагностирования. Этот способ помогает выявить у пациента разного рода инфекционные недуги и заболевания, которые передаются по наследству. Этот же метод диагностики применим в случае проверки биоматериала на присутствие ВИЧ – тяжелого заболевания, развивающегося на протяжении всей жизни пациента. С медицинской помощью ПЦР оказалась в числе рекомендуемых анализов, проводимых на платной основе при подозрении на вирус иммунодефицита человека. Однако достоверность исследования оправдывает себя только в 80 из 100 случаев.

ПЦР диагностика на ВИЧ расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Для исследования данного вида применяются различные типы биологических материалов. Среди них кровь, кроме этого может использоваться секреция из влагалища пациентки или семенная жидкость у мужчин.

Внимание! Слюна для ПЦР при диагностике ВИЧ не используется. Подобный подход признан неэффективным, поскольку в этом материале антитела к ВИЧ находятся в минимальной концентрации. Это же касается мочи, пота и слез.

Показанием к проведению описываемого исследования, является дважды положительный ИФА (иммуноферментный анализ). Об альтернативных назначениях речь пойдет позже.

В основе анализа на ВИЧ методом ПЦР лежит возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться. Живые клетки состоят из белка и этих самых кислот, иначе говоря, из РНК и ДНК. Молекулы выступают в роли хранителей генетического кода.
При низкой концентрации вирусных частиц (ВИЧ) в биоматериале, проба включает не целые цепочки ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), а только их составляющие, называемые нуклеотидами. Анализ позволяет выявить даже незначительные остатки клеток вируса. Именно этим фактом объясняется способность ПЦР демонстрировать результат на ранних сроках — спустя несколько недель после заражения ВИЧ.

Наиболее качественных результатов от проведения полимеразной цепной реакции стоит ждать при исследовании венозной крови. Пробу расщепляют с помощью оборудования. Затем фракции подвергаются ферментной обработке. Реактивные вещества, объединившись с частицами вирусной ДНК, дублируют ее. Число таких элементов возрастает по принципу цепочки, пока их наличие (не антител) в крови пациента не станет заметно лаборантам. По точно такому же принципу не работает ни один из существующих способов диагностики.

С помощью метода ПЦР можно заблаговременно узнать о развитии вируса в организме. Почему же его нельзя назвать популярным в области бесплатной медицины и делать повсеместно? Дело в том, что такой тест на ВИЧ весьма затратный и требует наличия следующих компонентов:

• матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты, включающая отрезок ДНК, предназначенный для амплификации;
• два праймера (для каждого цепного отрезка);
• химически активный компонент полимераза для ускорения полимеризации вирусных частиц;
• дезоксирибонуклеозидтрифосфаты;
• частицы двухвалентного магния (заряженные);
• специальный раствор для создания благоприятных условий, обеспечивающий должный уровень кислотности, солевой концентрации, количества частиц магния в жидкости.

Внимание! Чтобы защитить образец от перегрева, в материал добавляют небольшое количество вазелина, который содержит жиры и, соответственно, высокую температуру кипения.

Относительно высокий показатель точности анализа объясняется его повышенной чувствительностью, которая стимулирует реакцию на антитела к прочим вирусам.

Для объективной оценки метода в таблице ниже приведем ряд преимуществ и недостатков исследования:

Очевидно, преимуществ методики больше. Если оценивать тип диагностики с точки зрения продуктивности дальнейшего лечения и возможности продления жизни пациенту, ПЦР – самый верный путь к успеху.

Основная особенность описываемого анализа состоит в его способности к ранней диагностики ВИЧ, на что не способны другие методы исследований. Через сколько дней после предполагаемого инфицирования можно сдавать кровь на ПЦР? Обычно этот временной промежуток составляет 10-14 дней. В течение следующих 24 часов пациент получает результат. Возможные отклонения в сроках объясняются индивидуальными условиями работы диагностических центров, клиник.

ПЦР в большинстве своем проводится в целях выявления ВИЧ (синдрома иммунодефицита человека). Однако анализ можно сдать и при подозрении на развитие заболеваний, которые передаются половым путем. Этот же метод применим и в случае диагностики наследственных болезней.

Когда следует сдавать кровь на ПЦР? Биологический материал в большинстве случаев сдается, когда вирус иммунодефицита человека приспособился к условиям организма, простимулировал выработку антител и вызвал первые симптомы ВИЧ. Однако подобное оправдано лишь в случае истечения достаточного количества времени после заражения и предполагает проведение ИФА.

Необходимость же в ПЦР возникает по инициативе пациента, который желает оперативно диагностировать заболевание (если таковое имеет место быть). Причиной тому может быть: незащищенный половой акт, контакт с биологическим материалом инфицированного, недавнее переливание крови и пр.

Определение инфекции ВИЧ при помощи ПЦР по рекомендации специалиста производят в следующих случаях:

• предварительное диагностирование. ПЦР безошибочно подтверждает или опровергает результат ИФА;
• иммуноблоттинг подтвердил диагноз. Иммунный блоттинг является дополнительным способом исследования СПИДа. Оба метода применяются совместно, что позволяет исключить вероятность постановки ошибочного диагноза;
• при подтвержденном ВИЧ-статусе с помощью ПЦР отслеживают эффект от проведения выбранного лечения;
• для анализа крови доноров на присутствие ВИЧ-антител;
• для определения ВИЧ-статуса у новорожденного, когда мать имеет положительный результат. ПЦР в первые дни жизни позволяет определить внутриутробное инфицирование или заражение младенца при прохождении по родовым путям. Тест проводится на 2 – 3 неделе после рождения.

Анализ ПЦР на ВИЧ проводится в специальной лаборатории. Сам тест и трактовка результата не требует много времени: месяца и даже недели. Для взятия крови необходимо до 6 минут. В обычном случае специалисту, чтобы поставить диагноз и выдать заключение, потребуется не больше суток. Первые 8 часов происходит изучение крови, оставшееся время уходит на оформление. Результат можно будет забрать уже на следующий день после взятия пробы. Срок проведения экспресс-тестирования – 2 часа.

Внимание! Полис ОМС дает возможность прохождения теста бесплатно в государственном учреждении здравоохранения.

Почти любая коммерческая лаборатория способна провести исследование, причем, на анонимной основе. Человеку присваивают специальный номер, к которому затем привязывают результаты. Данная информация заливается на сайт учреждения в личный кабинет пользователя.

Данный способ проведения исследований является достаточно дорогим. Связано это с тем, что проводить ПЦР необходимо на новейшем медицинском аппарате, манипуляция требует от специалистов достаточного багажа знаний.

Насущный вопрос: сколько же стоит человеку сдать анализ ПЦР на ВИЧ? Для этого потребуется в районе 56-60 долларов.

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ предусматривает:

• забор крови на проведение исследование;
• дополнительный забор спермы у мужчины и половых выделений у женщины.

Внимание! В результате тест позволяет медикам определить высокую вирусную нагрузку для того, чтобы осуществлять контроль над состоянием больного.

Прочие особенности проведения этого анализа на ВИЧ, которые стоит принять во внимание:

• пару дней до теста пациенту следует снизить количество жирной пищи в рационе;
• забор крови производится на голодный желудок;
• к расщепленным биологическим материалам в особом реакторе добавляются ферменты, синтезирующие различные инфекции;
• анализ проводят в несколько этапов, т. к. деление молекул происходит в арифметической прогрессии. Специальная программа осуществляет сравнение большого количества клеточных структур для выявления ВИЧ.

Методы точной диагностики, к которым относится ПЦР, отличаются высокой стоимостью, но способны на ранних сроках выявить ВИЧ. В лечении подобных патологий самое главное – правильно и своевременно поставленный диагноз, который может улучшить качество жизни человека и ее продолжительность.

источник

Согласно статистике ВОЗ, за 40 последних лет 25 млн человек умерли от СПИДа. Урон от этой инфекции колоссален. Больше всего зараженных оказалось в странах Африки, откуда и пошла эта инфекция. При ВИЧ становится особо актуальной диагностика заболевания. Правда, средств для лечения ВИЧ еще не создано, но рано начатая терапия может удлинить срок жизни пациента и улучшить ее качество.

ВИЧ-инфекция определяется на разных этапах следующими методами:

• ИФА — иммуноферментный анализ.
• Вестерн-блот.
• ПЦР — полимеразная цепная реакция.
• Экспресс-тесты.

Метод ПЦР был разработан американским биохимиком Кэри Муллисом, который получил за это в 1983 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод в медицине при диагностике всех инфекций считается ведущим в силу своей точности и информативности. ВИЧ в этом плане не исключение.

Любая живая клетка содержит РНК и ДНК. Эти нуклеиновые кислоты способны к самокопированию и самовоспроизведению. Для каждой инфекции фрагменты ДНК уникальны. В биологических жидкостях эти обломки нуклеиновых кислот циркулируют. Они улавливаются и распознаются специальной аппаратурой — реактором. Это и есть основа метода. Лаборант ведет подсчет этих фрагментов. У ретровируса ВИЧ отслеживают РНК. Даже при единичных копиях вирусных частиц ПЦР может их обнаружить и посчитать.

В качестве исследуемой жидкости чаще всего используется венозная кровь. Специальные компоненты метода вступают в связь с частицами вируса и делают их определяемыми, потому что происходит многократное увеличение найденных фрагментов.

В случае с ВИЧ результат наличия вируса можно получить задолго до того, как появится клиника. Поэтому в силу своей высокой чувствительности ПЦР имеет такое высокое диагностическое значение. Огромный плюс ПЦР заключается в универсальности метода. Инкубационный период инфекции для ПЦР не преграда.

Метод ПЦР – достаточно дорогой. В этом заключается один из его больших минусов. Для его проведения нужна новейшая аппаратура и высокая квалификация врача-лаборанта. В силу сказанного ПЦР-диагностика не выполняется в небольших населенных пунктах. Сдать анализ можно только в специализированных крупных клиниках.

Стоимость определения ДНК ВИЧ в клиниках Москвы от 2 800 рублей, выяснение с помощью ПЦР вирусной нагрузки (РНК вируса в плазме) – от 8 800 рублей, а резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы – от 16 500 рублей. Как видим, цены достаточно высокие. ПЦР можно провести бесплатно в государственных поликлиниках по полису ОМС. Важно, что процедуру можно сделать анонимно. В регистратуре пациент получает номер, по которому он сможет узнать результат. В современных медцентрах имеются личные кабинеты клиентов, куда эти данные будут внесены.

ПЦР-диагностику на ВИЧ назначают в таких случаях:

• Выявление инфекции у ребенка, рожденного от больной матери или носительницы, чтобы определить внутриутробное инфицирование.
• Если ИФА дал сомнительные результаты (ПЦР на ВИЧ помогает в этом случае поставить окончательный диагноз).
• Для выявления количественного содержания вируса в организме.
• При положительном иммуноблотинге – они с ПЦР дополняют друг друга.
• Тестирование доноров.
• Для ранней диагностики ВИЧ.
• Для определения эффективности и резистентности к АРВТ.

Преимущество указанного анализа и в том, что ПЦР на ВИЧ можно проводить даже детям до года.

Исследование чаще выполняют не для первичной диагностики, а уже в процессе лечения. Первичная диагностика – это серологические исследования (при них определяют уровень антител к ВИЧ). При ложноположительном результате его повторяют – это может быть при низкой вирусной нагрузке.

ПЦР диагностирует ВИЧ, когда еще нет к нему антител. Метод ИФА в этом случае не даст ответа.

А ПЦР на ВИЧ будет уже положительным. Но симптомы данного периода ВИЧ неспецифичны. Пациент сначала долго и безуспешно лечится по поводу ОРВИ у терапевта. Следует иметь в виду, что диагноз ВИЧ только на основании ПЦР не ставится, необходимо прохождение и других комплексных тестов. Метод ПЦР служит чаще вспомогательным для сложных случаев.

Перед тем как сдать ПЦР на ВИЧ, за 2 дня до анализа нужно не употреблять жирную пищу, алкоголь. Также лучше психически и физически не напрягаться. Если пациенту назначен курс иммуностимуляции, его прекращают за 2 недели до анализа.

Кровь лучше сдавать в утренние часы. Исследовать можно и другие биологические жидкости организма (сперму, секрет вагины), но лучшим материалом является кровь. Слюну, пот, мочу и слезы не используют, так как содержание вируса в них минимально.

Достоинствами метода являются крайне малая вероятность ложноположительного результата, универсальность реакции для любых биологических жидкостей организма. Анализ имеет широкий спектр:

• Один забор крови можно использовать для выявления разных инфекций.
• Методика относится к срочным, результат бывает готов уже на следующий день.
• Достоверность составляет от 85 до 98%.
• Наличие ВИЧ можно определить через 10-14 дней после заражения (антител при этом сроке еще нет).
• Нет возрастных ограничений, проводить можно сразу с момента рождения.

Недостатки ПЦР заключаются в следующем:

• Дороговизна анализа.
• Необходимо сложное медицинское оборудование.
• Требуется высокая квалификация лаборанта и врача, берущего анализ.
• Реакция высокочувствительна, поэтому погрешность может составить 20%.
• Может получиться ложноположительный результат, если у пациента есть аутоиммунные процессы, онкология, хронические инфекции.
• Необходима особая чистота помещения лаборатории, потому что вирус может попасть в анализ из воздуха. Тогда результат будет неправильным.

Для лабораторий, в которых проводится ПЦР, для улучшения качества диагностики разработаны специальные жесткие меры по системе СанПиНа на внутренний контроль. Кроме того, должны быть соблюдены все правила работы при такой методике:

• Требуется строго следить на информацией на пробирках.
• Перед забором крови вновь посмотреть и удостовериться в назначении анализа.
• Медсестра должна сделать правильную маркировку пробирок.
• Врач-лаборант должен правильно провести все манипуляции с биоматериалом, чтобы не допустить перекрестное загрязнение.
• Тест-система должна быть отличного качества.

Только при соблюдении всех этих условий погрешность в ответе может составить всего около 2% эпизодов.

Многие интересуются, через сколько ПЦР на ВИЧ будет готов. Диагностирование длится не больше 8 часов. Ответ пациент может получить уже на следующий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Несмотря на массу преимуществ, ПЦР не считается идеальным методом диагностирования. К нему обращаются в случае необходимости получения скрининговых тестов на наличие ВИЧ в организме.

Через сколько сдавать ПЦР на ВИЧ? Достоверный результат можно получить уже при взятии крови через 4-4 дней после предполагаемого инфицирования. Через 2 недели достоверность на ВИЧ составит 98%, а при сроке 5 дней – 80%. Наличие при ПЦР на ВИЧ отрицательного результата будет достоверным, но для абсолютно точного результата проводят и ИФА.

Анализ ИФА будет результативным только при наличии антител к вирусу, это время может занимать от 1-3 месяцев до полугода. Так как ИФА дает вероятность выше (98%-99,9%), ПЦР нельзя назвать 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции. Но зато это единственная методика, при которой не нужно ждать появления антител.

При ВИЧ методом ПЦР можно получить сведения об эффективности АРВТ, о стадии заболевания ВИЧ и количестве ВН (количественная оценка нахождения ВИЧ в организме). Это будет говорить о тяжести и степени изменений.

Сдать анализы на ПЦР при ВИЧ нужно и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не указывает на достоверность ВИЧ-инфицирования клинически.

Сдают анализ не только при заражении и случайной половой связи. Другие поводы:

• Планирование беременности.
• Предстоящая операция.
• Случайная половая связь.
• Некоторые профессии требуют сдачи этого анализа для допуска на работу (педагоги, врачи и другой медицинский персонал).
• Заключенные.
• Больные ТБ.
• Работники МЧС и полиции.
• Вернувшиеся после отпуска из экзотических стран (при желании удостовериться, что нет инфицирования).
• Проститутки.
• Иностранные студенты.
• Наркоманы.

Также к сдаче анализа на ВИЧ может вынудить определенная симптоматика у пациента:

• Резкая потеря веса.
• Диарея, длящаяся больше 3 недель.
• Беспричинное повышение температуры в течение длительного времени.
• Увеличение лимфоузлов.
• Невыясненная причина пневмонии, кандидоза и пр.

Расшифровка анализа – прерогатива лечащего врача, а не лаборанта.

При ПЦР-диагностике ВИЧ РНК вируса выявляется и качественно, и количественно. Этот анализ четко идентифицирует конкретный патоген даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых. Биологический материал можно использовать даже в засохшем виде. Минус же в высокой чувствительности ПЦР, когда ложноположительный результат может дать и присутствие на инструментах или пробирке даже мизерного количества постороннего ДНК.

Задача и возможность ИФА – определение наличия антител к ретровирусу. Хотя его точность 99%, на ранних стадиях он неприменим.

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ определяет присутствие вируса в организме. Результаты в этом случае будут выглядеть следующим образом: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но данное исследование не даст сведений о количестве ретровируса. Такой качественный анализ нецелесообразен тогда, когда уже выявлена ВИЧ-инфекция в организме другими способами.

Контролировать результативность лечения качественным ПЦР невозможно.

Проводится уже только ВИЧ-инфицированным с целью подсчета количества копий РНК вируса в биопрепарате.

Цель такого исследования — мониторинг проводимого лечения и выявление резистентности вируса к нему. Противовирусная терапия в таких вычислениях не назначается врачом вслепую, поэтому будет являться более эффективной. Количественный ПЦР на ВИЧ-инфекцию делают гораздо чаще. Отображается этот анализ копией/мл крови.

Какие результаты могут быть выданы:

• РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл). Нет достоверности диагноза.
• От 20 – до 10 в 6 степени копий/мл – диагноз достоверный.
• Более чем 10 в 6 степени копий/мл — большая ВН.

Лаборатории могут выполнять анализ ПЦР на ВИЧ в режиме Real-time. Это подразумевает наблюдение и численную оценку накапливания продуктов ПЦР при автоматической фиксации результатов.

источник

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР.

Метод определения в пробах материалов, подвергающихся исследованию, любых ДНК и РНК, в случае неэффективности других методов.

Суть этого метода звучит в самом названии.

Поначалу исторический экскурс.

Автор разработки Кэри Мюллис, заработал Нобелевскую премию за работу 1983 года.

Первоначально планировалось научное применение метода, но впоследствии он завоевал свое место и в диагностической медицине.

Этим методом можно определять генетический материал всевозможных инфекций.

Гинекологические и урологические труднодиагностируемые инфекции выявляются этим методом.

Очень часто ПЦР используется для диагностики ВИЧ.

Основы метода, на основании которых работает исследование, основаны на уникальности фрагмента ДНК для каждой инфекции.

Руководствуясь принципом комплементарности, эталонный участок ДНК или РНК делает обнаружение «своего» фрагмента.

И создает большое количество копий этого фрагмента ДНК (или РНК).

Геометрическая прогрессия определяет число копий в течение цикла ПЦР (около 3-х минут).

По прошествии нескольких часов число фрагментов – несколько миллиардов.

Теперь несложно определить и возбудителя инфекции.

Метод силен своей универсальностью.

Для определения фрагментов ДНК (или РНК) возбудителя любой инфекции всегда используется одно и то же стандартное оборудование.

ПЦР славится и своей специфичностью (практически 100%).

Можно использовать один и тот же исследуемый материал для поиска разных возбудителей заболеваний.

У метода очень высокая чувствительность и оперативность.

Всего в течение дня, можно узнать, есть ли возбудитель в организме и какой.

Инкубационный период не мешает проведению исследования.

Нет еще клиники заболевания и антител в крови, но есть ДНК или РНК конкретного возбудителя в организме подвергающегося исследованию.

К недостаткам метода нужно отнести высокую квалификацию врача, берущего материал для исследования, и лаборанта, проводящего исследование.

Также важна высокая чистота помещения, в котором проводят исследование (практически 100%), чтобы результаты исследований были достоверными.

Для ИППП существуют специальные комплексные исследования, при которых определяют наличие сразу нескольких возбудителей.

А теперь поговорим о перспективах ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции.

От четырех до четырнадцати дней спустя, после инфицирования, можно обнаружить ВИЧ данным методом.

Достоверность результата оценивают, когда минуло четырнадцать дней спустя опасной половой связи.

Наличие отрицательного результата говорит о достоверности проведенного исследования.

Но для того чтобы получить непререкаемый результат исследования проводят еще и ИФА.

ПЦР является высокочувствительным методом, в основе которого лежит амплификация (усиление) небольшого участка провирусной ДНК (или РНК) за счёт праймеров.

Праймеры – это специальные реагенты.

Желательная (не обязательная) процедура взятия венозной крови на исследование на ВИЧ-инфекцию.

Проведение ПЦР для диагностики достаточно дорогостоящий анализ.

Его делают не всегда, а в особых случаях.

И если случилась медицинская авария, в которой есть ВИЧ-инфицированные и возможно заразившиеся.

Спустя четырнадцать дней достоверность на наличие ВИЧ-инфекции порядка 98%.

По истечении пяти дней после предполагаемого заражения — 80%.

Анализ ИФА можно делать только тогда, когда появятся антитела к ВИЧ в крови.

Проходит от одного до трёх месяцев, иногда до года.

Поэтому если есть озабоченность по поводу ВИЧ инфицирования, лучше не тянуть, а сделать этот дорогостоящий, но такой необходимый анализ.

Важно знать диагноз как можно раньше.

ПЦР анализ на ВИЧ
рассказывает подполковник
медицинской службы, врач
Ленкин Сергей Геннадьевич

Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.

Нахождение ВИЧ в пробах крови методом ПЦР выполняется двумя вариантами:

• исследуется провирус ВИЧ-инфекции, точнее его ДНК
• исследуется плазма или сыворотка крови на РНК ВИЧ-инфекции

Периферическая кровь, точнее ее мононуклеарные клетки, исследуются на содержание провируса.

По причине того, что ИФА дает вероятность выше 98% — 99,9%, ПЦР не является 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции.

Большой процент ложноположительных срабатываний зависит и от чистоты лаборатории, где проводят исследования, и от квалификации проводящего исследования.

ПЦР на ВИЧ-инфекцию – единственная диагностика до появления антител к ВИЧ.

То есть до минимум трёх месяцев с начала инфицирования.

Прогресс заболевания ВИЧ-инфекцией характеризуется нарастанием количества вируса в крови.

Проведение ПЦР говорит о стадии заболевания ВИЧ и эффективности антиретровирусной терапии.

Помимо вышеперечисленных условий, есть обязательные исследования крови на ВИЧ-инфекцию для:

• новорожденных от ВИЧ-инфицированной матери
• наблюдения за концентрацией ВИЧ-инфекции

Все остальные условия являются необязательными.

Процедура сдачи ПЦР для диагностики наличия ВИЧ-инфекции в организме проста.

Берется венозная кровь и проводится анализ.

Нужно воздержаться от употребления любых продуктов около десяти часов.

Не употреблять алкоголь, ограничить физическую активность, исключить эмоциональные нагрузки.

Для этого нужна очень чистая лаборатория.

При получении положительного результата его обязательно перепроверяют.

Для этого используют референц-лабораторию.

Там проводят более точный исследовательский способ диагностики.

К сожалению, универсальность не 100%, и зачастую результат анализа ложноположительный.

Его используют вспомогательным методом для установления наличия или отсутствия ВИЧ-инфекции в организме.

Если проводят скрининг на наличие ВИЧ-инфекции или ставят диагноз ВИЧ инфицирования, то используют метод ПЦР.

Методом проводят и количественную оценку нахождения ВИЧ в организме.

Так определяется степень и тяжесть патологических изменений в организме.

Уровень концентрации ВИЧ-инфекции, в организме диагностируемого определяют методом ПЦР.

До лечения исследуется кровь методом ПЦР и после, и можно оценить правильность проводимого курса лечения.

Те ли препараты назначают или нужно другие.

Проводят анализ, и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не говорит о достоверности наличия ВИЧ-инфекции в организме.

Есть много поводов для исследования на наличие ВИЧ-инфекции в организме.

Предстоящая операция, планирование беременности, наличие в анамнезе случайных половых связей и другие похожие причины.

Есть категории работников (например, медицинские работники, учителя и другие) для которых эта процедура необходима, для допуска работы с людьми.

Есть определенная тревожная симптоматика, при которой анализ на ВИЧ-инфекцию проводят:

• при резкой потере веса
• при длительной диарее (около 3-х недель)
• при лихорадке невыясненной этиологии
• при росте лимфоузлов в разных местах
• при лимфо- и лейкопении
• при наличии необъяснимой пневмонии, системном кандидозе, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе и других серьезных заболеваниях

Интерпретацией результатов проведенных анализов занимается только лечащий врач.

Какой бы ни был результат — это не повод заниматься лечением самостоятельно.

К тому же результат ввиду несовершенства метода может быть как ложноотрицательным, так и ложноположительным.

Иногда схожие результаты анализов у разных людей свидетельствуют о различной клинике.

Чаще делают количественный ПЦР-анализ на ВИЧ-инфекцию.

Этот анализ дает сведения о количестве вируса и отображается единицей копия/мл.

Расшифровка результатов:

• РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл)
• мизерное количество РНК (чуть больше 20 копий/мл)
• 20 – 10 6 копий/мл
• более чем 10 6 копий/мл

Самый опасный третий и четвертый результат.

Анализы на ВИЧ-инфекцию делают в несколько этапов.

Это занимает период от двух до десяти дней.

Результаты анализов делятся на положительные, отрицательные и сомнительные.

Если результат сомнительный, то немного позже обязательно делают анализ еще раз.

Но даже положительный результат не окончательный.

Пересдача крови на анализ тоже делается.

На достоверность результата влияние оказывает некоторые заболевания и состояния организма.

Проведение анализа может быть конфиденциальным или анонимным.

При конфиденциальном обследовании имя обследуемого человека называется.

При анонимном обследовании анализ делают по идентификационному номеру.

Результат анализа может узнать только подвергшийся обследованию человек.

Даже положительный результат остается тайной.

Это врачебная тайна, и она не может быть нарушена.

Но даже подтвержденный положительный результат еще не приговор.

В современных условиях ВИЧ-инфицированные подвергаются пожизненной антиретровирусной терапии, что позволяет сохранить им жизнь.

Наоборот, чем раньше обнаружено наличие ВИЧ-инфекции в организме, тем плодотворнее будет лечение.

ПЦР относится к молекулярно-биологическим методам исследования.

Помимо диагностики ВИЧ-инфекции и ИППП, метод зарекомендовал себя в генетических разработках, в ветеринарной науке, сельском хозяйстве.

Продукты питания исследуют на содержание ГМО с помощью ПЦР.

Также сфера применения метода судебно-медицинская экспертиза.

Но все же нас интересуют, в первую очередь, перспективы ПЦР для постановки диагноза наличия ВИЧ-инфекции.

С помощью ПЦР выявляются даже единицы ВИЧ присутствия в крови.

Анализ характеризуется очень высокой чувствительностью – от одного до ста единиц ВИЧ.

Выраженная уникальность происходит за счет того, что идет поиск специфичной ДНК (или РНК) присущий конкретному возбудителю заболевания.

Реакция протекания операции копирования фрагментов РНК характеризуется высокой специфичностью метода ПЦР.

Поэтому амплификационная тест-система (ПЦР) выигрывает перед другими тест-системами иммунологического характера (например, ИФА).

Потому что нет «войны» между антигенами.

Еще важна и скорость ПЦР анализа.

Один рабочий день уходит на проведение ПЦР.

Но есть у метода и негативные качества.

Если ВИЧ-инфекция попадет в исследуемую кровь случайно, из воздуха, при ее отсутствии в организме, реакция копирования вируса все равно будет идти.

Поэтому и нужна такая стерильность в лаборатории, в которой проводиться ПЦР.

Благодаря большому непостоянству генетического материала ВИЧ уменьшаются диагностические показатели чувствительности.

Хотя сам метод очень чувствительный.

Чувствительность метода ПЦР характеризуют 98%. У ИФА этот показатель выше – 99%.

А за данными статистики или вовремя не продиагностируемые заболевшие или, наоборот, неправильно продиагностируемые о наличии в организме ВИЧ-инфекции.

Для лабораторий, в которых ПЦР проводиться, разрабатываются специальные системы внутреннего контроля, с целью повышения качества диагностики.

На основе стандартизированных межлабораторных панелей качества минимализируют ошибки тестирования.

Если все сделано правильно, без ошибок, то с помощью ПЦР можно определить только один фрагмент провируса на десять тысяч – сто тысяч лимфоцитов.

Методом определяют и резистентность к препаратам антиретрорвирусной терапии.

Конечно, метод несовершенный, но у него большие перспективы.

Особенно на ранних стадиях инфицирования, когда в крови еще нет антигенов.

Метод хоть и недешевый, но правильно проведенный, с соблюдением всех условий правильной постановки, очень информативный.

В умелых руках ПЦР мощный диагностический инструмент.

Главное – уметь им пользоваться и избегать всевозможных ошибок.

источник

Способ лечения болезни, вызванной вирусом иммунодефицита человека, не найден до сих пор. Зато диагностика достигла серьезных успехов. Анализ на ВИЧ, выполненный методом ПЦР, – один из вариантов выявления вируса в организме.

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР, – один из современных методов диагностики ВИЧ. В его основе лежит способность нуклеиновых кислот к саморепродукции. Клетка любого живого организма включает белок и нуклеиновые кислоты:

• РНК- рибонуклеиновую,
• ДНК- дезоксирибонуклеиновую.

Эти макромолекулы хранят генетический код. Если концентрация вирусных клеток в крови низкая, в пробе содержатся не целые цепочки ДНК, а их отдельные «кирпичики» – нуклеотиды. Полимеразная цепная реакция выявляет даже такие «обломки» вирусных клеток. Этот анализ крови на ВИЧ позволяет получить результат на ранних сроках после возможного заражения, когда клинические первые симптомы еще не появились.

Наиболее точный результат можно получить, используя для анализа венозную кровь. Перед тем как пройти обследование, за пару дней следует отказаться от жирной пищи и алкоголя. За 2 недели прекратить прием иммуностимулирующих препаратов.

Пробу биоматериала расщепляют в медицинском лабораторном реакторе. Затем фракции обрабатывают ферментами. Реактивы объединяются с ДНК вирусной молекулы и дублируют ее. Из одной клетки получается 2, из 2-х – 4, далее 8. Число растет в геометрической прогрессии. Цепная реакция позволяет в короткий срок увеличить количество вирусного компонента и сделать его заметным для лаборантов.

Нормой является отрицательный результат анализа, который выглядит так: «ДНК вируса не обнаружено». Это и есть референсное (среднестатистическое) значение.

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР имеет неоспоримые преимущества, но есть и существенные недостатки. К первым относятся:

• Высокая точность. Крайне мала вероятность получить ложноотрицательные результаты.
• Универсальность. Для исследования подходит не только кровь, но и другие биологические жидкости (влагалищные выделения, сперма). Слюна, моча также используются, но точность результата будет ниже. В этих средах концентрация вирусных клеток незначительна.
• Широкий спектр анализа. Один образец биоматериала можно исследовать на несколько заболеваний.
• Скорость выполнения. Полимеразная цепная реакция относится к срочным методам диагностики. Ответ можно узнать уже на следующий день.
• Достоверность составляет 80 %. С помощью метода ПЦР можно обнаружить вирусные частицы, даже если их концентрация невелика. Это позволяет диагностировать заболевание на ранних стадиях и своевременно начинать терапию.
• Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции. Время, когда ВИЧ обнаруживают в крови при помощи ПЦР, – 10-14 дней после предполагаемого заражения. Это стандартный отрезок для диагностики вируса иммунодефицита. Антитела на этом этапе еще не обнаруживаются; метод ИФА не работает.
• Нет возрастных ограничений. Можно проводить это тестирование ребенку с момента рождения.

Недостатки метода ПЦР при диагностике ВИЧ:

• Более высокая стоимость в сравнении с иммуноферментным анализом 3 поколения.
• Требуется сложное медицинское оборудование.
• Погрешность 20% в связи с высокой чувствительностью реакции. При аутоиммунных заболеваниях, злокачественных опухолях, хронических инфекциях ПЦР может дать ложноположительный результат.

Проведение этого анализа на ВИЧ рекомендовано в следующих случаях:

• Нужен ранний ответ для предварительного диагностирования. ПЦР помогает подтвердить или опровергнуть результаты ИФА.
• Иммуноблоттинг дал положительный результат. Если первым проводится ПЦР анализ, то обязательно подтверждение результата методом иммунного блоттинга. Исследования дополняют друг друга. Используя сразу 2 метода, медики исключают возможность ошибок.
• Когда позитивный ВИЧ-статус подтвержден, ПЦР помогает отследить эффективность проводимой терапии.
• Используется для исследования донорской крови на наличие антител к ВИЧ.
• Проводить ПЦР можно даже детям до года. Этот метод применяется, чтобы выяснить ВИЧ-статус новорожденных, мамы которых являются носительницами вируса. Тест, проведенный в первые дни жизни, покажет, произошло ли внутриутробное инфицирование. Заражение могло случиться, когда ребенок проходил по родовым путям. Положительный ВИЧ-статус, приобретенный младенцем в процессе родов, удастся выявить через 2 – 3 недели.

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ и расшифровка результатов не требуют много времени. Забор крови занимает 5-7 минут. В стандартном случае лаборанту достаточно 24 часов, чтобы подготовить справку. Диагностирование занимает не более 8 часов, остальное время требуется на оформление. Пациент получает отчет на следующий рабочий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Исследования на ВИЧ указанным способом не проводят по полису ОМС. Получить эту услугу бесплатно в государственной поликлинике нельзя. Зато практически все коммерческие лаборатории обычно имеют необходимое оборудование и реагенты. Проведение анализа ПЦР часто входит в общий скрининг на ВИЧ. Цена комплексной диагностики составляет от 600 до 1000 руб.

Пройти процедуру можно анонимно. В регистратуре пациенту дают индивидуальный номер, по которому он узнает результат. Современные медицинские центры отображают все данные на своем сайте в личном кабинете клиента.

источник

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод молекулярной генетики, который позволяет анализировать любую короткую последовательность ДНК (или РНК) даже в образцах, содержащих только мельчайшие количества ДНК или РНК, тем самым определив наличие/отсутствие патогенного возбудителя (определить, например есть ли в человеке вирус ВИЧ или гепатита Б или микобактерии туберкулёза). ПЦР используется для воспроизведения/умножения/клонирования (амплификации) выбранных участков ДНК или РНК для анализа.

Метод ПЦР настолько прост, что его может поставить даже школьник)

Раньше амплификация ДНК включала клонирование сегментов, представляющих интерес, в векторы для экспрессии в бактериях и занимала недели. Но теперь, когда ПЦР делается в пробирках, требуется всего несколько часов. ПЦР является высокоэффективной, так что из ДНК может быть сделано огромное количество копий.

Более того, ПЦР использует те же молекулы, которые природа использует для копирования ДНК:

• Два «праймера», коротких одноцепочечных последовательностей ДНК, которые синтезируются так, чтобы соответствовать началу и концу растяжения ДНК, подлежащей копированию.
• Фермент, называемый полимеразой, который перемещается вдоль сегмента ДНК, считывает его код и собирает копию.
• Куча блоков ДНК, которые необходимо сделать этой полимеразе.

То есть ПЦР — это такая техника при которой частицы ДНК (иногда РНК) умножаются в определенном растворе или на специальной поверхности, где они могут быть депонированы.

ПЦР — это метод, с помощью которого учёные могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

Ключом к пониманию ПЦР является знание о том, что каждый человек, животное, растение, паразит, бактерия или вирус содержит генетический материал — ДНК (или РНК) последовательности (нуклеотидные последовательности или кусочки ДНК (или РНК)), которые уникальны для каждого индивидуума. То есть, если образец содержит сегменты ДНК или РНК,

задача ПЦР как метода — умножить (амплифицировать), сделать как можно больше их копий, чтобы можно было идентифицировать кому они могут принадлежать (определенному человеку, животному или патогенному организму), даже если есть только следы наличия ДНК/РНК.

Однако ПЦР-амплификация является лишь частью диагностического теста. После проведения амплификации амплифицированные сегменты необходимо сравнить с другими нуклеотидными сегментами, но уже из известного источника (например, конкретного человека, животного или патогенного организма). Это сравнение уникальных сегментов часто выполняется путем размещения нуклеотидных последовательностей, сгенерированных ПЦР, рядом с известными нуклеотидными последовательностями от людей, патогенов или других источников в специальном геле.

Когда электрический ток проходит через гель, то различные нуклеотидные последовательности образуют полосы, которые напоминают «лестницу» в соответствии с их электрическим зарядом и молекулярным размером. Это называется гель-электрофорез. Они мигрируют на одни и те же уровни в геле, показывая идентичность нуклеотидных последовательностей. Этот метод является одним из самых популярных последних этапов ПЦР-тестов.

В 1983 году Кари Муллис разработал основные этапы по амплификации ДНК-последовательностей. Он и Майкл Смит были удостоены Нобелевской премии за создание ПЦР в 1993 году.

ПЦР проводится в одной пробирке с соответствующими химическими веществами и при определенной температуре нагревания.

Необходимы следующие реагенты или химикаты:

• Образец, содержащий нуклеотидную последовательность (из крови, волос, гноя, кожи и т. д.).
• ДНК-праймеры: короткая одноцепочечная ДНК, которая присоединена к нуклеотидным последовательностям, которая способствует синтезу комплементарной цепи нуклеотидов.
• ДНК-полимераза: фермент, который, когда ДНК связывается с праймером, спускается по фрагменту ДНК с добавлением структурных блоков ДНК для образования комплементарных пар оснований и, таким образом, синтезирует комплементарную нуклеотидную цепь ДНК (введение термостойкой ДНК-полимеразы, Taq-полимеразы , полученной из термостойких бактерий, заметно улучшает способность к ПЦР).
• Большой избыток структурных блоков ДНК, называемых нуклеотидами (аденин, тимидин, цитозин и гуанин, сокращенные как: A, T, C и G соответственно) в растворе. Когда эти блоки соединены вместе, они образуют нуклеотидную последовательность или одну нить ДНК. Когда эти строительные блоки связывают свой комплементарный строительный блок слабыми водородными связями (например, A будет связываться только с T и G только с C) образуется комплементарная нуклеотидная последовательность ДНК, которая связана с исходной одноцепочечной ДНК. Когда связывание завершается, комплементарная ДНК с двойной цепью образуется в определенной последовательности.

Кари Муллис очень интересный, прикольный дядечка, посмотрите как он интересно рассказывает, как он придумал ПЦР:

Он верит в астрологию, но не верит, что ВИЧ вызывает СПИД.)

Методами ИФА и ПЦР диагностируется ряд заболеваний, которые передаются половым путем.

При подготовке к обследованию пациентам в течение двух дней нежелательно употреблять жирную еду. Как и анализ крови на вирусы, пробы берутся натощак, последний прием пищи был не позднее 8 часов назад. Исключить из рациона жареное и алкоголь. Соблюдая эти несложные требования, вы приближаете результаты своих обследований к более точным.

В список выявляемых заболеваний входят:

• вирус папилломы человека (ВПЧ);
• хламидии;
• герпес (дополнительно назначается анализ крови на герпес);
• уреаплазма;
• микоплазма;
• гонорея;
• цитомегаловирус;
• трихомониаз;
• токсоплазмоз.

В связи с тем, что нет известных симптомов, характерных исключительно для ВИЧ-инфекции, основываясь лишь на жалобах обратившегося пациента, произвести распознавание ВИЧ-инфекции не представляется возможным.

Тестирование на ВИЧ стало необходимостью, т.к. современное мнение общества об этой болезни сводится к тому, что СПИД считают смертельным приговором. Встречались такие случаи, что после нерегулярных сексуальных контактов человек уделяет повышенное внимание сигналам своего организма, находя, а зачастую придумывая все новые признаки смертельной болезни.

Проведение исследования в лабораторных условиях на сегодняшний момент единственный и самый надежный вариант диагностики (анализ крови на ВИЧ). Используют ПЦР для определения следующих проблем со здоровьем:

• для подтверждения или опровержения наличия ВИЧ в период серонегативного окна;
• при сомнительном результате иммуноблота (чтобы установить точное описание патологического процесса);
• при установлении генотипа ВИЧ-1 или ВИЧ-2;
• для установления и наблюдения за вирусной загруженностью организма;
• для выявления ВИЧ-статуса у новорожденных детей, матери которых являются носителями ВИЧ;
• при переливании крови.

Превосходство метода ПЦР при диагностировании инфекционных заболеваний:

1. Нацеленное выявление наличия в организме причины болезни. Большинство имеющихся на сегодняшний день методов диагностики, к примеру, иммуноферментный анализ, показывают наличие в организме элементов, которые представляют собой продукты распада жизнедеятельности инфекционных агентов, что передает информацию о том, что в организме присутствует инфекция. В структуре ДНК отыскивается характерный участок, который является возбудителем инфекции и указывает на ее прямое наличие.
2. Высокая характерность метода ПЦР определена тем, что в тканях, предоставленных для исследования, выявляется уникальный, типичный только для этого возбудителя фрагмент ДНК. Характерность указывается нуклеотидным порядком праймеров.
3. Наивысшая восприимчивость метода ПЦР дает потенциал для обнаружения находящихся в организме клеток вирусов и бактерий, даже если их единицы. Если другими известными на сегодняшний день методами обнаружить возбудителя инфекционной болезни не представляется возможным, то на помощь приходит метод ПЦР-анализа. Если осязаемость микроскопических и иммунологических тестов варьируется от 103 до 105 клеток, то при ПЦР-анализе этот показатель намного меньше и заключен в рамки от 10 до 100 клеток.
4. Стремительность формирования результата довольно значительна, так как не нужно ожидать выделения и взращивания самого возбудителя, что в иных похожих случаях занимает львиную долю времени. Биоматериал обрабатывается в течение 4-5 часов, это дает вероятность обнаружения не только острых, но и скрытых инфекций. Наиболее результативен метод ПЦР-диагностики при исследовании вирусов с наивысшей антигенной переменчивостью и паразитарными агентами, расположенными внутри клеток.
5. ПЦР-методы делают возможным выявить возбудителя не только из лабораторного материалов, принятых непосредственно от пациента, но и из тканей, взятых из внешних объектов его обитания.

При установлении у обратившегося за медицинской помощью пациента утвердительного результата на ВИЧ-инфекции начинают проводить более глубокие исследования больного для выяснения и уточнения характера заболевания и его течения, а также основания и характера вторичных болезней, уровня поражения иммунитета.

Кровь для проведения анализа берется из вены. В период беременности заборы крови на СПИД производятся в неукоснительном порядке. Выводы об отсутствии или присутствии в организме больного вируса иммунодефицита производятся по результатам наличия или отсутствия антител. ИФА нужно производить не сразу после подозрения на заражение, а спустя некоторое время, чтобы в крови пациента образовались антитела. Проходит по разным причинам от 3 недель до 3 месяцев.

Кроме того, выявлено, что результат ИФА может быть и ложноположительным и ложноотрицательным. При очень ранней диагностике на предполагаемую инфекцию, когда антитела к ВИЧ еще не появились, получается ложноотрицательный результат. В таких случаях для уточнения нужно пересдать кровь на ВИЧ по прошествии 1-3 месяцев.

Ложноположительный итог, напротив, может быть получен в случае, когда у обратившегося пациента есть хронические инфекции, онкологические болезни, аутоиммунные заболевания, кроме перечисленных возможны отклонения от нормы и в других ситуациях. Поэтому при утвердительном результате ИФА его непременно перепроверяют наиболее восприимчивыми способами.

ПЦР диагностика входит в ряды нынешних наиболее высокотехнологичных способов проведения исследований, достаточно часто используется при выявлении инфекционных заболеваний. Диагностирование ДНК вобрало в себя несколько различных способов проведения исследований, в большей степени популярен сегодня метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР.

В основе этого метода лежит нахождение в тканях для микроисследования малой части ДНК возбудителя данной инфекции. При этом малая часть ДНК заключает в себе пары ДНК количеством до нескольких сотен, которые находятся в строгом порядке.

Метод ПЦР является наиболее точным, с его помощью возможно определение наличия вируса вне зависимости от того, появились антитела или нет. Но, несмотря на свою точность, метод имеет один серьезнейший недостаток, который как раз и вызван его повышенной точностью. Существует достаточно высокая вероятность, что результат окажется ложным. Поэтому в связи с этим методом и в дополнение к нему применяют иные способы для обнаружения генного и антигенного материалов.

Существует пять доказанных вирусов, вызывающих болезни печени. Это известные вирусы гепатита А, В, С, D, Е. Очень редкими являются случаи, когда гепатит вызывается вирусом Эпштейна-Барр, который на деле является разновидностью герпеса. Перечисленные вирусы являются представителями разных семейств, что отражается на их лечении в зависимости от вида гепатита.

источник