Анализ вестерн блот на сифилис

Тест Вестерн-Блота проводится, когда у пациента подозревается диагноз болезнь Лайма. Вестерн-блоттинг — метод, который заключается в поиске специфических антител против бактерий, вызывающих болезнь Лайма. Что такое тест Вестерн-блот? Как интерпретировать результаты исследования?

Вестерн-блоттинг— это тест, который ищет антитела, которые организм вырабатывает против бактерий, вызывающих болезнь Лайма . На поверхности бактерий существуют антигены, против которых организм имеет специфические антитела в классе IgM и IgG. IgM.

Иммуноглобулины M (IgM) — производятся, когда наш организм впервые встречает данный патоген. Увеличение количества IgM против данного патогена указывает на начало процесса заболевания.

Иммуноглобулины G (IgG) продуцируются организмом после IgM, самый высокий уровень достигается около полугода после заражения, и в отличие от IgM антитела могут сохраняться в крови в течение очень долгого времени, даже нескольких лет.

Вестерн-блот используется во втором этапе диагностики боррелиоза — когда тест ELISA (первый тест) дал положительный или сомнительный результат. Однако он не используется, когда тест ELISA дал однозначно отрицательный результат.

Тест Вестерн-Блот на боррелиоз (болезнь Лайма) точно оценивает антитела к различным фрагментам бактерий. Различные антитела
против отдельных бактериальных фрагментов графически отражены как черные полосы на нитроцеллюлозной бумаге.

1. Для проведения теста необходимы два основных элемента: сыворотка крови пациента и убитые и фрагментированные культивируемые бактерии боррелиоза.

Не делайте этот теста вскоре после укуса клеща. Подождите минимум 4 недели. Стоимость исследования методом Вестерн-Блоттинг в обоих классах антител составляет около 2500-5000 рублей.

2. Под воздействием электрического тока происходит распределение на факторы, в первую очередь бактерий, полученной из культуры клеток, в том числе на бактериальные белки (антигены). Затем эти белки переносят на нитроцеллюлозную мембрану. Мембрана разрезается на полоски.

3. Полоска с антигенами, в сочетании с сывороткой крови пациента, окрашивается с использованием специальной методики, которая обнаруживает антитела, специфически связанные с антигенами Sprechete Borrelia.

4. В местах, где антитела пациента связаны с белками (антигенами) бактерий боррелиоза, мы замечаем характерные полосы (что указывает на инфекцию бактериями Лайма). Результат теста положительный.

Каждая полоса соответствует бактериальному белку (антиген). Если белки клеток Боррелиоза и антитела не соединяются, полоса не появится. Тогда результат отрицательный.

Тест Вестерн-Блот — когда надо делать?

Ранняя диагностика болезни Лайма проблематична из-за так называемого серологического окна. Это период от начала инфицирования до старта продуцирующего детектируемых антител организмом. В случае болезни Лайма серологическое окно длится в среднем 4 недели.

Выполнение тестов менее чем за 4 недели после укуса клещей создает риск получения ложноотрицательного результата.

Тест Вестерн-Блот — положительный результат

Наличие антител против Боррелий означает, что у вас болезнь Лайма. Однако трудно ответить на вопрос, активна ли инфекция или нет.

IgG-антитела, полученные в результате инфекции, можно обнаружить в крови даже через 10, а иногда через 20 лет после диагноза болезни Лайма.

Также случается, что обнаруженные антитела класса IgM (обычно считающиеся активным маркером инфекции) могут быть постоянными и также не указывают на активную инфекцию.

Тест может дать отрицательный результат в начальный период заболевания, т.е. В первые несколько недель после укуса.

Вестерн-блоттинг может быть выполнен не только при подозрении Лайма, но также при заражении H. pylori (который вызывает язвенную болезнь) или ВИЧ.

Тест Вестерн-блот может дать ложно отрицательный результат и в другой ситуации — когда в старом хроническом боррелиозе производство антител было остановлено или когда антитела были полностью использованы в борьбе с этим заболеванием.

Если подозрение на болезнь Лайма сильное, исследование Вестерн-Блот стоит несколько раз повторять, например, каждые несколько недель, чтобы попасть на такой момент, когда антитела присутствуют в крови.

Наличие антител в активной болезни Лайма варьируется, и у человека с отрицательным результатом есть шанс получить положительный результат при повтороном тесте через несколько недель. Иногда подтверждение диагноза получают только после четвертого или пятого раза.

В этом случае некоторые врачи пытаются получить подтверждение инфекции по-другому: они лечат пациента антибиотиками в течение нескольких недель и через 5-6 недель они направляют его на Вестерн-блоттинг.

Лечение антибиотиками в течение такого времени не может излечить хроническое заболевание, но оно настолько изменяет иммунную систему, что в крови будет достаточно антител, чтобы их можно было обнаружить. Результат Вестерн-блот теста должен интерпретироваться врачом, который специализируется на лечении болезни Лайма

Тест ВБ может проводиться и во время антибактериальной терапии, но с антибиотиками вероятность положительного результата несколько меньше. Самый простой способ диагностировать болезнь с этим тестом — через 6 недель после прекращения терапии антибиотиками.

Интерпретация исследования — это интерпретация полос. Как правило, следует полагать, что чем больше полос, тем надежнее диагноз. Три полоски это уже действительно большая уверенность, а 5-6 полос — болезнь Лайма с практически 100% вероятностью.

Полосы IgM имеют большее диагностическое значение, поскольку они предполагают активную фазу клещевого боррелиоза, хотя обнаруженные антитела в IgM-классе (полосы IgM) могут быть постоянными и не указывать на активную инфекцию. Оказывается потому, что IgM высок в начале инфекции и, вопреки логике, при хронической болезни Лайма.

Повышенные уровни антител в классе IgG можно рассматривать как остаточную инфекцию, или это означает хроническое активное заболевание.

Даже отрицательный результат теста не означает, что болезнь Лайма отсутствует. Отрицательный результат теста означает только, что в крови нет антител против бактерий боррелиоза — это может иметь место, например, когда бактерии вошли в организм, а производство антител еще не началось (врачи называют этот период серологическим окном).

Из-за множества методов проведения этого исследования трудно сделать универсальные рекомендации относительно интерпретации. Каждая лаборатория использует свои критерии.

Болезнь может быть обнаружена только врачом-специалистом на основании симптомов и результатов лабораторных испытаний. Тест Вестер-Блот нельзя интерпретировать без учёта симптомов.

источник

Исследование, направленное на диагностику антител к Treponema pallidum класса IgG методом иммуноблотинга в целях диагностики или подтверждения сифилиса, а также для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum.

Антитела класса IgG к возбудителю сифилиса; иммуноглобулины класса G к антигенам Тreponema pallidum.

Синонимы английские

Syphilis IgG; anti-Treponema pallidum, IgG; anti-TP IgG; antibodies to Т. pallidum, IgG; immunoblotting.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний, передающимся преимущественно половым путем при непосредственном контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром). Возможен и вертикальный путь передачи от инфицированной матери к плоду, а также через кровь и реже при контакте с контаминированными предметами. Источником инфекции является больной человек, возбудитель инфекции – Treponema pallidum (T. pallidum), семейство Spirochaetaceae, род Treponema.

Соответственно клиническому течению заболевания, классифицируют несколько стадий сифилиса: первичную, вторичную, латентную и третичную. Первичный сифилис возникает на 14-21-й день заражения и проявляется возникновением твердого шанкра в месте контакта и проникновения возбудителя. Твердый шанкр представляет собой одну или несколько безболезненных язв, исчезающих в течение 2-6 недель без лечения. Возможно также увеличение регионарных лимфатических узлов. Вторичный сифилис диагностируется на 4-8-й неделе от момента появления твердого шанкра или на 2-3-й месяц после заражения. Для него характерны следующие клинические проявления: розеолезно-папулезная сыпь преимущественно на ладонях и стопах, энантема на слизистых оболочках, слабость, лихорадка, головная боль, генерализованная лимфоаденопатия, тонзиллит, фарингит. Далее симптомы исчезают и инфекция переходит в латентную форму, возможно с возникновением рецидивов. При нелеченном заболевании развивается третичный сифилис, проявляющийся поражением нервной системы, сердечно-сосудистой системы, костно-суставного аппарата.

Клиническая лабораторная диагностика играет важную роль в диагностике сифилиса в сочетании с эпидемиологической и клинической картинами заболевания. Чаще всего используются серологические методы лабораторной диагностики, основанные на выявлении антител.

Различают нетрепонемные и трепонемные тесты. Нетрепонемные тесты направлены на выявление антител к кардиолипину, фосфолипиду, компоненту клеточной и митохондриальной мембран бактерий. Трепонемные тесты выявляют антитела, направленные конкретно против антигенов, компонентов бактерий T. pallidum. К ним относятся реакция пассивной гемагглютинации, реакция иммунофлуоресценции, метод иммуноферментного анализа и метод иммуноблотинга.

Метод иммуноблотинга используется в качестве теста второй линии для подтверждения скрининговых методов исследования или в качестве дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований. Он основан на определении антител классов IgM и IgG к молекулам-антигенам, разделенным с помощью метода электрофореза в соответствии с их молекулярной массой. Диагностическая чувствительность метода составляет 99 %, диагностическая специфичность – 100 %.

Известно несколько липопротеинов-антигенов наружной клеточной мембраны T. рallidum, которые обладают наибольшей иммуногенностью и играют важную роль в серологической диагностике сифилиса методом иммуноблотинга. К ним относятся следующие специфичные мембранные белки: Tp15 (15 кДа), Tp17 (17 кДа), Tp45 (45 кДа), Tp47 (47 кДа). Иммуноглобулины класса G к T. pallidum появляются в крови через 3-4 недели после инфицирования. Их количество постепенно увеличивается, начиная преобладать на шестой неделе заболевания над уровнем иммуноглобулинов IgM. Антитрепонемные антитела класса IgG могут сохраняться на определённом уровне в течение месяцев и лет. Уровень данных антител нарастает в зависимости от длительности заболевания.

Антитела к антигенам трепонем класса IgG играют важную роль в диагностике первичного, вторичного, третичного и латентного сифилиса. Для подтверждения ранее диагностированного инфицирования T. pallidum рекомендуется определение антител класса IgG через один-два месяца после обнаружения антител класса IgM, но обязательно в свежем образце крови. По некоторым данным, антитела класса IgGк Tp17, Tp45 и Tp47 обнаруживаются при первичном сифилисе на его более поздних стадиях. Анти-Tp45 и анти-Tp47 IgG чаще встречаются при латентной форме сифилиса. Через 24 месяца после проведенной патогенетической терапии у пациентов с первичным и вторичным сифилисом антитела класса IgGметодом иммуноблотинга не детектируются.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики сифилиса;
• для подтверждения скрининговых методов исследования;
• для дополнительной диагностики сифилиса при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
• для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum;
• для диагностики первичного, вторичного, латентного и третичного сифилиса;
• для профилактического обследования беременных женщин;
• для оценки проведенной патогенетической терапии сифилиса.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на сифилис и при симптомах данного заболевания: наличие твердого шанкра, генитальных язв, лимфоаденопатии, слабости, лихорадки, розеолезно-папулезной сыпи преимущественно на ладонях и стопах, энантемы на слизистых оболочках;
• при подтверждении скрининговых методов исследования и для дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
• при наличии полового партнера, больного сифилисом;
• при ведении беременностив целях профилактического обследования беременных женщин желательно на первом приеме гинеколога, при постановке на учет в женской консультации;
• при лечении от другого заболевания, передающегося половым путем;
• при определении точной причины заболевания, при наличии неспецифических симптомов, схожих с признаками сифилиса;
• если пациент был инфицирован, он должен повторить анализы на сифилис через 3, 6, 12 и 24 месяца для оценки проведенной патогенетической терапии против сифилиса.

Мембранный белок TpN47: отрицательный.

Мембранный белок TpN17: отрицательный.

Мембранный белок TpN15: отрицательный.

• первичный, вторичный, третичный сифилис;
• латентный сифилис.

• отсутствие сифилиса;
• проведение диагностики на раннем сроке, когда не сформировался иммунный ответ против возбудителя T. рallidum;
• поскольку антитела IgG к T. pallidum могут свободно проникать через плаценту, положительный результат у младенцев не является основанием для постановки диагноза «врождённый сифилис»;
• отсутствие антител класса IgG у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает наличия врождённого заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут ещё не сформироваться.

Что может влиять на результат?

• Возможно получение ложноположительного результата при наличии ВИЧ-инфекции, болезни Лайма, малярии, аутоиммунных заболеваний, в частности системной красной волчанки, при атипичной пневмонии, у людей, употребляющих наркотики внутривенно, у пожилых.



• Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, с учетом анамнеза, клинических данных, результатов лабораторного обследования.
• Для подтверждения ранее диагностированного инфицирования T. pallidum рекомендуется определение антител класса IgG через один-два месяца после обнаружения антител класса IgM, но обязательно в свежем образце крови.
• Отрицательный результат иммуноблотинга не исключает наличие сифилиса.
• Если у пациента выявлено инфицирование, ему необходимо поставить в известность и своего сексуального партнера (партнершу), чтобы он (она) тоже прошел обследование и при необходимости лечение.

[07-047] Treponema pallidum, IgG, титр [07-048] Treponema pallidum, IgM, титр [07-049] Treponema pallidum, антитела [07-056] Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр [07-070] Treponema pallidum, IgG в ликворе [07-117] Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр [07-157] anti-Treponema pallidum, IgM (иммуноблот)

Кто назначает исследование?

Дерматолог, дерматовенеролог, гинеколог, уролог, инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр.

источник

Сифилис, подтверждающий тест (иммуноблот) IgM — современный метод диагностики сифилиса, самый достоверный высокочувствительный метод идентификации белков.

Сифилис — инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передающееся в основном половым путем, склонное к хроническому течению и поражающее большинство органов и систем организма. Сифилис характеризуется медленным прогрессирующим течением. На поздних стадиях он может приводить к тяжелым поражениям нервной системы и внутренних органов.

Клиническая картина при сифилисе
Клинические проявления сифилиса очень разнообразны и зависят от стадии заболевания. Выделяют несколько стадий сифилиса. Первичная стадия наступает примерно через 2–3 недели после заражения. На этой стадии проявляются одна или иногда несколько язв, называемых шанкром, как правило, на той части тела, которая контактировала с шанкром больного человека, например пенисом или влагалищем. Во многих случаях твердый шанкр безболезненный и остается незамеченным, особенно если он находится в прямой кишке или на шейке матки. Шанкр исчезает через 4–6 недель.

Вторая стадия заболевания начинается через 2–8 недель после возникновения твердого шанкра. Она характеризуется появлением сыпи, чаще на ладонях и подошвах. Иногда встречаются и другие симптомы, к примеру лихорадка, усталость, опухание лимфатических узлов, боль в горле и ломота в теле.

Сифилис способен протекать в скрытой форме, во время которой у инфицированного человека не проявляется никаких симптомов, но в то же время он продолжает оставаться носителем инфекции. Это может длиться годами.

Без лечения примерно у 15% больных развиваются симптомы позднего, или третичного, сифилиса. Эта стадия иногда длится несколько лет и приводит к психическим заболеваниям, слепоте, неврологическим проблемам, болезням сердца и даже к смерти.

От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков (предпочтительно применять производные пенициллина). Причем на ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее.

При контакте человека с Treponema pallidum, его иммунная система вырабатывает антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида таких антител: IgM и IgG.

Антитела класса IgM при сифилисе
Антитела класса IgM вырабатываются организмом в первую очередь. Они выявляются в сыворотке крови в конце второй недели заболевания и исчезают у нелеченых больных примерно через 1–1,5 года, при лечении раннего сифилиса — через 3–6 мес., позднего — через год. Они присутствуют у большей части пациентов с первичным и вторичным сифилисом, поэтому тест на IgM может быть использован для различения давней инфекции от только приобретенной.

Специфических трепонемных антител IgM нет у лечившихся в прошлом пациентов, но их отсутствие само по себе не говорит об эффективности проведенной терапии, поскольку у большинства из тех, кто не лечился, в скрытой стадии сифилиса IgM-антитела тоже отсутствуют.

Исследование IgM антител к антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum методом иммуноблота используют в качестве дополнительного специфического трепонемного теста при необходимости углубленного исследования при неубедительных результатах скрининговых и подтверждающих тестов диагностики сифилиса.

Тест основан на методе Вестерн-блота. В ходе исследования выявляют наличие в сыворотке пациента антител класса IgG к электрофоретически разделенным и перенесенным на нитроцеллюлозную мембрану избранным антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum.

Используемые антигены в методе Вестерн-блота:

• 47 кДа мембранный белок (TpN47) — специфичный;
• 45 кДа (TmpA) — специфичный;
• 22 кДа (Р 22) — неспецифичный;
• 17 кДа мембранный белок (TpN17) — специфичный;
• 15 кДа мембранный белок (TpN15) — специфичный.

Показания
В комплексе тестов диагностики заболеваний, вызванных инфекцией Treponema pallidum (сифилис).

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Формат выдачи результата исследования — качественный (описание наличия/отсутствия полос, характеризующих выявление антител к каждому из указанных антигенов; общее заключение о результате исследования в форме: положительный/отрицательный/неопределенный).

Референсные значения: отрицательный.

При общей оценке результата учитывают положение окрашенных полос (специфичность антигена) и интенсивность их окрашивания (поскольку иногда возможна неспецифическая слабая ложная реакция с отдельными антигенами):

• Отрицательный результат: отсутствуют полосы специфических антигенов;
• Неопределенный результат: одна четкая полоса специфического антигена: р15 кДа, р17 кДа, р45 кДа или р47 кДа;
• Положительный результат: более одной четкой полосы специфических антигенов: р15 кДа, р17 кДа, р45 кДа или р47 кДа.

Примечание: для установления диагноза недавней инфекции Treponema pallidum, положительный результат по IgM-антителам должен быть подтвержден положительным результатом по IgG-антителам (сероконверсией), на свежем образце крови, взятом на 3–6 недель позднее.

Специфичность исследования 98%, чувствительность 100%. Положительная предсказательная значимость 94%.

источник

• живые или фиксированные трепонемы;
• очищенные и обработанные ультразвуком трепонемы (соникат). Используются культуральные или (редко) патогенные штаммы T. Pallidum;
• специфические для T. pallidum биосинтетические или рекомбинантные антигены.

• Применяется антиген трепонемного происхождения: используются либо подготовленные трепонемы, либо рекомбинантные белки – антигены возбудителя;
• В тестах определяются трепонемоспецифические антитела
• Методы — диагностические, подтверждающие, «золотой стандарт»
• Высокая чувствительность: чувствительность трепонемных тестов составляет от 70 до 100% в зависимости от вида теста и стадии сифилиса;
• Высокая специфичность: специфичность трепонемных тестов составляет 94 – 100%;
• Ложноположительные реакции при трепонемных тестах отмечаются реже, чем при нетрепонемных;
• «Надежность» при диагностике поздних форм сифилиса

• Проведение скрининга населения (используются методы ИФА, РПГА, простые быстрые тесты). Скрининг отдельных категорий населения на сифилис (доноров, беременных, больных офтальмологических, психоневрологических, кардиологических стационаров, ВИЧ-инфицированных).
• Подтверждение положительных результатов нетрепонемных тестов
• Тесты применяются для исключения ложноположительных результатов (ЛПР), ретроспективного подтверждения диагноза
• Подтверждение в случае расхождения результатов скринингового трепонемного теста и последующего нетрепонемного теста, а также скринингового и подтверждающего трепонемных тестов;

• трепонемные тесты не могут быть использованы для контроля эффективности терапии, т. к. антитрепонемные антитела длительно циркулируют в организме больного, перенесшего сифилитическую инфекцию;
• дают положительные результаты при невенерических трепонематозах и спирохетозах (боррелиоз, пинта, фрамбезия, беджель);
• могут давать ложноположительные реакции у больных с аутоиммунными заболеваниями, проказой, онкопатологией, эндокринной патологией и при некоторых других заболеваниях.
• трепонемные тесты дороже для проведения в расчете на одного больного, чем нетрепонемные тесты, поэтому возрастают затраты при проведении скрининговых обследований на сифилис

• Реакция связывания комплемента (реакция Вассермана) с трепонемным антигеном (РСКт).
• Реакция иммунофлюоресценции (РИФ; Fluorescent treponemal antibody, FTA). Она применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA-200); РИФ-абс (FTA-abs; FTA-abs double staining; FTA-abs IgM; РИФ-абс-IgM; 19S-IgM-FTA-abs); РИФц — реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью.
• Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА; Treponema pallidum haemagglutination assay, TPHA).
• Реакция пассивной агглютинации желатиновых частиц, сенсибилизированных антигенами возбудителя сифилиса (TPPA, Treponema pallidum particle agglutination assay)
• Иммуноферментный анализ (ИФА; Enzyme Lynced Immunosorbent Assay, ELISA).
• ИХЛ — иммунохемилюминесцентное исследование (ИХЛ; Chemiluminescence immunoassays, CLIA)
• Реакция иммобилизации бледных трепонем РИБТ (РИТ), в зарубежной литературе TPI (Treponema pallidum immobilization test). В последние годы используется все реже и только в научных целях и в исследовательских лабораториях.
• Иммуноблотинг (ИБ; Western Blot, Line Blot). Как правило, используется метод линейного иммуноблотинга, являющийся вариантом иммуноферментного анализа. Применяется в двух вариантах: для выявления IgG и IgM-антител к возбудителю сифилиса

Очищенные и разрушенные ультразвуком трепонемы Связаны с эритроцитами РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) Связаны с желатиновыми частицами Реакция агглютинации частиц (TPPA) Связаны с поверхностью лунок микропланшета ИФА

• диагностики всех форм сифилиса,
• контроля за эффективностью лечения,
• обследования лиц, имевших половой контакт с больным сифилисом,
• обследования лиц с клиническим и анамнестическим подозрением на сифилис
• при профилактическом обследовании на сифилис больных психиатрических и неврологических стационаров, доноров и беременных, в том числе лиц, направляемых на искусственное прерывание беременности.

• положительная при иммобилизации 51 — 100% трепонем,
• слабоположительная:31 — 50% неподвижных трепонем,
• сомнительная:21 — 30% неподвижных трепонем,
• отрицательная:0 — 20% неподвижных трепонем.

• РИБТ требует работы с живыми патогенными бледными трепонемами штамма Никольс, остающегося заразным для человека несмотря на адаптацию для кроликов
• постановка реакции сложна, трудоемка и дорогостояща
• необходимо наличия вивария
• требуется высококвалифицированный персонал для постановки реакции, учета результатов и содержания вивария
• субъективность оценки результатов
• отсутствие автоматизации
• нет возможности стандартизировать этот серологический метод.
• реакция неприменима на фоне проводимой антисифилитической терапии
• невозможность использовать для контроля излеченности. РИБТ у больных сифилисом может оставаться положительной в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение.
• реакция может давать ложноположительные результаты у больных злокачественными опухолями, диабетом, лепрой, аутоиммунными заболеваниями, пневмонией, тяжелой сердечно-сосудистой патологией.

• как подтверждающая реакция при раннем, скрытом сифилисе
• при установлении ретроспективного диагноза
• для дифференциации скрытых форм сифилиса и ложноположительных результатов исследований на сифилис.
• как подтверждающий тест при нейросифилисе.

• РИФ-абс – наиболее чувствительный метод серодиагностики сифилиса, становится позитивным раньше других реакций (с 3-ей недели от заражения);
• РИФ-200 (сыворотка пациента при постановке разводится в 200 раз) – высоко специфичный метод серодиагностики сифилиса.
• РИФ-10 (разведение испытуемой сыворотке в 10 раз) — более чувствительный метод, чем РИФ-200.
• РИФ-ц проводят с ликвором.
• РИФ-абс-IgM — выявление ранних противотрепонемных антител класса IgM.

• диагностика скрытых и поздних форм сифилиса,
• выявление ложноположительных результатов КСР и РМП, особенно у беременных и соматических больных при подозрении на сифилис,
• для установления ретроспективного диагноза заболевания.

• простой в постановке и интерпретации,
• не требует специального оборудования,
• время получения результата – 45 минут,
• пригоден для массового скрининга (необходимо всего 25 мкл сыворотки в разведении 1:20),
• высокая степень стандартизации,
• наличие внутренних контролей,
• большой срок годности,
• приемлемая цена
• возможность автоматизации учета.

• возможность неспецифических реакций при наличии антиэритроцитарных антител,
• отсутствие корреляции титра и стадии сифилиса,
• более поздняя позитивация реакции на ранних стадиях сифилиса,
• возможность ложноположительных реакций у лиц, принимавших алкоголь, наркоманов,
• чувствительность к вибрации и температуре в лаборатории.

• использование промышленных тест-систем,
• возможность автоматизации реакции,
• нет необходимости работать с живой бледной трепонемой,
• отпадает потребность в виварии.

• при исследовании сывороток крови пациентов с невенерическими трепонематозами,
• за счет ревматоидного фактора
• за счет перекрестно реагирующих с трепонемным антигеном антител, образующихся при различных системных или индуцированных лекарствами и наркотиками нарушениях обмена,
• из-за аномального уровня иммуноглобулинов;
• у новорожденных детей — за счет образования в организме плода или ребенка IgM-антител к IgG матери, что осложняет трактовку результатов и диагностику врожденного сифилиса.

• загрязненные микропланшеты
• неправильное пипетирование
• наличие вибрации в лаборатории
• температура воздуха в лаборатории выходит за диапазон температуры: 18–25 градусов

• неточное разведение ингредиентов,
• нарушение температурного режима,
• нарушение времени инкубации реагентов,
• нарушение сроков нанесения реагентов на планшет,
• несоответствие рН растворов требуемым,
• загрязнение лабораторной посуды.

• исследование в реакции гиперлипидемичной, гемолизированной сыворотки крови или образцов с признаками бактериального пророста;
• исключение из постановки реакции контрольных сывороток крови;
• неравномерная концентрация эритроцитов в диагностикуме вследствие недостаточного его перемешивания перед использованием;
• нарушение сроков и условий хранения диагностикума и контрольных эритроцитов; использование наборов с истекшим сроком годности;
• использование при постановке реакций загрязненных пробирок, наконечников пипеточных дозаторов, пипеток, иммунологических планшетов, растворов;
• неточности при первичном разведении образца сыворотки крови;
• недостаточная тщательность выполнения последовательных двукратных разведений;
• несоблюдение температурного режима и времени инкубации;
• наличие посторонних вибраций и встряхиваний иммунологического планшета во время инкубации;
• нарушение методики постановки РПГА, выражающееся в отказе от выполнения исследования с контрольными эритроцитами.

• лизатными — полученными в результате разрушения ультразвуком бледной трепонемы;
• пептидными — полученными в результате химического синтеза фрагментов белков бледной трепонемы и имеющими антигенную реактивность, аналогичную исходным белкам возбудителя;
• рекомбинантными — полученными с помощью методов генной инженерии, несущими антигенные детерминанты, идентичные бледной трепонеме.

• Дает возможность дифференцированного и суммарного определения IgM и IgG антител к возбудителю сифилиса.
• высокая чувствительность и специфичность, приближающиеся к 100%,
• воспроизводимость
• возможности автоматизации

возможные ошибки персонала при проведении исследования (оплошность, небрежность, нарушение технологии);

невозможность полной стандартизации процесса исследования при ручном варианте постановки ИФА;

источник

Анализы на сифилис: виды анализов, расшифровка результатов, причины ложноположительных и ложноотрицательных результатов обследования.

Сифилис – это венерическое заболевание, возбудителем которого является бактерия Treponema pallidum (бледная трепонема). Подробнее о путях передачи сифилиса, его симптомах и возможных осложнениях читайте в статье Все о сифилисе. Симптомы и лечение.

Своевременное выявление сифилиса (с помощью специальных анализов) позволяет врачам вовремя начать лечение и предотвратить развитие опасных осложнений этой болезни.

Проведение анализов на сифилис во время беременности помогает предотвратить рождение детей с врожденным сифилисом. Подробно об анализах на сифилис во время беременности рассказано в статье Все о диагностике и лечении сифилиса во время беременности.

В подавляющем большинстве случаев у врачей нет возможности получить точные данные о сексуальной жизни пациентов (некоторые люди скрывают детали своей половой жизни или недооценивают риск заражения заболеваниями передающимися половым путем). В связи с этим, для того чтобы защитить людей от возможных последствий их собственной невнимательности или недостатка медицинских знаний, в некоторых случаях врачи назначают так называемые скрининговые анализы на сифилис (то есть анализы, которые сдают большие количества людей).

Врач может назначить вам анализы на сифилис, даже если у вас нет симптомов этой болезни, и вы уверены, что не могли им заразиться.

Необходимость проведения этих анализов связана с тем, что сифилис иногда передается бытовым путем (не через сексуальный контакт) и протекает в скрытой форме (то есть без симптомов).

1. При устройстве на работу (работникам здравоохранения, общественного питания, военнослужащим и пр.)
2. При становлении на учет по поводу беременности.
3. Во время поступления в больницу, при подготовке к операциям.
4. Донорам крови.
5. Лицам, заключенным в местах лишения свободы.

1. При обнаружении симптомов заболевания (обычно, это сыпь в области половых органов).
2. При получении положительных результатов скрининговых анализов на сифилис.
3. В случае если у вас был половой контакт с человеком, у которого был выявлен сифилис.
4. Новорожденным детям, матери которых больны сифилисом.

Кроме того, анализы на сифилис периодически проводятся во время лечения (для того, чтобы убедиться в том, что лечение эффективно) и даже после окончания курса лечения, для контроля излеченности.

Диагностикой и лечением сифилиса занимается врач дерматовенеролог. В диагностике заболевания могут быть использованы следующие анализы:

Осмотр кожи, наружных и внутренних половых органов производится с целью выявления основных симптомов сифилиса: твердый шанкр, увеличение лимфатических узлов, высыпания на коже и пр. (см. Симптомы сифилиса)

Для того чтобы обнаружить бледную трепонему, врачи обследуют под микроскопом мазки (или соскобы), полученные из язв, лимфатических узлов, околоплодных вод у беременных и пр. Кровь под микроскопом не обследуют.

Важно: Если в ваших анализах под микроскопом была обнаружена бледная трепонема, это означает, что вы точно больны сифилисом. Но если анализы показали, что возбудитель сифилиса не обнаружен, нельзя быть полностью уверенным в том, что сифилиса нет. Для того чтобы убедиться, что вы не больны, нужно сдать дополнительные анализы, описанные ниже.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – это сложный и дорогостоящий метод диагностики сифилиса, который позволяет обнаружить ДНК бледной трепонемы в крови или других исследуемых материалах (околоплодные воды, спинномозговая жидкость). Если анализ ПЦР дал отрицательный результат, то, скорее всего, вы не больны сифилисом. Однако при получении положительного результата (то есть, если ПЦР обнаружил ДНК бледной трепонемы в крови), нет 100% гарантии, что вы больны. Это связано с тем, что ПЦР иногда дает ложноположительные результаты (дает положительный результат при отсутствии заболевания). Поэтому если ПЦР дал положительный результат, рекомендуется дополнительно пройти другие методы обследования на сифилис (например, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА)).

Серологический анализ – это обнаружение в крови особых белков (антител), которые вырабатываются в организме человека в ответ на инфекцию. В отличие от предыдущих методов диагностики, серологические анализы обнаруживают не саму бледную трепонему, а лишь ее «следы» в организме.

Если в вашей крови обнаружены антитела к бледной трепонеме, это говорит о том, что вы либо заражены сифилисом в данный момент, либо переболели им ранее.

Серологические анализы на сифилис делятся на 2 большие группы: неспецифические и специфические тесты. Основное различие этих анализов заключается в том, что неспецифические тесты показывают положительный результат только если человек болен сифилисом в данный момент и становятся отрицательными после излечения, а специфические тесты остаются положительными даже после излечения заболевания.

Говоря другими словами, отрицательный результат неспецифического теста является некоторой гарантией того, что вы здоровы.

К неспецифическим анализам относят микрореакцию преципитации (МР) и реакцию Вассермана (РВ, RW). Эти тесты используются для скрининга на сифилис. После излечения сифилиса эти анализы становятся отрицательными у 90% людей.

Как работают эти тесты: в результате жизнедеятельности бледной трепонемы (при сифилисе) в организме погибают клетки. В ответ на разрушение клеток иммунная система вырабатывает особые белки (антитела, или иммуноглобулины). Неспецифические тесты направлены на выявление этих антител, а также подсчет их концентрации (определение титра антител).

Микрореакция преципитации (МР) и ее аналоги в некоторых странах: тест быстрых реагинов (RPR, Rapid Plasma Reagins) и тест VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory) — это нетрепонемные тесты, которые назначаются при скрининге на сифилис.

Что обследуют: кровь (из пальца или из вены), спинномозговую жидкость.

Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, через 4-5 недель после заражения.

Как оценивать результаты анализа: если анализ показал положительный результат, то есть вероятность, что вы больны сифилисом. Так как этот анализ может ошибочно давать положительные результаты, рекомендуется пройти дополнительное обследование с помощью специфических тестов, описанных ниже. Отрицательный результат указывает на отсутствие сифилиса, либо раннюю стадию заболевания (до появления антител в крови).

Как оценивать полученный титр антител: если в крови обнаружены антитела в титре от 1:2 до 1:320 и выше, это означает, что вы заражены сифилисом. При позднем сифилисе титр антител может быть низким (что оценивается как сомнительный результат).

Какие могут быть причины ложноположительных результатов: ложноположительные результаты МР встречаются примерно в 2-5% случаев, вот их возможные причины:

1. Системные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, ревматоидный артрит, дерматомиозит, васкулиты и пр.)
2. Инфекционные заболевания: вирусные гепатиты, инфекционный мононуклеоз, туберкулез, некоторые кишечные инфекции и пр.
3. Воспалительные заболевания сердца (эндокардит, миокардит).
4. Сахарный диабет.
5. Беременность.
6. Недавно проведенная вакцинация (прививание).
7. Употребление алкоголя, наркотиков и др.
8. Перенесенный ранее и излеченный сифилис (примерно у 10% людей, прошедших курс лечения, анализ МР может оставаться положительным всю жизнь).

Какие могут быть причины ложноотрицательных результатов: анализ может ошибочно показать отрицательный результат, если в крови содержится много антител, если анализ взят на ранней стадии заболевания до появления антител, либо при позднем сифилисе, когда в крови остается мало антител.

Реакция Вассермана (РВ, RW) — это нетрепонемный тест, который используется для скрининга на сифилис в странах СНГ.

Что обследуют: кровь (из пальца или из вены), спинномозговую жидкость.

Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, через 6-8 недель после заражения.

Как оценивать результаты анализа: «-» — отрицательная реакция, «+» или «++» это слабоположительная реакция, «+++» это положительная реакция, «++++» это резко положительная реакция. Если реакция Вассермана показала хотя бы один плюс, то вам необходимо сдать дополнительные анализы на сифилис. Отрицательная реакция не является гарантией того, что вы здоровы.

Как оценивать полученный титр антител: титр антител от 1:2 до 1:800 говорит о наличии сифилиса.

Какие могут быть причины ложноположительных результатов: реакция Вассермана может ошибочно дать положительный результат по тем же причинам, что и микрореакция преципитации (МР), а также, если незадолго до сдачи крови на анализ вы пили алкоголь или употребляли жирную пищу.

В связи с большим количеством ошибочных результатов Реакция Вассермана (РВ, RW) используется все реже и заменяется другими, более достоверными методами диагностики.

Неспецифические тесты (микрореакция преципитации (МР) и реакция Вассермана (РВ, RW)) являются хорошими методами диагностики сифилиса. Отрицательный результат обследования с большой вероятностью указывает на то, что вы здоровы. Но при получении положительных результатов этих анализов необходимо дополнительное обследование с помощью специфических (трепонемных) тестов.

К трепонемным тестам относят следующие анализы: реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноблотинг, реакция пассивной агглютинации (РПГА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), иммуноферментный анализ (ИФА).

Специфические тесты назначают людям, у которых выявлены положительные результаты микрореакции преципитации (МР) или реакции Вассермана (РВ). Специфические тесты остаются положительными еще долгое время после излечения сифилиса.

Как работают эти тесты: при попадании в организм возбудителей сифилиса иммунная система вырабатывает антитела, направленные на борьбу с бледной трепонемой. Эти антитела появляются в крови не сразу после заражения, а лишь спустя несколько недель. Примерно в конце второй недели после заражения в крови появляются антитела класса IgM. Антитела этого класса указывают на недавнее заражение сифилисом, однако в отсутствие лечения они сохраняются в крови в течение нескольких месяцев и даже лет (при этом их количество постепенно снижается). Через 4-5 недель после заражения сифилисом в крови начинают определяться антитела другого класса – IgG. Антитела этого типа сохраняются в крови в течение многих лет (иногда в течение всей жизни). Трепонемные тесты позволяют выявить наличие в крови антител (IgM и IgG), направленных на борьбу с бледной трепонемой.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) или Fluorescent Treponemal Antibody (FTA, и его разновидность FTA-ABS) — это трепонемный тест, который применяется для подтверждения диагноза сифилиса на самых ранних стадиях (даже до появления первых симптомов).

Что обследуют: кровь из вены или из пальца.

Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, через 6-9 недель.

Как оценивать результаты анализа: Результаты анализа выдаются в виде минуса или плюсов (от одного до четырех). Если в анализе стоит минус, значит антитела не выявлены, и вы здоровы. Наличие одного плюса и более говорит о наличии сифилиса.

Какие могут быть причины ложноположительных результатов: ложноположительные результаты встречаются редко, однако ошибки возможны у людей с заболеваниями соединительной ткани (системная красная волчанка, дерматомиозит и пр.), у беременных и пр.

Реакция пассивной агглютинации (РПГА), или Treponema pallidum hemagglutionation assay (TPHA) – это специфический тест, который применяется для подтверждения диагноза сифилиса практически на любой его стадии.

Что обследуют: кровь из вены или из пальца.

Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, уже через 4 недели.

Как оценивать результаты анализа: положительный результат РПГА указывает на то, что вы больны сифилисом, либо здоровы, но перенесли эту болезнь в прошлом.

Как оценивать полученный титр антител: в зависимости от титра антител можно ориентировочно предположить давность заражения сифилисом. Вскоре после первого попадания трепонемы в организм титр антител, как правило, менее 1:320. Чем выше титр антител, тем больше времени прошло от момента заражения.

Иммуноферментный анализ (ИФА), или Enzyme ImmunoAssay (EIA), или ELISA (Еnzyme Linked ImmunoSorbent Assay) – это трепонемный тест, который применяется для подтверждения диагноза и определения стадии сифилиса.

Что обследуют: кровь из вены или из пальца.

Через какое время после заражения анализ становится положительным: уже через 3 недели после инфицирования.

Как оценивать результаты анализа: положительный результат ИФА указывает на то, что вы больны сифилисом, либо перенесли это заболевание ранее. Этот анализ может оставаться положительным и после излечения.

Определение давности заражения сифилисом с помощью ИФА: в зависимости от того, какие классы антител (IgA, IgM, IgG) обнаружены в крови, можно предположить давность заражения.

источник

Диагноз сифилиса ставиться на совокупности данных анамнеза,конфронтации,клинической картины и лабораторных данных,включающих обнаружение возбудителя и результатов серологического обследования.Подтверждение диагноза лабораторными данными обязательно.

В случае полного отсутствия возможности использования методов лабораторной диагностики сифилиса, Всемирная организация здравоохранения (1999 г.) и МЗ РФ ( приказ № 327 от 25.07.2003 г.) допускают использование так называемого синдромного (эпидемиологического) лечения сифилиса на основе клинико-анамнестических данных.

Методы диагностики,подтверждающие наличие сифилиcа

Подтвержденный диагноз сифилиса у полового партнера
Случайная половая связь без барьерного предохранения в период ,соответствующий инкубационному периоду
Наличие в прошлом высыпаний в области половых органов,увеличения лимфоузлов

Осмотр половых органов,кожных покровов,слизистой рта,ануса
Пальпация высыпных элементов при их наличии
Пальпация периферических лимоузлов

Наличие характерных для различных периодов сифилиса поражений кожи и слизистых.
Увеличение лимфоузлов

Обнаружение T.pallidum в материале из очагов поражения,лимфатических узлов,амниотической жидкости,ликвора

Обнаружение типичных форм трепонемы

Наличие флюоресцирующих трепонем

Обнаружение специфической ДНК T.pallidum

Нетрепонемные серологические тесты — обнаружение в сыворотке крови антител против фосфолипидов тканей,разрушенных сифилитической инфекцией и липидов мембраны Т.pallidum

Макроскопический тест
Тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins, RPR)

Микроскопический тест
VDRL (Venereal Disease Research laboratory)
Количественный тест VDRL

Трепонемные серологические тесты — обнаружение в сыворотки крови антител против антигенов бледной трепонемы

Положительный (позитивный) результат

Методы диагностики, подтверждающие наличие различных форм и осложнений сифилиса

Ренгенография
аорты
длинных трубчатых костей
грудины
костей черепа
суставов

Ранний врожденный сифилис
Поздний врожденный сифилис
Третичный сифилис

Неврит слухового нерва
Сифилитический лабиринтит

Неврит зрительного нерва
Паренхиматозный кератит

Также применяются и рутинные методы исследования — общие анализы крови и мочи,биохимический анализ крови и.т.д.

В большинстве случаев обнаружить возбудителя сифилиса невозможно или обнаружение
его затруднительно.Поэтому для диагностики сифилиса применяют так называемое серологическую диагностику,основанную на определении различных видов и классов антител,которые организм выработал с целью своей защиты от сифилитической инфекции т.е определяется не возбудитель инфекции,а как организм прореагировал на его появление.
Серологическое исследование (от от лат. serum — сыворотка) представляет собой лабораторный анализ плазмы каппилярной или венозной крови основаный на иммунологической реакции антиген-антитело.
В качестве антигенов используют фабрично изготовленные препараты,аналогичные по своей структуре антигенам липидов,появляющихся в организме при разрушении тканей бледной спирохетой,липидам ее мембран и специфическим молекулярным соединениям,входящих в состав мебраны бледной спирохеты (для этих целей используются очищенные и ультраозвученные штаммы трепонем или выделенные от них рекомбинантные антигены).
В лабораторных условиях к антигенам добавляется сыворотка крови обследуемого.Если в сыворотке (плазме) крови присутствуют антитела происходит реакция антиген-антитело и ее результаты обнаруживаются различными методами (положительный результат) при отсутствии антител реакция не происходит (отрицательный результат).Серологическую диагностику сифилиса осуществляют в следующих случаях.

Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на нетрепонемных тестах.Скринингу на сифилис подвергаются:

• Беременные женщины
• Доноры крови и органов для трансплантации
• Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)
• Военнослужащие
• Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы
• Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
• Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация — в России,странах СНГ и некоторых других странах)

Для диагностики сифилиса применяются комбинация нетрепонемных и трепонемных тестов на сифилис или только трепонемные (подтверждающие) реакции.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:

• Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса
• Лицам с любыми генитальными язвами
• Лицам — половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом
• Детям,родившимся от больных сифилисом матерей
• Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций
• Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)

Контроль за лечением сифилиса

Применяются нетрепонемные тесты,так трепонемные тесты остаются положительными продолжительное время после лечения,а иногда всю жизнь.

Нетрепонемные тесты определяют антитела класса IgG и IgM к липидам(фосфолипидам),
липопротеинам, высвобождаемых из поврежденных клеток хозяина, вследствии сифилитической инфекции и липидам,входящим в состав мембраны бледной трепонемы. Антилипидные антитела могут появляться не только вследствие сифилиса или других трепонематозов, но и в ответ на на некоторые острые и хронические заболевания, при которых наблюдается разрушение тканей.Антилипидные антитела (реагины) образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.В основном нетрепонемные тесты применяются в двух случаях:

• Нетрепонемные тесты, в связи с дешевизной,доступностью простотой и быстрым сроком исполнения, применяются для скрининга сифилиса как отборочные реакции.
• По изменению количественных нетрепонемных тестов судят о степени эффективности лечения сифилиса и устанавливают его излеченность.Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами для установки диагноза сифилиса и проводятся до начала лечения,в процессе лечения и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

• The value of darkfield microscopy in the differential diagnosis of secondary syphilis (Calif West Med. 1926 ) Full text
• Результаты сравнительного изучения диагностической эффективности ряда современных нетрепонемных и трепонемных тестов
• Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis (Clin Microbiol Rev. 1995) Full text
• Dark ground microscopy and treponemalserological tests in the diagnosis of early syphilis

посещений 245027 обновлено 01.07.10