ИФА — иммуноферментный анализ — является одним из самых прогрессивных методов диагностики сифилиса. Он выявляет признаки присутствия возбудителя заболевания на разных стадиях последнего. В основе анализа лежит выявление специфических антител, которые появляются в крови больного при внедрении в организм бледной трепонемы (бактериального возбудителя).
Метод ИФА работает не только для группы заболеваний, передающихся половым путем. В равной степени он применим и для диагностики самых разных болезней инфекционного характера. Принцип проведения анализа был разработан еще в 60-х годах прошлого столетия. Однако активно использоваться он начал только спустя 20 лет.
Сейчас ИФА применяется для диагностики сифилиса, СПИДа, туберкулеза и многих других болезней. Для обнаружения антител используются специально разработанные ферменты, активно реагирующие на специфические белки крови.
Больной может сам прийти в клинику для проведения анализа, если у него присутствуют подозрительные симптомы (характерные высыпания на теле, повышенная температура, боли в мышцах и пр.). Однако на определенных стадиях недуг не проявляется столь явно. Через несколько недель после инфицирования симптомы исчезают, и пациент может ошибочно считать себя выздоровевшим. По этой причине существует ряд случаев, когда анализ ИФА проводится в обязательном порядке:
- При устройстве на работу на предприятия, где есть контакт с большим количеством людей, продуктами питания, детскими и медицинскими товарами.
- При постановке на учет беременной. Болезнь передается от больной матери младенцу, поэтому важно ее вовремя выявить.
- При донорстве крови. Перед тем как сдавать кровь, донор обязан проверить ее на наличие опасных инфекций, в том числе и сифилиса.
- Во время подготовки к операции. Проведение такого рода вмешательств подразумевает прямой контакт с кровью больного. Это может быть небезопасно для медперсонала и других пациентов клиники.
- При обнаружении симптомов у одного из половых партнеров. В этом случае второй партнер также обязан сдать кровь на пробу.
- При прохождении воинской службы, а также в случае тюремного заключения. Обе ситуации предполагают продолжительный контакт с большим количеством людей. Поскольку недуг передается не только половым, но и контактно-бытовым путем, любой человек из окружения инфицированного находится под угрозой.
Главная особенность ИФА — высокая точность данных. Позволяет не просто обнаружить антитела, но и определить их количественное соотношение.
Это значит, что иммуноферментный анализ позволяет с 99,99%-ной вероятностью выявить болезнь и одновременно определить, на какой стадии развития болезнь в данный момент находится.
При проведении ИФА у пациента берут кровь из вены. Затем ее особым образом подготавливают и размещают на полистироловой панели со множеством лунок. При диагностике в сыворотку крови добавляют специальные ферменты, которые при наличии антител/антигенов недуга образуют с ними прочные соединения.
Результатом образования таких соединений становится изменение цвета плазмы крови в лунке (с бесцветного — на ярко-желтый). Работнику лаборатории достаточно визуально оценить результат, чтобы понять, что на панели — кровь больного.
При ИФА на сифилис оценивают наличие 3 классов антител (иммуноглобулинов): A, M и G. Эти вещества образуются в крови инфицированного человека в строго определенной последовательности:
- Наличие иммуноглобулина A указывает на то, что с момента заражения бледной трепонемой прошло больше месяца.
- Антитела M выявляются при длительном присутствии инфекции в организме. Также они могут быть реакцией на обострение хронической болезни.
- Иммуноглобулин G организм вырабатывает на самом пике заболевания, а также после уже проведенного лечения.
Интенсивность окрашивания плазмы крови в ярко-желтый цвет при проведении ИФА напрямую указывает на количество антител. Если цвет плазмы слегка желтоватый, результаты ставят под сомнение и процедуру повторяют. При отрицательном результате цвет плазмы не меняется и остается прозрачным.
На протяжении всей жизни человеку довольно часто приходится делать ИФА на сифилис (перед устройством на работу и пр.). Положительный результат всегда становится стрессом. Однако не стоит паниковать раньше времени! Иногда ИФА может дать ложноположительный результат. В этом случае есть смысл провести повторное обследование.
Специалисты не советуют беспокоиться после первого же положительного результата ИФА, поскольку это исследование направлено на выявление не самой бледной трепонемы, а антител, которые организм вырабатывает в ответ на атаку патогенных бактерий. ИФА — анализ с высокой точностью (вероятность погрешности меньше 1%). При наличии сомнений врачи не ставят диагноз сразу же, а предлагают пациенту сдать кровь еще раз.
Ложноположительный ответ ИФА возможен при болезнях:
- соединительной ткани, суставов (васкулит, ревматоидный артрит и пр.);
- сердца (главным образом это касается воспалительных заболеваний: миокардита, эндокардита);
- эндокринной системы (диабет);
- инфекционных (гепатит, туберкулез и пр.).
Ложноположительный результат может быть при беременности или в том случае, если незадолго до ИФА пациенту была проведена вакцинация. Изменить итоги анализа не в лучшую сторону способно и употребление алкоголя, наркотиков.
В достаточно большом количестве случаев положительную реакцию дает проверка крови пациентов, которые уже прошли лечение. У 10% излеченных положительная реакция остается на всю жизнь, поскольку в крови постоянно циркулирует определенное количество антител как иммунный ответ на возникшее однажды заболевание.
Наряду с ложноположительным возможна и ложноотрицательная реакция. В самом начале болезни, когда трепонема только попала в организм, антитела вырабатываются в недостаточном для выявления количестве. Ферменты могут их не зафиксировать, поэтому итоги ИФА оказываются отрицательными.
При наличии подозрений на сифилис (пациент имел незащищенный половой акт, тем или иным образом контактировал с возможными больными и пр.) проводится повторный анализ.
Существует определенный протокол действий на тот случай, если у пациента со 100%-ной достоверностью был выявлен недуг. В первую очередь обследование проходит его половой партнер: муж, жена, другие лица, вступавшие с зараженным в интимную связь. В этом плане медики категоричны. Обследование сексуальных партнеров является обязательным во избежание распространения опасного заболевания.
Лечение проходят все члены семьи больного, даже если их анализы показали отрицательный результат. Помним: сифилис — острозаразная болезнь, передающаяся контактно-бытовым путем. Дети и другие члены семьи могут получить трепонему во время пользования санузлом, общими полотенцами, посудой.
Как только данные ИФА на сифилис подтвердились, инфицированный и контактировавшие с ним лица проходят терапию антибиотиками. Все рекомендации врача — дозировку, периодичность приема лекарств — необходимо соблюдать в точности!
На время лечения работающим гражданам выдается справка с зашифрованным согласно МКБ-10 диагнозом. После полного излечения медицинская книжка продлевается. Выздоровевший работник может приступать к своим непосредственным обязанностям. Работодатель не вправе отказать ему в восстановлении на рабочем месте.
Таковы основные данные по проведению ИФА. Заразившимся нужно помнить: постановка диагноза не ставит крест на всей последующей жизни больного. Сейчас существуют эффективные препараты, позволяющие надежно излечивать это заболевание. Вовремя проведенные обследование и лечение позволяют избежать самых опасных последствий недуга и защитить от него других членов общества.
источник
Анализы на сифилис: виды анализов, расшифровка результатов, причины ложноположительных и ложноотрицательных результатов обследования.
Сифилис – это венерическое заболевание, возбудителем которого является бактерия Treponema pallidum (бледная трепонема). Подробнее о путях передачи сифилиса, его симптомах и возможных осложнениях читайте в статье Все о сифилисе. Симптомы и лечение.
Своевременное выявление сифилиса (с помощью специальных анализов) позволяет врачам вовремя начать лечение и предотвратить развитие опасных осложнений этой болезни.
Проведение анализов на сифилис во время беременности помогает предотвратить рождение детей с врожденным сифилисом. Подробно об анализах на сифилис во время беременности рассказано в статье Все о диагностике и лечении сифилиса во время беременности.
В подавляющем большинстве случаев у врачей нет возможности получить точные данные о сексуальной жизни пациентов (некоторые люди скрывают детали своей половой жизни или недооценивают риск заражения заболеваниями передающимися половым путем). В связи с этим, для того чтобы защитить людей от возможных последствий их собственной невнимательности или недостатка медицинских знаний, в некоторых случаях врачи назначают так называемые скрининговые анализы на сифилис (то есть анализы, которые сдают большие количества людей).
Врач может назначить вам анализы на сифилис, даже если у вас нет симптомов этой болезни, и вы уверены, что не могли им заразиться.
Необходимость проведения этих анализов связана с тем, что сифилис иногда передается бытовым путем (не через сексуальный контакт) и протекает в скрытой форме (то есть без симптомов).
- При устройстве на работу (работникам здравоохранения, общественного питания, военнослужащим и пр.)
- При становлении на учет по поводу беременности.
- Во время поступления в больницу, при подготовке к операциям.
- Донорам крови.
- Лицам, заключенным в местах лишения свободы.
- При обнаружении симптомов заболевания (обычно, это сыпь в области половых органов).
- При получении положительных результатов скрининговых анализов на сифилис.
- В случае если у вас был половой контакт с человеком, у которого был выявлен сифилис.
- Новорожденным детям, матери которых больны сифилисом.
Кроме того, анализы на сифилис периодически проводятся во время лечения (для того, чтобы убедиться в том, что лечение эффективно) и даже после окончания курса лечения, для контроля излеченности.
Диагностикой и лечением сифилиса занимается врач дерматовенеролог. В диагностике заболевания могут быть использованы следующие анализы:
Осмотр кожи, наружных и внутренних половых органов производится с целью выявления основных симптомов сифилиса: твердый шанкр, увеличение лимфатических узлов, высыпания на коже и пр. (см. Симптомы сифилиса)
Для того чтобы обнаружить бледную трепонему, врачи обследуют под микроскопом мазки (или соскобы), полученные из язв, лимфатических узлов, околоплодных вод у беременных и пр. Кровь под микроскопом не обследуют.
Важно: Если в ваших анализах под микроскопом была обнаружена бледная трепонема, это означает, что вы точно больны сифилисом. Но если анализы показали, что возбудитель сифилиса не обнаружен, нельзя быть полностью уверенным в том, что сифилиса нет. Для того чтобы убедиться, что вы не больны, нужно сдать дополнительные анализы, описанные ниже.
ПЦР (полимеразная цепная реакция) – это сложный и дорогостоящий метод диагностики сифилиса, который позволяет обнаружить ДНК бледной трепонемы в крови или других исследуемых материалах (околоплодные воды, спинномозговая жидкость). Если анализ ПЦР дал отрицательный результат, то, скорее всего, вы не больны сифилисом. Однако при получении положительного результата (то есть, если ПЦР обнаружил ДНК бледной трепонемы в крови), нет 100% гарантии, что вы больны. Это связано с тем, что ПЦР иногда дает ложноположительные результаты (дает положительный результат при отсутствии заболевания). Поэтому если ПЦР дал положительный результат, рекомендуется дополнительно пройти другие методы обследования на сифилис (например, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА)).
Серологический анализ – это обнаружение в крови особых белков (антител), которые вырабатываются в организме человека в ответ на инфекцию. В отличие от предыдущих методов диагностики, серологические анализы обнаруживают не саму бледную трепонему, а лишь ее «следы» в организме.
Если в вашей крови обнаружены антитела к бледной трепонеме, это говорит о том, что вы либо заражены сифилисом в данный момент, либо переболели им ранее.
Серологические анализы на сифилис делятся на 2 большие группы: неспецифические и специфические тесты. Основное различие этих анализов заключается в том, что неспецифические тесты показывают положительный результат только если человек болен сифилисом в данный момент и становятся отрицательными после излечения, а специфические тесты остаются положительными даже после излечения заболевания.
Говоря другими словами, отрицательный результат неспецифического теста является некоторой гарантией того, что вы здоровы.
К неспецифическим анализам относят микрореакцию преципитации (МР) и реакцию Вассермана (РВ, RW). Эти тесты используются для скрининга на сифилис. После излечения сифилиса эти анализы становятся отрицательными у 90% людей.
Как работают эти тесты: в результате жизнедеятельности бледной трепонемы (при сифилисе) в организме погибают клетки. В ответ на разрушение клеток иммунная система вырабатывает особые белки (антитела, или иммуноглобулины). Неспецифические тесты направлены на выявление этих антител, а также подсчет их концентрации (определение титра антител).
Микрореакция преципитации (МР) и ее аналоги в некоторых странах: тест быстрых реагинов (RPR, Rapid Plasma Reagins) и тест VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory) — это нетрепонемные тесты, которые назначаются при скрининге на сифилис.
Что обследуют: кровь (из пальца или из вены), спинномозговую жидкость.
Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, через 4-5 недель после заражения.
Как оценивать результаты анализа: если анализ показал положительный результат, то есть вероятность, что вы больны сифилисом. Так как этот анализ может ошибочно давать положительные результаты, рекомендуется пройти дополнительное обследование с помощью специфических тестов, описанных ниже. Отрицательный результат указывает на отсутствие сифилиса, либо раннюю стадию заболевания (до появления антител в крови).
Как оценивать полученный титр антител: если в крови обнаружены антитела в титре от 1:2 до 1:320 и выше, это означает, что вы заражены сифилисом. При позднем сифилисе титр антител может быть низким (что оценивается как сомнительный результат).
Какие могут быть причины ложноположительных результатов: ложноположительные результаты МР встречаются примерно в 2-5% случаев, вот их возможные причины:
- Системные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, ревматоидный артрит, дерматомиозит, васкулиты и пр.)
- Инфекционные заболевания: вирусные гепатиты, инфекционный мононуклеоз, туберкулез, некоторые кишечные инфекции и пр.
- Воспалительные заболевания сердца (эндокардит, миокардит).
- Сахарный диабет.
- Беременность.
- Недавно проведенная вакцинация (прививание).
- Употребление алкоголя, наркотиков и др.
- Перенесенный ранее и излеченный сифилис (примерно у 10% людей, прошедших курс лечения, анализ МР может оставаться положительным всю жизнь).
Какие могут быть причины ложноотрицательных результатов: анализ может ошибочно показать отрицательный результат, если в крови содержится много антител, если анализ взят на ранней стадии заболевания до появления антител, либо при позднем сифилисе, когда в крови остается мало антител.
Реакция Вассермана (РВ, RW) — это нетрепонемный тест, который используется для скрининга на сифилис в странах СНГ.
Что обследуют: кровь (из пальца или из вены), спинномозговую жидкость.
Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, через 6-8 недель после заражения.
Как оценивать результаты анализа: «-» — отрицательная реакция, «+» или «++» это слабоположительная реакция, «+++» это положительная реакция, «++++» это резко положительная реакция. Если реакция Вассермана показала хотя бы один плюс, то вам необходимо сдать дополнительные анализы на сифилис. Отрицательная реакция не является гарантией того, что вы здоровы.
Как оценивать полученный титр антител: титр антител от 1:2 до 1:800 говорит о наличии сифилиса.
Какие могут быть причины ложноположительных результатов: реакция Вассермана может ошибочно дать положительный результат по тем же причинам, что и микрореакция преципитации (МР), а также, если незадолго до сдачи крови на анализ вы пили алкоголь или употребляли жирную пищу.
В связи с большим количеством ошибочных результатов Реакция Вассермана (РВ, RW) используется все реже и заменяется другими, более достоверными методами диагностики.
Неспецифические тесты (микрореакция преципитации (МР) и реакция Вассермана (РВ, RW)) являются хорошими методами диагностики сифилиса. Отрицательный результат обследования с большой вероятностью указывает на то, что вы здоровы. Но при получении положительных результатов этих анализов необходимо дополнительное обследование с помощью специфических (трепонемных) тестов.
К трепонемным тестам относят следующие анализы: реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноблотинг, реакция пассивной агглютинации (РПГА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), иммуноферментный анализ (ИФА).
Специфические тесты назначают людям, у которых выявлены положительные результаты микрореакции преципитации (МР) или реакции Вассермана (РВ). Специфические тесты остаются положительными еще долгое время после излечения сифилиса.
Как работают эти тесты: при попадании в организм возбудителей сифилиса иммунная система вырабатывает антитела, направленные на борьбу с бледной трепонемой. Эти антитела появляются в крови не сразу после заражения, а лишь спустя несколько недель. Примерно в конце второй недели после заражения в крови появляются антитела класса IgM. Антитела этого класса указывают на недавнее заражение сифилисом, однако в отсутствие лечения они сохраняются в крови в течение нескольких месяцев и даже лет (при этом их количество постепенно снижается). Через 4-5 недель после заражения сифилисом в крови начинают определяться антитела другого класса – IgG. Антитела этого типа сохраняются в крови в течение многих лет (иногда в течение всей жизни). Трепонемные тесты позволяют выявить наличие в крови антител (IgM и IgG), направленных на борьбу с бледной трепонемой.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) или Fluorescent Treponemal Antibody (FTA, и его разновидность FTA-ABS) — это трепонемный тест, который применяется для подтверждения диагноза сифилиса на самых ранних стадиях (даже до появления первых симптомов).
Что обследуют: кровь из вены или из пальца.
Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, через 6-9 недель.
Как оценивать результаты анализа: Результаты анализа выдаются в виде минуса или плюсов (от одного до четырех). Если в анализе стоит минус, значит антитела не выявлены, и вы здоровы. Наличие одного плюса и более говорит о наличии сифилиса.
Какие могут быть причины ложноположительных результатов: ложноположительные результаты встречаются редко, однако ошибки возможны у людей с заболеваниями соединительной ткани (системная красная волчанка, дерматомиозит и пр.), у беременных и пр.
Реакция пассивной агглютинации (РПГА), или Treponema pallidum hemagglutionation assay (TPHA) – это специфический тест, который применяется для подтверждения диагноза сифилиса практически на любой его стадии.
Что обследуют: кровь из вены или из пальца.
Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, уже через 4 недели.
Как оценивать результаты анализа: положительный результат РПГА указывает на то, что вы больны сифилисом, либо здоровы, но перенесли эту болезнь в прошлом.
Как оценивать полученный титр антител: в зависимости от титра антител можно ориентировочно предположить давность заражения сифилисом. Вскоре после первого попадания трепонемы в организм титр антител, как правило, менее 1:320. Чем выше титр антител, тем больше времени прошло от момента заражения.
Иммуноферментный анализ (ИФА), или Enzyme ImmunoAssay (EIA), или ELISA (Еnzyme Linked ImmunoSorbent Assay) – это трепонемный тест, который применяется для подтверждения диагноза и определения стадии сифилиса.
Что обследуют: кровь из вены или из пальца.
Через какое время после заражения анализ становится положительным: уже через 3 недели после инфицирования.
Как оценивать результаты анализа: положительный результат ИФА указывает на то, что вы больны сифилисом, либо перенесли это заболевание ранее. Этот анализ может оставаться положительным и после излечения.
Определение давности заражения сифилисом с помощью ИФА: в зависимости от того, какие классы антител (IgA, IgM, IgG) обнаружены в крови, можно предположить давность заражения.
источник
ИФА на сифилис является одним из самых эффективных методов, применяемых для диагностирования венерического заболевания, вызванного бледными трепонемами. Анализ позволяет определить связь антигена с антителом и осуществляется с помощью ферментов. Этот высокоточный способ выявляет инфекцию в 90% случаев. Тест-система, используемая в иммуноферментной диагностике, предназначена для обнаружения как сифилиса, так и других заболеваний, вызванных патогенными микроорганизмами.
Анализ методом ИФА на сифилис назначается через 3-4 недели после предполагаемого инфицирования.
Часто его применяют для того, чтобы подтвердить диагноз после получения положительного результата способом, основанном на реакции Вассермана. Иммуноферментный анализ проводят, если:
- у пациента обнаружены высыпания в области половых органов;
- имелись случаи незащищенных сексуальных контактов;
- женщина беременна;
- мужчина желает стать донором семенной жидкости;
- ребенок родился у матери, страдающей сифилисом;
- у пациента повышена температура по неизвестной причине;
- планируется госпитализация или оперативное вмешательство;
- проводится медосмотр работникам детских учреждений, общепита.
Для того чтобы достоверность иммуноферментного анализа была максимальной, пациенты должны быть осведомлены о правилах подготовки, при несоблюдении которых результат может оказаться ложноположительным. В целях минимизирования погрешности нужно:
- Сдавать кровь на голодный желудок.
- За двое-трое суток воздержаться от употребления спиртосодержащих напитков, еды с повышенным содержанием жиров.
- Ограничить физические нагрузки за несколько дней до забора крови.
- За три часа до сдачи биоматериала отказаться от курения.
- Сообщить врачу о лекарственных средствах, используемых в настоящее время, а также об имеющихся заболеваниях и прививках, сделанных недавно.
О том, сколько может делаться анализ, лучше спросить работников лаборатории. Срок проведения связан не только с ее загруженностью, но и с наличием специального оборудования.
С помощью ИФА возможно выявить антитело, принадлежащее разным классам (А, G, M). При повышении уровня М-иммуноглобулинов врачи определяют время, когда произошло инфицирование бледными спирохетами. Обычно этот период не превышает 90 дней. Если у пациента увеличен титр класса А, это значит, что инфицирование произошло в течение последних 30 суток. G-иммуноглобулины позволяют выявить острый процесс, пролеченное заболевание.
Суммарный анализ, обозначаемый в медицинских центрах как “сифилис igg ИФА”, назначается людям, ранее не обследованным на это венерическое заболевание. Метод позволяет обнаружить его при появлении первых симптомов и в первоначальной стадии инфицирования.
Получив на руки расшифровку, пациент не всегда может правильно истолковать ее значение. Только врач способен определить результаты и поставить точный диагноз. В лабораторном бланке могут быть указаны следующие данные:
- IgA+ IgM- IgG- – заражение произошло недавно;
- IgA+ IgM+ IgG- – патогенный возбудитель попал в организм менее 30 дней назад;
- IgA+ IgM+ IgG+ – инфицирование состоялось более месяца;
- IgA- IgM- IgG+ – венерическое заболевание пролечено.
В некоторых случаях, если результат теста положительный, врач может назначить проведение дополнительных анализов другими методами.
Способ выявления инфекционного заболевания, вызванного бледными трепонемами, считается высокочувствительным. Прозводители ИФА-тестов дают гарантию качества и подтверждение его на опытах, в ходе которых сравнивались результаты других специфических диагностик. Точность составляет 98%.
Ложноположительный результат возможен в следующих случаях:
- Беременность. В этот период существует вероятность получения искаженных результатов, поскольку генетические материалы отца и сам плод могут быть расценены как чужеродный агент.
- Хроническое заболевание. Сомнительный результат возможен, если у пациента имеется запущенная форма туберкулеза, аутоиммунные процессы, патологии печени.
- Недавно сделанные прививки. Вакцина оказывает влияние на синтез иммуноглобулинов.
- Травма. У пациента с недавними повреждениями развиваются воспалительные процессы, которые могут спровоцировать получение ложноположительного анализа.
- Пожилой возраст. У таких людей нередко наблюдается сразу несколько хронических патологий, оказывающих сильное влияние на иммунную систему.
- Новорожденные. До полутора лет у маленьких детей серодиагностика по ИФА-методу может показать положительные результаты, если женщины были инфицированы трепонемами в период беременности. В крови малыша в течение года и более циркулируют иммуноглобулины матери.
В зависимости от лаборатории цены на специфические тесты методом ИФА варьируются в пределах от 6,1$ до 11,4$. В некоторых диагностических центрах за процедуру взятия крови на анализ берется 2,5$.
Во многих государственных медицинских учреждениях ИФА можно сдать бесплатно. При большой загруженности лабораторий и необходимости получения быстрого результата тест на сифилис лучше сдать в частных лабораториях.
ИФА на выявление сифилиса можно сдать в Инвитро. Стоимость услуг составляет 14$, включая забор крови в процедурном кабинете. Срок выполнения — 7 дней.
Центр CMD также предоставляет услуги по определению венерического заболевания. Стоимость анализа составляет 9,2$. Срок выполнения — до 3 дней. При необходимости лаборанты учреждения могут провести взятие крови на дому.
Пройти исследование на сифилис можно в медицинской лаборатории Гемотест. Цена анализа на сифилис РПГ (реакция пассивной гемагглютинации) составляет 10,3$. Срок выполнения — 1 сутки.
Все диагностические центры гарантируют полную анонимность.
Сифилитический тест, основанный на иммуноферментной реакции, позволяет с высокой точностью выявить венерическое заболевание, вызванное трепонемами. Анализ назначается, если неспецифический способ выявления инфекции, показывает отрицательный результат при наличии симптомов у пациента или контактах с зараженными лицами.
Лечение проводится только при наличии положительных результатов, полученных несколькими методами.
источник
ИФА анализ — что это такое, расшифровка иммуноферментного анализа крови на паразитов, сифилис, ВИЧ, туберкулез. Норма в таблице, результаты
Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.
Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.
ИФА анализ — это такое лабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.
Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.
ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.
Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.
Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.
Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.
Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:
| Кол-во в организме | Функции | Период полураспада (дней) | Значение | |
| G | 70% | Формируют пассивный иммунитет у новорожденного; необходимы для иммунного ответа улучшают фагоцитоз, | 21-24 | обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях |
| М | 5-10% | нужны для активации фагоцитоза, способны связать 5 молекул антигена, | 5 | Обеспечивает первичную иммунную реакцию |
| А | 10-15 | Нейтрализуют токсины и вирусы нужны для формирования раннего иммунитета Образование местного иммунитета | 4-5 | Защита слизистых оболочек |
| Е | 0,2% | вызывают аллергию и анафилаксию активируют тканевые базофилы | 2 | Защита от паразитов |
| D | 0,2% | задействованы в выработке лимфоцитов, необходим как мембранный рецептор для антигенов; | 3 | Их роль малоизучена |
Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.
ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.
Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:
- вирусный гепатит;
- ВИЧ-инфекция;
- цитомегаловирус,
- вирус Эпштейна-Барр,
- вирус герпеса,
- корь
- краснуха,
- туберкулез,
- сальмонеллёз,
- дизентерия,
- клещевой энцефалит,
- бактерии хеликобактер,
- боррелиоз,
- столбняк,
- сифилис,
- дифтерия,
- лептоспироз,
- хламидиоза,
- уреаплазмоз,
- микоплазмоз,
- коклюш.
Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:
- плоскими червями
- аскаридами
- гистолическими амебами,
- печеночными тремадами,
- лямблиями,
- токсоплазмами,
- трихинеллами,
- двуусткой,
- цестодозами.
ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.
При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:
- за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
- не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
- стараться не допускать стрессов,
Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.
Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.
Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.
В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.
Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.
Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки.
Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.
Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С.
После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.
Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:
- Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
- Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
- Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.
В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.
Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.
При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.
Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.
После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей.
При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.
Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.
Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.
Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.
Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.
На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.
Возможны различные интерпретации результатов:
- IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
- IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
- IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
- IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
- IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
- IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.
Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:
- вирусный гепатит;
- цитомегаловирус;
- герпес;
- ветряная оспа;
- хламидиозом;
- стафилококковая или стрептококковая инфекция.
Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:
| Название гормона | Пол | Норма | |
| 1 | тиреоглобулин | м/ж | До 70 МЕ/мл |
| 2 | тироксин | м/ж | 64-146 нмоль/л |
| 3 | трийодтиронин | м/ж | 1,8-2,8 нмоль/л |
| 4 | Свободный тироксин | м/ж | 11-25 пмоль/л |
| 5 | Свободный трийодритонин | м/ж | 4,49-9,3 пмоль/л |
| 6 | Тестостерон, дегидротестостерон | Ж | 0,5-10 мЕд/л |
ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.
ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.
Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:
- иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
- IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
- IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.
В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.
Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).
В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).
При получении положительных проб далее следует:
- если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
- повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
- при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.
Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга.
ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.
ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.
| Цитомегаловирус | IgM обнаруживаются через 30-45 дней после заражения, либо во время реактивации инфекции в течение 4-6 месяцев | источник ИФА на сифилис — сложное многоступенчатое лабораторное исследование. Оно проводится для обнаружения возбудителей данной венерической патологии в системном кровотоке, установления их количественного содержания. Иммунологический анализ информативен, не требует длительной подготовки, а расшифровка полученных данных редко занимает более 1-3 дней. Не всегда результаты исследования соответствуют истинному положению дел. Иногда они бывают как ложноположительными, так и ложноотрицательными. Поэтому для выставления основного диагноза требуется проведение и других лабораторных тестов, в том числе инструментальных. Анализ ИФА на сифилис помогает с достаточно высокой точностью обнаружить в крови пациента специфические иммуноглобулины — антитела. Они всегда вырабатываются иммунной системой в ответ на вторжение в организм человека чужеродных белков. Все они специфичны, то есть для уничтожения бледных трепонем продуцируются антитела, не способные разрушать клетки возбудителей других заболеваний. Поэтому обнаружение в кровеносном русле специфического антигена прямо указывает на развивающийся сифилис. Исследование методом ИФА преимущественно назначается пациентам при выявлении у них внешних признаков данной венерологической патологии — это твердый шанкр, гуммы, вторичные или третичные сифилиды на коже и слизистых, укрупнившиеся и болезненные лимфоузлы. Также биохимическое исследование показано в следующих случаях:
Анализ на сифилис методом ИФА чаще проводится непрямым неконкурентным методом. Взятый антиген от бледной трепонемы переносится в лунки лабораторного приспособления. Затем туда же добавляется определенное количество плазмы или сыворотки крови, которые содержат антитела к бледным трепонемам. Наблюдается быстрое связывание биологического материала с подготовленными антигенами, оседание образовавшихся комплексов на дне лунок. Затем вводятся меченые ферментами антитела и реагенты. При наличии в крови возбудителей сифилиса содержимое лунок окрашивается в различные цвета. Также выполняется диагностика сифилиса методом прямого конкурентного ИФА с использованием иммобилизованных на твердой поверхности специфических антигенов. После нанесения на них обработанных биоматериалов требуется некоторое время для инкубации. По ее окончанию происходит образование меченных и немеченных комплексов. После отмывания носителя добавляются субстрато-хромогенные реагенты, окрашивающие биоматериалы при наличии в них специфических антигенов. Во время проведения анализа крови важно не только обнаружить антигены к возбудителям сифилиса. Обязательно устанавливается вид и количественное содержание в исследуемом образце иммуноглобулинов A, M и G. Так как каждый из них вырабатывается иммунной системой на определенном этапе развитии болезни, то удается с высокой точностью установить стадию сифилиса:
Если результаты иммуноферментного исследования отрицательные при наличии специфических симптомов сифилиса, оно проводится заново. Анализ может быть повторен и по желанию самого обследуемого. Расшифровкой занимается врач из лаборатории. Результат готов спустя 1-3 дня, но в некоторых случаях, например, при срочной операции, все исследование занимает не более 2-3 часов. Если ИФА на сифилис дал положительный результат, то он будет обязательно перепроверен. Дело в том, что иммунная система не всегда работает корректно, что становится причиной искажения параметров биохимического исследования. Для человека, практикующего случайные сексуальные контакты, предстоящее проведение анализа является стрессом. Это также может спровоцировать получение некорректных данных из-за выброса в кровь комплекса биоактивных веществ. Искажение результатов наблюдается и при выкуривании сигареты за 3-5 часов до проведения исследования. Также при наличии у пациента некоторых заболеваний данные ИФА на сифилис будут перепроверены:
Ложноположительные результаты нередко спровоцированы беременностью вследствие изменения гормонального фона, недавней вакцинацией из-за присутствия в крови антител к введенным микроорганизмам.
Насколько чувствителен ИФА — в 99% случаев удается с первого раза правильно выставить диагноз. Но иногда при наличии в организме бледных трепонем результат бывает отрицательным. Чаще всего это происходит на этапе инкубационного периода. Он начинается сразу после внедрения инфекционных возбудителей в кожу или слизистые половых органов, аноректальной области, рта. Длительность инкубации значительно варьируется:
В этот период сифилис клинически не проявляется, а анализ крови даст ложноотрицательные результаты. Патогенные бактерии только распространяются по организму, а иммунная система еще не начала вырабатывать к ним антитела.
Когда анализ крови дал положительный результат, то венерологи требуют, чтобы больной оповестил всех половых партнеров. Они также обязаны посетить лабораторию для обследования на сифилис. При этом недостаточно проведения только одной биохимической диагностики. Сифилис наиболее часто передается при половых контактах. Но в клинической практике были отмечены случаи инфицирования через предметы личной гигиены. Поэтому невозможно точно определить, когда заразились члены семьи. Им рекомендуется сдать кровь на ИФА через 1, 3, 6 месяцев даже при получении отрицательного результата. После выдачи на руки бланка с данными пациент должен обратиться к венерологу. Если диагностика сифилиса дала положительный результат, то врач подбирает антибиотики, к которым наиболее чувствительны обнаруженные трепонемы. Терапия длится несколько месяцев, после чего переболевший человек ставится на учет в течение 2 лет. В это время он регулярно сдает кровь на анализ для подтверждения окончательного выздоровления. источник
В перечень стандартных диагностических мероприятий, применяемых для инфекционных заболеваний, входит иммуноферментный анализ. Если ИФА на сифилис положительный, не стоит сразу впадать в панику. Рассмотрим подробнее особенности этой методики исследования и принципы расшифровки полученных результатов у разных категорий пациентов. Иммуноферментный анализ является одним из наиболее распространенных методов диагностики инфекционных заболеваний. Он относится к категории трепонемных тестов, то есть с его помощью можно установить наличие в организме пациента возбудителя сифилиса – бледной трепонемы.
Методом ИФА сифилис обнаруживается благодаря выявлению антител к трепонеме. Они содержаться в крови больного, причем их тип и количество зависят от стадии и формы заболевания, что позволяет получить важную информацию о текущем состоянии здоровья человека. Этот метод также применяется для диагностики других венерических и инфекционных заболеваний, в частности, аутоиммунных, паразитарных, системных и т. д. ИФА очень часто назначается при подозрении на сифилис или другие инфекционные заболевания. Это обусловлено тем, что анализ позволяет выявить точный тип и стадию заболевания, причем его достоверность сохраняется на высоком уровне – вероятность ошибки по итогам многократного исследования составляет всего 1%, первичный ИФА имеет точность около 90%. Использование качественных реактивов и современного оборудования позволяет максимизировать точность показателей. В целом преимуществами метода являются:
Не стоит забывать и о слабых сторонах этого метода. ИФА обладает следующими недостатками:
Врач может назначить проведение иммуноферментного анализа для диагностики не только сифилиса, но и ряда других инфекционных заболеваний. Если рассматривать ситуацию непосредственно с заражением трепонемой, поводом для обследования могут стать:
ИФА может проводиться разными способами. В каждом конкретном случае подбирается наиболее подходящий вариант. В первую очередь, существует разделение методов на:
Также существует классификация способов проведения ИФА по принципу воспроизведения необходимой реакции.
Для того чтобы сократить риски получения недостоверных результатов, необходимо правильно сдать кровь для анализа. Перед прохождением ИФА нужно соблюдать некоторые ограничения:
Для ИФА берется венозная кровь из локтевой вены, сдавать ее нужно утром натощак. В целом применяются стандартные правила подготовки к забору венозной крови. В зависимости от того наличие какого заболевания тестируется, могут вноситься дополнительные требования к предварительной подготовке пациента. Инструкция по проведению ИФА достаточно проста:
После проведения исследований пациенту выдается документ с результатами. Он имеет вид таблицы с соответствующими обозначениями напротив каждого типа иммуноглобулина на пересечении с наименованиями инфекционных заболеваний. Только специалист сможет грамотно расшифровать результаты анализов. Самостоятельно трудно разобраться, например, что означает результат ИФА к=1 4. Сифилис к тому же может протекать в разных формах, что также отражается на итоговых данных. В результатах указываются 3 вида иммуноглобулинов:
Эти вещества вырабатываются организмом в определенной последовательности, что является дополнительным признаком болезни. При качественных тестах устанавливается лишь присутствие иммуноглобулинов в крови каждого типа. Это выражается в изменении цвета материалов, участвующих в анализе. Количественные показатели являются вспомогательными, они более точно описывают ситуацию. Соотношение антигенов и антител указывает на степень тяжести заболевания и интенсивность ответных действий организма. Если у пациента действительно имеется сифилис, положительный ИФА обнаруживается абсолютно всегда, не заметить присутствия трепонем при таком исследовании невозможно. Не стоит отчаиваться, заболевание хорошо поддается лечению, особенно на начальных стадиях. Что необходимо делать при положительных результатах теста:
Не нужно откладывать уход на больничный и бояться огласки результатов. Диагноз шифруется и остается в секрете, лишь при угрозе инфицирования других людей необходимо сообщить о проблеме родственникам и половому партнеру, чтобы они прошли требуемые обследования. Иногда фиксируется результат других тестов и ИФА ложноположительный на сифилис. Именно поэтому рекомендуется проводить 2 — 3 вспомогательных метода и через некоторое время повторять иммуноферментный анализ. Подобные неточности встречаются редко, они обусловлены преимущественно такими факторами:
Ложноположительные результаты разделяют на острые и хронические, в зависимости от характера спровоцировавшего их фактора. Основные из них представлены в таблице:
| Организм реагирует воспалительным процессом, может произойти сопутствующее инфицирование. | ||||
| Интоксикация
| Возникает при отравлении токсическими веществами или проникновении некоторых патогенных микроорганизмов. | ||||||
| Инфаркт
| Острые проблемы с сердцем создают существенную нагрузку на организм и вызывают ряд десенсибилизирующих реакций. | ||||||
| Вакцинация
| При подобных сбоях выработка иммуноглобулинов может быть необоснованной наличием антител. | ||||||
| Болезни соединительной ткани
| Преимущественно являются генетическими патологиями и иногда «сбивают» результаты обследований. | ||||||
| Возрастные изменения
| У пожилых людей иммунная система работает со сбоями, к тому же имеется множество хронических болезней. |
При наличии подобных проблем со здоровьем тест на сифилис может показать положительный результат, но это является лишь следствием выработки организмом белков для борьбы с заболеванием. Однако ИФА распознает их, как антигены.
У здорового ребенка до полуторагодовалого возраста могут наблюдаться ложноположительные результаты ИФА, если женщина во время беременности была инфицирована сифилисом. До этого возраста кровь еще не успевает полностью обновиться, поэтому в ней могут присутствовать антитела матери. Исключение составляет ситуация с обнаружением иммуноглобулинов IgM.
Больше информации об особенностях иммуноферментного анализа и методике его проведения вы можете узнать, посмотрев видео в этой статье.
источник