Иммуногистохимический анализ при раке легкого

Иммуногистохимическое исследование в онкологии – это разновидность исследования ткани с помощью специальных реактивов по принципу антиген-антитело.

При иммуногистохимическом исследовании используются реактивы, которые содержат антитела, отмеченные специальными веществами.

Антитело – это белок, который связывается в тканях с определенными молекулами — антигенами, после чего возникает реакция. Если же таких молекул нет, то и реакции не будет.

По этому признаку можно судить, присутствует в ткани интересная нам молекула или нет. Это похоже на то, если нанести на белый стол бесцветный клей. Невооруженным глазом на белом фоне он практически незаметен, но стоит насыпать на стол мелкого песка, как клей становится виден за счет прилипших песчинок.

По правилам иммуногистохимическое исследование при раке всегда проводится в специализированной лаборатории. Для его проведения необходима опухолевая ткань, полученная в результате биопсии или операции.

Иммуногистохимическое исследование проводится для определения наличия в опухолевых клетках различных точек приложения, например, наличие рецепторов эстрогенов (ER) и прогестеронов (PR). Также иммуногистохимия выполняется для определения показателя Ki-67 (индекс пролиферативной активности опухолевых клеток), гиперэкспрессии белка Her2neu, VEGF (сосудистый фактор роста), р53.

Иммуногистохимическое исследование при раке выполняется для того, чтобы понять, какими препаратами можно лечить злокачественную опухоль, и к каким видам препаратов она чувствительна.

Самый распространённый анализ, определяемый при иммуногистохимическом исследовании, это наличие рецепторной чувствительности к гормонам у опухоли.

ER и PR — протеиновые рецепторы на поверхности опухолевых клеток.

В организме человека постоянно вырабатываются гормоны — эстроген и прогестерон. Эти гормоны воздействуют на ER и PR рецепторы, что приводит к стимуляции роста опухолевых клеток.

Определение Эстрогеновых и Прогетестероновых рецепторов является одним из важнейших моментов, определяющих чувствительность опухоли к терапии гормональными препаратами.

Чаще всего наличие рецепторов ER/PR определяют при раке молочной железы. Их наличие дает возможность, помимо стандартных методов лечения, применить гормональную терапию.

При гормон позитивном раке молочной железы, назначаются препараты: Тамосксифен, Экземестан (Аромазин), Летрозол (Фемара), Анастразол (Аримидекс), Гексэстрол (Синестрол) и другие.Также, считается, что гормонально-зависимый рак молочной железы отличается спокойным течением и редким метастазированием.

Чувствительность опухолевых клеток к гормональной терапии выражается в баллах от до 10. Опухоль считается гормонозависимой, начиная с 2-х баллов. и требует добавления к лечению гормональной терапии.

Her2Neu — это рецептор эпидермального фактора роста раковой клетки. Это — ген, который воздействует на мембранные рецепторы клетки, и стимулирует её к усиленному делению.

В некоторых опухолях (чаще всего рак молочной железы, рак пищевода, рак желудка) присутствует гиперэкспрессия (повышенная активность) Her2Neu, что вызывает быстрое деление опухолевой клетки и её повышенную активность.

Также снижается эффективность химиотерапии, лучевой терапии, гормональной терапии. Из-за этого опухоли с Her2neu позитивным статусом отличаются агрессивным течением.

Существует две методики определения наличия у опухоли гена Her2neu:

Результаты иммуногистохимического исследования выражаются в баллах:

• 0-1 означает, что опухоль без гиперэкспрессии Her2neu.
• 3 означает, что опухоль с гиперэкспрессией Her2neu.

2. Метод FISH (Флуоресцентная гибридизация in situ)

В отличие от иммуногистохимического исследования, при котором определяются белки, при методе FISH определяется наличие генов, кодирующих протеины Her2neu. В зависимости от их наличия, определяется гиперэкспрессия Her2neu.

Определение гиперэкспрессии рецептора Her2neu в опухоли молочной железы является очень важным для дальнейшего назначения лечения.

В современной онкологии гиперэкспрессию Her2neu определяют, чтобы понять, необходимо ли добавление к лечению ингибиторов Her2neu. Для лечения опухолей с гиперэкспрессией рецептора Her2Neu активно и успешно используются таргетные препараты Трастузумаб (Герцептин), Пертузумаб (Перьета), Трастузумаб-эмтанзин (Кадсила), Бейодайм (Трастузумаб+Пертузумаб). Эти препараты прицельно блокируют рецепторы Her2neu, тем самым останавливая активный рост опухолевых клеток и повышая их чувствительность к химиопрепаратам. Добавление таргетной терапии к стандартной химиотерапии при лечении Her2neu позитивных опухолей, серьезно увеличивает общую выживаемость и результат противоопухолевого лечения.

Ki-67 — это маркер пролиферативной активности опухолевой клетки. Данный параметр оценивается в процентах и показывает, сколько процентов опухолевых клеток активно делятся.

Если Ki-67 меньше 15%, опухоль считается слабоагрессивной, при показателе Ki-67 от 30 до 50% опухоль считается агрессивной, а при показателе Ki-67 выше 50% опухоль является высокоагрессивной.

Также Ki-67 является фактором прогноза течения опухолевого заболевания и ответа опухоли на химиотерапевтическое лечение. Определяется это простым способом: чем ниже показатель Ki-67, тем хуже опухоль реагирует на химиотерапевтическое лечение. И наоборот — чем выше показатель Ki-67, тем лучше опухоль будет отвечать на химиотерапию.

Белок p53 — это транскрипционный фактор, регулирующий клеточный цикл. В быстро делящихся клетках обнаружено увеличение концентрации белка р53 по сравнению с клетками, делящимися медленно, что обусловлено высоким риском их онкогенности.

Белок p53 предотвращает образование злокачественных опухолей в нашем организме. В норме, антионкоген р53 находится в неактивном состоянии, а при появлении повреждений ДНК в здоровой клетке — активируется.

Функция белка р53 состоит в удалении тех клеток, которые являются потенциально онкогенными. Это называется — индуцированный апоптоз, уничтожение потенциально опасной клетки.

При иммуногистохимическом исследовании, повышенное содержание белка p53 обнаруживается в 50% злокачественных клеток, что позволяет им беспрепятственно делиться и избегать апоптоза (уничтожения).

Количество белка p53, определяют в дополнение к показателю Кi67, для того, чтобы понять насколько агрессивна опухоль и определить дальнейшее течение болезни. Если уровень белка p53 высокий, значит опухоль не агрессивная и не склонна к метастазированию и быстрому росту. Если же, показатель белка p53 низкий, то значит опухоль агрессивна и склонна к быстрому росту в окружающие ткани и метастазированию.

VEGF – это сигнальный белок, вырабатываемый клетками для активного роста новых сосудов в уже существующей сосудистой системе.

Есть несколько видов белка VEGF, и каждый воздействует на определенный рецептор VEGFR (Vascular endothelial growth factor receptor). Для того чтобы активно делиться, опухоли нужно питание, а для этого нужны сосуды, по которым это питание будет поступать. Именно по этой причине в опухолевых клетках содержится повышенное содержание белка VEGF — для того, чтобы в короткие сроки строить сосудистые сети.

Наличие белка VEGF в опухоли говорит о возможности применения таргетной терапии такими препаратами, как Бевацизумаб (Авастин), Рамуцирумаб (Цирамза), Афлиберцепт (Залтрап). Они перестраивают сосудистую сеть опухоли, тем самым лишая её питания.

Иммунотерапия в онкологии появилась сравнительно недавно, но уже успела показать удивительные результаты в лечении опухолей. Механизм иммунотерапии рака заключается в том, что препарат позволяет иммунитету увидеть опухоль и уничтожить её. Ответственные за «видимость» опухоли белки PD-1, PDL-1 и PDL-2 в достаточном количестве присутствуют не во всех опухолях. Именно поэтому одним пациентам иммунотерапия помогает, а другим нет.

Чаще всего определение гиперэкспрессии белка PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2 необходимо при меланоме, немелкоклеточном раке легкого, раке желудка и раке почки.

Для того чтобы отобрать пациентов, которым показана иммунотерапия, проводится определение наличия экспрессии PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2, при помощи флюоресцентной гибридизации in situ (FISH). При наличии экспрессии PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2, показано применение иммунотерапии препаратами Пембролизумаб (Кейтруда), Ниволумаб (Опдиво), Атезолизумаб (Тецентрик).

В современной онкологии иммуногистохимическое исследование играет очень важную роль, так как при помощи этого исследования онкологи определяют наличие тех или иных факторов в опухоли, которые позволяют грамотно и адекватно составить дальнейшее лечение пациента и говорить о прогнозах заболевания.

источник

Поставить точно диагноз «онкология» без проведения специальных исследований практически невозможно. В настоящее время медицина обладает такими возможностями. Поэтому если имеется подозрение на рак, то проводится иммуногистохимическое исследование. Рассмотрим, что собой представляет данный анализ, в каких случаях назначается и что позволяет выявить.

Под данным исследованием подразумевается изучение образца тканей под микроскопом. Их получают при помощи биопсии и предварительно обрабатывают специфическими антителами.

Онкологические заболевания давно находятся в поле зрения врачей и ученых. В ходе многочисленных исследований было установлено, что злокачественные клетки в процессе жизнедеятельности продуцируют специфические белки, которые называют антигенами. Они связываются с антителами, именно на этом основано иммуногистохимическое исследование, когда ткань пациента, взятая для изучения, после обработки тщательно изучается при помощи микроскопии.

Когда антитела взаимодействуют с раковыми клетками, то можно наблюдать явление флуоресценции. Это дает основания практически на 100 % быть уверенным, что имеет место онкология.

Сейчас уже разработаны и активно внедрены в медицинскую практику антитела практически ко всем новообразованиям.

Иммуногистохимическое исследование при раке позволяет:

• Распознать новообразование и определить его разновидность.
• Выяснить распространенность первичного очага по организму.
• При взятии биологического материала из вторичных очагов можно определить источник распространения метастазов.
• Исследование позволяет оценить эффективность терапии.
• При помощи анализа можно выяснить, на какой стадии развития находится раковая опухоль.
• Иммуногистохимическое исследование позволяет также выяснить скорость роста новообразований.

Данный метод исследования считается более информативным по сравнению с обычным гистологическим. Если использовать оба метода исследования, то можно получить полнейшую картину, поэтому на практике чаще всего врачи так и поступают.

Исследовать при помощи этого метода можно практически все ткани человеческого организма, но чаще всего такой анализ назначают при подозрении на онкологию.

1. Для определения первичных новообразований.
2. Для выявления метастазов.
3. Данный анализ помогает определить прогноз развития и протекания патологии.
4. Анализ служит одним из методов исследования рецепторов к ряду гормонов.
5. ИГХ-исследование позволяет обнаружить микроорганизмы.
6. Метод исследования применяют для выяснения чувствительности раковых клеток к химиотерапии и радиотерапии.

Иммуногистохимическое исследование проводится в несколько этапов, первым из них является сбор биологического материала. Его получают путем биопсии или изъятия материала во время проведения операции.

Кусочек ткани помещают в формалин и направляют в лабораторию, где его подвергают изменениям:

1. Материал обезжиривают специальными составами и заливают парафином. В таком состоянии он может храниться практически вечно, поэтому при необходимости исследование можно повторять.
2. На следующем этапе получают тончайшие срезы — проводят микротомирование. Их размещают на специальных стеклах.
3. Приготовленные срезы обрабатывают растворами антител определенной концентрации. Использовать для обработки могут составы, содержащие разное количество антител. Какие из них вступят во взаимодействие с раковыми клетками, будет зависеть от разновидности опухоли.

Такой анализ просто незаменим, если есть подозрение на наличие раковых клеток в груди. Обязательно определение количества рецепторов эстрогена и прогестерона. При их повышении активизируется процесс роста злокачественных клеток.

ИГХ-исследование позволяет не только распознать онкологическое заболевание, но и определить его стадию. При помощи исследования врачи выясняют, показана ли гормональная терапия.

Опухоли, имеющие большую концентрацию гормонов, чаще всего вполне эффективно лечатся антигормональными препаратами.

Во время проведения анализа обязательно определяют показатель Ki-67, он помогает определить злокачественность процесса. Если иммуногистохимическое исследование молочной железы показывает Ki-67 до 15 %, то исход заболевания считается благоприятным. Если показатель доходит до 30 %, то без химиотерапии не обойтись, потому что опухоль растет довольно быстро. Отметка в 90 % чаще всего свидетельствует о неизбежности летального исхода.

Данный анализ назначается не только при подозрении на онкологию груди, но еще он оказывается довольно информативным, если:

• Имеется бесплодие.
• Обнаружены злокачественные образования матки.
• Наблюдаются патологические изменения в репродуктивной системе.

Такой анализ проводится, если:

• Часто наблюдаются выкидыши.
• У женщины было несколько неудачных попыток ЭКО.
• Диагностирована хроническая форма эндометрита.

Данное исследование помогает выяснить, имеются ли клетки, мешающие зачатию естественным путем.

ИГХ-исследование тканей эндометрия назначается женщинам, у которых уже было несколько неудачных попыток искусственного оплодотворения.

Взятие тканей эндометрия проводится в разные дни цикла, которые назначает врач.

Необходимо иметь в виду, что исследовать подготовленные образцы тканей имеет право только врач, имеющий сертификат, подтверждающий специальную подготовку по проведению анализов по методу ИГХ.

В заключении должно быть указано:

1. Показатели антител, к которым определена тропность исследуемой ткани.
2. Указывается разновидность раковых клеток и их количество.
3. Указываются выявленные антигены, которые помогают установить вид онкологии.

По результатам исследования нельзя ставить окончательный диагноз. Врач-онколог имеет право это сделать только после получения интерпретации всех диагностических процедур.

Таким образом, можно сделать вывод, что эффективно иммуногистохимическое исследование при раке молочной или других желез и других видах онкологии. Анализ дает исчерпывающую информацию и позволяет распознать начинающийся патологический процесс на клеточном уровне.

источник

Иммуногистохимическое исследование экспрессии рецептора EGFR при раковых опухолях эпителиальной природы

EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) является одним из рецепторов семейства трансмембранных. Экспрессируется EGFR на поверхности эпителиальных клеток и принимает участие в регуляции роста клеток и дифференцировки. Деление клеток в его присутствии происходит намного быстрее. При активации рецептора EGFR после связывания с факторами роста (EGF и TGF-a), запускаются механизмы, которые приводят к росту опухоли и пролиферация раковых клеток повышается, также стимулируется процесс метастазирования.

Экспрессия EGFR — это показатель, свидетельствующий о том, что рост опухоли стимулируется деятельностью рецептора эпидермального фактора роста. Так как активация рецептора происходит за счет веществ самого новообразования, то правильнее будет говорить о экспрессии EGFR опухолью.

Экспрессия EGFR обнаружена при следующих формах рака: легких, шеи и головы, толстой и прямой кишки (колоректальный тип рака). Иммуногистохимическое определение экспрессии EGFR позволяет установить статус этих рецепторов и назначить лечение.

Для иммуногистохимического исследования берут фрагмент ткани опухоли, полученный во время операции или процедуры биопсии. Из материала делают тонкий срез для микроскопирования и подвергают воздействию специальных реактивов.

Интенсивность реакции оценивают по специальной шкале: 0, 1+, 2+, 3+. Определяют степень экспрессии (%) и ее тип (нормальный или патологический). Параллельно проводится гистологическое исследование новообразования.

Экспрессия EGFR напрямую связана со степенью злокачественности и стадией развития опухоли шеи и головы, онкопатологии легких и колоректального рака.

Специалист в соответствии с полученными данными иммуногистохимического исследования классифицирует опухоль как EGFR-отрицательную или EGFR-положительную.

Гиперэкспрессия EGFR говорит о высокой злокачественности, поздних сроках развития опухоли и метастатических процессах. Этот фактор является неблагоприятным в отношении прогноза болезни и свидетельствует о высокой пролиферативной активности опухоли, агрессивности, устойчивости к проводимой терапии.

Низкая степень экспрессии EGFR свидетельствует о регрессе опухоли и положительной динамике в лечении.

Иммуногистохимическое исследование экспрессии EGFR является важным методом лабораторного анализа при колоректальном раке, онкопатологии легких и опухолях головы и шеи, позволяющим установить прогноз развития болезни и эффективность лечения.

Анализы Вопрос: Здравствуйте у мужа нашли половую инфекцию Enterococcus faecalis, какие анализы мне нужно сдать ?

уточнить цену Вопрос: Добрый день. Подскажите пожалуйста, мне нужно сдать комплекс анализов, однако в прейскуранте не все нашла. Рассчитайте мне какова сумма на сдачу данных анализов: Комплекс «Безопасный секс» +кровь на ВПГ1.2.6 ТИПЫ И цмви (Lg M и G). спасибо.

источник

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

ИГХ-исследование ткани легкого

Подскажите,пожалуйста, что означает следующее заключение ИГК-исследования:
С целью верификации гистологического диагноза в легком — картина воспалительной миофибробластической опухоли, проведено ИГК-исследование.
Клетки опухоли позитивны по экспрессии виментина +++, a-SMA++, ALK-1++ и СД 68++
Клетки опухоли не экспрессируют SMMS-1, десмин, AE1/AE3

Таким образом,морфо-ИГХ картина опухоли соответствует воспалительной миофибробластической опухоли

Регистрация: 15.01.2006 Сообщений: 236 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

По результату ИГХ я вижу что в опухоли есть миофибробласты или гладкие мышечные клетки с макрофагами. такая комбинация может быть в реактивной ткани любого воспалительного процесса (не обязательно но включая инфекционные) или «воспалительной опухоли». Признаков карциномы похоже нет. Результат зависит от места ткани потомучто реактивная ткань может на периферии другой опухоли, инфаркта. Биопсии могут «промазать». Ваш материал биопсия или резекция?

Регистрация: 27.02.2009 Сообщений: 23 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

Соглашусь в В.В. Яковлев, с той лишь оговоркой, что без рутинного гистологического исследования такая ИГХ-картина мало что означает. Пожалуй можно сказать лишь, что в исследованном материале нет эпителиальной опухоли. В остальном вполне может быть и воспалительная миофибробластическая псевдоопухоль.

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

Спасибо больше за ответы.
Материал — биопсия, исследован дважды,в Москве и в Кишиневе:результат один и тот же. При биопсии был взят довольно крупный кусок ткани. В Кишиневе исследовали 6 стеклышек,в Москве сделали ещё 9 стеклышек, которые потом тоже исследовали. В итоге пришли к одному и тому же результату. Насчет «промазали с биопсией» — когда делали надрез,чтобы взять кусок ткани на анализ, пришлось увеличить надрез, чтоб взять самый крупный пораженный участок (кусочек ткани на анализ).
Сейчас стоит вопрос лечения данного заболевания. Здесь в Кишиневе врачи не сталкивались с таким диагнозом и не знают как это лечится.
Мне 22 года.
Очень надеюсь на вашу помощь.

Регистрация: 15.01.2006 Сообщений: 236 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

В 22 года дифференциальный диагноз немного другой. Можете ли вы скопировать полное гистологическое описание, а так же немного истории (рентгенологическое описание, симптомы, другие заболевания или анализы отклоняюшиеся от нормы).

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

Добрый день.
Начнем с самого начала болезни: Выпил очень холодную воду с холодильника. На второй день почувствовал недомогание и поднялась температура. Выпил ампиокс так как и горло тоже как бы чувствовал. Обратился в санчасть, сделали рентген и поставили диагноз подозрение на пневмонию. Неделю принимал парацетамол и трикаксон и витамины. Изменений ни каких не было даже хуже температура до 38-40. Взяли в больницу , опять рентген и томографию там написали что видят десимилированный процес неясной этиологии. Тем не менее лечили от пневмонии около месяца. Результат не дало Решили что наверное туберкулез. В другой больнице институт пульмонологии начали пробный курс 10 дней от туберкулеза еще хуже стало. Решили делать операцию и брать гистологию на обследовании. В Кишиневе такой результат после лаборатории:
внутри сосудистая бронхо-альвиолярная склерозирующая опухоль. Хронический воспалительный процесс с очагами некроза , периваскулярный пневмосклероз с очагами отека легких и фиброноидного некроза в гранулематозных образованиях.
В Москве провели исследование материала ИГХ:
Микроскопическое описание:
С целью верификации гистологического диагноза (Б. 168559/09) в легком- картина воспалительной миофибробластической опухоли, проведено иммуногистохимическое иследование.
Клетки опухоли позитивны по экспрессии виментина+++, а-SMA++,ALK-1++ и СД 68++. Клетки опухоли не экспрессируют SMMS-1,AE1/AE3.
Таким образом, морфо-иммуногистологическая картина опухоли соответствует воспалительной миофибробластической опухоли.
Вот это то что дало исследование. Наши врачи не знают как лечить это.
Анализы крови все хорошие кроме лейкоцитов сейчас 20 и СОИ 56, гемоглобин 120.
Как таково врачи нам описали рентген не ода опухоль а разбросанно по всем легким и не опухоль а гранулезного типа. Это длится 4 месяца, Самое главное температура каждый день. до 38 обычно после обеда поднимается. Принимаю сейчас капли Psorinoheel и Lymphomyosot и от температуры МИГ-400. Не кашляю, месяц назад кашлял была одышка когда поднимался по лестнице сейчас лучше не чувствую. Вот это все.
С уважением,
Алексей.

Регистрация: 15.01.2006 Сообщений: 236 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

Судя по описанию, не опухоль. Была ли сделана бактериальная культура? Антибиотики?
По биопсии, мне нужно посмотреть хоть бы на фотографии стекол сделанных в микроскопе. Ни диагноз, ни выбор ИГХ пока не сходятся с клинической картиной. Я бы в первую очередь думал бы об инфекции (нужны окраски на ТБ, грипковые организмы и по Граму) и о воспалительных неинфекционных (саркоидоз, пневмониты. ). Можете ли вы попросить сфотографировать стекла в микроскопе и отсканировать рентген легких.
iakovlev.v@gmail.com

Добавлено через 2 минуты 59 секунд
Есть ли симптомы в носу и носоглотке? Кем вы работете? Контакт с сеном, землей, животными?

Добавлено через 5 минут 43 секунды
функция почек (креатинин?)

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

добрый день .
Пишет мама Леши так как его дома нет.
Сегодня проверили почки и мы в ужасе, сделали узи и томографию с контрастом (в вену). Поставили диагноз непроходимость почки левой , хотя 2 месяца назад делали томографию и ничего не было. До этого неоднократно было сделано узи и ничего не было обнаружено.
Вот сейчас вы наверное поймете что у нас, Даже не знаем что делать. Завтра идем к онкологу урологу.
До свидания. Мы еще напишем.

Регистрация: 15.01.2006 Сообщений: 236 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

Пока все равно не понятно с определенностью. Оптимально было бы выслать стекла и гистологические блоки мне (укажите как документы, не говорите что в посылке ткань или стекла):
Dr. Vladimir Iakovlev
Division of Pathology
St. Michael’s Hospital
30 Bond St., Cardinal Carter 2-093
Toronto Ontario M5B1W8
Canada
Tel: 1-416-864-6060#3176
Я их верну за свой счет. В худшем случае сфотографировать стекла в микроскопе с разным увеличением. Мне в основном нужны снимки обычных гематоксили-еозин, фотографировать ИГХ пока не надо (но для пересылки нужно все).

Добавлено через 2 минуты 48 секунд
Кровь в моче? Уровень креатинина в крови?

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

здравствуйте.
Это опять мама Леши. Вы знаете наши блоки и стекла остались в Москве. Если у Вас кто то там есть мы бы дали адрес даже выслали денек на отправку чтобы от туда вам их отправить. Мы Вам позвоним . Это Ваш телефон? Объясните как звонить.
Почки только сегодня идем к врачу, но дома смотрим нет никакой крови в мочи.
Пишите. Спасибо.

Регистрация: 15.01.2006 Сообщений: 236 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

У меня к сожалению контактов в Москве нет, только очень далекие и я связь не держу. Я переехал в Канаду много лет назад из Сибири.

Можете ли вы попросить саму лабораторию отправить материал? Сложности могут возникнуть если в таможенной декларации указан биологический материал. К сожалению Российская таможня (как и многие бюрократические машины) немного квадратноголовая и не до конца понимают что материал фиксирован и безвреден. Посылку легче всего отправить указав содержание как «документы».

Другой вариант поросить их (лаборатотию) сфотографировать стекла.

Третий вариант, самый крайний, обьяснить ситуацию что диагноз не совпадает с клиническои картиной и потребовать пересмотра стекол в другом учреждении. Где сейчас стекла и блоки?

Звонить можно, я только не всегда в оффисе(1-416-864-6060 потом после ответа машины 3176). Мои сотовый: 1-647-6801500 (от вас набор наверно ?8-001-647-68-1500) сотовый в госпитале иногда попадает в зону без связи.

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

Доброго Вам времени суток. Уважаемый Владимир В.(извиняюсь, -не знаю как Вас по отчеству)Вас опять беспокоят из Кишинёва. это отец Алексея. Долго не выходили на связь-измотались немного. Я хотел Вас поблагодарить за понимание, неравнодушие и поддержку.
В Кишинёве в архиве оставалось одно стекло и кусочек биоматериала, но Алексея попросили взять с собой в Германию. Он там уже почти две недели.Рак, Слава Богу, исключили. 17-го числа сдал дополнительные анализы, завтра-послезавтра (21-22-го), дай Бог, будут результаты и, может быть, назначат лечение.А пока подозревают саркоидоз или туберкулёз костей.Сделали сканирование скелета и пункцию (опухоли?) на позвонке-ждём результатов.
С уважением, Иван

Регистрация: 15.01.2006 Сообщений: 236 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

Рад что события развиваются таким образом. Сейчас и диагностика и лечение похоже идут в комплексе и грамотные.

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

Добрый день, Владимир!Вы оказались правы по поводу «биопсии промазали». Действительно пришлось ещё раз делать биопсию, а до этого исследовали и на туберкулёз костей , и на бактерии. Сначала поставили диагноз » Саркома Юинга» и получил дважды по три дня химиотерапию по этому диагнозу, (но продолжали исследования) После чего исключили и этот диагноз и поставили » Анопластическая Т-крупноклеточная лимфома стадия IVB(CD30+:CD4+;CD43+CD56-/+;EMA+; GranzymeB+:monoklonalek TCR-gamma: ALK1+/- .По этому диагнозу получил ещё шесть химиотерапии по три дня. Закончил 13.01.10. Провели проверку (анализы, сканирование, томографию. )-Всё хорошо.Только рубцы остались на лёгких. Медики очень довольны результатами, но очень боятся ремиссии и предлагают сделать пересадку стволовых клеток, для большей гарантии. Мы вроде согласны, но некоторые родственники наши опасаются, чтоб обратной реакции не было. Вы, как специалист-медик, что нам можете посоветовать?Как нам поступить? С огромным уважением , Иван

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

[QUOTE=xorovod]Добрый день, Владимир!Вы оказались правы по поводу «биопсии промазали». Действительно пришлось ещё раз делать биопсию, а до этого исследовали и на туберкулёз костей , и на бактерии. Сначала поставили диагноз » Саркома Юинга» и получил дважды по три дня химиотерапию по этому диагнозу, (но продолжали исследования) После чего исключили и этот диагноз и поставили » Анопластическая Т-крупноклеточная лимфома стадия IVB(CD30+:CD4+;CD43+CD56-/+;EMA+; GranzymeB+:monoklonalek TCR-gamma: ALK1+/- .По этому диагнозу получил ещё шесть химиотерапии по три дня. Закончил 13.01.10. Провели проверку (анализы, сканирование, томографию. )-Всё хорошо.Только рубцы остались на лёгких. Медики очень довольны результатами, но очень боятся рецидива и предлагают сделать пересадку стволовых клеток, для большей гарантии. Мы вроде согласны, но некоторые родственники наши опасаются, чтоб обратной реакции не было. Вы, как специалист-медик, что нам можете посоветовать?Как нам поступить? С огромным уважением , Иван.

Регистрация: 16.06.2009 Сообщений: 9 Поблагодарил(а): 0 раз Поблагодарили: 0 раз —>

не ремиссии а рецидива, я извиняюсь там ошибся

источник

Иммуногистохимия рака легкого

Иммуногистохимия представляет собой инновационный метод морфологической диагностики раковых заболеваний. Суть исследования заключается в лабораторном изучении образцов опухолевой ткани, полученной во время биопсии, после их предварительной обработки специальными антителами. Данный метод НЕ ИМЕЕТ противопоказаний, поэтому не может быть выполнен только при невозможности проведения биопсии.
Патогенные клетки продуцируют характерные определенной раковой опухоли специфические белки, называемые антигенами, которые способны взаимодействовать с некоторыми антителами. При проведении иммуногистохимии рака легкого полученный образец опухолевой ткани подвергается обработке определенными антителами, а затем изучается в лаборатории. В результате обработки вещества, связывающиеся с бластными клетками, начинают светиться, что позволяет выявить наличие аномальных клеток.

Метод исследования позволяет исследовать любые ткани, поэтому часто выполняется при подозрении опухолевого процесса.
Исследование может быть выполнено с различными целями:

• Определить тип и подтип злокачественной опухоли,
• Выявить источник метастазов,
• Определить распространенность опухолевого очага,
• Оценить эффективность терапии рака,
• Определить степень онкологии,
• Оценить скорость роста новообразования,
• Определить прогноз болезни.

Результаты исследования позволяют осуществлять высокоэффективное лечение с помощью современных противоопухолевых препаратов, подавляющих пролиферацию раковых клеток.

Обследование включает четыре основные этапы.
Первый этап предполагает взятие образца опухолевой ткани во время биопсии либо во время оперативного вмешательства. Выбор метода забора биоптата (опухолевой ткани) зависит от места нахождения злокачественного новообразования. После взятия материала его помещают в раствор формалина (как правило, 10%-й) и передают в лабораторию.
На следующем этапе проводится обработка материала исследования, при которой лаборант делает тончайшие срезы биоптата и помещает их на гистологические стекла.
Третий этап иммуногистохимии предполагает окрашивание полученных срезов специальными препаратами – растворами специфических антител. После каждого этапа окрашивания материалы изучаются врачом, принимающим решение о необходимости продолжения поиска опухолевых маркеров либо о постановке диагноза. Окрашивание срезов выполняется вручную лаборантом, либо автоматически с помощью медицинского оборудования. Второй способ является более достоверным и исключает ошибки.
Количество используемых маркеров может отличаться в зависимости от конкретного клинического случая и, как правило, зависит от предварительного диагноза. Исследование предполагает использование малой панели (до 5 антител) либо большой (от 6 единиц до десятков антител). Результаты исследования при стандартной «малой панели» пациент получает через неделю, в случае использования «большой панели» ждать приходится около двух недель.

Изучение полученных данных проводит патологоанатом. В заключение процедуры специалист нашего Специализированного Онкоцентра отмечает реагенты, с которыми было определено сродство ткани, также описывается морфологическая картина биоптата: выявленный тип бластных клеток и их количество. Сродство биопсийного материала и используемых опухолевых антител указывает на конкретный тип раковой опухоли.
Иммуногистохимия рака легкого считается наиболее достоверным и точным методом исследования онкологии, позволяющим почти со 100% точностью поставить диагноз, определить тип новообразования и выявить место локализации опухоли.

Характерным отличием данного исследования от других диагностических процедур, в основе которых также заложена реакция антиген-антител, считается структурная специфика проведения обследования. В процессе диагностики врач изучает наличие реакции, а также ее интенсивность и распространение сигнала в биоптате.

источник

Важнейшим пунктом при диагностике раковых заболеваний является иммуногистохимическое исследование. Ежедневно в организм человека проникают микроорганизмы, способные запустить развитие патологического процесса. Защитные силы противостоят этому, образуя антитела. Эта реакция и легла в основу создания ИГХ-исследования.

Данный способ диагностики раковых заболеваний является наиболее современным и достоверным. В процессе развития опухолевого процесса образуются чужеродные организму белки – антигены. В это же время иммунная система вырабатывает антитела, главная цель которых – предотвращение размножения патогенных микроорганизмов.

Задачей иммуногистохимического исследования является своевременное выявление раковых клеток. Для этого биологический материал пациента обрабатывается множеством антител, после чего тщательно изучается под микроскопом. Если данные белковые соединения свяжутся с опухолевыми клетками, будет визуализироваться их свечение. Возникновение эффекта флюоресценции и свидетельствует о наличии в организме раковых клеток.

На сегодняшний день в распоряжении специалистов, осуществляющих ИГХ-исследование, имеются практически все антитела к различным видам опухолей, что служит залогом получения достоверных результатов.

Современный вид диагностики позволяет определить:

• распространение опухолевого процесса;
• скорость роста злокачественных новообразований;
• вид опухоли;
• источник метастазов;
• уровень злокачественности.

Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования может оцениваться степень эффективности лечения раковых заболеваний.

С помощью данного способа существует возможность изучения любых тканей человеческого организма. Главным основанием для назначения иммуногистохимического исследования является подозрение о наличии злокачественного образования.

В этом случае метод используется для:

• определения вида опухоли и области её локализации;
• обнаружения метастазов;
• оценки активности опухолевого процесса;
• выявления патологических микроорганизмов.

Также анализ эффективен при проблемах с зачатием.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия показано при:

• бесплодии;
• заболеваниях матки;
• наличии патологий в органах репродуктивной системы;
• невынашивании беременности;
• хронических заболеваниях эндометрия.

Кроме того, ИГХ-исследование назначается пациенткам, у которых не наступает беременность даже после нескольких попыток экстракорпорального оплодотворения. Метод позволяет определить, имеются ли в организме клетки, снижающие вероятность зачатия.

Противопоказаний к ИГХ-исследованию не существует. Единственным фактором, из-за которого невозможно провести анализ, является непреодолимая сложность при заборе биоматериала пациента.

В первую очередь методом биопсии получают образец ткани больного. Реже забор материала осуществляется в процессе эндоскопического обследования или хирургического вмешательства. Способ получения образца зависит от вида опухоли и её локализации.

Важным нюансом является то, что забор материала при первичном обследовании должен осуществляться до начала лечения. В противном случае результаты исследования могут быть искажены.

После забора биоматериала его помещают в формалин и отправляют в лабораторию, где он подвергается следующей обработке:

1. Образец ткани обезжиривается и заливается парафином. В данном виде биологический материал может храниться очень долго, за счёт чего ИГХ-исследование может быть проведено повторно.
2. С образца собирают несколько тонких срезов и перемещают их на специальные стёкла.
3. На них биоматериал окрашивается растворами различных антител. На данном этапе может применяться как малая панель, так и большая. В первом случае изучаются реакции после использования 5 видов антител, во втором – до нескольких десятков.
4. В процессе иммуногистохимического исследования при раке любого органа появляется эффект флюоресценции, что даёт возможность специалисту определить вид злокачественных клеток.

Как правило, заключение готово через 7–15 дней. Срок зависит от вида используемой панели (малой или большой). Расширенный способ занимает больше времени.

Изучением срезов биоматериала занимается патологоанатом, имеющий знания и навыки (подтверждённые официальным документом), необходимые для проведения анализа.

При интерпретации результатов особое внимание обращается на показатель Ki-67. Именно он предоставляет информацию о степени злокачественности процесса. Например, если результат показателя после проведения иммуногистохимического исследования при раке молочной железы составляет не более 15%, считается, что прогноз более чем благоприятный. Уровень в 30% свидетельствует об активности опухолевого процесса, т.е. о быстрой скорости его развития. Как правило, она останавливается после курса химиотерапии.

По некоторым статистическим данным, если Ki-67 составляет менее 10%, итог заболевания будет благоприятным (в 95% случаев). Отметка в 90% и выше означает почти 100%-ный летальный исход.

Кроме показателя злокачественности, в заключении указываются:

• антитела, к которым выявлено сходство (тропность);
• вид раковых клеток, их количественное значение.

Важно понимать, что точный диагноз ставится после получения и изучения информации, собранной посредством всех проведённых диагностических процедур. Несмотря на то, что ИГХ-анализ считается наиболее информативным методом по сравнению с гистологией, иногда необходимо использовать оба способа. Расшифровкой иммуногистохимического исследования занимается исключительно онколог.

В современной медицине особое внимание уделяется диагностике раковых заболеваний. Наиболее современным и информативным методом считается иммуногистохимическое исследование. С его помощью выявляется не только наличие раковых клеток, но и определяется их вид и скорость развития злокачественного процесса. Кроме того, на основании результатов производится оценка эффективности назначенного лечения.

источник

Экспертное заключение – доктор медицинских наук, профессор кафедры патологической анатомии лечебного факультета РГМУ М.В. Самойлов

Учебное пособие выполнено в рамках инновационной образовательной программы Российского университета дружбы народов, направление «Комплекс экспортоориентированных инновационных образовательных программ по приоритетным направлениям науки и технологий»

Содержание

ПРИКЛАДНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГИСТОХИМИИ Тема № 4. Значение клеточных белков в оценке гистогенеза опухолей Тема № 5. Рецепторные белки в неизмененных и опухолевых клетках Тема № 6. Белки – маркеры клеточного цикла Тема № 7. Факторы апоптоза и пролиферации

Тема № 8. Белковые молекулы, характеризующие клеточную адгезию Тема № 9. Иммуногистохимия ангиогенеза

1. Бабиченко И.И., Костанян И.А., Липкин В.М. HLDF – новый маркер анапластических процессов в предстательной железе человека // В кн.: Рак предстательной железы. / Под ред. Н.Е. Кушлинского, Ю.Н. Соловьева, М.Д. Трапезниковой. – М: Изд. РАМН, 2002. – С. 289-305.
2. Георгиев Г.П. Молекулярно-генетические механизмы прогрессии опухолей // Соросовский образовательный журнал. – 2000. –Т. 6, № 11. –C. 1-7.
3. Епифанова О.И. Лекции о клеточном цикле. – Изд. КМК, 2003. – 160 с.
4. Копнин Б.П. Основные свойства неопластической клетки и базовые механизмы их возникновения. Российский онкологический сервер. (www.rosoncoweb.ru/library/01/02.htm).
5. Костанян И.А., Осипова М.В., Старовойтова Е.В., Драницына С.М. Выделение и изучение механизма действия пептидно-белковых факторов дифференцировки, вырабатываемых активированными клетками HL-60 // Цитология. – 1994. – Т. 36, № 6. – С. 525.
6. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). – М.: Медицина, 2001. – 192 с.
7. Лысенко О.Н., Ашхаб М.Х., Стрижова Н.В., Бабиченко И.И. Иммуногистохимические исследования экспрессии рецепторов к стероидным гормонам при гиперпластических процессах в эндометрии // Архив патологии. – 2004. – Т. 66, № 2. – С. 7-10.
8. Мазуров В.И., Криволапов Ю.А. Классификация лимфом, морфология, иммунофенотип, молекулярная генетика неходжкинских лимфом // Практическая онкология. – 2004. – Т. 5. – C. 169-175.
9. Побединский Н.М., Балтуцкая О.И., Омельяненко А.И. Стероидные рецепторы нормального эндометрия // Акушерство и гинекология. – 2000 . – №3. – С. 5-8.
10. Полак Дж., Ван Норден С. Введение в иммуногистохимию: современные методы и проблемы. – М.: Мир, 1987. – С. 9-22.
11. Райхлин Н.Т., Петров С.В., Чаиркин И.Н. История иммуногистохимии // В кн. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. / Под ред. С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина. – Казань, 2000. – С. 12-14.
12. Самуилов В.Д. Биохимия программируемой клеточной смерти (апоптоза) у животных // Соросовский образовательный журнал. – 2001. – Т. 7, № 10. – С. 18-25.
13. Семиглазов В.Ф., Нургазиев К.Ш., Арзуманов А.С. Опухоли молочной железы (лечение и профилактика). – Алматы, 2001. –345 с.
14. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ. – Волгоград: Семь ветров, 1999. – 538 с.
15. Угрюмов М.В. Современные методы иммуноцитохимии и гистохимии. «Итоги науки и техники» ВИНИТИ, серия «Морфология». – 1991. – вып. 15. – 115 с.
16. Франк Г.А. Проблемы морфологической классификации и диагностики опухолей мягких тканей // Практическая онкология. – 2004. – Т. 5. – C. 231-236.
17. Фролова И.И., Бабиченко И.И., Местергази Г.М. Цервикальные интраэпителиальные неоплазии и дискератозы шейки матки. – М.: Издательский дом «Династия», 2004. – 88 с.
18. Хансон К.П., Имянитов Е.Н. Эпидемиология и биология неходжкинских лимфом // Практическая онкология. – 2004. –Т. 5. – C. 163-169.
19. Coons A.H., Kaplan M.H. Localization of antigen in tissue cells // J. Exp. Med. – 1950. – V.91. – P. 1-13.
20. Coons A.H., Creech H.J., Jones R.N. Immunological properties of an antibody containing a fluorescent group // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. – 1941. – V. 47. – P. 200-202.
21. Coons A.H., Leduc E.H., Connolly J.M. Studies on antibody production. I. A method for the histochemical demonstration of specific antibody and its application to a study of the hyperimmune rabbit // J. Exp. Med. – 1955. – V. 102. – P. 49-60.
22. Dabbs D.J. Diagnostic Immunohistochemistry. 2-nd ed. – Elsevier, 2006. – 828 p.
23. De Miguel M.P., Royuela M., Bethencourt F.R., Ruiz A., Fraile B., Paniagua R. Immunohistohemical comparative analysis of transforming grows factor alpha, epidermal growth factor and epidermal grows factor receptor in normal, hyperplastic and neoplastic human prostates // Cytokine. – 1999. – V.11, N9. – P. 722-727.
24. Graham R.C., Karnovsky M.J. The early stages of absorption of injected horseradish peroxidase in the proximal tubules of mouse kidney: ultrastructural cytochemistry by a new technique // J. Histochem. Cytochem. – 1966. – V. 14. – P. 291-302.
25. Guesdon J.L., Ternynck T., Avrameas S. The use of avidin-biotin interaction in immunoenzymatic techniques // J. Histochem. Cytochem. – 1979. – V.27. – P. 1131-1139.
26. Guesdon J.L., Ternynck T., Avrameas S. The use of avidin-biotin interaction in immunoenzymatic techniques // J. Histochem. Cytochem. – 1979. – V. 27. – P. 1131-1139.
27. Harris N.L., Stein H., Coupland S.E. et al. New approaches to lymphoma diagnosis // Hematology 2001. – V.1. –P. 194-220.
28. Kerr J.F.R., Wyllie F.N., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide ranging implications in tissue kinetics // Brit. J. Cancer. – 1972. – V. 26, № 2. – P. 239-257.
29. Mar K.C. et al. Cell proliferation marker MCM2, but not Ki 67, is helpful for distinguishing between minimally invasive follicular carcinoma and follicular adenoma of the thyroid // Histopathology. – 2006. – V. 48, N 7. – P. 801-807.
30. Marrack J.R. Nature of antibodies // Nature. – 1934. – V. 133. – P. 292-293.
31. Marshall J.M. Localization of adrenocorticotropic hormone by histochemical and immunochemical methods // J. Exp. Med. – 1951. – V. 94. – P. 21–30.
32. Moll R. Subcellular Biochemistry. Vol 31: Intermediate Filaments/ Ed. Herrmann and Harris. Plenum Press, New York, 1998. – P. 205-262.
33. Nakane P.K., Pierce G.B.Jr. Enzyme-labeled antibodies: preparation and application for the localization of antigen // J. Histochem. Cytochem. – 1966. – V. 14. – P. 929.
34. Pathology and Genetics of Tumours of Soft Tissue and Bone. WHO Classification of Tumours. – 2006 . – V.5. – 427 p.
35. Royuela M., De Miguel M.P., Bethencourt F.R., Sanchez-Chapado M., Fraile B., Paniagua R. Transforming growth factor beta 1 and its receptor types I and II. Comparison in human normal prostate, benign prostatic hyperplasia and prostatic carcinoma // Growth Factors. – 1998. –V. 16, N 2. – P. 101-110.
36. Sternberger L.A. The unlabelled antibody peroxidase-antiperoxidase (PAP) method. In: Sternberger, L.A., Ed Immunocytochemistry. John Wiley, New York, 1979.-p. 104-169.
37. Thornton A.D., Ravn P., Winslet M., Chester K. Блокада ангиогенеза с помощью бевацизумаба и хирургическое лечение колоректального рака // Современная онкология. – 2007. – Т. 9, № 1. (www.consilium-medicum.com/media/onkology/07_01/49.shtml).
38. Van Aken E., De Wever О., da Rocha A.S.C., Mareel M. Defective Ecadherin/catenin complexes in human cancer // Virchows Arch. – 2001. – V. 439. – P. 725-751.
39. Wood G.S., Warnke R. Suppression of endogenous avidin-binding activity in tissues and its relevance to biotin-avidin detection systems // J. Histochem. Cytochem. – 1981. – V. 29. – P. 1196-1204.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ОНКОМОРФОЛОГИИ

В настоящее время иммуногистохимический метод исследования широко применяется для выявления неизвестной локализации первичной опухоли при наличии её метастазов. От 10 до 15% раковых опухолей характеризуются метастазами в различных органах, полостях и лимфатических узлах.

При морфологической диагностике метастатические опухоли, согласно рекомендациям Европейского общества медицинской онкологии (ESMO, 2004), целесообразно разделять на пять крупных категорий: аденокарцинома, плоскоклеточный рак, нейроэндокринный рак, недифференцированный рак, недифференцированная опухоль. Эти морфологические категории наряду с данными о распространённости процесса во многих случаях позволяют определить адекватный план обследования и лечения.

Частота случаев, когда заболевание сопровождалось развитием метастазов, а локализация первичной опухоли на момент морфологического исследования неизвестна, составляет 3-15% от всех онкологических заболеваний. При этом локализация первичного очага определяется при жизни в среднем у 30-40% пациентов, на аутопсии – у 60-70%.

Иммуногистохимическое исследование в зависимости от морфологического типа новообразования позволяет уточнить гистогенез опухоли и/или высказаться о вероятной локализации первичного очага. Большинство из этих опухолей представляют аденокарциномы молочной железы, толстого кишечника, легких, яичников, поджелудочной железы, предстательной железы и желудка.

В случае метастазов аденокарциномы задача иммуногистохимического исследования состоит в выявлении вероятного источника метастазирования.

Для этих целей в настоящее время используется целый ряд маркеров включая цитокератины 7 и 20, тиреоидный фактор транскрипции (TTF-1), CA125, CDX2, рецепторы к эстрогенам, GCDFP-15, лизоцим, мезотелин, простат-специфический антиген.

Цитокератин 7 (CK7) относится к семейству белков промежуточных филаментов, имеет молекулярную массу 54 кДа, выявляется в различных видах железистого эпителия. Антитела клона OV-TL (Dako) окрашивают цитоплазму различных видов клеток нормального и неопластического железистого эпителия, включая эпителий протоков. CK7 выявляется в клетках цилиндрического и железистого эпителия легких, шейки матки, молочной железы, желчевыводящих путей и собирательных трубочек почек. CK7 окрашивает переходный эпителий мочевого пузыря, эпителий яичников и легких. Иногда можно встретить положительное окрашивание эндотелия сосудов. В свою очередь, CK7 не экспрессируется в эпителиальных клетках желудочно-кишечного тракта, предстательной железы. Практически не выявляется CK7 в гепатоцитах, эпителии проксимальных и дистальных извитых канальцев почек, миоэпителиальных клетках, многослойном эпителии кожи, языка, пищевода и эктоцервикса. Моноклональные антитела OV-TL выявляют отдельные виды аденокарцином и могут быть использованы для проведения дифференциальной диагностики между CK7-позитивными тканями (такими как рак яичников и переходноклеточный рак) и CK7-негативными тканями (такими как аденокарциномы желудочно-кишечного тракта и рак предстательной железы).

Цитокератин 20 (CK20) является представителем кератина I типа, который непосредственно экспрессируется в эпителии желудка и тонкого кишечника, уротелии и клетках Меркеля кожи. Антитела (клон Ks 20.8, Dako) реагируют с соответствующим белком молекулярной массой 46 кДа. CK 20 – это основной белок зрелых энтероцитов и бокаловидных клеток; он специфически экспрессируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки желудка и тонкого кишечника. Его также можно выявить в аденокарциномах толстого кишечника, желудка, поджелудочной железы, желчных капилляров, в муцинозных опухолях яичников, переходноклеточном раке мочевого пузыря и раке из клеток Меркеля. В свою очередь, в плоскоклеточных раках, аденокарциномах молочной железы, легких, эндометрия, не муцинозных опухолях яичников и мелкоклеточных карциномах легких CK 20 не экспрессируется.

TTF-1 – ядерный фактор транскрипции, представляющий собой гомеодоменный белок семейства NKX2 (молекулярная масса 40 кДа); экспрессируемый эмбриональной и зрелой тканью легкого и щитовидной железы. В ядрах клеток большинства других органов – печени, желудка, поджелудочной железы, тонкого и толстого кишечника, почек, молочной железы, кожи, яичек, гипофиза, предстательной железы и надпочечников данный фактор не содержится. TTF-1 выявлен в первичных легочных аденокарциномах и не экспрессируется в аденокарциномах толстого кишечника и молочной железы. Антитела к TTF-1 являются ценным маркером при дифференциальной диагностике аденокарциномы легких с метастазами рака молочной железы и мезотелиомы. При выявлении аденокарцином легких с помощью TTF-1 окраска является более специфичной, чем при использовании антисурфактантных антител.

Лизоцим катализирует гидролиз отдельных мукополисахаридов клеточной оболочки бактерий. Используется для выявления опухолей из гистиоцитов и лейкозных клеток миелоидного ряда. Он выявлен в клетках селезенки, легких, почек, лейкоцитах крови, плазматических клетках, слюне, молоке и слезной жидкости.

Мезотелин – клеточный гликопротеин (молекулярная масса 40 кДа), располагается на поверхности мезотелиальных клеток и связан с механизмами клеточной адгезии. Он также выявляется в мезотелиомах, эпителиальных раках яичников и некоторых плоскоклеточных раках. Клон 5В2 (Novocastra) окрашивает эпителиоидные мезотелиомы и аденокарциномы легких, яичников, опухоли брюшины, эндометрия, поджелудочной железы, желудка и толстого кишечника. Антитела не реагируют с тканью почек, печени, плаценты, кожи и щитовидной железы. Мезотелина много в обычных мезотелиальных клетках, из которых формируются злокачественные мезотелиомы и цистаденокарциномы яичников. Эти антитела вместе с антителами к калретинину могут быть использованы для выявления мезотелиом.

CDX2 – рекомбинантный белок прокариотов, соответствующий аминокислотному N-терминальному участку молекулы CDX2 человека. Является специфическим транскрипционным фактором клеток тонкого кишечника. Ген cdx2 кодирует интестинально-специфический транскрипционный фактор, его белок экспрессируется на ранних стадиях развития тонкого кишечника и может иметь значение в регулировании пролиферации и дифференцировки эпителиальных клеток тонкого кишечника. Играет важную роль в инициации дифференцировки клеток в зрелые энтероциты. Клон AMT28 (Novocastra) реагирует с 40кДа белком, расположенным в ядрах клеток. Он экспрессируется в ядрах эпителиальных клеток кишечника от двенадцатиперстной кишки до прямой кишки. Белок CDX2 экспрессируется также в первичных и метастатических опухолях толстого кишечника, а также выявляется при кишечной метаплазии желудка и кишечном типе рака желудка, в свою очередь, в нормальных эпителиальных клетках желудка он не встречается. Данный белок обнаруживается в ядрах только цилиндрического эпителия и раковых клетках колоректальных аденокарцином, таким образом с его помощью можно идентифицировать метастазы рака толстого кишечника.

CA125 – белок ракового антигена яичников. Моноклональные антитела (клон Ov185:1, Novocastra) распознают муциноподобный гликопротеин молекулярной массой около 200 кДа. Антитела окрашивают различные опухоли, такие как аденокарциномы толстого кишечника, аденокарциномы молочной железы, опухоли матки, бронхо-альвеолярные раки, эндометриоидные и серозные аденокарциномы яичников.

ER – рецепторы к эстрогенам. Клон 6F11 (Novocastra) взаимодействует с эстрогеновым рецептором альфа. Антитела окрашивают ядра с рецепторами к эстрогенам в эпителиальных и гладкомышечных клетках матки, а также ядра эпителия молочных желез. Выявление рецепторов к стероидным гормонам широко применяется при лечении гормонально-зависимых опухолей. Наличие рецепторов к эстрогенам является маркером рака молочной железы, а также может свидетельствовать о прогнозе заболевания и эффективности эндокринной терапии.

Простат-специфический антиген (ПСА) – представляет собой гликопротеин. Клон ER-PR8 (Dako) получен к белку молекулярной массой 35 кДа. ПСА биохимически и иммуногистохимически отличается от другого широко используемого маркера опухоли предстательной железы – кислой простатической фосфатазы. Он располагается в цитоплазме клеток ацинарного и протокового эпителия нормальной ткани, выявляется при доброкачественной гиперплазии предстательной железы и аденокарциноме. Эти антитела можно использовать для выявления метастазов рака предстательной железы, поскольку ПСА выделяется опухолевыми клетками простаты и определяется в плазме крови у больных с раком простаты.

GCDFP-15 – белок, который встречается при диффузной кистозной мастопатии, для которой характерны макро- и микрокисты, протоковая и дольковая гиперплазия и др. патология молочных желез. Кисты формируются за счет апокриновой секреции эпителиальными клетками. Жидкость кист содержит гликопротеины, включая уникальный 15 кДа мономер. В нормальной ткани подобный белок встречается в эпителии слезных, подъязычных и мелких слюнных желез, в клетках серозных оболочек, трахеальных и бронхиальных желез.

GCDFP-15 и PSA одновременно экспрессируются в опухолях молочных желез с положительной реакцией на рецепторы к андрогенам. Данный маркер может быть использован для выявления аденокарциномы молочной железы, протоковых раков слюнных желез и апокринового эпителия.

Часть маркеров, такие как ПСА для рака предстательной железы, TTF-1 для рака легких, работают моноспецифично. Другая часть маркеров этой панели характерна для нескольких опухолей: так, рецепторы к эстрогенам могут быть выявлены при раке молочной железы или яичников, CDX2 – при опухолях желудочно-кишечного тракта. Часть маркеров может характеризовать источник метастаза только комплексно: рецепторы к эстрогенам, мезотелин и CA125 характеризуют опухоли яичников.

J.L Dennis с соавт. (2005) предложили алгоритм для выявления локализации первичных опухолей по иммуногистохимической характеристике метастазов с использованием данного набора маркеров:

1. ПСА-позитивные опухоли, как правило, в 99% случаев представляют собой рак предстательной железы.
2. TTF1-позитивные опухоли, в 98% случаев — рак легких.
3. GCDFP-15-позитивные опухоли могут быть либо аденокарциномой толстого кишечника, либо аденокарциномой молочной железы. В данном случае для дифференциальной диагностики используется маркер CDX2. Опухоли CDX2(+) составляют аденокарциномы толстого кишечника, CDX2(–) – аденокарциному молочной железы.
4. Положительная реакция с маркерами CDX2 и CK20 наблюдается в метастазах из опухолей желудка, поджелудочной железы и толстого кишечника. Применение дополнительного маркера CK7 позволяет дифференцировать эти опухоли. CK7(+) характерен для аденокарциномы желудка и поджелудочной железы; CK7(–) – характеризует аденокарциному толстого кишечника.
5. Рецепторы к эстрогенам встречаются как в опухолях яичников, так и при раке молочной железы. В дифференциальной диагностике этих опухолей помогает маркер мезотелин(+), фенотип характерен для рака яичников; фенотип мезотелин(–) наблюдается при раке молочной железы.
6. CA125 является маркером аденокарциномы поджелудочной железы.
7. Мезотелин(+) характерен для опухолей желудка или поджелудочной железы.
8. Лизоцим(+) выявляет опухоли желудка и поджелудочной железы.

Метастазы плоскоклеточного и нейроэндокринного рака без выявленного
первичного очага (Савелов Н.А., Петровичев Н.Н., 2006)

При метастазах плоскоклеточного рака проводить иммуногистохимическое исследование нецелесообразно, так как возможности метода не позволяют уточнить вероятный источник метастазирования. Это относится и к метастазам низкодифференцированного нейроэндокринного рака. Однако при метастазах высокодифференцированного нейроэндокринного рака (синоним – атипичный карциноид) коэкспрессия CK7 и TTF1 может свидетельствовать о локализации первичного очага в легком, а коэкспрессия CK20 и CDX2 – в органах ЖКТ.

Метастазы недифференцированного рака без выявленного первичного
очага (Савелов Н.А., Петровичев Н.Н., 2006)

У пациентов с метастазами без четких морфологических признаков железистой (аденогенной), нейроэндокринной или плоскоклеточной дифференцировки главной задачей дополнительных методов исследования является уточнение гистогенеза опухоли (точнее, установление направления дифференцировки опухолевых клеток). Для этого применяется следующая панель антител: р63, CК5, CK14 или CК5/CK6, CК18, СD56 (N-CAM).

Антитела к белку Р63 (клон 4А4, Dako). Белок Р63 принадлежит к семейству Р53 опухолевых супрессорных генов, которые также включают белок Р73. Эти белки регулируют процессы клеточной транскрипции и запускают процессы апоптоза в ответ на повреждение ДНК и развитие гипоксии. Р63 экспрессируется в ядрах базальных клеток различных видов эпителия. Белок Р63 выявляется в пролиферирующих клетках эпителия шейки матки, уротелия и предстательной железы. Он также экспрессируется в большинстве низкодифференцированных плоскоклеточных раков. Антитела к Р63 помогают дифференцировать доброкачественные и злокачественные опухоли предстательной железы.

Антитела к белку CD56 (клон МОС-1, Dako). Белок CD56 является антигеном клеток натуральных киллеров. Реагирует с CD4+ и CD8+, Т-клетками в периферической крови. CD56 можно выявить в нейробластоме и мелкоклеточном раке легких, а также некоторых других опухолях.

Цитокератины CK5/CK6 (клон D6/16 B4, Dako). Цитокератины относятся к семейству промежуточных филаментов и выявлены практически во всех клетках. Типы цитокератинов CK5/CK6 выявляются в мезотелиальных клетках и не встречаются в аденокарциномах. CK5/CK6 применяются как маркеры мезотелиомы и плоскоклеточного рака легких, болезни Боуэна (разновидности карциномы, поражающей чешуйчатые клетки эпидермиса кожи, но не распространяющейся на ее базальные слои). Они не встречаются в аденокарциномах легких, но окрашивают мезотелиому и базальные клетки желез простаты. Данные антитела не реагируют с тканями мезодермального происхождения, такими как мышцы и соединительная ткань. Цитокератины CK5/CK6 экспрессируются в низкодифференцированных аденокарциномах и выявляются в эпителиоидных мезотелиомах.

Цитокератин CK14 (клон LL002, BioGenex), молекулярная масса 50 кДа, – это кислый цитокератин первого типа, с помощью которого можно отличить многослойный плоский эпителий от простого эпителия. Цитокератин CK14 равномерно экспрессируется в цитоплазме всех клеток многослойного плоского ороговевающего эпителия. Моноклональные антитела к цитокератину CK14 помогают дифференцировать типы клеток в молочных железах при развитии аденокарциномы.

Цитокератин CK18 (клон DC10, Dako) – белок с молекулярной массой 45 кДа. Антитела реагируют с большинством видов простого эпителия, включая эпителий протоков и ацинусов желез. Данный белок экспрессируется в эпителии щитовидной железы, молочной железы, желудочно-кишечного тракта и дыхательной системы. Антитела используют для выявления аденокарцином легких, при этом они окрашивают цитоплазму опухолевых клеток из эпителия и не окрашивают опухолевые неэпителиальные клетки (глиомы, меланомы, остеосаркомы).

Для дифференциальной диагностики низкодифференцированных опухолей используется следующий алгоритм:

1. СК18(+) – аденокарцинома;
2. СК5/14(+) и р63(+) – плоскоклеточный рак;
3. СК5/CK14(+), СК18(+), р63(+) – переходноклеточный рак, плоскоклеточный рак, тимома;
4. СК18(+), CD56(+) – нейроэндокринный рак.
5. При выявлении экспрессии СК5/14, СК18 и р63 дифференцировать переходноклеточный рак от плоскоклеточного в ряде случаев возможно, исследуя коэкспрессию СК7 и СК20, которая наблюдается приблизительно в 60% метастазов переходноклеточного рака.

источник