Сдавая анализы всегда хочется получить только достоверные ответы. Особенно, когда проводится исследование на иммунодефицит. Именно в таком случае важна точность тестов на ВИЧ, ведь от этого зависит дальнейшее здоровье человека и его родных. Тестирование на ВИЧ делают практически в каждой клинической лаборатории. Для этого достаточно сдать небольшое количество крови и подождать несколько дней до выдачи результата. ИФА анализ на ВИЧ самый распространенный метод анализа помогающий выявить антитела на вирус, что подтверждает его наличие в организме зараженного.
Этот метод исследования делает иммуноферментный анализ, который строится на обнаружении антител. Этот метод обладает иммунохимической реакцией, что позволяет увидеть с каким антигеном связано антитело. Этот анализ считается одним из наиболее точных и удобных. Его используют даже в случае, когда методом ПЦР после вирусной нагрузки не удалось получить точный ответ.
Самый распространенный гетерогенный вариант ИФА. В нем кровь пациента смешивают с антигеном и добавляют антитела, помогая создать молекулярную цепочку. Именно в ней и можно обнаружить белок вируса и доказать, что ВИЧ в организме человека есть.
Так как вирус не виден сразу после возможного заражения, необходимо некоторое время для его размножения и выявления. Только исследования помогают дать более достоверный ответ. В зависимости от концентрации вируса в организме и способа его попадания, он может проявиться спустя пару недель или несколько месяцев. Определить когда он точно проявится никто не знает, у каждого инфицированного индивидуальный срок.
Поэтому советуют делать анализ ИФА несколько раз. В основном его рекомендуется проводить через 6 недель, через 3 месяца и через полгода. Именно такой период, от попадания вируса в организм и до его выявления, будет серонегативным окном. Поэтому в период окна проводят ИФА анализ на ВИЧ. Зарубежные врачи рекомендуют делать анализ на ВИЧ через 3 месяца, игнорируя полугодовой анализ. Но многое зависит от самого ИФА и его поколения. Тем более люди постоянно волнуются и боятся, что ВИЧ не проявит себя за это время. Чтобы действительно быть уверенным и успокоить себя, проходят этот анализ трижды.
Этот метод исследования обнаружили несколько десятков лет назад. Действительно первое поколение ИФА было не таким чувствительным, что требовало многократной сдачи анализов в разные сроки. Ведь только большая вирусная нагрузка помогала выявить ВИЧ ИФА. Это было не очень удобно, приходилось долгое время жить в волнении и постоянном страхе за свое здоровье.
Поэтому ИФА не стоял с тех пор на месте. Даже сейчас он продолжает развиваться, искать новые возможности для более быстрого и точного исследования и выявления вируса. Это поможет обнаружить его в более краткий срок после заражения и начать раньше принимать препараты для его подавления.
На данный момент существует уже 4 поколения ИФА. Чем выше поколение, тем более точным и быстрым будет анализ. Современные анализы ИФА помогают выявить антиген р24, который появляется раньше антител вируса. Именно это позволяет увидеть проявление вируса раньше, чем это было в прошлые годы. Возможно через некоторое время появятся еще несколько поколений, которые смогут выявить ВИЧ уже в начале заражения.
В случаях, когда ИФА на ВИЧ положительный, не стоит впадать в паническое состояние. Возможно человек не прислушался к советам по подготовке перед сдачей анализа или он переболел острой вирусной инфекцией. Именно это может дать такие нежеланные положительные результаты.
В такой ситуации назначают дополнительный повторный тест с другими методами исследования. Часто применяют метод иммуноблотинга, когда ищет антитела к индивидуальным белкам вируса. Достоверность такого исследования довольно высока и позволяет с точностью сказать о присутствии или отсутствии вируса в организме.
Чтобы ИФА тест на ВИЧ получился правдивым и точным, желательно прислушиваться к советам врачей по подготовке к анализу. Это помогает избежать ложноположительных результатов и лишних ненужных волнений. Поэтому важно заранее подготовить организм.
Не рекомендуется принимать алкогольные напитки непосредственно за сутки перед сдачей теста. В идеале для этого желательно несколько дней. Также не стоит слишком плотно наедаться перед тестом. Последний прием пищи возможен за 8 часов до сдачи крови на исследование. Обычно сдают ее утром, поэтому последний прием пищи приходится на ужин. А утром кровь сдают уже натощак.
Если человек переболел острым вирусным заболеванием, достоверность его анализов резко уменьшится. Желательно посоветоваться с врачом по этому поводу или сделать тест несколько позже, когда организм полностью освободится от остаточного явления острой вирусной болезни. Но в случае повторного теста могут использовать другой метод, позволяющий достоверно проверить наличие или отсутствие вируса.
Беременные женщины обязательно сдают некоторые анализы и среди них ИФА анализ на ВИЧ. Но это время имеет свои особенности, ведь беременность может влиять на точность результатов по ВИЧ. Именно поэтому, казалось бы здоровая женщина, получает положительный анализ на ВИЧ.
Но не стоит отчаиваться и волноваться за свое здоровье и самочувствие будущего ребенка. Такие ложные анализы могут быть не по вине сотрудников лаборатории, а из-за особенного состояния матери. Некоторые проходящие в это время процессы в ее организме существенно влияют на результат.
Вероятность передачи вируса от матери к плоду не стопроцентная, она равняется около 30%.
Бывает, что организм женщины воспринимает тело малыша как инородный предмет и начинает вырабатывать на него антитела. Если срок довольно маленький, а антител уже много, то часто могут происходить выкидыши. Поэтому желательно становиться на учет в самом начале беременности.
Также в это прекрасное для женщины время ее организм несколько слабеет, иммунная система тоже, а хронические заболевания этим пользуются, стараясь сильнее воздействовать на здоровье.
Из-за таких ситуаций и возникают ложноположительные результаты. Но не стоит волноваться. Достаточно сдать анализ еще раз и все выяснится.
Так как метод исследования ИФА распространенный, то его применяют в каждой лаборатории. Поэтому выбор места для сдачи крови на ВИЧ каждый выбирает себе самостоятельно. Необходимо лишь узнать время приема анализов и адрес.
По желанию можно посетить Центр СПИДа и сдать тест именно там, ведь работа этого учреждения направлена именно на это заболевание и решение проблем с ним. Исследование в нем ничем не отличаются от исследований в других лабораториях.
В среднем для получения анализа необходимо около 5 дней. Но некоторые лаборатории могут делать его за 3 дня. Стоит понимать, что возможны случаи, когда ответ затягивается на больший срок. Но это не означает, что результат обязательно будет положительным. Возможно ккая-то ситуация в лаборатории или большой наплыв анализов не позволяют сделать это быстро.
Если анализ ИФА получился положительным, то назначают повторный анализ. Так делают всегда, чтобы исключить возможные ошибки со стороны пациента и человеческий фактор медицинских сотрудников. В этом случае исследования могут проводить другим методом.
Если же при повторном анализе получился положительный результат, то стоит обратиться к врачу. Он назначит соответствующее лечение и будет прослеживать состояние инфицированного. Препараты и дозировка подбираются индивидуально для каждого. Все зависит от вирусной нагрузки и особенностей организма.
Если анализы вызывают сомнение, человек может сдать их в нескольких лабораториях и затем при получении результатов сравнить. Но случаи ошибки довольно редкие и в основном результаты достоверны. Если у одного партнера был выявлен ВИЧ, то другому желательно тоже пройти исследование.
Положительный ИФА на ВИЧ не всегда говорит о том, что человек инфицирован.
При правильном лечении, подавляется распространение вируса и человек может спокойно жить дальше. Если он не расскажет о своем заболевании, то никто этого и не узнает, ведь врачи не имеют права раскрывать врачебную тайну. Но желательно обезопасить своих близких и родных, принимая все меры безопасности.
источник
ИФА анализ — что это такое, расшифровка иммуноферментного анализа крови на паразитов, сифилис, ВИЧ, туберкулез. Норма в таблице, результаты
Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.
Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.
ИФА анализ — это такое лабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.
Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.
ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.
Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.
Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.
Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.
Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:
| Кол-во в организме | Функции | Период полураспада (дней) | Значение | |
| G | 70% | Формируют пассивный иммунитет у новорожденного; необходимы для иммунного ответа улучшают фагоцитоз, | 21-24 | обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях |
| М | 5-10% | нужны для активации фагоцитоза, способны связать 5 молекул антигена, | 5 | Обеспечивает первичную иммунную реакцию |
| А | 10-15 | Нейтрализуют токсины и вирусы нужны для формирования раннего иммунитета Образование местного иммунитета | 4-5 | Защита слизистых оболочек |
| Е | 0,2% | вызывают аллергию и анафилаксию активируют тканевые базофилы | 2 | Защита от паразитов |
| D | 0,2% | задействованы в выработке лимфоцитов, необходим как мембранный рецептор для антигенов; | 3 | Их роль малоизучена |
Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.
ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.
Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:
- вирусный гепатит;
- ВИЧ-инфекция;
- цитомегаловирус,
- вирус Эпштейна-Барр,
- вирус герпеса,
- корь
- краснуха,
- туберкулез,
- сальмонеллёз,
- дизентерия,
- клещевой энцефалит,
- бактерии хеликобактер,
- боррелиоз,
- столбняк,
- сифилис,
- дифтерия,
- лептоспироз,
- хламидиоза,
- уреаплазмоз,
- микоплазмоз,
- коклюш.
Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:
- плоскими червями
- аскаридами
- гистолическими амебами,
- печеночными тремадами,
- лямблиями,
- токсоплазмами,
- трихинеллами,
- двуусткой,
- цестодозами.
ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.
При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:
- за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
- не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
- стараться не допускать стрессов,
Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.
Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.
Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.
В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.
Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.
Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки.
Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.
Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С.
После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.
Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:
- Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
- Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
- Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.
В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.
Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.
При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.
Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.
После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей.
При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.
Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.
Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.
Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.
Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.
На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.
Возможны различные интерпретации результатов:
- IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
- IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
- IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
- IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
- IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
- IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.
Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:
- вирусный гепатит;
- цитомегаловирус;
- герпес;
- ветряная оспа;
- хламидиозом;
- стафилококковая или стрептококковая инфекция.
Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:
| Название гормона | Пол | Норма | |
| 1 | тиреоглобулин | м/ж | До 70 МЕ/мл |
| 2 | тироксин | м/ж | 64-146 нмоль/л |
| 3 | трийодтиронин | м/ж | 1,8-2,8 нмоль/л |
| 4 | Свободный тироксин | м/ж | 11-25 пмоль/л |
| 5 | Свободный трийодритонин | м/ж | 4,49-9,3 пмоль/л |
| 6 | Тестостерон, дегидротестостерон | Ж | 0,5-10 мЕд/л |
ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.
ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.
Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:
- иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
- IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
- IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.
В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.
Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).
В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).
При получении положительных проб далее следует:
- если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
- повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
- при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.
Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга.
ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.
ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.
| Цитомегаловирус | IgM обнаруживаются через 30-45 дней после заражения, либо во время реактивации инфекции в течение 4-6 месяцев | источник Инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека, – серьезный диагноз. Ошибки при диагностике могут привести к плачевным последствиям. Анализ ИФА на ВИЧ – наиболее доступный метод исследования, но не во всех случаях он информативен. ИФА – иммуноферментный анализ. Задача метода ИФА – выявление антител к вирусу иммунодефицита в биологическом материале. С помощью метода можно отследить присутствие в жидкости не самих вирусов, но только антител, вырабатывающихся в ответ на их присутствие. Иммуноферментный анализ широко используется при диагностике ЗППП. Он помогает выявить ВИЧ и другие инфекции, передающиеся половым путем. Существует несколько видов ИФА: прямой вариант, косвенный вариант, метод «сэндвича». В любом случае методика основана на определении наличия антител, которые служат индикатором проникновения чужеродного агента. Чтобы выявить эти «метки», биологический компонент обрабатывают ферментами. Иммуноферментный анализ определяет антитела с точностью 96 – 98%, погрешность незначительна. Она составляет 2 – 4%. ИФА анализ на ВИЧ – это первый этап диагностики. Антигенами вируса иммунодефицита являются протеины p24, p15, p17, p31 и гликопротеины gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160. Чтобы обнаружить вирусный белок, берут порцию крови из вены. Образец, направленный на исследование крови ИФА, обрабатывают иммуноферментными реагентами. Из крови выделяют сыворотку. Если в ходе исследования обнаруживаются антитела к ВИЧ, значит, в крови уже присутствует вирус. Кровь сдают строго натощак. За 2 дня до анализа не рекомендуется есть жирную пищу и употреблять алкоголь. Следует за 14 дней прекратить прием противовирусных препаратов.
Современные тест-системы для ИФА производят по мировым стандартам. Это повышает точность метода. Иммуноферментный анализ не всегда дает достоверные результаты. После попадания вируса в кровь начинается латентная (скрытая) стадия развития. Период, пока вирусы не начали размножаться, и антитела еще не сформированы, называется «время серонегативного окна». Делать ИФА на этом этапе бессмысленно. Если заражение произошло, результат будет ложноотрицательным. Как быстро вирус себя обнаружит, зависит от того, какое количество опасных клеток попало в организм. При незащищенном половом акте или переливании зараженной крови этот срок будет минимальным. Для высокой достоверности ИФА на ВИЧ исследование проводят трижды. Сроки сдачи ИФА на вирус иммунодефицита человека:
ИФА 4 поколения на ВИЧ – метод, наиболее информативный на ранних сроках заражения. Его можно проводить уже через 1 месяц после предполагаемого инфицирования. Тест на ВИЧ 4 поколения является дорогостоящим по сравнению с аналогом 3-го поколения. Поэтому в государственных медучреждениях он используется как дополнительный метод диагностики. Бесплатно проводится тест 3. Если по его итогам однозначного ответа дать нельзя, пациента направляют на ИФА 4 поколения.
Если при ИФА выявлены антитела к антигенам ВИЧ, необходимо проводить дополнительные исследования. К таким относится полимеразная цепная реакция (ПЦР). Достоверность этого метода – 80%. С помощью ПЦР исследуют кровь, сперму и влагалищные выделения. Биологическую жидкость расщепляют в медицинском реакторе, затем подвергают обработке ферментами. В итоге получают данные о том, какова концентрация клеток ВИЧ в жидкой среде. Из-за большой погрешности (20%) при положительном результате дополнительно проводят иммунный блоттинг. Следующий этап диагностики – тест Комбо (или иммунный блоттинг). Это высокочувствительное исследование (98% достоверности), которое проводят, если через 6 месяцев результаты ИФА неоднозначны. Время расшифровки составляет от 24 до 48 часов. Если необходимо получить информацию срочно (требуется хирургическое вмешательство), расшифровку проводят за 2 часа. В провинциальных медицинских пунктах не всегда есть необходимые реагенты. Пробу берут по месту обращения, затем ее передают в областной центр. При таких обстоятельствах итог можно узнать через 1- 2 недели. Результат иммуноферментного анализа может быть либо положительным, либо отрицательным; других вариантов нет. Даже если при первичном и повторных ИФА итог был положительным, пациента нельзя признать ВИЧ-инфицированным. Возможна погрешность. Причины ложноположительного результата:
Поэтому результат анализа должен быть уточнен дополнительными исследованиями. Если при проведении иммуноблоттинга на ВИЧ результат положительный (реактивный), человек считается ВИЧ-инфицированным, а отрицательный тест значит, что он здоров. Проводится еще тест на вирусную нагрузку. Этот показатель при ВИЧ характеризуется количеством вирусных частиц в единице крови (анализ определяет РНК-частицы вируса). Нормой считается количество от 5000 до 15000 клеток вируса в единице крови. Если цифра находится в этих пределах, либо меньше, вирус неактивен. Даже в случае дальнейшего подтверждения позитивного ВИЧ-статуса человек не заметит перемен в состоянии здоровья долгое время (10 – 15 лет). Если нагрузка менее 20000 клеток, это близко к норме. Когда число вирусных клеток увеличивается, следует незамедлительно начинать противовирусную терапию. Отрицательный иммуноферментный анализ 3-го и 4-го поколения показывает с высокой достоверностью (98%), что человек здоров. Для подтверждения положительного ВИЧ-статуса проведения ИФА недостаточно. Если при первом и повторных тестах в крови обнаружены антигены ВИЧ, человек получает направление на иммуноблоттинг. Когда в ходе исследований выясняется, что человек имеет ВИЧ-позитивный статус, ему следует обратиться к врачу. Он определит вирусную нагрузку и назначит терапию. Клетки вируса со временем адаптируются к назначенным препаратам. Чтобы контролировать эффективность лечения, тест ИФА периодически повторяют. Иногда иммуноблоттинг показывает ложноотрицательный результат. Крайне редко вирус иммунодефицита 6 месяцев (и более) не проявляет себя. Это возможно, если в кровь попало незначительное количество клеток вируса. В 0,5% от общего числа случаев диагностировать заражение удается лишь через год. В 99,5% в течение полугода после инфицирования при проведении ИФА получится достоверный результат. Даже при проведении высокоточных исследований остается вероятность ошибки, составляющая 2%. Не следует забывать о человеческом факторе. Чтобы исключить вероятность ошибки, тест можно провести в 2-х разных учреждениях. источник Исследование образцов крови при помощи ИФА на ВИЧ-инфекцию — это один из самых ранних и достоверных методов диагностики. Иммуноферментный тест состоит в числе немногих исследований наряду с ПЦР, которые с большой степенью вероятности подтверждают либо опровергают такой страшный диагноз, как ВИЧ-инфекция или СПИД. С момента выявления первых случаев заражения вирусом иммунодефицита на территории советского пространства, а это 1983 год. Лекарство, которое полностью бы исцеляло эту инфекцию, а также вакцина к ней, не были изобретены, но этот процесс находится в стадии активной разработки. А пока что, только ранняя диагностика ВИЧ-инфекции позволяет держать патологический процесс под контролем. Вирус иммунодефицита у человека относится к ретровирусам, которые обусловливают медленное течение заболевания. Проникая в организм, вирус иммунодефицита воздействует в первую очередь на лимфоидную ткань. Здоровый иммунитет вырабатывает Т-лимфоциты для того, чтобы распознать вновь прибывшего вирусного агента. После чего дать информацию антителам, по каким признакам узнать вирус иммунодефицита и уничтожить его. Процесс «опознания» вируса иммунодефицита происходит при помощи белков-рецепторов CD4. Но именно на этом этапе наблюдается нечто странное, то, что вот уже много лет не позволяет победить чуму XX века.
Клетка иммунитета СD4 для распознавания чужеродного агента вступает в контакт с вирусом иммунодефицита. В этот момент вирус иммунодефицита прикрепляется к мембране лимфоцита, сливается с оболочкой рецептора и внедряет в клетку иммунитета капсулу со своей генетической информацией и специфическими вирусными белками. И клетка, отправленная на вычисление вируса иммунодефицита, с этих пор сама становится зараженной. Но происходит все, к сожалению, не с одной клеткой, а в очень крупных масштабах. Иммунная система человека в ответ уже на «бывшие свои», а ныне зараженные клетки, создает новые антитела. Но вирусы иммунодефицита, по описанной ранее схеме, снова и снова производят захват клеток-защитников. Таким образом, иммунитет человека попадает в замкнутый круг. Помочь организму можно только, если проводить высокоактивную антиретровирусную инфекцию (ВААРТ). А также перейти на полностью здоровый образ жизни и питания, что освободит большие ресурсы иммунитета от лишней работы. Ученые всего мира объединили свои усилия и постоянно проводят исследования в поисках эффективного лекарства против ВИЧ-инфекции. Не так давно был произведен эксперимент с белком ССR5, который обеспечивает врожденную невосприимчивость организма определенной части людей к заражению ВИЧ-инфекцией. Ученые подвергли кровяную субстанцию людей добровольцев генной терапии, чтобы внедрить ССR5 в клетки Т-хелперов. У всех подопечных это привело к масштабному снижению числа ретровирусных ДНК. А у одного пациента вирус иммунодефицита этот метод позволил ликвидировать полностью. На основании данного эксперимента можно пока еще только предположить в единичном случае об успешной победе над страшной чумой XX века. Начиная с 2016 года, эта деятельность продвинулась значительно вперед. Получены ошеломляющие по эффективности результаты девяносто процентного уничтожения вируса иммунодефицита при помощи атакующих антител, выделяемых мышечной тканью в обход захваченному иммунитету. Для этого в мышечную ткань подопытных живых существ вживляли специальный ген, продуцирующий эти самые клетки-киллеры для уничтожения ВИЧ-инфекции. Но на людях этот метод пока еще не применялся, хотя планируется в ближайшие годы. Тем более не имеет смысл падать духом. А лучше как можно раньше выявить вирус иммунодефицита, что можно сделать при помощи ИФА, если имел место риск заражения. И в случае подтверждения диагноза, поддерживать свой иммунитет посредством ВААРТ до тех пор, пока новое лекарство от ВИЧ-инфекции будет обнародовано. Метод ИФА на ВИЧ-инфекцию нацелен на обнаружение в образце крови человека антител к вирусу иммунодефицита. Попадая в организм, ретровирусы к группе которых относится ВИЧ-инфекция, не сразу начинают активный захват иммунных клеток СD4 (Т-лимфоцитов). Но дожидаться, пока агрессивные агенты начнут смертельную деятельность в организме не стоит. Не секрет, что при любом заболевании, и ВИЧ-инфекция не является исключением, чем раньше начата терапия, тем эффективнее исцеление. Когда дело касается вируса иммунодефицита человека, случаи полного исцеления официально зафиксированы не были. Но это совсем не значит, что нужно опустить руки, и пустить заболевание на самотек. С ВИЧ-инфекцией люди живут до 75–80 лет при условии выявления на начальной стадии и постоянной поддерживающей терапии. Метод иммуноферментной диагностики ВИЧ-инфекции имеет высокую достоверность около 97–99%. Но именно эта незначительная часть в 1–3% может давать ложноположительный либо ложноотрицательный результат диагностики ВИЧ-инфекции при помощи ИФА. Для этих целей, чтобы окончательно подтвердить или опровергнуть показания иммуноферментного анализа, применяется анализ, именуемый иммуноблот (ИБ). Иммунноферментный метод на ВИЧ-инфекцию 4-го поколения направлен не только на поиск и идентификацию патогенных клеток, но и на установления их численности. Следовательно, один иммуноферментный тест объединяет в себе качественное и количественное исследование. Метод ИФА 4-го поколения на ВИЧ-инфекцию на сроке от шести недель с момента предположительного заражения покажет 100% высокую достоверность результатов. В основании иммуноферментного исследования лежит взаимодействие специфических антител и родственных им антигенов. Благодаря специальному ферменту, и происходит образование совокупности «антиген-антитело». Чтобы осуществить эту реакцию по обнаружению иммуноглобулинов к ВИЧ-инфекции, в полистероловую панель с 96-ю лунками, в которых в твердой форме находятся рекомбинантные белки (сорбированные), помещают образец крови. Оказавшиеся в емкости с сывороткой крови антигены либо антитела распознают известный им объект и образуют с ним соединение «АТ-АГ». Для установления антител к вирусам иммунодефицита 1 и 2 типов применяется также тест ДС ИФФ на ВИЧ АГ-АТ. Преимущества иммуноферментного метода на ВИЧ-инфекцию 4-го поколения:
Иммунный блотинг является скринингом и назначается для определения типа антигена. Скрининговое исследование ИБ используют как верифицирующий тест при ВИЧ-инфекции через 5–7 недель после проведения ИФА. Метод ИБ основан на применении электрофореза для разделения антигенов вирусов иммунодефицита. Процесс разделения антигенов дает возможность обнаруживать специфические иммуноглобулины к каждому конкретному антигену ВИЧ-инфекции. Иммунноблотинг применяют, когда иммуноферментный тест ВИЧ-инфекции два раза подряд показывает ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подозрения могут возникнуть при отсутствии или наоборот наличии характерных симптомов ВИЧ-инфекции. Хотя здесь тоже могут возникать различные вариации. В случае, когда ИФА плюс подтверждается скринингом ИБ положительным, сомнений не возникает, у пациента в организме присутствует вирус иммунодефицита. Но если, к примеру, ИФФ на ВИЧ положительный, а иммуноблот отрицательный, то делают вывод об инфицировании «минус», то есть о его отсутствии.
А при иммуноферментном анализе на ВИЧ 4 поколения «минус», а иммуноблоттинге положительном, возможно в организме присутствует иная инфекция. Возможно у человека какое-либо аутоиммунное заболевание, онкологический процесс, бывает псориаз кожи или суставов дает ложноположительные результаты как ИФА, так и ИБ. Еще такой вариант, когда иммуноферментный тест на ВИЧ-инфекцию показывает результат «минус» и иммунноблот также со значением «минус», здесь остается только порадоваться по причине отсутствия вируса иммунодифицита. Но при наличии специфических признаков, присущих ВИЧ-инфекции или, если человек состоит в тесном контакте с ВИЧ положительным пациентом. Тогда будет тоже необходимо провести дополнительную диагностику, например полимеразную цепную реакцию (ПЦР). К тому же при сомнительных показателях «минус» или «плюс», пациенту рекомендуется пересдать кровь через 4, а лучше 6 месяцев. Норма и отклонение числа Т-лимфоцитов при ВИЧ-инфекции:
Болезнь легче предотвратить, чем лечить ― это все известная мудрость. Со времен распространения в обществе свободных нравов появилось и большое количество различных венерических заболеваний. ВИЧ-инфекции и СПИД причисляются пока к неизлечимым заболеваниям. Способ передачи в основном половым путем и через кровь. На все сто процентов защититься ни от одной болезни невозможно. Существует масса непредвиденных ситуаций, даже у людей, ведущих нравственный и чистоплотный образ жизни. В ситуации повышенной опасности заражения ВИЧ и другими опасными инфекциями неоценимую пользу оказывает диагностика крови. источник ВИЧ – бич нашего поколения. Какие существуют методы для диагностики ВИЧ, углубленная информация о ИФА-тесте на ВИЧ. Как сдавать, как трактовать результаты анализа.
ВИЧ деструктивно влияет на нашу иммунную систему, и если вовремя не остановить прогресс заболевания, он может трансформироваться в синдром приобретенного иммунодефицита. ВИЧ распространяется через непосредственный контакт партнеров при сексуальном акте через мужские и женские половые органы. Еще одной причиной заражения может стать попадание вируса через кровь. Это происходит вследствие использования нестерильных инструментов, переливанием зараженной крови и даже через поколения: ребенку от инфицированной матери при кормление грудью. До сих пор ученые по всему миру ломают голову над созданием лекарства нового поколения, способного излечить от СПИДа, однако, несмотря на большие темпы научного прогресса, вирус иммунодефицита человека продолжает распространяться по планете. Учеными поколения 20-го века разработано несколько методов диагностики ВИЧ, важнейшим из которых считают иммуноферментный анализ. ИФА на ВИЧ стали проводить относительно недавно – в начале девяностых годов. С течением времени метод оттачивался, приобретал новые детали. Теперь достоверность метода ИФА одна из самых высоких – около 98%. Соответственно, такой метод проводится все чаще. ИФА – первый анализ, с которым сталкивается пациент при обследовании на ВИЧ. Метод ИФА определяет наличие в крови антител. Если тест находит присутствие антител в крови, значит, и вирус присутствует. Однако, информацию по этому тесту необходимо подкреплять и другими анализами, такими как иммунный блоттинг (ИБ) и метод последнего поколения – полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Врач выпишет вам направление на анализ, если вы контактировали с человеком, зараженным ВИЧ либо существует опасность инфицирования. К группе опасности заражения ВИЧ относят поколения людей:
Какой-то особенной подготовки к сдаче анализа крови на ВИЧ не требуется, однако лучше придерживаться простейших правил:
Сама процедура сдачи анализа осуществляется довольно быстро, а вот исследование образца и определение показателей проходит от нескольких дней до половины месяца. В случае, если у вас есть боязнь уколов или вы склонны к головокружениям от вида крови, стоит заблаговременно известить об этом медперсонал. Обычно перед сдачей анализа медицинский работник просит заполнить анкету, в которой вы подписываете пункт о согласии на проведение процедуры. Специалист предлагает брошюры для ознакомления, объясняет основные принципы проведения теста:
Вы, возможно, будете ощущать некоторый дискомфорт при проведении анализа и даже болезненные ощущения при использовании шприца. Дрожь в руке после забора крови – нормальное явление. Дышите ровно, не стоит волноваться – дискомфорт быстро исчезнет. Проба материала подвергается тщательному лабораторному исследованию: в специальном медицинском приборе – чашке Петри находится жидкость с антигеном. Антиген – чужеродный микроорганизм, провоцирующий защитную реакцию организма. Испытуемую пробу крови смешивают с жидкостью в чашке Петри. Антитела, содержащиеся в крови, образуют соединения с антигеном, а специалист визуально фиксирует изменение окраски вещества. То есть результат теста положительный, антитела найдены, значит, инфекция есть в организме. Результат анализа действителен 4 месяца. Как правило, проведение анализов не представляет опасности для здоровья, тем не менее, редкие случаи осложнений имеют место быть:
Как правило, положительный результат теста ИФА указывает на присутствие инфекции ВИЧ в организме. Реже случается, что тест дал ложноположительный результат, то есть при показаниях теста о наличии вируса, на самом деле вируса в организме нет. В таких случаях требуется пройти другие анализы, чтобы подтвердить достоверность анализа. Исходя из практики, ложноположительный результат на заражение ВИЧ может показать тест ИФА при болезни волчанки, сифилиса, болезни Лайма или других серьезных заболеваний нашего поколения. Достоверность теста ИБ довольно высока – около 98%. Положительный результат на иммунный блоттинг в совокупности с положительным результатом теста ИФА с минимальной долей погрешности свидетельствует об инфицировании ВИЧ. На начальном этапе инфицирования, когда антитела к вирусу еще не выработались или выработались в недостаточном для идентификации количестве (в так называемый период окна), результат анализа может быть ложноотрицательным. Как и при ложноположительном результате, анализ необходимо подтвердить другими тестами на ВИЧ. Медицинские исследования фиксируют стандартную длительность периода окна около месяца – от 14 до 56 дней. Очень редкими бывают случаи, когда антитела начинают продуцироваться через пол года с момента инфицирования. источник ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA – англ.) вошел в жизнь практической медицины еще где-то в 60-х прошлого столетия. Первоначальной его задачей были гистологические исследования в научных целях, которые сводились к поиску и идентификации антигенной структуры клеток живого организма. В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических антител (АТ) и родственных антигенов (АГ) с образованием комплекса «антиген – антитело», который выявляют при помощи фермента. Этот факт натолкнул ученых на мысль, что метод может быть использован в диагностических целях для выявления специфических иммуноглобулинов различных классов, участвующих в иммунном ответе на ту или иную инфекцию. И это был прорыв в клинической лабораторной диагностике! Активно использоваться метод начал только в начале 80-х и то, в основном, в специализированных учреждениях. Первыми иммуноферментными анализаторами были снабжены центры и станции переливания крови, инфекционные и венерологические стационары, поскольку рожденный на африканском континенте, появившийся на горизонте у нас и тут же примкнувший к «старым» инфекциям грозный СПИД, требовал незамедлительных мер диагностики и поиска лечебных препаратов, воздействующих на него. Возможности иммуноферментного анализа поистине обширны. Теперь и представить себе трудно, как можно обойтись без подобных исследований, применяемых буквально во всех отраслях медицины. Кажется, что может сделать ИФА в онкологии? Оказывается, может. И многое. Способность анализа находить маркеры, свойственные некоторым видам злокачественных новообразований, лежит в основе раннего выявления опухоли, когда другим способом она еще не определяется из-за своих небольших размеров.
Таким образом, ИФА, благодаря своей чувствительности и специфичности, по образцу крови, взятому из вены, может определить:
Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях. Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск. Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки. Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки. Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами. Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд. На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах. Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы. Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм сифилиса, а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак. В работе используются планшеты с определенной специфичностью (АТ классов А, М, G) или суммарные антитела. Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:
При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования. Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой. Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ). Анализ на ВИЧ, пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.
ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций, предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным. Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок. Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.
Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:
Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию. Анализы на хламидии и цитомегаловирус иммуноферментным методом также обрели особую популярность, ввиду того, что позволяют определить время заражения, стадию заболевания и эффективность лечебных мероприятий. При внедрении хламидии тоже можно наблюдать появление антител различных классов в разных фазах патологического состояния, вызванного инфекционным агентом:
Что касается цитомегаловируса (ЦМВ), то здесь несколько иначе: антитела класса М появляются приблизительно через месяц-полтора, то есть, положительным результат (IgM+) становится в фазе первичного инфицирования или при реактивации скрытой инфекции и остается таковым от 4 месяцев до полугода. Наличие АТ класса G характерно для начала первичной острой инфекции или реинфекции. Анализ констатирует, что вирус имеет место, однако информации, в какой стадии находится инфекционный процесс – не дает. Между тем, определение нормы титра IgG тоже вызывает затруднения, так как она целиком зависит от иммунного статуса конкретного человека, который, впрочем, устанавливается выявлением иммуноглобулинов класса G. Учитывая такое поведение антител, при диагностике ЦМВИ возникает необходимость в оценке способностей антител класса G взаимодействовать с ЦМВ, чтобы потом «обезвредить» его (авидность АТ). На начальном этапе болезни IgG очень плохо связываются с антигенами вируса (низкая авидность) и лишь потом начинают проявлять активность, стало быть, можно говорить о повышении авидности антител. Алгоритм ИФА-исследований при подозрении на ЦМВ Что такое паразиты – вряд ли стоит рассказывать, ведь они преследуют человека, начиная с детского возраста и, в полном смысле слова, отравляют ему жизнь (продукты жизнедеятельности паразитов очень ядовиты). Они бывают внушительных размеров (гельминты, а попросту – глисты) или маленькие (амебы, трихомонады, лямблии). До появления в клинической лабораторной диагностике иммуноферментного метода найти паразитов было весьма сложно, теперь же, как говорят: «Нет проблем!». А все потому, что есть ИФА, который отыщет паразита, в какой бы форме тот не пребывал (цисты, личинки, яйца или взрослая особь) и в какой бы части человеческого тела не находился. Для этого нужно лишь взять кровь из вены и найти антитела, которыми организм уже ответил на чужеродные антигены. О достоинствах иммуноферментного анализа можно говорить долго и много, ведь этот метод сумел решить многие диагностические задачи, используя лишь венозную кровь. Не нужно долгих ожиданий, волнений и проблем с забором материала для исследования. К тому же тест-системы для ИФА продолжают совершенствоваться и не за горами тот день, когда тест выдаст 100% достоверность результата. источник |
Современная клиническая лабораторная диагностика (КДЛ), кроме онкомаркеров, располагает значительным арсеналом панелей для ИФА и использует их для диагностики различных патологических состояний (инфекционных процессов, гормональных нарушений) и мониторинга фармацевтических лечебных препаратов с целью выявления их влияния на организм больного и, кстати, не только человека. В настоящее время иммуноферментный анализ широко используется и в ветеринарной службе, ведь «братья наши меньшие» тоже подвержены многим заболеваниям, от которых, порой, очень сильно страдают.
ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).