Методика иммуноферментного анализа применяется в различных отраслях медицины. Но в большинстве случаев данным методом диагностируют широкий круг инфекционных заболеваний, таких как вирус иммунодефицита человека, гепатит, герпес и прочих инфекций половых органов. Также иммуноферментный анализ применяют для выявления онкомаркеров различного происхождения, определения гормонов и при диагностике репродуктивной функции организма. Материалом для иммуноферментного исследования является кровь человека.
Иммуноферментный анализ крови – это лабораторное иммунологическое исследование крови, при котором происходят качественные и количественные измерения антител (антигенов), а также гормонов. Этот метод предоставляет до 90% точности при установлении диагноза заболевания.
Медицинские лаборатории используют несколько вариантов его проведения, что влияет на срок готовности результатов. Но в среднем выдача результатов исследования происходит в период 1-10 дней после сдачи крови.
При данном виде анализа крови устанавливаются антитела разных видов – это иммуноглобулины класса M, A, G (JgM, JgA, JgG). Их накопление происходит в различные временные промежутки. Первыми начинают проявляться иммуноглобулины класса М (пятый день после начала болезни). Такие иммуноглобулины задерживаются в организме пять-шесть недель, после чего начинают исчезать из крови организма. Именно в данный период времени выявляются антитела класса М.
Вторыми проявляются иммуноглобулины класса G (через три-четыре недели). Они задерживаются в организме несколько месяцев или лет. Во время проведения иммуноферментного анализа крови и расшифровки его результата можно обнаружить возрастание антител класса G. Это свидетельствует о наличии инфекции или реинфекции.
Антитела класса А проявляются в крови на протяжении двух-четырех недель. Но всего лишь 20% из них присутствуют в сыворотке крови. Остальные же входят в состав секрета слизистых оболочек. Иммуноглобулины класса А начинают исчезать в промежутке времени от двух недель до двух месяцев. Данный процесс является свидетельством уничтожения инфекции в организме. Если после выздоровления человека проводился повторный иммуноферментный анализ крови и расшифровка результата показала наличие антител класса А – это свидетельство хронической инфекции.
Расшифровка результатов анализа может принимать такие значения:
- JgM (-), JgG (-), JgA (-) – отсутствие иммунитета к инфекции;
- JgM (-), JgG (+), JgA (-) – наличие поствакционного или постинфекционного иммунитета;
- JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) – наличие острой инфекции;
- JgM (+), JgG (+), JgA (+) – наличие обострения хронической инфекции;
- JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) – наличие хронической инфекции;
- JgM (-) – выздоровление.
В расшифровке (+) является положительным результатом, а (–) – отрицательным результатом.
Помимо уточнения классов антител в расшифровке встречаются количественные их показатели. Но обширное их объяснение может предоставить только лечащий врач.
Сыворотка крови – это прозрачная жидкость с желтым оттенком. После свертывания крови она отделяется от кровяного сгустка. Не содержит фибрина и форменных элементов.
Иммуноферментный анализ сыворотки крови основан на взаимодействии антигена с антителом, причем один из них содержит в своей структуре фермент. При взаимодействии двух компонентов содержимое пробирки должно менять свой цвет. Результаты сравниваются со стандартной цветовой шкалой, и далее устанавливается антиген, который присутствует в материале. Другими словами принцип иммуноферментного анализа сыворотки крови можно объяснить так:
- подготавливаются наборы антигенов (например, возбудители инфекционных заболеваний, аллергены или гормоны);
- пациент сдает кровь на анализ, из которой в лаборатории выделяется сыворотка;
- материал для исследования добавляется в лунки готовых наборов, после чего возникает реакция антиген-антитело;
- оставшаяся сыворотка крови убирается, а обнаруженные антитела распознаются при помощи индикаторов.
Иммуноферментный анализ сыворотки крови считается достоверным. Но в тех случаях, когда произошло неправильное взятие крови для анализа, или была нарушена техника проведения исследования, или же имеются у человека скрытые системные заболевания, результаты иммуноферментного анализа сыворотки крови могут оказаться ложными.
Иммуноферментный анализ сыворотки крови исследует практически все гормоны щитовидной железы, онкомаркеры и различные виды инфекций.
К гормонам щитовидной железы относятся тиреоглобулин (ТГ), тироксин (Т4), трийодтиронин (Т3), свободный тироксин (Т4), свободный трийодтиронин (Т3).
Иммуноферментный анализ крови в норме считается, если присущи такие допустимые нормы гормонов щитовидной железы:
- тиреоглобулин (ТГ) – допустимые границы 70 МЕ/мл;
- тироксин (Т4) – 64-146 нмоль/л (50-113 нг/мл);
- трийодтиронин (Т3) – 1,8-2,8 нмоль/л (0,8-2,0 нг/мл);
- свободный тироксин (Т4) – 11-25 пмоль/л (10-27 пг/мл);
- свободный трийодтиронин (Т3) – 4,49-9,3 пмоль/л (2,5-5,8 пг/мл).
В случае исследования половых гормонов иммуноферментный анализ крови в нормедля женщин считается, если в организме выделяется лютеинизирующий гормон (ЛГ) в таких пределах:
- фолликулярная фаза цикла (с первого дня месячных до двенадцатого-четырнадцатого) – 2-14 мЕд/л;
- овуляционная фаза цикла (с двенадцатого дня по четырнадцатый день) – 24-150 мЕд/л;
- лютеиновая фаза цикла (с пятнадцатого-шестнадцатого дня и до начала следующих месячных) – 2-17 мЕд/л.
В норме для мужчин принимается, если половой гормон вырабатывается в пределах 0,5-10 мЕд/л.
При исследовании хронического гонадотропина (ХГ) референсные значения зависят от пола человека.
- У взрослых мужчин и небеременных женщин нормой считается уровень ХГ ниже 5мЕд/мл.
- У беременных женщин результат зависит от срока беременности и может колебаться в пределах 25-49000 мЕд/мл.
Иммуноферментный анализ крови исследует множество онкологических показателей. К ним можно отнести наличие пролактина, эстрадиола, прогестерона, тестостерона, стероид связывающего глобулина (ССГ) и других маркеров. Но интерпретация результата анализа и норм этих показателей должна проводиться только лечащим врачом.
Кроме того, данный метод диагностирует инфекционные (например, краснуха, корь, туберкулез, герпес, сифилис, гепатит, псевдотуберкулез) и аутоиммунные заболевания разного вида, а также устанавливает иммунный статус человека. Но все показатели и полученные результаты должны расшифровываться квалифицированным специалистом.
источник
Существует множество способов для проверки эффективности какого-либо лечения или диагностики и подтверждения определённого диагноза. В качестве контрольного теста врачи используют исследование крови методом ИФА. Он направлен на определение некоторых антител и антиген, связанных с возбудителями, которые при взаимодействии между собой представляют некий комплекс. Обнаружение такого вещества определяется наличием изменения окраски при добавлении некоторых реактивов.
Другими словами, исследование крови методом ИФА расшифровывается как лабораторный химический анализ на содержание различных антител в крови, при помощи различных реагентов на конкретные возбудители. Точность диагноза напрямую зависит от интенсивности окрашивания: чем ярче цвет, тем больше вероятность заболевания.
Возможность проведения иммуноферментного анализа крови есть только в случае наличия специальной аппаратуры в лабораториях, которая определяет количество антител и чужеродных веществ, то есть антиген. Только они могут подвести иммунную систему к борьбе с инфекцией. Сейчас в медицине широко используются самые разные антигены крови, поэтому с помощью необходимого оборудования можно получить достаточно точный анализ для конкретного возбудителя. Однако важно правильно расшифровать иммуноферментны анализ и полученные данные, а ИФА проводить только при наличии соответствующей нормы или её отклонения.
Обычно процедуру ИФА используют в диагностике различных вирусных заболеваний. Гематит, ИППП, герпес и многие другие заболевания на разных стадиях дадут достаточно высокую точность подтверждения наличия заболевания в организме. Преимущество такого иммуноферментного анализа в том, что можно взять не только венозную кровь, но и спинномозговую жидкость или жидкость стекловидного тела.
Иммуноферментный анализ
Для диагностики разных видов и форм заболеваний в организме иммуноферментный анализ крови использует множество ЭЛИ-тестов. Так, состояние сердца и кровеносных сосудов, определение высокого риска сердечно-сосудистых заболеваний, определяют с помощью ЭЛИ-Анкор-тесту-12, а для оценки состояния печени, почек, кишечника, желудка и других основных органов используют ЭЛИ-Висцеро-16. Можно легко диагностировать сахарный диабет некоторых типов или общее состояние ЦНС.
Есть множество разных тестов, для проверки состояния практически всех органов:
- ЭЛИ-Н-Комплекс-12 – определяет общее состояние нервной системы.
- ЭЛИ-ЖКТ-12 – ИФА для общего состояния пищеварительного тракта человека и возможность его патологий в дальнейшем.
- ЭЛИ-ХГЧ-АФС – показывает нарушение системы половых органов.
- ЭЛИ-П-комплекс-12 –оценивает систему половых органов.
Существует три метода оценки иммуноферментного анализа крови:
- Непрямой метод. Антитела смешивают со специальным реактивом, в процессе которого показывается определённая метка. Таким способом обнаруживаются практически все заболевания.
- Прямой метод отличается от непрямого только тем, что к антителу добавляется антиген, с уже имеющейся на нём меткой.
- Метод сандвич-тип практически идентичен непрямому, однако, в нём на специальном планшете собираются антитела, а не антигены.
Исследование крови методом ИФА считается в норме, когда показатели анализа на гормоны щитовидной железы не превышают показателей:
Результат ИФА
- тироксин (Т4) – 62-145 нмоль/л (51-112 нг/мл);
- трийодтиронин (Т3) – 0,5-1,8 нмоль/л (0,7-3,4 нг/мл);
- тиреоглобулин (ТГ) – 65-75 МЕ/мл.
Нормой ИФА для женщин в исследовании на половые гормоны является наличие лютеинизирующего гормона в пределах:
- фолликулярной фазы – 3-18 мЕд/л; ( первые 13 дней.);
- овуляционной фазы – 25-160 мЕд/л; ( с 13 по 15-е дни);
- лютеиновой фазы – 4-18 мЕд/л. ( с 15 до следующей фолликулярной фазы).
- Нормой ИФА у мужчин считается, если половой гормон выделяется в пределах 0,4-9 мЕд/л.
Нормальные показатели иммуноферментного анализа у детей:
- Аутоиммунные антитела «-»;
- Антинуклеарный фактор «-»;
- Антистрептолизин – О 0—5 лет — менее 110 Ед/мл; 5—15 лет — 150—300 Ед/мл; 15 и далее – менее 250 Ед/мл.
У беременных:
- При помощи современной диагностики крови методом ИФА у беременных могут быть выявлены какие-либо заболевания ИППП. Женщины обязаны делать биохимию крови 2 раза во время беременности, для того, чтобы в дальнейшем не было осложнений при родах. Но для них допустимой нормой считаются немного завышенные показатели.
Исследование крови методом иммуноферментного анализа крови достаточно увлекательный процесс, однако, по недостающим медицинским знаниям углубляться в него не имеет смысла. После получения результата врач отдаёт их вам на руки, так или иначе, вы получите точный подтверждённый диагноз.
Главное, не придумывать себе несуществующих симптомов и не лечить их народными способами, существующая медицина сама справится с поставленной для неё задачей, такой, как обнаружение различных заболеваний в тех или иных органах.
источник
ИФА анализ — что это такое, расшифровка иммуноферментного анализа крови на паразитов, сифилис, ВИЧ, туберкулез. Норма в таблице, результаты
Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.
Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.
ИФА анализ — это такое лабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.
Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.
ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.
Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.
Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.
Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.
Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:
| Кол-во в организме | Функции | Период полураспада (дней) | Значение | |
| G | 70% | Формируют пассивный иммунитет у новорожденного; необходимы для иммунного ответа улучшают фагоцитоз, | 21-24 | обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях |
| М | 5-10% | нужны для активации фагоцитоза, способны связать 5 молекул антигена, | 5 | Обеспечивает первичную иммунную реакцию |
| А | 10-15 | Нейтрализуют токсины и вирусы нужны для формирования раннего иммунитета Образование местного иммунитета | 4-5 | Защита слизистых оболочек |
| Е | 0,2% | вызывают аллергию и анафилаксию активируют тканевые базофилы | 2 | Защита от паразитов |
| D | 0,2% | задействованы в выработке лимфоцитов, необходим как мембранный рецептор для антигенов; | 3 | Их роль малоизучена |
Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.
ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.
Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:
- вирусный гепатит;
- ВИЧ-инфекция;
- цитомегаловирус,
- вирус Эпштейна-Барр,
- вирус герпеса,
- корь
- краснуха,
- туберкулез,
- сальмонеллёз,
- дизентерия,
- клещевой энцефалит,
- бактерии хеликобактер,
- боррелиоз,
- столбняк,
- сифилис,
- дифтерия,
- лептоспироз,
- хламидиоза,
- уреаплазмоз,
- микоплазмоз,
- коклюш.
Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:
- плоскими червями
- аскаридами
- гистолическими амебами,
- печеночными тремадами,
- лямблиями,
- токсоплазмами,
- трихинеллами,
- двуусткой,
- цестодозами.
ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.
При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:
- за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
- не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
- стараться не допускать стрессов,
Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.
Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.
Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.
В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.
Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.
Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки.
Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.
Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С.
После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.
Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:
- Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
- Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
- Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.
В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.
Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.
При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.
Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.
После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей.
При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.
Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.
Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.
Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.
Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.
На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.
Возможны различные интерпретации результатов:
- IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
- IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
- IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
- IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
- IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
- IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.
Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:
- вирусный гепатит;
- цитомегаловирус;
- герпес;
- ветряная оспа;
- хламидиозом;
- стафилококковая или стрептококковая инфекция.
Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:
| Название гормона | Пол | Норма | |
| 1 | тиреоглобулин | м/ж | До 70 МЕ/мл |
| 2 | тироксин | м/ж | 64-146 нмоль/л |
| 3 | трийодтиронин | м/ж | 1,8-2,8 нмоль/л |
| 4 | Свободный тироксин | м/ж | 11-25 пмоль/л |
| 5 | Свободный трийодритонин | м/ж | 4,49-9,3 пмоль/л |
| 6 | Тестостерон, дегидротестостерон | Ж | 0,5-10 мЕд/л |
ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.
ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.
Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:
- иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
- IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
- IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.
В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.
Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).
В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).
При получении положительных проб далее следует:
- если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
- повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
- при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.
Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга.
ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.
ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.
| Цитомегаловирус | IgM обнаруживаются через 30-45 дней после заражения, либо во время реактивации инфекции в течение 4-6 месяцев | источник Иммуноферментный анализ крови является распространенным методом выявления различных патологий. Результат анализа крови, расшифровка ИФА которого была интерпретирована врачом лабораторной диагностики, является достоверным в большинстве случаев. ИФА — современный диагностический метод, который применяется для диагностики инфекций, гормональных и иммунных нарушений, онкологических заболеваний в лабораторных условиях. Метод позволяет выявить антитела к инфекции уже на ранних сроках заболевания. Данный метод относится к непрямым диагностическим методам, так как он выявляет иммунный ответ организма. Среди преимуществ ИФА в сравнении с другими методами диагностики можно выделить высокий уровень технологичности, что уменьшает вероятность ошибок. Метод является высокочувствительным и применяется для диагностики заболеваний как у детей, так и у взрослых. Существует обширное количество различных модификаций ИФА.
Метод ИФА основывается на специфичности иммунохимических реакций, а также физико-химических закономерностях реакций комплексов антиген-антитело. Реакции производятся с участием специфических ферментов, которые являются метками для определения антител. В результате иммунохимической реакции строго определенные антитела связываются с соответствующими антигенами. Исследование крови методом иммуноферментного анализа почти исключает возможность получения ложноположительного результата. О положительном или отрицательном результате специалисты лабораторной диагностики судят исходя из того, произошло ли окрашивание раствора в ходе ферментативной индикации комплекса антиген-антитело. Если раствор окрасился, то произошло взаимодействие антигена с антителом, результат ИФА положителен. Исследование методом иммуноферментного анализа позволяет:
Анализ крови методом ИФА позволяет определить наличие следующих инфекций:
Метод применяется для выявления антигенов возбудителей ряда инфекций, а также для выявления антител различных классов. Большую популярность метод ИФА получил для выявления сифилиса, ВИЧ, вирусных гепатитов. Определять наличие и уровень антител в сыворотке крови с целью первичной диагностики ИППП не рекомендуется. В данном случае наличие антител в крови может быть лишь признаком того, что организм пациента контактировал с возбудителем инфекции в прошлом. Диагностика различных аутоиммунных заболеваний методом ИФА производится посредством исследования:
Специфические иммунные комплексы характерны для определенных аутоиммунных заболеваний. Например, антитела двуспиральной ДНК являются характерными для такого заболевания, как системная красная волчанка.
ПСА свидетельствует о наличии аденомы простаты и рака простаты. СА-125 — это онкомаркер злокачественной опухоли яичника. Значение повышается и при раковых опухолях матки, молочных желез, эндометрия. Чтобы обеспечить максимальную точность результатов, нужно следовать определенным правилам подготовки к исследованию. Анализ для лабораторной диагностики методом ИФА, как правило, сдается утром из локтевой вены. Сдавать кровь необходимо строго натощак. Кроме этого простого предписания, следует выполнять следующие рекомендации по подготовке:
Кроме того, за несколько дней до сдачи анализа рекомендуется придерживаться диеты. При этом из рациона исключить жирные продукты, жареную пищу. Перед анализом на вирусные гепатиты из рациона исключить не только жирное и жареное, но и цитрусовые, а также оранжевые овощи. Следует отметить, что на результаты определенного спектра гормональных исследований влияет такой фактор, как фаза менструального цикла. Необходимость сдавать анализ в ту или иную фазу менструального цикла следует заранее обговорить с лечащим врачом. В противном случае можно получить неожиданные показатели. Так, например, нормальный уровень лютеинизирующего полового гормона у женщин варьируется в зависимости от дня цикла:
Анализ позволяет установить наличие в организме антител различных классов. Существуют антитела 3 классов: Выработка этих антител происходит на различных стадиях заболевания. Самыми первыми после заражения в организме начинают вырабатываться антитела IgM. Их наличие является показателем болезни в любом случае. В организме здорового человека этот класс антител отсутствует.
Иммуноглобулины класса G, присутствующие в крови, говорят о том, что человек либо уже перенес заболевание, либо является носителем инфекции. Эти антитела начинают вырабатываться после антител класса М, при большинстве заболеваний на 3-4 неделю после заражения. Их присутствие в организме возможно в течение нескольких лет. А при некоторых болезнях (например, сифилисе) IgG присутствуют в крови пожизненно. Если в организме присутствуют IgA, необходимо как можно интенсивнее бороться с инфекцией. Антитела этого класса появляются лишь в случае хронического инфекционного заболевания. Исчезновение IgA говорит об уничтожении инфекции. Если анализ ИФА производится в детском возрасте до 1,5 лет, должна учитываться следующая особенность: кровь ребенка содержит IgG матери к различным инфекциям. Это совсем не означает, что ребенок болен. В таком случае это скорее норма. Наличие IgM является свидетельством внутриутробной инфекции либо инфекции, приобретенной уже после рождения. IgM матери не могут проникнуть в организм ребенка через плаценту. В таблице представлены возможные комбинации наличия или отсутствия в организме антител 3 классов и их интерпретации.
При расшифровке анализов (+) свидетельствует о положительном результате, а (-) говорит об обратном, то есть об отрицательном. Результат, показывающий наличие или отсутствие какого-либо вещества в организме, называется качественным. Он может быть дополнен количественным. Количественный результат отображает количественное содержание различных веществ в организме. Стоит отметить, что тест-системы имеют собственные, определенные изготовителем, референтные значения, которые характеризуют показатели. Превышения референтных значений, как правило, означают наличие тех или иных патологий в организме исследуемого. После получения результатов ИФА расшифровку полученных значений должен производить лечащий врач. Только он сможет произвести правильную оценку полученных результатов и определить стадию заболевания. источник Для постановки точного диагноза и определения общего состояния здоровья у взрослого или ребенка широко применяется анализ крови, расшифровка которого выполняется высококвалифицированным специалистом. В поликлинике существует медицинская лаборатория, где можно пройти подобное исследование. Результаты анализа обычно готовятся в течение суток, в крупных городах полученные данные можно получить в режиме онлайн или на электронную почту по мере проведения расшифровки. Если есть желание сдать материал на анализ в какой-либо крупной лаборатории, то на исследование также лучше записываться в онлайн режиме, чтобы избежать очередей и сэкономить время. Общее обследование крови назначается в первую очередь каждому пациенту, обратившемуся за врачебной помощью или оформившемуся на стационарное лечение. В понятие общего анализа входит очень широкий спектр показателей, поэтому он никогда не проводится полностью – в этом просто нет необходимости. Результаты исследования включают несколько сотен параметров, большая часть из которых не нужны для установления диагноза. При подозрении на ту или иную болезнь, доктор назначает тест только части показателей. Обычно общий анализ назначается:
Клинический анализ – это возможность установить количество и качество определенных составляющих крови пациента. Для удобства расшифровки результатов существует специальная таблица, в которую сведены все показатели, содержащиеся в сыворотке. По полученным данным, рассматривающимся в комплексной взаимосвязи, можно подтвердить или опровергнуть наличие каких-либо патологий. У детей и взрослых данные отличаются, поэтому возраст пациента крайне важен для правильной оценки результатов. Общий анализ определяет наличие основных «жителей» кровеносной системы: гемоглобина, пептидов, гормонов, тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов. Норма последних говорит о наличии воспаления, но установить пострадавший показатель орган не может. Поэтому для этого используются иные методы обследований: УЗИ, компьютерная томография, магнитно-резонансная томография, рентген. Таблица показателей общего анализа включает следующие параметры. Эритроциты (RBC), норма которых отличается в зависимости от пола и возраста человека. Так, у женщин норма RBC составляет от 3,8 до 5,5*1012/л, у мужчин RBC — 4.3– .2 х 1012/л, а норма RBC для детей такая же, как и для взрослых женщин. Эритроциты (RBC) являются первым и основным показателем состояния крови человека. Благодаря эритроцитам (RBC) в организме происходит доставка кислорода ко всем органам.
Низкое количество RBC может наблюдаться на последних сроках беременности и при потере большого количества крови. Вместе с RBC исследуется и гемоглобин (HGB), основное составляющее этих клеток. Его норма у взрослых составляет 120–140 г/л, у ребенка 100–120 г/л. Следующий параметр общего анализа – гематокрит (HCT) или объем эритроцитов. Для мужчин норма HCT составляет 39–49%, для женщин – 35–45% от общего количества. Гематокрит (HCT) помогает оценить способность эритроцитов качественно переносить клетки кислорода. Измеряется HCT в процентах или долях количества данных клеток к общему объему крови. Следующие измеряемые показатели – тромбоциты (PLT). Их норма составляет от 180 до 320*109/л. эти данные характерны и для взрослого человека, и для ребенка. PLT – это маленькие клетки, отвечающие за свертываемость крови пациента. Если норма PLT превышена, это говорит о повышенной вязкости сыворотки и склонности к образованию тромбов. Низкие показатели PLT также очень опасны – неспособность крови сворачиваться может привести к ее потере при травмах и хирургических вмешательствах. Заболевание, характеризующее низкий уровень PLT, в народе называют белокровием. PLT выполняют еще одну функцию – заживляющую. Т. е. попадая на место травмы, PLT выделяют определенные факторы роста, способствующие регенерации травмированных тканей и клеток. При анализе изучается и «возраст» PLT, т. к. эти клетки подвержены отмиранию и выводу из организма. Они делятся на юные, зрелые, старые, формы разложения и дегенеративные. В норме юные PLT у взрослых и детей должны составлять не менее 92% от общего числа тромбоцитов. Нормальные показатели лейкоцитов (WBC) одинаковы для детей и взрослых и составляют от 4,0 до 9,0*109/л. это белые кровяные тельца, формирующие защитную систему организма. WBC двигаются в кровяном русле, и, обнаруживая инородные тела, разрушают их, связывают и выводят из тела. Благодаря маленьким размерам, WBC способны проникать и в межклеточное пространство и ткани всех органов. Количество WBC величина непостоянная, она меняется в зависимости от времени суток, после еды и физических или эмоциональных перегрузок. Если норма WBC повышена, то в теле развивается лейкоцитоз, который свидетельствует об инфекционном заболевании. Нормальным считается повышение WBC только в предменструальный период у женщины, во втором триместре беременности и в течение двух недель после родов. Низкий уровень WBC называется лейкопенией и возникает при иммунодефицитных недугах, стрессовых ситуациях и т. д. Норма лимфоцитов (LYM) у взрослых и людей младшего возраста и измеряется в процентах или соотношении на литр сыворотки. Показатели LYM здорового человека или ребенка колеблются в пределах от 1,2 до 3,0*109/л (25–40%). Это одни из разновидностей лейкоцитов, а именно клетки, ответственные за выработку антител. По функциональным особенностям LYM делят на три вида: одни различают вредоносные микроорганизмы и начинают выработку антител, вторые отвечают за регулировку иммунитета, а третьи разрушают инородную микрофлору. Низкий уровень LYM говорит о врожденных патологических заболеваниях, предраковых состояниях и наличии злокачественных образований в головном мозге. Также низкий уровень LYM возникает при недостатке витаминов группы В, вызванном длительным голоданием. Повышение LYM отмечаются в период простудных заболеваний, при туберкулезе, онкологических болезнях, саркоме, гипотериозе и болезнях эндокринной системы. Следующий показатель, который содержит таблица клинического анализа – средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC). Т. е. MCHC показывает, насколько красное тельце насыщено железосодержащим веществом. Он колеблется на уровне 300-370 г/л, у детей от 4 месяцев до 4 лет нормой считается показатель MCHC 280–380 г/л, у ребенка старше пяти лет — от 320 до 370 г/л. Низкий уровень MCHC развивается в результате таких болезней, как:
Превышение нормы MCHC характерно для дефицита фолиевой кислоты в организме и анемий. Показатель MCHC может меняться в зависимости от того, какие медикаменты употребляет пациент и от его рациона. Поэтому для достоверного исследования показателя MCHC, анализ обязательно следует проводить натощак, а за несколько дней нужно перестать принимать железосодержащие препараты, которые очень сильно влияют на уровень MCHC. Общий клинический анализ включает еще несколько десятков показателей, но их обследование используется намного реже и назначается строго по показаниям лечащего врача. Концентрация гемоглобина в эритроците Вторым методом исследования является биохимия. Данный метод позволяет провести несколько десятков видов исследований на наличие самых разных заболеваний детей и взрослых. Это обследование всегда сдается натощак, в утренние часы. Подготовка к нему включает соблюдение диеты, отказ от приема медикаментов, сигарет, алкоголя и физических нагрузок. Для его проведения иногда требуется посетить специальную лабораторию. Чтобы не стоять в очереди, на исследование можно записаться в онлайн-режиме и прийти в назначенное время. Также онлайн можно следить за выполнением анализа, а его результаты вместе с комментариями и рекомендациями получить на электронную почту. Часто изучение количества тромбоцитов проводят при помощи биохимического анализа. Такое обследование более информативно, чем сдача крови из пальца и общего анализа. При расшифровке они будут иметь немного другую аббревиатуру – MPV. В норме у взрослых и детей MPV должны быть на уровне от 180 до 320*109 г/л. Такое исследования помогает более подробно рассмотреть именно состояние MPV в данный момент – сколько из них зрелых, сколько юных, а сколько скоро отомрут и выведутся из тела. Оценка уровня тромбоцитов в биохимическом анализе Иногда уровень MPV может отличаться от данных, полученных при клиническом анализе, на результаты, полученные при биохимическом исследовании, считаются более достоверными. Низкий уровень MPV характерен для болезни печени, щитовидной железы, анемии, интоксикации организма, гепатита и туберкулеза. Высокий MPV бывает при обострении хронических болезней желудка и кишечника, при онкологии, после перенесенных операций и как побочное действие при приеме медицинских препаратов. Следующий параметр, который определяется в ходе биохимического исследования, это онокомаркеры, один из которых СА 125. В его основе лежит определение антигенов, вырабатываемых организмом в ответ на образование злокачественных опухолей. Онкомаркер СА 125 самый удобный показатель для определения новообразований в репродуктивной системе. Во время роста опухоли яичника или семенника уровень маркера СА 125 резко увеличивается, а при продуктивном лечении показатели заметно снижаются. Уровень онкомаркера СА 125 здорового человека лежит в пределах от 10 до 13 ед/мл у женщин, и не более 10 ед/мл у мужчин. Критическим значением СА 125 принято считать отметку в 35 ед/мл. Прослеживая этот показатель в динамике, можно определить, дает ли лечение положительные результаты. Если при ремиссии уровень СА 125 снова повысился, то есть повод провести дополнительное обследование и выявить новый очаг заболевания. Если же показатели СА 125 все время находятся в повышенной концентрации, то следует пересмотреть назначенное лечение. Природным считается повышение уровня СА 125 во время первого триместра беременности и во время критических дней. В других случаях высокий уровень СА 125 говорит о таких болезнях, как рак груди, половых органов или эндометрия, пищеварительной системы или печени, поджелудочной железы, легких и т.д. Если повышение СА 125 не выше 100 ед/мл, то речь идет о доброкачественных образованиях или воспалительных процессах, но пересдать анализ через некоторое время необходимо для оценки назначенного лечения и контроля за его уровнем. Такое биологическое исследование, как ИФА проводят для комплексной оценки работы иммунной системы. Оно определяет количество ее клеток системы у детей и взрослых, их свойства и способность к образованию антител. Также ИФА выявляет болезни инфекционного, аутоиммунного и гематологического характера. Назначается ИФА пациентам в случае подозрения на такие болезни, как:
При выполнении ИФА изучается количество иммуноглобулинов – веществ, которые при попадании в тело чужеродных вирусов и бактерий, активизируются. Расшифровка данных ИФА говорит о наличии инфекции или же повторном инфицировании пациента. При проведении правильного лечения, иммуноглобулины выводятся из кровотока в течение 2–8 недель, поэтому обследование повторяют. Если по истечении этого срока в расшифровке ИФА снова присутствуют данные иммуноглобулины, то это свидетельствует о переходе недуга в хроническую стадию. Кроме венозной крови, для проведения ИФА можно использовать жидкость спинного мозга или околоплодные воды при беременности. Очень часто метод ИФА назначается на определение наличия в теле ребенка паразитов: глистов, лишая и др. Информативность ИФА очень высока и лежит в основе постановки разнообразных диагнозов. Хеликобактер пилори – наиболее коварная бактерия, вызывающая целый ряд болезней пищеварительной системы. Анализ на определение хеликобактер пилори рекомендуют сдать всем пациентам, имеющим проблемы с желудочно-кишечным трактом. Как правило, данная бактерия присутствует у каждого второго человека, но ее пагубное влияние развивается далеко не в каждом человеческом организме. Бактерия неспособна выжить на открытом воздухе, а потому чаще всего она передается через секреции тела – слюну или слизь, или через готовую еду. Чаще всего это происходит в семейном кругу – при поцелуях, пользовании одними столовыми предметами, облизывании соски ребенка и т. д. Попадая в тело, бактерия оседает в желудке и проникает в его слизистую. Свою разрушительную деятельность она начинает при ослаблении иммунитета пациента вызванного какими-либо заболеваниями. В отличие от других микроорганизмов, бактерия очень устойчива к действию соляной кислоты, составляющей основу желудочного сока, а потому может жить в организме годами. В процессе своей жизнедеятельности, она вырабатывает аммиак, который разъедает слизистую оболочку желудка и приводит к язвам. Но существуют медицинские препараты, которые легко справляются с этим микроорганизмом. Биохимический тест на определение бактерии сдается при появлении болей в желудки в процессе принятия пищи или после трапезы, наличии «голодных болей» частой изжоге, постоянном чувстве тяжести. Анализ на наличие хеликобатер пилори включает отказ от сигарет, кофе и спиртных напитков за сутки до сдачи крови, наличие голодного желудка (натощак). После проведения исследования на хеликобактер пилори можно съесть шоколадку и выпить чашку чая или стакан чистой воды, чтобы снять головокружение, и повысить гемоглобин. Результаты исследования на наличие бактерии обычно готовятся в течение 2–3 дней. Для определения здоровья мужчин используется анализ PSA или ПСА, свидетельствующий правильности работы его половой системы. ПСА – это один из видов онокмаркеров, определяющих антигены при развитии раковых заболеваний предстательной железы. Биохимический тест PSA проводится методом взятия венозной крови натощак и может выявить такие тяжелые недуги, как рак или аденома. По мнению медиков, проводить биохимический тест на ПСА должны все мужчины после 45 лет. Именно в этом возрасте начинается снижение потенции и развитие всевозможных болезней. ПСА – это простатический специфический антиген, вещество, вырабатываемое предстательной железой мужчины. Он необходим для нормального функционирования мужской половой системы, но его норма не должна быть выше определенных норм. Чем старше пациент, тем большее количество ПСА считается допустимым. Так, при возрасте от 40 до 50 лет норма ПСА не должна превышать 2,5 нанограмма на миллилитр, от 50 до 60 лет – 3,5 нанограмма на мл и т. д. Увеличение показателей онкомаркера ПСА в более молодом возрасте – серьезный повод задуматься о собственном здоровье и пройти комплексную диагностику. Проводится исследование ПСА при соблюдении определенных правил. За сутки до анализа стоит исключить из меню фруктовые соки, кофе, чай и алкоголь. В течение недели перед обследованием придется отказаться от интимных отношений, а перед сдачей крови не посещают уролога. Также кровь на ПСА сдается не ранее, чем через четыре недели после завершения курса массажа предстательной железы. Если результаты неудовлетворительные, необходимо посетить уролога и пройти дополнительные обследования, которые подтвердят или опровергнут предварительный диагноз. источник
Иммуноферментный анализ крови (ИФА) проводят в качестве контрольного исследования, когда необходимо подтвердить или опровергнуть диагноз. Также это поможет оценить эффективность назначенного лечения через определенное время после начала. ИФА направлен на выявление определенных возбудителей антител и антиген к ним. Иммуноферментный анализ крови характеризуется реакцией взаимодействия антигена со специфическими антителами. В результате такой реакции возникает некий комплекс, который при взаимодействии с некоторыми реактивами меняет свой цвет. Таким образом, если анализ крови ИФА показывает такие результаты, значит расшифровка будет указывать на наличие определенного заболевания. Соответственно, чем интенсивнее окрашивание, тем больше вероятность того, что анализ положительный и необходимая норма вовсе отсутствует. С помощью специальной аппаратуры определяют имеющееся количество антител и антигенов. В данном случае под антигенами подразумевают все чужеродные вещества. Именно они способны вызвать иммунную систему и приводят в действие для борьбы с инфекцией. В медицине известны самые разные антигены для каждого возбудителя. Поэтому, используя специальные реактивы и лабораторное оборудование можно получить точные результаты. Главное, в этом случае, чтоб подтвердила соответствующая норма или ее отклонение и была правильно сделана расшифровка ИФА.
Иммуноферментный анализ предполагает использование нескольких групп ЭЛИ-тестов. Это норма на ЭЛИ-В-тест, с помощью которого будет видна расшифровка по поводу состояния иммунной системы. Другой ЭЛИ-Диа-тест направлен на определение состояния эндокринной системы организма. Таким образом, очень легко продиагностировать диабет первого и второго типа. Также можно определять таким методом, как ЭЛИ-Н-Комплекс-12 – дает возможность определить состояние центральной нервной системы и периферической. Существует достаточно много различных методов, с помощью которых можно определять состояние здоровья того или иного органа:
Иммуноферментный анализ крови (ИФА) располагает тремя методами оценки. Это прямой, непрямой и сендвич-тип. Непрямым методом определяют заболевания любого теста, при этом применяется смешивание антител со специальными реактивами, показывающими определенную метку. Прямым методом пользуются также довольно широко, при этом к сорбированному антигену сразу же добавляются помеченные антитела. Иммуноферментный анализ при помощи крови методом сендвич-типа очень похож с непрямым методом, но при этом на специальном планшете должны сорбироваться не антигены, а антитела. Иммуноферментный анализ с использованием крови достаточно сложный и серьезный процесс, поэтому углубляться в его особенности нет смысла. Все результаты выдаются по окончанию на руки пациенту или пересылаются лечащему врачу. Если в результатах норма, то вам об этом скажут, даже опираясь на симптомы. Если же норма отсутствует и есть значительное увеличение показателей, то необходимо будет предпринять меры лечения. В любом случае норма крови должна будет установлена и без помощи врача этого не сделать. Не стоит заниматься самолечением и выдумывать некоторые признаки заболевания. Это может и не подтвердиться в результате обследования. источник |
Иммуноферментный анализ проводят для выявления разного типа вирусных заболеваний. Такую процедуру можно проводить на разных стадиях, так как точность исследования будет высокая в любое время. Это может быть исследование гепатита, герпеса, вируса Эпштейна-Барра, ИППП и многие другие. Кроме того, что для исследования берут венозную кровь, можно еще использовать спинномозговую жидкость, содержание стекловидного тела или околоплодные воды.