Какой необходим материал для анализа днк

Жидкую кровь вылить на(стерильную) чистую марлю, свернутую в 4-5 раз, чтобы получилось пятно размером 2-3 см в диаметре. Высушить марлю в течении 1-2 ч на открытом воздухе при комнатной. В пробирках с консервантом (цитратом или ЭДТА) до 7 дней при температуре +4°C; если планируется хранение дольше – хранить и транспортировать в замороженном виде при 20°C t . и поместить в чистый бумажный конверт.

Пятно крови на бинте, марле, ткани, бумажной салфетке — поместить в чистый бумажный конверт

Состриженные ногти в количестве 5-7 штук, поместить в чистый бумажный конверт. При сборе состриженных ногтей необходимо быть уверенным, что все ногти принадлежат необходимому человеку .

пятно более 1 см2 или на ватных палочках изнутри презерватива (2-5 палочек).Пятно спермы может быть на ткани, на бумаге. Образец спермы из презерватива: не касаясь стенок презерватива опустить в семенную жидкость несколько ватных палочек, аккуратно вынуть, так же, не касаясь стенок презерватива, и поместить в чистый бумажный конверт.

5-6 штук поместить в чистый бумажный конверт

Подсушить жевательную резинку при комнатной температуре 30-60 мин на чистой бумажной салфетке (или фольге), завернуть подсушенную жевательную резинку в эту салфетку и поместить в чистый бумажный конверт.

Взять чистую ушную палочку, противоположным концом тщательно прочистить ушной канал (10-20 раз) и поместить в чистый бумажный конверт. Необходимо 2-3 палочки (по одной палочке на ушной канал).

3-5 сигаретных окурков поместить в чистый бумажный конверт

Волосы с луковицами, желательно 8-10 волосинок, поместить в маленький пластиковый конверт, который затем поместить в бумажный конверт. (волосы вырывать пинцетом)

Женская прокладка или тампон

Положить в бумажный конверт, высушить не менее 8 часов

Носовая слизь. Положите носовой платок или салфетку с носовой слизью в бумажный конверт. Если слизь влажная, подсушить в течение 4 часов.

Щетина с фрагментами кожи. Щетина с электробритвы дает лучшие результаты.

Высушенная, возможно понадобится также образец матери

Поместить фрагмент ткани (желательно 4-10 грамм) в 50мл пробирку, залить 70% спиртом и направить КУРЬЕРСКОЙ службой в лабораторию. До отправления хранить препарат при -20 градусов в морозильнике. Если есть возможность, то направлять препарат на льду (с использованием замороженных при -20 – 30 градусов хладоэлементах в термоконтейнере

Поместить весь имеющийся абортивный материал в пластиковый стерильный контейнер и направить КУРЬЕРСКОЙ службой в лабораторию. До отправления хранить препарат при -20 градусов в морозильнике. Если есть возможность, то направлять препарат на льду (с использованием замороженных при -20 – 30 градусов хладоэлементах в термоконтейнере. Т.к. абортивный материал всегда загрязнен биологической тканью материнского происхождения необходимо ОБЯЗАТЕЛЬНО предоставлять образец ДНК матери

Поместить фрагмент ткани (желательно 4-10 грамм) в чистый бумажный конверт.

Ткань в парафиновых блоках

Поместить фрагмент блока (желательно не менее 1 см3 ) в чистый бумажный конверт

Поместить ремешок в чистый прозрачный пластиковый пакет, или же в чистый бумажный пакет.

Бритву целиком поместить в чистый бумажный конверт. Если бритва мокрая – то подсушить конверт.

Поместить зубную щетку в бумажный конверт. Если щетка влажная, то подсушить конверт 2-3 ч.

Поместить расческу в чистый бумажный конверт

Рубашка с засаленным воротничком, майка, нижнее белье

Аккуратно завернуть стакан в чистую бумажную салфетку.

Аккуратно завернуть в чистую бумажную салфетку.

Поместите в бумажный конверт

Вилки, ложки. Аккуратно завернуть столовую утварь в чистую бумажную салфетку.

Поместить фрагмент ткани (желательно 4-10 грамм) в чистый бумажный конверт. Подсушить конверт до исчезновения следов влаги (обычно 1-2 ч при комнатной температуре)

Например, фрагмент берцовой кости 10-15 см, не подверженный гнили, возможно с остатками мумифицированной ткани

Поместить фрагмент ткани (желательно 4-10 грамм) в 50мл пробирку, залить 70% спиртом. Направлять не замораживая, при температуре окружающей среды

Гистологические препараты на стеклах

Поместить стекло в чистый бумажный конверт. Следует учитывать, что количество биоматериала на стекле крайне незначительное. Это, и то, что гистологические препараты, как правило, фиксируются при помощи веществ, разрушающих структуру ДНК. Это приводит к тому, что вероятность выделения ДНК из этих образцов мала.

источник

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Установление отцовства предполагает проведение серии процедур, которые направлены на определение родственной связи между ребенком и мужчиной, предположительно являющимся его биологическим отцом.

Медицина оперирует несколькими основными методиками определения отцовства. Они различаются по технике проведения и степени сложности, по материалам, которые используются в процессе, и конечно, по достоверности полученных результатов. Как правило, исследования, связанные с установлением отцовства, проводят врачи-генетики. При этом они применяют следующие методы:

• по дате зачатия и сроку беременности;
• по внешним признакам;
• по группе крови;
• по анализу ДНК.

Зачастую, в том случае, если в течение одного менструального цикла женщина вступала в половую связь с несколькими мужчинами, возникает необходимость установления отцовства. В таких ситуациях, с целью предварительного и весьма неточного определения отцовства, можно попробовать вычислить конкретную дату, на которую пришелся максимальный шанс зачатия. Соответственно, мужчина, бывший в половой связи с женщиной незадолго после, или до этой даты, имеет высокую вероятность оказаться отцом ребенка.

Известно, что если у женщины менструальный цикл регулярен, то максимальная вероятность зачатия возникает в середине менструального цикла, примерно на 14-15 день от начала очередных месячных. Но как показывают практические наблюдения, момент максимальной вероятности зачатия у многих женщин точно определить достаточно трудно.

Установление отцовства при помощи сопоставления возможной даты зачатия и даты половой связи может оказаться неверным еще по одной причине. Дело в том, что сперматозоиды могут сохранять свою активность и способность к оплодотворению в женском организме на протяжении 3-5 дней после полового акта. А это означает, что зачатие могло произойти и через несколько дней после половой связи. В таком случае отцом ребенка может оказаться мужчина, имевший половой акт с женщиной еще за несколько дней до оптимальной для зачатия даты. Подобная ситуация возможна даже в том случае, если у женщины был секс непосредственно в дату зачатия с другим мужчиной.

Установление отцовства возможно и при помощи определения срока беременности, который может быть примерно измерен согласно показаниям ультразвукового исследования. Однако даже наиболее совершенная УЗИ-аппаратура не способна установить дату зачатия с высокой точностью, и указать на конкретную дату.

Таким образом, установление отцовства на основе определения возможной даты зачатия или измерения срока беременности, является крайне приблизительным и недостоверным методом. Оно может иметь только дополняющее значение. Кроме того, данная методика становится практически бесполезной в случае, если женщина в течение небольшого промежутка времени имела половые контакты с различными партнерами.

Различные элементы внешности человека, такие как цвет волос, глаз или кожи, сходство в чертах лица и т.д., могут служить только косвенным, и очень ненадежным поводом для опровержения либо подтверждения отцовства.

Объясняется это тем, что, хоть внешние признаки и задаются генетически, но при этом способны варьироваться в широких пределах и иметь разную степень проявления в каждом конкретном случае. Кроме того, несостоятельность метода установления отцовства на основе внешнего сходства мужчины и ребенка подтверждается фактом существования двойников. Так называются люди, которые не имеют никаких родственных связей, но при этом очень похожи друг на друга своей внешностью.

В человеческой популяции насчитывается более 20 различных систем групп крови. Наиболее часто используются только две из них:
1. Система AB0. Чаще всего именно эту систему имеют в виду, когда говорят о «группе крови».
2. Rh-фактор. Различия по резус-фактору крови.

Обе эти системы разделения крови по группам задаются генетически и, следовательно, открывают некоторые возможности для определения отцовства. Сам принцип установления отцовства по резус-фактору и группе крови основан на том, что параметры крови ребенка зависят от набора генов, которые передадут ему мать и отец.

В этой системе выделяют 4 группы крови:

• I или 0 (нулевая);
• II – A;
• III – B;
• IV – AB.

Их различие определяется нахождением в крови человека антител (веществ, которые вырабатываются иммунной системой) того или иного вида. Соответственно, в крови у человека с I группой оба вида антител отсутствуют, у человека со II группой – есть только антитела А, с III – только В, а с IV – оба вида антител.

Определение отцовства на основе группы крови не может считаться точным способом, хотя и имеет большую достоверность, чем описанные выше. Данная методика считается скорее индикативной, и применяется в качестве скринингового предварительного исследования перед проведением ДНК-теста. Анализ крови предоставляет неопровержимые доказательства только в редких случаях. Например, если у ребенка I группа крови, а у отца – IV.

Согласно системе Rh-факторов, выделяют только две группы – резус-отрицательную (Rh-) и резус-положительную (Rh+). Соответственно, их различие состоит в наличии или отсутствии специфических антител (резус-фактора) в крови человека.

Установление отцовства по резус-фактору является менее достоверным, чем на основе системы АВ0. Даже у резус-положительных родителей может родиться ребенок с резус-отрицательной кровью. Однако у резус-отрицательных родителей ребенок также всегда будет иметь отрицательный резус-фактор. Поэтому единственный случай, когда можно однозначно утверждать, что мужчина не является биологическим отцом ребенка, возникает в ситуации, когда оба родителя имеют отрицательный резус-фактор, а ребенок – положительный.

Определение отцовства по группе крови служит предварительным методом для оценки наличия кровного родства между ребенком и мужчиной. Особенность данного метода заключена в том, что отрицательный результат будет точен на 99%, а положительный практически не является значимым. Кроме того, данный анализ можно провести только после рождения ребенка, когда появляется возможность исследовать его группу крови.

Каждый человек несет в себе совершенно уникальную генетическую информацию. Она закодирована в ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоте). Эти гигантские молекулы присутствуют в любой клетке человеческого организма, имеющей ядро. Молекулы ДНК организованы в сложные структуры, получившие название хромосом.

Каждая из хромосом содержится в каждой из соматических клеток в двух экземплярах. Греческое слово «сома» означает «тело», поэтому соматическими называются клетки, которые составляют тело человека. Единственным исключением – несоматическими клетками – являются клетки половые: сперматозоиды у мужчин и яйцеклетки у женщин. От соматических они отличаются тем, что в них все хромосомы содержатся не парами, а только в единственном числе.

Зачем же природа предусмотрела такое различие? Как известно, при зачатии происходит слияние сперматозоида с яйцеклеткой и объединение их хромосомного набора, то есть генетического материала, который в них содержится. Одну хромосому из каждой пары ребенок получает от отца (хромосома сперматозоида), а вторую – от матери (хромосома яйцеклетки). Таким путем ребенок получает полный хромосомный набор, и наследует генный материал своих родителей – поэтому он зачастую на них похож. Но с другой стороны, комбинации мужских и женских хромосом могут сложиться миллиардами различных вариантов – именно это определяет индивидуальность каждого человека.

ДНК-тест на определение отцовства считается настолько достоверным, что его результаты имею даже официальную юридическую силу. Согласно Приказу Министерства Здравоохранения, для доказательств факта отцовства достаточно проведения исследования с точностью результатов 99,90%. Современные технологии позволяют достигать еще большей точности, но чаще всего в этом просто нет необходимости. Корректно подсчитанная вероятность отцовства, равная 99,90%, вполне достаточна для использования формулировки, принятой в научном мире и юридической практике: «отцовство практически доказано».

Исключение факта отцовства для признания его юридически значимым требует получения как минимум трех несовпадений между исследуемыми фрагментами ДНК ребенка и его предполагаемого отца.

Следует помнить, что без материала, взятого от матери ребенка, достичь уровня необходимой достоверности исследования сложнее, чем в случае проведения тестирования всех членов семьи. Именно поэтому, если ДНК-экспертиза выполняется с целью оспаривания или определения отцовства в судебном порядке, то судьи зачастую настаивают на одновременном заборе материалов от ребенка, его предполагаемого отца и биологической матери. Это необходимо для того, чтобы заключение, выданное судебно-медицинским экспертом, не вызывало никаких сомнений.

Определение отцовства при помощи исследования молекул ДНК – возможность получить совершенно достоверный и научно обоснованный результат. Это заключение может стать важным аргументом в решении множества юридических проблем, например, при бракоразводных процессах и взыскании алиментов, определении наследников и распределении наследства, в иммиграционных и многих других вопросах.

После проведения ДНК-анализа для установления отцовства выдается заключение, содержащее один из следующих выводов:
1. Результат положительный – мужчина НЕ ИСКЛЮЧЕН как биологический отец данного ребенка (вероятность отцовства составляет 99,9%).
2. Результат отрицательный – мужчина ИСКЛЮЧЕН как биологический отец данного ребенка (вероятность отцовства исключена на 100%).

Теоретически возможно существование в мире другого человека с генетическим набором, абсолютно идентичным генетическому паспорту тестируемого. Например, такая ситуация наблюдается у однояйцевых близнецов, чей генный материал соответствует друг другу на все 100%. С этой вероятностью и связано небольшое отклонение от полностью достоверного положительного результата при тесте ДНК на отцовство. Но, в подавляющем большинстве случаев, установление отцовства с вероятностью в 99,9% будет означать его доказанность. А отрицательный результат при корректном заборе материала и правильном проведении исследования всегда однозначно верен.

Если взятие щечного эпителия не представляется возможным или затруднено, то можно воспользоваться другими методами. В качестве источника ДНК при выполнении частных и анонимных исследований, кроме стандартного образца буккального эпителия, могут быть использованы практически любые объекты, содержащие ДНК человека:

• образцы крови;
• слюна;
• зубы;
• ногти;
• сперма;
• образцы из хранилища биопсии тканей;
• волосы с корнем и другие подходящие биологические ткани.

Обнаружить подобные образцы, на которых остались следы ДНК человека, чаще всего можно на его личных вещах:

• зубных щетках;
• лезвии бритвы;
• окурках сигарет;
• носовых платках;
• салфетках;
• одежде и т.д.

Необходимо учитывать, что анализ ДНК по нестандартным образцам потребует соблюдения некоторых обязательных условий, применения более сложных технологий, а иногда и специального оборудования. Например, для определения отцовства по волосам нужно помнить, что для исследования не подходят подстриженные волосы. Использовать необходимо только те волосы, на которых сохранилась луковица, поскольку именно в ней и содержится ДНК, по которой будет проводиться анализ. Количество таких волос с луковицами должно составлять не менее 5-6 штук.

Кроме того, несмотря на применение самых современных методов генетической экспертизы, выделить ДНК из таких нестандартных образцов в некоторых случаях невозможно по причине ее полного отсутствия.

Локусом ДНК называется ее строго определенная часть, которая подвергается исследованию и сравнению. 99,9% из последовательностей, встречающихся в ДНК человека, совпадают по своему составу, но, тем не менее, ДНК различных людей несут в себе достаточное количество индивидуальных отличий. Существуют такие участки молекулы ДНК, которые являются уникальными для каждого человека. Именно этот факт определяет отличия между нами.

На точность ДНК-анализа, в первую очередь, влияет количество изучаемых генетических локусов. Чем большее количество участков, определяющих нашу уникальность, будет исследовано, тем выше вероятность опровержения или подтверждения отцовства. В настоящее время на каждом образце ДНК принято анализировать от 16 до 40 различных локусов. Это обеспечивает достоверность более 99.99% при подтверждении биологического отцовства, и 100% результат при его исключении. Кроме того, зачастую анализ проводится двумя независимыми группами исследователей, а полученные данные впоследствии сверяются. Такая процедура позволяет избежать ошибок, связанных со случайными загрязнениями материала, или неточностями при работе с ним.

Установление отцовства еще на ранних сроках беременности традиционно относится к пренатальной диагностике. Чтобы определить отцовство во время беременности, вначале необходимо осуществить забор биологического материала от плода. Данную процедуру строго рекомендуется проводить только в профильном медицинском учреждении, поскольку она может быть сопряжена с возможными рисками возникновения осложнений.

В той ситуации, когда отцовство необходимо определить еще до рождения ребенка, применяется ДНК-тестирование на основании биологических материалов плода, получение которых происходит следующим образом:

• Биопсия ворсинок хориона. Забор материала осуществляется на сроке от 9 до 12 недель беременности. С целью получения биологического материала специалист под контролем ультразвукового аппарата, через переднюю стенку живота или влагалище, вводит иглу, достигая оболочки плода. Шанс прерывания беременности в процессе проведения данной процедуры составляет около 2%.
• Амниоцентез. Процедура получения околоплодных вод (амниотической жидкости) для последующего генетического исследования. Амниоцентез чаще всего проводится на сроке от 14 до 20 недель беременности. Процедура отбора амниотической жидкости осуществляется специалистом-гинекологом. Он, под контролем УЗИ-аппарата, через ткани передней брюшной стенки вводит тонкую и длинную иглу, проникает через стенку матки, и набирает необходимое для исследования количество околоплодных вод. Шанс развития осложнений или спонтанного прерывания беременности в процессе проведения амниоцентеза составляет около 1%.
• Кордоцентез. В процессе кордоцентеза выполняется забор крови плода непосредственно из сосудов пуповины. Осуществляется эта процедура на сроке беременности, превышающем 18-20 недель. Шанс осложнений при применении данного метода составляет менее 1%.

По сообщениям американских ученых, они разработали неинвазивный способ определения отцовства в период беременности. Генетическая экспертиза выполняется по специальной методике, в которой анализу подвергается небольшое количество ДНК. Данный тест можно использовать уже в первом триместре, чаще всего после наступления 10 недели беременности. Анализ на более ранних сроках не дает гарантии получения достаточного количества частей ДНК плода из плазмы крови матери. Тестирование проводится путём исследования некоторого количества образцов венозной крови, взятой у будущей матери и у предполагаемого отца.

В технологии дородового неинвазивного определения отцовства применяется исследование свободно циркулирующей ДНК плода. Некоторое ее количество при беременности находится в крови будущей матери. Современные технологии, используемые в генетике, позволяют выделить ее, и подвергнуть сравнению с ДНК матери и возможного биологического отца.

Новый неинвазивный тест на определение отцовства может послужить заменой перечисленным выше небезопасным для здоровья матери и ребенка методам определения ДНК-профиля плода. По сообщениям ученых, он обладает такой же высокой точностью, но является более предпочтительным, поскольку при его проведении не возникает угрозы осложнений и досрочного прерывания беременности.

Минимальный срок установления биологического родства и проведения исследования для определения отцовства составляет 3 дня. Однако, в большинстве случаев, для качественного анализа потребуется от десяти дней до двух недель с момента поступления биологических материалов в лабораторию.

На сегодняшний день анализ ДНК может проводиться практически везде. Имеются даже портативные лаборатории. А оборудование для генетической идентификации личности производят десятки предприятий во многих странах мира. Именно поэтому ранее сложная и экзотическая процедура сегодня становится обыденным методом исследования, воспользоваться которым может каждый желающий.

Автор: Пашков М.К. Координатор проекта по контенту.

источник

Сегодня практически 10% отцов воспитывают не своих кровных детей в браке, которые могут считаться наследниками, причем статистика говорит, только о тех случаях, когда родство в судебном порядке не подтвердилось. А сколько еще таких, что не подозревают о данном факте. Одним из главных доказательств установления отцовства является генетическая экспертиза, которая проводится посредством сбора ДНК. ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота, которая содержит информацию о генетической составляющей человека, что передается из поколения в поколение. Таким образом, именно такой анализ является ключевым при установлении кровного родства. Насколько достоверна данная процедура, можно ли ее провести в домашних условиях и какие условия для сбора материала необходимо соблюдать? Об этом мы расскажем далее.

Нить ДНК – это 46 хромосом, а именно главный носитель уникальной информации каждого отдельного человека. То есть, каждый человек имеет свои гены, они позволяют передавать данные в качестве сперматозоида следующему поколению. Клетки, которые содержат ДНК, хранят заложенную информацию о человеке при его зачатии и могут восстановить необходимый набор генетических признаков. Именно поэтому, нить ДНК используют для подтверждения или опровержения родства двух людей. Если ребенок был зачат от предполагаемого мужчины, то ему передается набор его генетических признаков, в результате чего хромосомы от двух биологических материалов (отца и ребенка) совпадают и тест выдает положительный результат. Поэтому достоверность данного теста высокая.

Провести тест ДНК для установления отцовства можно как после рождения ребенка, так и в период вынашивания плода, если у матери не стоит диагноз «Угроза выкидыша».

Проверка ДНК процедура довольно сложная, ее оказывают не все медицинские учреждения. Так как для ее проведения необходимо дорогостоящее оборудование и квалифицированные специалисты, ее цена не будет дешевой. Сегодня тест ДНК на установление родства может обойтись вам примерно в 5000-7000 рублей для каждого участника. Цена иногда может доходить и до 10000 рублей. Все зависит от региона проживания, медицинского центра куда вы обратились, а также срочности проведения процедуры. Стандартная цена составляет для получения результатов в течение 14 дней. Если вам необходимо узнать ответ срочно, за 2-3 дня, тогда придется заплатить две цены.

Когда вопрос установления отцовства поднимается принудительно через судебные органы, многие клиенты, придя в лабораторию, интересуются: «Возможно ли проведение экспертизы бесплатно?». Закон в этом случае возложил все издержки с судебным процессом на истца. Если в процессе установления отцовства через суд, будет доказан факт родства, от которого ответчик уклонялся, то суд может обязать его компенсировать растраты истца.

Многие, услышал о возможности провести процедуру теста ДНК в домашних условиях, путают ее с действительностью. Не стоит сравнивать данный вид процедуры с тестом на беременность или овуляцию, при помощи экспресс-полосок. Здесь смысл заключается совершенно в другом. Под термином «анализ ДНК дома» понимается только лишь забор биологического материала, который в дальнейшем направляется в медицинскую лабораторию. Обычно для проведения анализа предоставляют биологические данные отца и ребенка, но наличие клеток матери позволит существенно упростить тест и увеличить процент результативности.

Важным моментом, перед тем как провести процедуру в домашних условиях является то, что полученный результат при таких обстоятельствах забора материала не сможет быть допущен к рассмотрению на судебном заседании.

Чтобы процедура прошла по всем правилам, сотрудник медицинского центра присылает по адресу вашего проживания специальный набор. Он состоит из подробной инструкции забора материала, набора стерильных палочек, а также разноцветных конвертов, куда помещается материал. На дому обычно предоставляют забор клеток слизистой, а именно эпителия с внутренней стороны щек. После успешного выполнения рекомендаций, конверты направляют в лабораторию, где и осуществляют непосредственно сам тест.

Наиболее частым вопросом перед проведением ДНК анализа на родство, является предмет исследуемого, то есть биологического материала человека, где содержится необходимая генетическая информации. Итак, в качестве материала для проведения генетической экспертизы от отца и ребенка может выступать следующее:

• кровь;
• слюна;
• сперма;
• волосы;
• ногти;
• сера из уха;
• пятна на ткани естественных выделений человека;
• зубная щетка;
• бритва;
• окурки;
• жевательная резинка.

Если проблем с забором материала нет, то сотрудники лаборатории советуют предоставлять слюну с внутренней стороны щек, так как данные клетки являются буккальным эпителием.

Задача специалиста – это исследовать сразу несколько фрагментов молекулы, которая содержит генетические данные, чтобы удостовериться несколько раз в подлинности результатов. Именно поэтому, лучше всего проводить данную процедуру в стенах лаборатории, чтобы разные внешние факторы не повлияли хоть на малейшую долю отклонения.

Очень важно соблюдать правила забора материала, что может напрямую отразиться на точности результатов теста. Особенно это касается тех людей, кто выбрал проведение забора биологического материала на дому.

• ни в коем случае нельзя к предмету забора дотрагиваться руками, для этого необходимо использовать перчатки и стерильный пинцет, который после помещает материал в специальный контейнер;
• если это зубная щетка, то ее срок эксплуатации не должен превышать недели;
• при наличии пятен на одежде, их нужно аккуратно вырезать ножницами, а после также поместить пинцетом в стерильный конверт или контейнер;
• жевательная резинка или окурки, предварительно подсушиваются;
• волосы предоставляются для анализа только с луковицами и желательно около 10 шт.;
• собрать слюну можно стерильной ватной палочкой.

Если вы собираете биологический материал в домашних условиях, очень важно соблюдать не только вышеперечисленные правила, касаемо отдельных предметов, но и проследить, чтобы за время их хранения (например, если это жевательная резинка или окурок от сигареты), к ним никто не дотрагивался. Иначе результаты будут искаженными.

После сдачи исследуемого материала в отведенный срок вы получаете результата теста ДНК. Результаты будут отображены на бланке, где будет представлена информация о двух или более участников исследования. Главное здесь, это запись о выводе проводимого исследования и заключение специалиста – подтвердить или опровергнуть совпадение. Если ответ положительный, то в выводе будет стоять вероятность совпадения 99,9%. Многие задают вопрос: «Почему не 100%?». А все потому, что 0,01% отводится исключительным случаям, которые могут произойти в жизни, например, когда у биологического отца есть брат-близнец и были поданы именно его биологические материалы. А вот если сходства с генами не будет найдено, то результат будет 100%. Здесь ошибка исключена.

Как бы ни звучало это абсурдным, но результаты ДНК экспертизы можно исказить. Если данное действие произошло умышленно, то за этого рода деяния грозит уголовная ответственность и заказчику и исполнителю. Конечно, все мы понимаем, что за все этим стоит цена вопроса. А вот неумышленно подлинные результаты могут быть искажены в следствии подмены биологического материала в лаборатории. Такое на практике происходит, когда в экспертизе не задействованы судебные органы при установлении отцовства. Так как если на экспертизу направляет суд в ходе разбирательства, то тест ДНК проходит по строгим правилам, в проверенных медицинских центрах, с подробным отчетом, а также фотоотчетом, и при присутствии уполномоченного лица.

Если вы сомневаетесь в результатах генетической экспертизы, вы можете затребовать ее повторное проведение, даже если отцовство устанавливается в судебном порядке.

На сегодняшний день ведущие ученые мира доказали, что можно искусственно подделать образцы слюны и крови при наличии чужого биологического материала. Происходит это при помощи высокотехнологического оборудования, которое умеет синтезировать молекулу ДНК. Но сделать этого не может любая лаборатория, так как ей необходим доступ к базе геномов, а также современные технологии, которые не имеются в широкой доступности.

Следовательно, тест ДНК для установления отцовства является единственным методом определения родства с высокой точностью. Несмотря на недешевую цену, а также длительность ожидания результатов, анализ ДНК на отцовство является достоверной и максимально точной информацией, что либо подтверждает, либо опровергает факт родственной связи. Именно поэтому при судебных разбирательствах, результаты генетической экспертизы играют решающую роль.

источник

Развитие технологий, достижения в области науки и медицины сделали генетическую экспертизу доступным и востребованным видом современных исследований. Используя материал для ДНК анализа, специальное оборудование и реактивы, в лабораторных условиях проводятся уникальные исследования, результаты которых являются незаменимыми для медицины и криминалистики. На сегодняшний день анализ образцов генетического материала является единственным точным способом установления родства, проведения ДНК теста на определение пола ребенка, а также выявления различных наследственных заболеваний.

ДНК тестирование может проводиться по желанию заказчика, когда он желает выяснить пол своего будущего малыша, установить степень родства или принадлежность к определенной этнической группе. Также экспертиза проводится по медицинским показаниям, когда необходимо выявить возможные заболевания или состояния, по решению судебного органа и во многих других случаях.

Независимо от целей и методик, обязательным условием для проведения ДНК-тестирования является наличие образцов биоматериала, содержащего генетическую информацию. Выясним, что может использоваться в качестве объекта исследования.

Современные методики позволяют извлечь образцы ДНК, содержащие уникальную информацию, из самых разных биоматериалов. Чаще всего для этих целей используют частицы буккального эпителия, забор которого производят на поверхности слизистой оболочки щеки.

Забор такого образца производится специальной мягкой палочкой, занимает несколько минут и является абсолютно безопасным и не причиняет дискомфорта. Полученного образца вполне достаточно для проведения экспертизы и получения точных результатов.

Также используются и другие материалы для определения ДНК человека, в числе которых:

• венозная, пуповинная кровь;
• сперма;
• частицы кожи, волос, ногтей;
• пятна биологических жидкостей.

Если нет возможности исследовать такой материал, то образцы ДНК выделяют из предметов личной гигиены, окурков, посуды, которой пользовался человек, относительно которого будет проводиться экспертиза.

Чаще всего к генетической экспертизе прибегают с целью установления или оспаривания отцовства. Точность ДНК теста в таком случае не подвергается никаким сомнениям, а экспертное заключение может использоваться в ходе судебных разбирательств и подаваться в государственные органы. Какой материал для ДНК анализа на отцовство дает возможность точно установить биологическое родство?

Для исследования потребуется образец биоматериала ребенка и предполагаемого отца. Это могут быть все перечисленные виды биоматериала, но стандартная процедура предполагает использование буккального эпителия. В лабораторных условиях сравнивают локусы и устанавливают идентичные участки. По частоте совпадений получают результат, который может составлять 99,999999%, что подтверждает факт биологического родства.

Таким образом, чтобы установить отцовство по ДНК, достаточно того, чтобы ребенок и мужчина сдали мазок. Но, в некоторых случаях необходим забор образцов ДНК матери. Когда это необходимо – можно узнать у специалистов нашего Центра в телефонном режиме.

Молекулярно-генетический Центр «ДТЛ» специализируется на проведении различных видов генетических экспертиз, направленных на определение степени родства, установление пола будущего ребенка, этнической или расовой принадлежности, выявления возможных заболеваний.

Все, что требуется для проведения высокоточных исследований – образец буккального эпителия, по которому наши опытные специалисты с максимальной точностью установят необходимую информацию. Мы стремимся сделать наши услуги доступными как можно большему количеству желающих, поэтому сдать образцы биоматериала можно наиболее подходящим способом:

• в нашем Центре – специалисты проведет процедуру быстро, безболезненно и в комфортных условиях;
• в официальных представительствах «ДТЛ», открытых в других городах РФ;
• в домашних условиях.

О том, как правильно собрать образцы дома, и как их потом отправить на анализ, расскажут наши специалисты. Заказывайте обратный звонок и получайте бесплатную консультацию.

источник

По словам специалистов, ДНК-анализ на установление отцовства — самый востребованный вид ДНК-исследований. Ситуации у людей, которые обращаются в лаборатории для проведения генетических анализов, разные: молодые родители хотят точно знать, кто отец ребенка, взрослые люди пытаются найти родню. Сейчас этот анализ доступен всем желающим по приемлемой цене.

В основе анализа ДНК на отцовство лежит метод ПЦР (полимеразной цепной реакции). Как мы все помним из школьного учебника биологии, половину генетического материала ребенок наследует от отца, половину — от матери. При методе ПЦР создается множество копий ДНК, а затем специалист при помощи специальной аппаратуры сравнивает определенные участки ДНК — локусы. Чем больше локусов сравнивается, тем точнее результат, так как единичное совпадение может быть простой случайностью, а вот если совпадают, например, 15 локусов, то это практически полная гарантия родства.

Анализ ДНК на отцовство — высокотехнологичный, кропотливый и очень сложный процесс. Обычно результатов приходится ждать 10–15 рабочих дней, хотя в особых случаях их можно получить и за 4 рабочих дня, но за дополнительную плату. Продолжительность зависит и от количества сравниваемых локусов — обычно их 14, однако в некоторых лабораториях анализируют 20–30: это делает результат еще точнее, но требует больше времени.

Анализ ДНК на определение отцовства очень точный. Его достоверность по самым пессимистичным данным составляет 99%, хотя на самом деле этот показатель даже выше. 100-процентная точность невозможна по той причине, что нельзя гарантировать, что у отца нет близнеца, ведь, как известно, ДНК однояйцевых близнецов идентична.

Для пациентов клиник анализ на отцовство — процедура очень простая. Нужно обратиться в лабораторию или медцентр, предлагающий такие услуги, и сдать биоматериал. Материал забирается и у ребенка, и у предполагаемого отца. Иногда, для еще большей достоверности результата, биоматериал берется и у матери, однако это вовсе не обязательно.

В качестве биоматериала обычно используется слюна или соскоб клеток с внутренней поверхности щеки. Это простая и безболезненная процедура. Для такого исследования пригодны также волосы и кровь, но их берут намного реже. Кровь чаще используется для определения отцовства еще до родов — сегодняшние технологии позволяют проводить такие исследования. Раньше для этих целей использовались околоплодные воды, забор которых был сопряжен с риском и для матери, и для ребенка, но теперь стало возможным выделить ДНК ребенка из крови матери.

Анализ ДНК на отцовство не требует особой подготовки. Если вы сдаете кровь, анализ не следует проводить ранее, чем через полгода после переливания крови. Слюна и соскоб обычно сдаются с утра натощак.

Взять образец слюны или клеток слизистой оболочки рта можно даже дома — при помощи стерильного контейнера и ватной палочки. Наборы для забора биоматериала на дому продаются в Интернете. Образец упаковывается в контейнер и отсылается в лабораторию, а через несколько дней вы получаете ответ. Если все так просто и можно провести анализ анонимно, зачем же лаборатории предлагают анализ ДНК на отцовство? Зачем ехать в медцентр?

Дело в том, что такой анонимный результат не имеет юридической силы. В этом нет ничего удивительного — специалист не знает, чей образец прислан на исследование. Если такой анализ вам нужен не для удовлетворения любопытства, а для дела, вам все же придется приехать в лабораторию лично. Причем подойдет не любое медучреждение: вам нужна лаборатория, имеющая соответствующую лицензию. При заборе материала потребуется предъявить паспорт (или другой документ, подтверждающий личность), причем это обязательно и для ребенка. Только после этого специалист может подтвердить, что анализы были взяты у конкретных людей.

Исследование, результаты которого могут быть признаны судом, всегда проводится только на условиях добровольного согласия всех участвующих лиц. Перед началом анализа заказчик — тот, кто оплачивает исследование — заключает с лабораторией письменный договор.

После того как анализ будет произведен, заказчик получит бланк, в котором станут обозначены все лица, сдававшие биоматериал, и предполагаемая степень родства в процентном соотношении.

Выявляя степень родства, медики избегают категоричных утверждений и при положительном результате пишут, что «родство не может быть исключено». Вероятность обозначается в процентах и при обнаружении родства обычно составляет 98-99,9%. Как мы уже говорили, 100% совпадения быть не может, так как нельзя полностью исключать наличие у отца брата-близнеца. Впрочем, такая вероятность в принципе невелика — и уж совсем невероятно, чтобы отец о нем не знал. Такие повороты характерны, скорее, для сюжетов низкобюджетных сериалов, в реальности же подобных случаев не случается.

Отрицательный результат формулируется более однозначно. Если совпадений не найдено, то отец ребенка — это определенно не тот человек, образец ДНК которого исследовался. Ошибка здесь невозможна.

Когда-то анализ ДНК на установление отцовства был очень дорогим, однако теперь он стал гораздо доступнее. При этом точную цифру назвать непросто, так как цена ДНК-анализа на отцовство складывается из многих факторов.

• Во-первых, это ценовая политика лаборатории. Одни позиционируют себя как медучреждения эконом-класса, другие работают для состоятельной клиентуры. Интерьер, удобство расположения, уровень сервиса сказываются и на цене анализов.
• Во-вторых, стоимость зависит от биоматериала. Современные технологии позволяют проанализировать и нестандартные образцы: волосы, ногти, даже окурки, на которых остались следы слюны. Но это делают далеко не во всех лабораториях, и цена такого исследования намного выше.
• В третьих, стоимость зависит от количества участников анализа. Если присутствуют все трое — мать, отец и ребенок — цена будет выше, если исследуются лишь образцы биоматериала ребенка и отца — ниже.
• В четвертых, сроки исполнения. Нет ничего странного, что за экспресс-анализ придется доплатить.
• И наконец, в пятых, тщательность проверки ДНК. Чем больше локусов, тем дороже.

В среднем цена анализа ДНК на установление отцовства начинается от 17 000 и может достигать 40 000 рублей.

Говоря об анализе ДНК на отцовство, нельзя игнорировать тот факт, что исследование это затрагивает деликатные области частной жизни и нередко становится трудным испытанием для семьи. Однако есть ситуации, когда избежать его невозможно. Результаты ДНК-теста на отцовство, сделанные в сертифицированной лаборатории, принимаются как свидетельство в суде. Они также необходимы, если нужна пересадка органов. Наконец, некоторые уже вполне взрослые люди хотят пройти этот тест, чтобы отыскать своих родителей. Какой бы ни была причина, побудившая вас пройти этот анализ, выбирайте серьезную и ответственную лабораторию.

Сейчас не только в Москве, но и по всей России расположено много лабораторий, предлагающих услугу ДНК-анализа на отцовство. Как выбрать лучшую лабораторию? Рассказывает эксперт сети лабораторий «ИНВИТРО»:

«Вам нужно крупное и уважаемое медицинское учреждение, которое располагает современной аппаратурой — это не только гарантия достоверности результата, но и залог того, что заключение будет готово вовремя. Хорошо, если есть возможность сделать срочный анализ.

Узнайте, по скольким локусам проводится исследование. 15 локусов позволяют получить результат точностью в 99,99%. В «ИНВИТРО» используется система оценки по 20-ти маркерам, что обеспечивает очень высокую достоверность результата».

P.S. «ИНВИТРО» — крупнейшая частная сеть лабораторий, проводит более 1000 видов исследований. Ежедневно ее пациентами становятся 24 000 человек. Результаты анализов признаются всеми медицинскими учреждениями России.

Лицензия на осуществление медицинской деятельности № ЛО-50-01-009134 от 26 октября 2017 г.

За­каз­чи­ком ана­ли­за ДНК на от­цовст­во мо­жет вы­сту­пить не каж­дый же­ла­ю­щий, а толь­ко за­кон­ный пред­ста­ви­тель ре­бен­ка (ро­ди­тель или опе­кун), пред­по­ла­га­е­мый ро­ди­тель (ис­клю­чи­тель­но в при­сут­ст­вии за­кон­но­го пред­ста­ви­те­ля ре­бен­ка) и сам ре­бе­нок пос­ле до­сти­же­ния им 18-лет­не­го воз­рас­та.

источник

Дезоксирибонуклеиновой кислотой выступает один из двух видов нуклеиновых кислот, которые передают и хранят генетическую информацию следующему поколению. Главной целью ДНК, содержащихся в клетках, считается долгое хранение сведений о строение белков и РНК.

Ученый из Швейцарии Мишер в 1869 году смог открыть ДНК. Но строение двойной спирали этой молекулы впервые выявили Френсис Крик и Джеймс Уотсон в 1953 году.

Существуют следующие экспертизы: для суда и информационная. Суть теста и точность результата этих исследований ничем не отличается. В последнем случае анализ можно выполнить анонимно, на основании таких биологических материалов, которые сдадите в лабораторию.

Но никакой юридической силы этот документ не будет иметь. Ведь не известно происхождение образцов, поэтому нет гарантии, что они принадлежат тому, кто указан в анкете.

Чтобы для суда провести ДНК-экспертизу нужно выполнить некоторые процедуры:

• Анализ на отцовство требует участие матери ребенка
• Когда подобное исследование осуществляется по решению суда, результаты не выдаются на руки участникам теста
• Потребуется дополнительная оплата за составление отчета и оформление бумаг
• Сбор биоматериалов происходит прямо в лаборатории с предоставлением документов личности (свидетельства о рождении, паспорта, водительского удостоверения и прочего).

Но перед проведением этого теста лучше проконсультироваться с юристом, поскольку требования к нему могут немного отличаться, в зависимости от случая.

Буккальным эпителием является ткань внутренней стороны щеки. Перед сбором слюны следует отказаться от приема пищи. К тому же надо хорошо прополоскать рот теплой водой. Если собираетесь сдавать волосы для анализа ДНК, то сначала их нужно тщательно вымыть. Чтобы отдать на экспертизу ногти, их придется вымыть с внутренней и внешней стороны.

Кроме этого, для генетического анализа применяют даже нестандартные образцы: окурки, носовые платки, зубные щетки, жевательные резинки и прочее.

Вообще, биологические образцы долгие годы хранятся без изменений. С того времени, как собрали материалы ДНК стерильной ватной палочкой, их можно использовать в течение нескольких недель. Если их высушили до упаковывания в пробирку или конверт, то образцы будут год пригодны для генетического исследования. Конечно, желательно отправить сразу все собранные материалы в лабораторию.

Анализ ДНК, а еще судебный генетический тест необходим, чтобы установить родство людей. Например, делается это, если требуется решение юридических проблем, выявление совместимости тканей или воссоединение семейства. .

Для определения между людьми биологического родства проводится экспертиза ДНК. Его можно выявить между родственниками человека с разной точностью. Вообще, все зависит от уровня родства. Причем положительный .

Сомнения в отцовстве считаются самыми популярными случаями, когда требуется проведение теста ДНК. Еще его выполнение может понадобиться женщине, чтобы установить факт отцовства для подачи алиментов и прочего. Смысл .

Очень часто у людей появляется необходимость установить процент родства между собой. Во многих случаях такая экспертиза проводится для того, чтобы привести доказательства отцовства. В современное время были .

Все о внешности, характере, личных особенностях и предрасположенностях к заболеваниям человека можно выяснить из анализа ДНК. Ведь именно в этой молекуле зашифрована вся эта информация. ДНК представляет собой .

источник

Тест ДНК на отцовство – самый надежный способ определить. имеется ли между людьми биологическое родство. Генетический анализ позволяет либо на 100% опровергнуть родственные связи, либо доказать отцовство на 99.9% и выше.

Признание отцовства – это юридический термин. Он означает установление биологического происхождения ребёнка от конкретного мужчины. Законодательство предоставляет возможность проводить генетический анализ на отцовство, который определяет кровное родство как между отцом и ребенком, а в некоторых случаях между матерью и ребенком.

Установление отцовства позволяет решать такие задачи:

1. Устранение сомнений при суррогатном материнстве.
2. Определение родства с ребенком в случае умышленной либо случайной подмены в родильном доме.
3. Подтверждение факта родства для получения либо отказа от наследства.
4. Определение биологического отца ребенка, который не известен.
5. Определение родственных связей для получения алиментов либо отказа от них.
6. Подтверждение факта отцовства либо материнства для судебного разбирательства.
7. Переезд матери и ребенка в родную страну отца, который имеет гражданство другого государства.

Благодаря анализу ДНК можно выявить, является ли лицо отцом/матерью конкретного ребёнка. Обычно такой тест выполняется по слюне, однако допускается применение нестандартных материалов, к которым относятся ногти, волосы, ушная сера и другие материалы, содержащие ДНК.

В бюро Хонест можно заказать анализ ДНК на отцовство следующих видов:

1. Анонимный. В этом случае участники экспертизы могут не предоставлять свои паспортные данные. Собрать материалы для анализа можно самостоятельно, после чего доставить их в офис. Такая экспертиза ДНК на отцовство лишена юридической силы.
2. Информационный. Для проведения анализа требуется паспорт или свидетельство о рождении. Для экспертизы участники должны явиться в офис, где будет взят материал. Её результаты обладают юридической силой.

• Приготовить: новую упаковку ватных палочек, медицинские перчатки, 2 листа бумаги, 2 почтовых конверта
• За час до забора слюны не курить, не есть, не чистить зубы, пить только воду, непосредственно перед забором прополоскать рот обычной водой.
• Надеваете перчатки, вскрываете упаковку с палочками, достаете 2-3 штуки, отрезаете от каждой по одному ватному кончику.
• Держась за отрезанный конец палочки с небольшим усилием проведите по внутренней стороне щеки в течение 10 секунд.
• Положите палочку на лист бумаги, чтобы образец подсох. Нельзя: сушить феном, ставить под прямые солнечные лучи, дуть, проверять готовность образца губами или руками.
• Повторите процедуру для оставшихся двух палочек, уберите образцы в бумажный конверт и подпишите. Например, «Ребенок».
• Повторите шаги для второго участника.

Для ДНК теста подойдут только волосы с луковицами, поскольку только в корешках сохранилась «живая» ДНК. При этом выпавшие или оставшиеся на расческе волосы не всегда пригодны для анализа. Оптимальный вариант — аккуратно вырвать 5-10 волосков пинцетом. Образцы также следует поместить в бумажный конверт.

Соберите 5-10 срезов ногтей с рук или ног, положите в бумажный конверт. Даже для таких материалов, как ногти, не рекомендуется использовать полиэтиленовые пакеты, поскольку в них образцы «не дышат» и в итоге портятся.

Для анализа подойдет только щетка, которой пользовались не менее недели. Оставьте щетку до полного высыхания в вертикальном положении (в стакане) и, не касаясь щетинок руками, положите в конверт или аккуратно заверните в бумагу.

При сборе окурков, коктейльных трубочек, столовых приборов и иных материалов постарайтесь не касаться их голыми руками — возьмите перчатки, салфетку или пинцет. Образцы также кладутся в бумажные конверты.

Вы должны привести собранные образцы в течение 3 суток.

Все клетки человека имеют по 46 хромосом. Исключение составляют только половые клетки, в которых хромосом в два раза меньше – 23. Они имеют один аллель – одну вариацию гена. Когда происходит слияние яйцеклетки и сперматозоида, новая клетка получает по половине генов от обоих родителей. Благодаря сравнению 2-х ДНК можно достаточно точно определить наличие либо отсутствие родства.

Итак, как сделать анализ ДНК на отцовство?

Чтобы создать ДНК-профиль лица, мало просто выделить дезоксирибонуклеиновую кислоту из имеющегося материала. Чтобы получить необходимое количество молекул ДНК, применяется процесс цепной полимеразной реакции. Она позволяет умножить либо выполнить амплификацию образца дезоксирибонуклеиновой кислоты, полученной из исходного материала. В результате можно получить миллиарды точных копий одной молекулы конкретного человека. С ними работу продолжают генетики.

Для этого из генетического материала выделяются стандартные генетические маркеры – STR-локусы. Они представляют собой участки генов, которые состоят из повторяющихся последовательностей.

На точность теста ДНК оказывает влияние количество исследуемых локусов. С повышением числа участков, которые определяют уникальность человека, тем больше шансов точного опровержения либо подтверждения отцовства. Обычно анализируется свыше 16 локусов. Это позволяет добиться высокой точности экспертизы.

Рассмотрим пример, как делают ДНК тест на отцовство. Например, у маркера TPOX количество повторов находится в промежутке от 6 до 12. У отца данный маркер составляет 8/11. Это значит, что в одной аллели их 8, а в другой – 11. У ребёнка 8/7. Из них 8 повторов были получены от отца, а 7 – от матери. Чтобы доказать отцовство, необходимо исследовать минимум 12 маркеров.

Как ДНК тест на отцовство делает компания Хонест? Для этого используется 19 SRT-локусов. Если все совпали, отцовство подтверждается на 99.99%. Если не совпал один-два локус, отцовство допускается, поскольку нельзя исключить возможность мутации. Такое встречается крайне редко, но все же встречается. Если же не совпадает три и больше локусов, отцовство на 100% исключается.

Никак. Установить отцовство на 100% невозможно. Вот почему:

1. Согласно теории вероятности, есть шанс, что в одном случае из миллиарда ДНК на отцовство (исследуемые локусы) у двух случайных людей совпадут. Поэтому 100-процентное подтверждение никто дать не может.
2. Гены могут мутировать. У отца маркер DYS391 может быть 9, а у дочери – 8. По этой причине 1-2 маркера могут не совпадать. Если же разница достигает 3, тогда отцовство можно полностью исключить.

Лаборатория Хонест делает тест ДНК на отцовство с точностью 99.999%. Это высокий показатель для информационного анализа. Результаты также можно использовать в суде.

источник

Выделение ДНК и РНК — важный шаг подготовки проб перед биохимическими и диагностическими процессами. Амплификация, проведение обратной транскрипции, детектирование накопления продуктов амплификации методом ПЦР в реальном времени, клонирование, секвенс, гибридизация, синтез ДНК и т. д., не могут быть выполнены непосредственно на биологических образцах без предварительного выделения (экстракции) нуклеиновых кислот (НК) и их последующей очистки.

Так как в ветеринарной клинической практике наиболее используемым методом является ПЦР в реальном времени (или, в некоторых случаях, классическая ПЦР), рассмотрим методы выделения НК и их особенности будут рассмотрены именно с точки зрения данного вида анализа.

Как известно, ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой реакцию синтеза комплементарной цепочки ДНК на ДНК матрице, катализируемую ферментом ДНК-зависимой ДНК-полимеразой. Фермент термостабильный – он может выдерживать высокие температуры, необходимые на этапе денатурации. Оптимум работы полимеразы составляет около 72°C. Для создания оптимальных условий синтеза образец ДНК помещается в так называемую реакционную смесь (РС).

Реакционная смесь состоит:

1. Буфер для ПЦР. Это буферный раствор с определенным значением pH и концентрацией различных солей и кофакторов, необходимых для работы полимеразы. В наше время компании-производители реактивов для ПЦР предлагают к своим полимеразам фирменные буферы.
2. ДНК-зависимая ДНК-полимераза. Катализатор реакции, чаще всего выделяется из термофильной бактерии Thermus aquaticus (Taq-полимераза).
3. Нуклеотидтрифосфаты (dNTPs). Раствор мононуклеотидтрифосфатов (dATP, dCTP, dTTP, dGTP) в свободном виде, которые служат «строительным материалом» для синтеза ампликонов.
4. Праймеры. Короткие синтезированные последовательности ДНК (олигонуклеотиды), фланкирующие исследуемые участки ДНК – от них полимераза начинает свою работу.
5. MQ вода. Дистиллированная и деионизированная вода, пригодная для молекулярно-генетических исследований. Используется для доведения реакционной смеси до рабочей концентрации.
6. ДНК. Собственно, сам образец ДНК, который необходимо исследовать.

При должном качестве всех компонентов реакционной смеси реакция может ингибироваться только из-за плохой очистки ДНК. Ингибиторы ПЦР представляют собой вещества, способные повлиять на конформацию фермента и уменьшить его активность, вплоть до полной деактивации. Эти примеси могут оказаться в растворе ДНК по двум причинам:

1. Плохая очистка образца от остатков веществ, которые содержались в материале, из которого производилось выделение. Ингибировать ПЦР могут остатки жиров, белков, углеводов, пигментов (для растительных клеток – хлорофиллы, каратиноиды, антоцианы, для животных – гемоглобин и др.). Сюда же относятся и вещества, которые были использованы в качестве транспортной или консервационной среды для образца (ЭДТА, гепарин, формальдегид).
2. Плохая очистка образца от реагентов, которые были использованы в процессе выделения. Сильно ингибируют ПЦР детергенты (ПАВ) и денатуранты, такие как SDS (додецилсульфат натрия) и мочевина; спирты и другие неполярные растворители, которые содержатся в экстрагентах и отмывочных буферах (этанол, изопропанол, фенол и др.).

Список некоторых веществ, которые могут негативно повлиять на эффективность ПЦР, показан в таблице 1.

Таблица 1. Некоторые ингибиторы процесса ПЦР