Анализы на инфекции риф или пцр

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — серологическая реакция, позволяющая выявить антитела к известным антигенам. Метод заключается в микроскопии окрашенных мазков.

Данную реакцию используют в иммунологии, вирусологии и микробиологии. Она позволяет определить наличие вирусов, бактерий, грибов, простейших и ИКК. РИФ очень широко применяется в диагностической практике для обнаружения вирусных и бактериальных антигенов в инфекционном материале. Метод основан на способности флюорохрома вступать в связь с белками, не нарушая при этом их иммунологической специфичности. В основном применяется при диагностике инфекций мочеполовых путей.

Различают следующие методы проведения реакции иммунофлюоресценции: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод заключается в окрашивании материала флюорохромами. Благодаря способности антигенов микробов или тканей светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа, они определяются как клетки с ярко окрашенной каймой зеленного цвета.

Непрямой метод заключается в определении комплекса антиген+антитело. Для этого опытный материал обрабатывается антителами антимикробной кроличьей сыворотки, предназначенной для диагностики. После того как антитела свяжутся с микробами, их отделяют от не связавшихся и обрабатывают антикроличьей сывороткой, помеченной флюорохромом. После этого комплекс микроб+анимикробные антитела+анитикроличьи антитела определяется с помощью ультрафиолетового микроскопа также, как и при прямом методе.

Реакция иммунофлюоресценции незаменима при диагностике сифилиса. Под воздействием флюорохрома возбудитель сифилиса определяется как клетка с желто-зеленой каймой. Отсутствие свечения означает, что пациент не заражен сифилисом. Этот анализ часто назначается при положительной реакции Вассермана. Данный метод очень эффективен при диагностике, так как позволяет определить возбудителя на ранних стадиях заболевания.

Кроме того, что РИФ позволяет диагностировать сифилис, его также применяют для определения наличия таких возбудителей как хламидии, микоплазма, трихомонады, а также возбудителей гонореи и генитального герпеса.

Для проведения анализа используют мазки или венозную кровь. Процедура взятия мазка совершенно безболезненная и не представляет никакой опасности. К сдаче данного анализа необходимо подготовиться. За двенадцать часов до него не рекомендуется пользоваться средствами гигиены, такими как мало или гели. Также иногда по показаниям врача проводиться провокация. Для этого рекомендуют прием острой пищи или алкоголя или проводится инъекция провоцирующего вещества, например гоновакцина или пирогенал. Помимо этого промежуток между приемом антибактериальных препаратов и сдачей анализа должен быть не менее четырнадцати дней.

При оценке результатов следует учитывать тот факт, что свечение наблюдается не только у живых бактерий, но и у мертвых, особенно это относится к хламидиям. После курса антибиотиков мертвые клетки хламидий также обладают свечением.

При правильной подготовке пациента и соблюдении техники взятия мазка, данный анализ позволяет определить заболевания на ранних стадиях, что очень важно для своевременного лечения. Положительными сторонами данного метода является короткие сроки получения результата, простота выполнения и небольшая стоимость анализа.

К недостаткам можно отнести то, что для проведения анализа необходимо достаточно большое количество исследуемого материала. Кроме того, оценку результатов может проводить только опытный специалист.

источник

Как и анализ ПЦР, ИФА-методы широко применяются в современной лабораторной диагностике ИППП. При чем врач может назначить Вам не только сдать ПЦР анализ, но и провести ИФА — диагностику для выявления определенной инфекции. С непрофессиональной точки зрения пациента подобный комплекс исследования вызывает много вопросов, поскольку все лабораторные методы исследования на первый взгляд кажутся абсолютно одинаковыми. Но, несмотря на внешнюю схожесть, разница между ПЦР, ИФА и другими иммунологическими исследованиями все же есть.

ИФА-анализ основан на выявлении не самой инфекции, а ее продуктов жизнедеятельности — белов-маркеров. ПЦР-анализ напротив выявляет существующие в настоящее время инфекционные агенты (бактерии, вирусы, грибы).

РИФ, как и другие иммунологические методы исследования, тоже несколько уступает достоверности ПЦР-инфекции. Суть РИФ такова, при проведении анализа антигены возбудителя (молекулы белка, свойственные инфекции) ищут антителами к ним. Если антитело «обнаружит» белок, антиген инфекции, значит потенциально человек инфицирован. Однако свойство антитела таково, что они могут реагировать не с одним, а с разными антигенами — так называемые перекрестно-реагирующие антигены. Из-за этого специфичность (способность метода выявлять лишь тот инфекционный агент, для которого данный метод исследования назначен) у РИФ чуть ниже, чем у ПЦР.

Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать. Обычно это происходит вследствие нескольких причин:

• «Иммунологический след» — «след» от уже перенесенной инфекции. В ответ на внедрение инфекции организм начинает вырабатывать антитела, в частности, антитела класса IgG. Эти антитела «улавливает» ИФА-анализ. Метод ПЦР реагирует только на наличие молекул ДНК инфекции в организме. В такой ситуации ПЦР-анализ дает отрицательный результат, а ИФА — положительный. При чем в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы положительный результат ИФА-диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления.
• Разница в оборудовании для проведения диагностики. Получение положительного результата ИФА и ПЦР — отрицательного, может быть вызвано использованием особых тест-систем в ИФА-анализе, которые выявляют все виды бактерий, в том числе те, которые в определенном количеств в норме содержатся в организме человека. Тест-система, используемая в ПЦР-анализе, может быть основана только на определение особого вида болезнетворных бактерий. Например, тест-система для ИФА-диагностики настроена на выявление всех видовхламидий : С. Pneumonia, C. Pecorum, C. Psitaci. А в проведении ПЦР-анализа может быть использована тест-система, выявляющая только С. Trachomatis. Вот почему, ИФА-анализ на С. Pneumonia будет положительным, а ПЦР — отрицательным.
• Разница в используемом материале. Материал для ПЦР получают из места предполагаемой локализации инфекции. Для ИФА-диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР-диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, хламидии могут локализироваться в разных местах организма. Вызвав хронический сальпингит , проведенный в области шейки матки анализ ПЦР хламидии не обнаружит. Но ИФА-диагностика все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс.
• Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР-диагностики. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдать врач-лаборант в том случае, если инфекция «свежая», т. е. даже при наличии определенных симптомов уровень антител класса IgG в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. Для половых инфекций подобный период «молчания» ИФА-диагностики может достигать двух недель.

Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР-анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА-диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.

Провести комплексную лабораторную диагностику, сдать ПЦР, ИФА и другие анализы Вы можете в медицинском центре «Евромедпрестиж».

источник

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, заключающийся в выявлении специфических (индивидуальных для каждого микроорганизма, вируса) антител.

Антитела (иммуноглобулины, Ig) — специфические белки-защитники, вырабатываемые лейкоцитами (белыми кровяными тельцами) в ответ на появление в организме чужеродного генетического материала (вирусов, бактерий, простейших).

Иными словами, результат иммуноферментного анализа (ИФА) показывает не факт наличия инфекционного агента (инфекции) в организме, а состояние иммунитета к этому инфекционному агенту.

Таким образом, на основании результатов исследования крови методом ИФА можно лишь опосредованно (косвенно) судить о наличии /отсутствии инфекционного агента (вирусов, бактерий, простейших) по ответной реакции на него иммунной (защитной) системы организма.

В зависимости от срока давности существования в организме человека вирусов, бактерий, простейших вырабатываются антитела классов А, M, G (IgА, IgM, IgG).

Антитела классов А, M, G свидетельствуют о свежем, недавнем или давно существующем заражении соответственно.

По комбинации количественных показателей антител данных классов можно судить об обострении или снижении активности хронического инфекционного процесса, или повторном заражении.

Данная информация представляет в гинекологии и дерматовенерологии известную ценность, позволяя ответить на вопрос «кто кого заразил?» и подобрать лечение в зависимости от длительности инфекционного процесса.

Исследование крови методом ИФА в гинекологии широко используют для диагностики микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомоноза, гарднереллеза, гонореи, TORCH-инфекций (токсоплазмы, краснухи, цитомегаловирусной инфекции и герпеса).

В случае низкой иммуногенности инфекционного агента (инфекции) либо недостаточной активности иммунной системы выработка антител (иммуноглобулинов классов А, M, G) может отсутствовать или быть диагностически незначимой при фактическом (реальном) наличии инфекционного агента (инфекции) в организме по данным полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Слабой иммуногенностью (способностью существовать незаметно для иммунной системы) обладают микоплазмы, уреаплазмы, трихомонада.

Результаты иммуноферментного анализа (ИФА) в ряде случаев могут быть ложноположительными, т.е. при фактическом отсутствии инфекционного агента (инфекции) в организме иммуноферментный анализ (ИФА) определяет наличие антител к нему.

Высокая частота ложноположительных реакций часто отмечается при диагностике методом ИФА трихомоноза (трихомониаза).

Низкой иммуногенностью инфекционного агента (бактерий, вирусов, простейших) и индивидуальными особенностями иммунитета человека объясняется кажущееся противоречие результатов ИФА и ПЦР, при котором исследование методом ИФА не находит инфекцию, а метод ПЦР свидетельствует о наличии инфекции в организме.

Таким образом, диагностика инфекционных заболеваний, включая инфекции, передаваемые половым путем (анализ на скрытые инфекции), требует комплексной (совокупной) оценки результатов нескольких диагностических методов.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет выявить специфические белки, возникающие в организме человека при наличии онкологического процесса — так называемые онкомаркеры.

ПЦР (полимеразная цепная реакция, ПЦР-анализ) — это метод лабораторной диагностики различных вирусов, бактерий, простейших на основании выявления их генетического материала (РНК и ДНК) в исследуемом биологическом материале: в крови, слюне, эякуляте (сперме), моче, выделениях из половых путей, мазках, соскобах и т.д.

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение типоспецифического (т.е. характерного для конкретного микроорганизма) участка РНК или ДНК, вследствие чего нарабатывается достаточное для точной идентификации данного микроорганизма количество РНК или ДНК.

Метод ПЦР является молекулярно-генетическим методом исследования.

В настоящее время полимеразная цепная реакция (ПЦР) является самым точным и чувствительным методом диагностики скрытых инфекций (инфекций, передаваемых половым путем) и иных инфекционных заболеваний после культурального исследования (посева на среду).

Таким образом, результаты исследования методом ПЦР свидетельствуют о наличии/отсутствии непосредственно инфекционного агента (вирусов, бактерий, простейших) в исследуемом органе (образце клеток, ткани).

Основным преимуществом метода ПЦР является высокая чувствительность и специфичность, т.е. способность определить возбудителя заболевания при наличии в пробе всего нескольких молекул его ДНК или РНК. Поэтому возможным становится обнаружение возбудителей заболеваний (в том числе скрытых инфекций) даже в тех случаях, когда другими методами их выявление не возможно.

Специфичность ПЦР (т.е. способность безошибочно определить данный вирус, бактерию) близка к 100%, что значительно превышает возможности микроскопии, иммуноферментного анализа (ИФА).

По этой причине исследование методом ПЦР нашло широкое применение в практике врачей Курортной клиники женского здоровья при экспертном выявлении скрытых инфекций: хламидиоза, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомоноза, бактериального вагиноза, вирусов папилломы человека и других вялотекущих либо скрыто существующих инфекций.

Следует учитывать, что результат ПЦР-исследования распространяется лишь на орган (ткань), клеточный материал которого с помощью мазка-соскоба забирается на исследование.

Это вносит известные ограничения, не позволяющие в ряде случаев судить о распространенности процесса. Например, выявление хламидий в канале шейки матки не позволяет утверждать присутствие хламидий в маточных трубах, ткани яичников, суставах, легких и иных органах и тканях.

Таким образом, метод ПЦР (ПЦР-анализ) отличается высокой информативностью и достоверностью относительно инфицирования (заражения) конкретного органа (участка ткани), а метод ИФА косвенно показывает распространенность процесса и возможную вовлеченность в инфекционный процесс органов и тканей, недоступных для прямой диагностики.

Методы ИФА и ПЦР взаимо дополняют друг друга. В рутинной (повседневной) практике Курортной клиники женского здоровья мы применяем все методы исследования для быстрой, достоверной диагностики.

Забор крови и мазков с целью проведения исследований методами ИФА и ПЦР в Курортной клинике женского здоровья осуществляют профессионально подготовленные акушерки, прошедшие специализацию по лабораторной диагностике. Забор крови и мазков выполняется безболезненно и в комфортных условиях.

Особенности диагностики инфекций, передаваемых половым путем (скрытых инфекций), и условия подготовки к исследованиям подробно изложены на нашем сайте в соответствующих статьях.

Мы в полном Вашем распоряжении при возникновении любых сомнений или пожеланий.

Мы работаем без выходных и праздничных дней:

понедельник — пятница с 8.00 до 20.00,
суббота, воскресенье, праздничные дни с 8.00 до 17.00.
Прием по предварительной записи по многоканальному телефону 8 (800) 500-52-74 (звонок по России бесплатный), или +7 (928) 022-05-32 , или info@kurortklinika.ru.

Вопрос: Анализ ИФА, что это в гинекологии?
Ответ: Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, заключающийся в выявлении специфических (индивидуальных для каждого микроорганизма, вируса) антител.
На основании результатов исследования крови методом ИФА можно лишь опосредованно (косвенно) судить о наличии /отсутствии инфекционного агента (вирусов, бактерий, простейших) по ответной реакции на него иммунной (защитной) системы организма.

Вопрос: Хламидиоз в крови как выявить?
Ответ: Хламидиоз в крови можно выявить методом иммуноферментного анализа (ИФА). Иммуноферментный анализ позволяет определить в крови антитела классов A, M, G к хламидии. Чувствительность выявления хламидий методом ИФА (точность метода) составляет 50-60%.
Иными словами, иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет определить в крови наличие антител (иммуноглобулинов (Ig) классов А,М,G) к хламидии. Специфические иммуноглобулины классов A, M, G вырабатываются организмом в ответ на свежее (Ig A), недавнее (Ig M) появление хламидий и длительное (Ig G) носительство хламидий.

Вопрос: Анализ ПЦР положительный после лечения. Как такое может быть?
Ответ: Положительный ПЦР после лечения свидетельствует о наличии ДНК возбудителя инфекции: вируса или бактерии. При этом, если ПЦР-мазок был взят ранее, чем через 30 дней после последнего приема антибиотиков, положительный анализ ПЦР может свидетельствовать о выявлении мертвых бактерий или вирусов.
Положительный анализ ПЦР после 30 дней с момента окончания лечения свидетельствует о сохранении инфекции и устойчивости инфекции к лечению, то есть о необходимости продолжить лечение.

Вопрос: ПЦР анализ, что это такое?
Ответ: ПЦР (полимеразная цепная реакция, ПЦР-анализ) — это метод лабораторной диагностики различных вирусов, бактерий, простейших на основании выявления их генетического материала (РНК и ДНК) в исследуемом биологическом материале: в крови, слюне, эякуляте (сперме), моче, выделениях из половых путей, мазках, соскобах и т.д.
Результаты исследования методом ПЦР свидетельствуют о наличии/отсутствии непосредственно инфекционного агента (вирусов, бактерий, простейших) в исследуемом органе (образце клеток, ткани).

источник

Сифилис – инфекционное венерическое заболевание, вызываемое спирохетами бледной трепонемы. Пути передачи: при сексе, от матери к плоду, трансфузионно, и значительно реже — через раны на коже, которые вступают в контакт с инфекционными поражениями. В зависимости от стадии, выделяют первичный, вторичный, латентный и третичный сифилис.

Бледные трепонемы не могут расти на питательных средах и не визуализируются под световым микроскопом. Так как обнаружение патогена с помощью обычной микроскопии невозможно, применяют специальный микроскоп с темным полем, где возбудитель виден в виде спирали на темном фоне.

Для проведения микроскопии забирается биоматериал с подозрительного на заболевание очага. Микроскопия в темном поле – это возможный способ оценки кожных поражений, таких как шанкр первичного сифилиса или кондилома вторичного сифилиса. Если материал макулопапулезного очага сухой, исследуют аспират лимфатического узла.

Отрицательный результат не исключает патологический процесс, статистически выявление возбудителя возможно только в 80%.

Реакция, направленная на многократное увеличение ДНК бледной трепонемы, позволяет сделать вывод об инфицировании сифилисом или об его отсутствии.

Биоматериал для анализа может быть любым: кровь, содержимое сифилида, спинномозговой жидкости и пр. Тест подходит для инкубационного периода.

Серологические анализы (КСР или комплекс серологических реакций) считаются наиболее распространенным способом для диагностики всех стадий сифилиса. Выделяют следующие реакции:

• агглютинации;
• преципитации;
• иммунофлюоресценции;
• иммуноферментный анализ и пр.

Также серологические анализы на сифилис подразделяют на трепонемные и нетрепонемные.

При подозрении на приобретенный сифилис выполняют скрининговое тестирование, для чего используют нетрепонемные тесты, определяющие антитела к липоидным антигенам тканей хозяина или возбудителя в разнообразных модификациях. В РФ рутинно выполняют реакцию микропреципитации (РМП), которая позволяет выявить антитела к поврежденным патогеном клеткам в крови. Достоверность скрининга высокая, но специфичность невелика, поэтому тестирование подходит для первичного массового обследования в превентивных целях.

Чувствительность экспресс-тестов оценивается в 78-86% для выявления первичного сифилиса, 100% для вторичного сифилиса и 95-98% для выявления третичного сифилиса.

Специфичность — от 85-99%, иногда- менее, что встречается при следующих состояниях:

• гестация;
• менструация;
• онкология;
• заболевания соединительной ткани;
• туберкулез;
• малярия;
• вирусные заболевания;
• болезни печени;
• вакцинация;
• «свежий» ИМ;
• сыпной тиф и пр.

Помимо этого, избыток жиров в рационе, употребление спиртосодержащих напитков и прием некоторых лекарств могут привести к ложноложительным заключениям.

Результаты скринингового тестирования становятся положительными через 1-2 недели после образования шанкра. Нетрепонемные тесты дают отрицательный ответ через некоторое время после лечения. При ВИЧ-статусе нетрепонемные антитела могут выявляться длительно, иногда на протяжении всей жизни (что подтверждается результатами соответствующего рандомизированнного исследования).

Другие разновидности нетрепонемных анализов: VDRL, плазмореагиновый тест (RPR) , проба с толуидиновым красным, реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (РСКк).

Связывание комплемента – ответ иммунной системы на инфицирование, результат варьируется от отрицательного (ставится «-»), до резко положительного «++++» или 4 плюса.

В начальной стадии первичного сифилиса RW отрицательна.

Из-за возможности ложноположительных результатов для подтверждения любого положительного или сомнительного результата нетрепонемного анализа, используют трепонемные тесты:

• реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
• гемагглютинация (РПГА),
• иммуноферментный анализ (ИФА) для иммуноглобулинов класса G (IgG) и иммуноглобулина М (IgM);
• иммуноблоттинг;
• РИБТ/РИТ (реакция иммобилизации бледных трепонем).

Трепонемные тесты не используются для оценки эффективности терапии.

РИФ на определение трепонемных АТ класса IgG применяют после положительного результата экспресс-анализов (чувствительность 84% для первичного сифилиса и 100 % при других стадиях, специфичность 96%). Для диагностики врожденного сифилиса у новорожденных не применимы.

В некоторых лабораториях используют «обратные» скрининговые исследования.

CDC (Centers for Disease Control and Prevention, США) рекомендует традиционные исследования, с проверкой количественными нетрепонемными тестами, при положительном результате проводится лечение.

На собранный материал наносят сыворотку с мечеными флюорохромом антителами, специфичными к антигену бледной трепонемы, возбудитель притягивает к себе иммунные комплексы, из-за чего начинает светиться в люминесцентном микроскопе.

До появления гемагглютинации (склеивания) эритроцитов с момента внедрения бледной трепонемы должно пройти не менее 4 недель.

Подготовленные эритроциты с фиксированными белковыми фракциями патогена взаимодействуют с плазмой, если есть антитела к сифилису, происходит реакция.

Подходит для подтверждения любой стадии заболевания.

В основу положена реакция антиген-антитело. Выявляются антитела различных классов, которые можно оценить количественно.

Полученные результаты позволяют судить о длительности патологического процесса, успешности проводимого лечения, иммунологическом статусе, активности возбудителей.

Иммуноблоттинг – разновидность ИФА, применяют для углубленной диагностики при всех сомнительных результатах.

Чувствительность и специфичность близка к 100%, на сегодняшний день ультрачувствительный метод идентификации белков.

Способ основан на реакции антиген-антитело. Антигеном служат бледные трепонемы, культивируемые в тестикулах кролика. При взаимодействии с антителами зараженного человека, патогены утрачивают подвижность. Реакция оценивается с помощью микроскопии в темном поле.

РИБТ в настоящее время применяют из-за трудоемкости реже, но анализ может быть полезен для решения спорных вопросов (ложноположительные реакции на сифилис).

Наибольшую сложность представляет диагностика третичного сифилиса, что обуславливается симптомами со стороны сердечно-сосудистой и нервной системы, а также проявлениями со стороны кожного покрова.

Перечислим заболевания, с которыми проводят дифференциальную диагностику при сифилисе:

Изначально проводится беседа с пациентом, во время которой уточняются детали: когда был подозрительный половой контакт и какие есть жалобы.

После сбора анамнеза переходят к физикальному осмотру, особое внимание уделяется области гениталий и ануса, слизистым оболочкам и лимфатическим узлам. Предварительный диагноз уже может быть установлен. Окончательная верификация происходит с помощью лабораторных анализов.

Если сказать просто о сложном, то одни анализы выявляют возбудителя сифилиса, а другие отражают реакцию организма на внедрение бледной трепонемы.

Для установки окончательного диагноза РПГА следует дополнить 1 трепонемным и 1 нетрепонемным анализом.

Проводятся обязательное исследование на сифилис несколько раз в течение беременности.

Направление на анализ КСР выдается во время первого визита женщины в консультацию, и за время беременности трижды выполняется обследование. Пациентки из высокой группы риска с отягощенным анамнезом: ИППП, асоциальные, зависимые и пр. требуют особенно пристального внимания.

Если результаты анализа положительные, проводят более глубокую диагностику, и по показаниям назначают лечение, которое зависит от стадии и клинических проявлений.

Большинство детей с врожденным сифилисом рождаются у нелеченных матерей, либо получивших терапию слишком поздно.

Трепонемные тесты с использованием неонатальной сыворотки не рекомендуются из-за пассивного переноса антител IgG. Все дети, рожденные от матерей с сифилисом, должны обследоваться с помощью количественного нетрепонемного серологического теста (RPR или VDRL), выполненного с использованием сыворотки крови новорожденного.

Реакция микропреципитации, РИФ и РПГА отрицательны – норма, положительны – подтверждение сифилиса.

Реакция микропреципитации отрицательна, остальные положительны – сифилис в анамнезе после проведения специфической терапии, либо поздняя стадия.

Отрицательная РИФ при положительных РПГА и реакции микропреципитации – результат вызывает сомнения, повторная комплексная оценка.

Отрицательный результат РИФ и микропреципитации, но положительная РПГА – состояние после успешной антибиотикотерапии либо ложноположительный результат.

Положительная РИФ при отрицательных РПГА и реакции микропреципитации – ранняя стадия, проведенное лечение или недостоверность результата.

Положительная реакция микропреципитации, не подтвержденная ни РПГА, ни РИФ – отсутствие сифилиса.

Инструментальная диагностика проводится в зависимости от вовлеченности органов. Например, гранулематозное поражение печени можно увидеть при компьютерной томографии брюшной полости.

Рентгенография органов грудной клетки у пациентов с третичным сифилисом может показать дилатацию аорты. Линейная кальцификация по ходу аорты свидетельствует в пользу сифилитического аортита.

Ангиография может быть полезна в диагностике абдоминальной сифилитической аневризмы.

При диагностике нейросифилиса при соответствующих симптомах используют люмбальную пункцию с забором спинномозговой жидкости.

Мишина Виктория, уролог, медицинский обозреватель

16,651 просмотров всего, 3 просмотров сегодня

источник

ИФА и ПЦР — два диагностических метода, относящихся к молекулярной биологии. Данные виды исследований биологического материала принадлежат к самым достоверным и быстрым анализам. А поэтому пользуются наибольшей популярностью, как у сотрудников лаборатории, так и у пациентов. Для выяснения отличительных особенностей методов ИФА и ПЦР понадобится изучить суть каждого исследования. Благодаря чему станет очевидным, какой диагностический метод предпочесть ПЦР или ИФА, что лучше для выявления того или иного заболевания.

Исследование при помощи полимеразной цепной реакции относится к количественным анализам. Достоинством диагностики посредством ПЦР является тот факт, что лаборант может выявить и распознать даже одиночную ДНК возбудителя. А также возможность исследовать увеличенный ДНК участок до нескольких десятков или даже сотен раз.

Преимущества диагностики с использованием полимеразных цепных реакций:

• Высочайшая специфичность.
• Высокая чувствительность.
• Определение численности возбудителей инфекции.
• Установление типа агрессивного антигена.
• Обнаружение одновременно нескольких видов патогенов.
• Отслеживание результативности медикаментозной терапии.
• Скорость получения результатов исследования с применением ПЦР (от нескольких часов до суток).

Исследования путем полимеразных цепных реакций эффективно в отношении всех без исключения возбудителей инфекции. Но есть некоторые разделы медицины, где без ПЦР не обходится постановка практически ни одного заключения. Речь идет о диагностировании инфекций, полученных половым путем.

Исследование посредством ПЦР особенно эффективно для постановки диагноза следующих заболеваний:

• Урогенитальные инфекционные процессы.
• Гепатиты различных типов.
• ВИЧ-инфекции и стадии СПИД.
• Папилломы вируса человека.
• Туберкулез.
• Сальмонеллез.
• Дифтерия.
• Хеликобактериоз и другие инфекции.

Благодаря полимеразной цепной реакции, появилась возможность выявлять инфекции, находящиеся в латентной или хронической форме. ПЦР анализ обнаруживает возбудителя инфекционного процесса на стадии, когда еще нет симптомов. Достоверность ПЦР метода самая высокая — от 99 до 100%.

Иммуноферментное исследование является, прежде всего, качественным анализом. Но с течением времени и усовершенствованием технологий, благодаря иммуноферментному анализу, стало возможным определять, кроме наличия или отсутствия патологических изменений в организме, вызванных конкретным возбудителем, вдобавок количество инфекционных агентов. Исследование при помощи ИФА применяется еще для выявления разнообразных онкомаркеров и стадий онкологического процесса.

А также к иммуноферментному исследованию прибегают для диагностирования заболеваний эндокринной системы и установления уровня гормонов, отвечающих за то или иное заболевание.

Иммуноферментный анализ представляет собой одно из интенсивно развивающихся течений синтетической энзимологии. ИФА сформирован на избирательном отклике специфических иммунологических взаимодействий между антигеном и антителом. Установление образовавшегося комплекса антиген-антитело выполняют с использованием особого фермента, который служит в качестве метки, регистрирующей сигнал взаимодействия.

Преимущества ИФА при диагностике патологических процессов:

• Специфичность иммуноферментного анализа на высоком уровне.
• Достаточная простота и чувствительность метода ИФА.
• Высокая каталитическая активность, способствующая выявлению метки во время реакции антиген-антитело при минимальной концентрации возбудителя.
• Стабильность при образовании комплексов антиген-антитело.

Процесс «узнавания» анализируемого комплекса чувствительным к нему иммуноглобулином осуществляется в количественном соответствии. Используется два подхода для количественной оценки анализируемых иммунных комплексов. Первая — это определение концентрации образовавшихся иммунных комплексов. А вторая — измерение концентрации не вступивших в реакцию антител.

Иммунологический метод диагностики нацелен на обнаружение иммуноглобулинов трех классов:

1. Антитела (ИГ) М.
2. Антитела (ИГ) А.
3. Антитела (ИГ) G.

Сначала в организме человека в течение первых 10–15 суток появляются иммуноглобулины типа М. Далее, в ходе инфекционного процесса, к первым присоединяются антитела типа А. В более запущенных стадиях заболевания, вырабатываются иммуноглобулины G. Обнаружение при помощи иммуноферментной реакции иммуноглобулинов конкретного типа, позволяет определить, на какой стадии находится патология.

После рассмотрения особенностей каждого из анализов становится ясно, что ИФА и ПЦР диагностики уникальны и эффективны каждая по-своему. Исследования ПЦР и ИФА не могут составлять конкуренцию друг другу, но способны отлично дополнять одно другое. Особенно в случаях получения сомнительных результатов, когда симптомы свидетельствуют об одном, а лабораторное исследование о противоположном.

Бывают иногда случаи, когда анализы ИФА или ПЦР срабатывают ложно отрицательно либо ложно положительно. Постановить окончательный диагноз могут помочь дополнительные исследования, такие как иммуноблотинг для иммуноферментного анализа. Что касается полимеразной цепной реакции, то этот метод более точный, ― вот и главная разница между ПЦР и ИФА. Но это не единственное свойство, которым отличается ПЦР и ИФА.

Отличия ИФА и ПЦР диагностических методов:

1. Иммуноферментный анализ позволяет установить лишь факт контакта организма с возбудителем инфекции. В то время как при помощи полимеразной цепной реакции возможно определить какой именно возбудитель проник в организм.
2. Благодаря ИФА, реально подтвердить или опровергнуть факт распространенности инфекционного процесса в любом участке организма. Метод ПЦР же предназначен для обнаружения возбудителя только в исследуемом образце, то есть биологических жидкостях, фрагментах органов и тканей, которые были предоставлены для исследования.
3. Для проведения иммуноферментного анализа пригоден абсолютно любой материал для исследования (кровь, моча, слюна, частички органов и тканей). Потому как иммуноглобулины при ответе организма на проникновение возбудителя могут находиться где угодно. Для исследования путем полимеразной цепной реакции берется тот биологический материал, где предположительно может присутствовать возбудитель.

Как видно из перечисленных особенностей каждого лабораторного исследования различия между ИФА и методом ПЦР существенные. Если коротко сформулировать, то ИФА направлен на обнаружение продуктов жизнедеятельности белков-маркеров. А ПЦР нацелен на установление конкретного возбудителя, который может относиться к группе бактерий, вирусов или грибков. Поэтому не редки случаи, когда лечащий врач может назначить одновременно оба вида диагностики как ИФА, так и ПЦР. С той лишь целью, чтобы сразу получить полномасштабную клиническую картину о происходящих патологических процессах внутри организма пациента. Чаще, чем с другими патологиями, проводится одновременное исследование методом ПЦР, а также ИФА, при инфекциях, полученных половым путем (ИППП).

Теперь, если когда-нибудь станет выбор, какой вид диагностики предпочесть ПЦР либо ИФА, у человека, ознакомившегося с предложенной информацией, вопросов не возникнет. Когда речь идет о здоровье, дабы не допустить развития инфекционного процесса до неизлечимой стадии. Лучше сделать полное обследование, чтобы обнаружить инфекцию как можно раньше и провести своевременное лечение. Либо полностью опровергнуть присутствие какого-либо возбудителя и, что называется, «спать спокойно».

источник

Обычно мазок окрашивается 1% метиленовым синим или используется методика окраски по Грамму. Данный метод даёт возможность обнаружить такие половые инфекции как трихомонады, гонококки, гарднереллы, грибки. Однако есть определённые сложности диагностики хронических форм трихомониаза и гонореи этим методом. Чувствительность этого метода не превышает 40% в отношении выявления трихомонад и гонококков. Важность микроскопии заключается в том, что есть возможность по количеству лейкоцитов, обнаруженных в мазках, говорить о наличии обострения воспалительного процесса в половых путях и предполагать наличие инфекции. В то же время при хронических формах половых инфекций в стадии неактивного течения обычные мазки могут быть совершенно нормальными, без повышения лейкоцитов и изменения флоры.

Метод основан на окраске мазка моноклональными антителами, которые соединяются с той инфекцией, на которую проводится исследование и в результате флюоресцирующий микроб визуализируется в люминесцентном микроскопе. Данный метод применим для диагностики таких инфекций как хламидии, уреаплазмы, микоплазмы, которые не видны при обычном исследовании в микроскопе. Также этот метод на сегодняшнее время является самым чувствительным по выявлению трихомонадной инфекции. Метод даёт возможность обнаружить нетипичные формы трихомонад, которые не выявляются лаборантами при обычной микроскопии. Чувствительность ПИФ диагностики достаточно высокая — 70–80%.

Метод основан на выявлении ДНК различных инфекций и позволяет с высокой достоверностью выявлять такие инфекции как: вирусы, уреаплазмы, микоплазмы, гарднереллы, грибки. К сожалению, обнаружить трихомонаду или гонококк методом ПЦР получается крайне редко, обычно чувствительность в отношении этих инфекций не более 2–5%.

Основан на выращивании микроорганизмов в специальных средах. За счёт сложности и длительности исполнения метод применяется достаточно редко. Не всегда бактериологические лаборатории снабжены средами для выращивания половых инфекций. А так же имеет большое значение качество сред, используемых для анализа. Поэтому чаще всего мы сталкиваемся с низкой чувствительностью этого метода для выявления хронических форм половых инфекций.

Если ПИФ, ПЦР, обычная микроскопия и культуральный методы дают возможность обнаружить непосредственно инфекцию в мазках или моче, метод ИФА даёт возможность обнаружить антитела в крови, которые появляются при наличии инфекции в организме. Антитела — это иммунные белки, которые организм вырабатывает в ответ на внедрение в организм инфекции. Антитела специфичны к каждой инфекции и дают возможность ставить диагноз определённой половой инфекции с высокой долей вероятности. Но и у этого метода есть свои недостатки. Дело в том, что не всегда человеческий организм формирует антитела на инфекцию, обитающую в организме. Чаще всего формирование антител происходит на уреаплазмы, микоплазмы и хламидии, а так же вирусы. К трихомонадам антитела формируются редко, так как трихомонады способны к своей поверхности прикреплять белки организма человека и не обнаруживаются иммунитетом человека. К гонококкам антитела практически не формируются. В то же время, если происходит обнаружение антител к инфекциям методом ИФА, можно говорить о высокой вероятности присутствия инфекции в организме. Длительность выведения антител из организма после лечения инфекции различная для разных инфекций. Для уреаплазм, микоплазм и хламидий мы можем ожидать выведение антител через 2 месяца.

Учитывая, что каждый метод диагностики имеет свои достоинства и недостатки и не является на 100% информативным, рекомендовано проведение диагностики половых инфекций одновременно несколькими методами. Поэтому обычно используют для диагностики метод ИФА, микроскопическое исследование мазка, для обнаружения уреаплазм, микоплазм, хламидий — ПЦР или/и ПИФ метод, для обнаружения трихомонады — метод ПИФ.

Мазок для исследования методами микроскопии, ПИФ и ПЦР берётся из мочеиспускательного канала у мужчин и из мочеиспускательного канала, цервикального канала и влагалища у женщин. Перед сдачей мазков нужно не мочиться, чтобы в уретре была слизь, которая понадобится для исследования. Так как хламидии, уреаплазмы и микоплазмы являются внутриклеточными обитателями, то для исследования необходимо получить соскоб эпителия, что выполняется специальной уретральной щёточкой. В зависимости от локализации инфекции материал может браться из конъюнктивальной полости, а также для исследования методом ПЦР может использоваться первая порция мочи и сперма.

Кровь для исследования на антитела методом ИФА сдаётся из вены на голодный желудок.

Если у пациента половая инфекция находится в неактивной фазе заболевания, то её концентрация на слизистых оболочках небольшая и, следовательно, ни один из методов диагностики может не обнаружить инфекцию.

Поэтому в медицине с давних времён для обнаружения хронических форм половых инфекций, особенно трихомонад и гонококков, использовали провокации. Самыми эффективными являются провокации с использованием внутримышечного введения пирогенала или гоновакцины, а так же местные провокации с использованием нитрата серебра. При провокации инфекция активно выходит на слизистые оболочки и становится обнаружима при исследовании в течение 3 дней. Поэтому через сутки после проведения провокации в течение 3 дней берутся мазки для исследования методами микроскопии и ПИФ. Большое значение имеет увеличение в мазках лейкоцитов при проведении провокации, что может быть косвенным признаком наличия воспалительного процесса.

По ряду причин результаты методов могут не совпадать.

ПЦР и/или ПИФ положительные, а ИФА отрицательный. Такая картина наблюдается, если у пациента имеется половая инфекция, но организмом не формируется иммунный ответ в виде антител. Чаще такое случается при длительных хронических формах инфекции, когда организм свыкся с инфекцией и перестал формировать достаточное для диагностики количество антител.

ПЦР и/или ПИФ отрицательные, а ИФА положительный. Такая картина может наблюдаться, если процесс неактивный, и количество микробных тел в местах взятия мазков не очень велико, но в то же время идёт формирование антител. Возможность формирования антител и уровень титра зависит от вирулентности возбудителя и от особенности иммунной системы пациента. Так же титр антител может сохраняться в крови после лечения в течение определённого срока для каждой инфекции.

Так как все методы в небольшом количестве случаев имеют вероятность ложноположительных результатов, то диагноз является достоверным, если инфекция подтверждена, например, двумя методами. Но не всегда есть возможность подтвердить инфекцию другим методом в силу особенностей вышеперечисленных методов диагностики. Поэтому перед принятием решения о лечении учитываются такие факторы как: лечение этой же инфекции ранее, наличие инфекции у полового партнёра, наличие воспалительного процесса при обнаружении инфекции

Необходимо понимать, что медицинские обследования, которые проводятся гинекологами и урологами не включают специальное обследование на половые инфекции. Задача на медицинских осмотрах — выявить по мазкам острые формы гонореи и трихомониаза, опасные в эпидемиологическом плане. Хронические же формы инфекции чаще остаются незамеченными.

Показания для обследования на инфекции, передающиеся половым путём, формируются при наличии воспалительного процесса в половых путях, повышении лейкоцитов в мазках, планировании беременности или беременности.

Часто половые инфекции протекают на фоне совершенно нормальных мазков и их проявление — это развитие хронического простатита, хронического эпидидимита, хронического цистита Либо носители половых инфекций вообще не имеют отклонений со стороны мочеполовых органов.

Если у пациента с воспалительными заболеваниями малого таза не выявлена половая инфекция, на обследование для взятия анализов на инфекции приглашают полового партнёра. В ряде случаев обнаружение инфекции у партнёра даёт возможность адекватно пролечить семейную пару от половых инфекций и тем самым значительно улучшить эффективность и сократить сроки лечения.

В отношении инфекций, передающихся половым путём, существуют стандарты лечения полового партнёра, причем независимо выявлена или нет у него данная инфекция. Практика показывает, что отсутствие лечения полового партнёра приводит в дальнейшем к рецидиву заболевания.

Относительно уреаплаз и микоплаз в настоящий момент нет рекомендаций по обязательному лечению. Поэтому решение вопроса принимается врачом индивидуально с учётом активности воспалительного процесса, сопутствующей патологии, детородного периода

Практика, однако, показывает, что совместное лечение уреаплазмоза и микоплазмоза у обоих половых партнёров ведёт к лучшему результату лечения воспалительных процессов малого таза, несмотря на клинические рекомендации.

Важно отметить, что выявление хламидиоза, уреаплазмоза и микоплазмоза, не является сложной задачей. В то же время выявление трихомониаза, который по статистике встречается в 60–80% случаев при воспалительных заболеваниях малого таза, достаточно сложная задача. Это объясняется тем, что при хронических заболеваниях малого таза мы сталкиваемся с особенным течением трихомониаза: полиморфность простейшей; низкая концентрация микроорганизмов на слизистой уретры и влагалища; недостаточная чувствительность методов существующей диагностики. Трихомонада является резервуаром накопления для хламидий, уреаплазм, микоплазм и гонококков, способствует устойчивости этих внутриклеточных инфекций и увеличивает вероятность их передачи во время полового акта от одного партнёра к другому. Так же трихомонада защищает внутриклеточные инфекции от иммунной системы человека и антибиотиков. Именно с трихомониазом может быть связана неэффективность лечения гонореи, хламидиоза, уреамикоплазмоза, а так же хронизация данных инфекций в организме.

Кроме того, можно столкнуться с первичным выявлением микроорганизмов после лечения трихомониаза, что тоже объясняется накоплением гонококков, хламидий и уреамикоплазм в трихомонадах и высвобождение их после гибели трихомонады.

Диагностику излеченности половых инфекций рекомендуется проводить трёхкратно и желательно с провокацией. Таким образом, уменьшается вероятность того, что половая инфекция осталась в организме в скрытой форме.

Обычно первый анализ на излеченность трихомониаза и гонореи берется через 10 дней после лечения, на хламидии, уреаплазмы, микоплазмы через 1–1,5 месяца. Сроки зависят от особенностей элиминации микроорганизмов и специфических антител из организма. Последующие два обследования проводится раз в 3–4 недели.

Учитывая особенности проводимых методов диагностики и особенность трактования результатов, рекомендовано проводить обследование на половые инфекции под контролем врача, а не самостоятельно. В этом случае, врач берёт на себя ответственность за правильно проведённую диагностику и анализ полученных данных. А так же вы сможете получить подробное разъяснение по поводу полученных результатов. Получив нужную информацию относительно вашего заболевания, вы сможете сформировать правильное отношение к заболеванию. Так же немаловажно провести адекватное лечение современными препаратами с учётом ваших особенностей организма и переносимости лечения.

Хотите читать всё самое интересное о красоте и здоровье, подпишитесь на рассылку!

Понравился материал? Будем благодарны за репосты

источник

Здравствуйте, Уважаемые!
Я понимаю, что вопрос не совсем корректен, у каждого способа диагностики ИППП есть свои минусы и плюсы, так что сказать какой однозначно лучше думаю, никто не сможет. Так вот хотелось бы узнать при каких заболевания (подозрениях на них) какой способ «лучше» — т.е. точнее, объективнее и т.д. а также какие методы диагностики считаются более убедительными при контрольных анализах (после лечения)
Хотелось бы что бы кто-нибудь из уважаемых докторов провёл ликбез в этом вопросе (вероятность обнаружения, сроки через которые имеет смысл сдавать контрольные пробы, для тех или иных ИППП различными методами. ), а то если честно читая форумы и статьи обнаруживал полую неразбериху и иной раз полные противоречия одних авторов другим.

Это всё в общем, буду рад если кто-то поможет мне в моей конкретной ситуации. Мы с моей подругой в лечились от трихоманиаза+хламидиоз, по моим анализам у неё нашли только хламидиоз, но лечились от того и другого, по разным схемам, через 2 месяца она сдала контрольный анализ РИФ (мазок) у неё ничего не обнажилось. У меня остались хламидии только хламидии (анализ методом РИФ) я провёл ещё один не очень эффективный 2х недельный курс из таблеток (как сказал врач надо немного «добить» то что осталось) который мне не помог, после чего был назначен более жёсткий курс на месяц с процедурами.
Через месяц и дней 10, после окончания курса, я сдал в другом месте (более современной клиники) анализы методами ПЦР (из уретры) и ИФА (кровь) Результаты: прц — всё отрицательно, ифа:

Хламидии:
М-отриц-проба 0,065-(критич.0,263)
G-отриц-проба 0,082-(критич.0,258)
Трихомонос:
G-сомнительно-проба 0,298-(критич.0,251)
Гарданелы:
М-отриц-проба 0,067-(критич.0,256)
G-сомнительно-проба 0,25-(критич.0,236)
Уреплазма, Микоплазма -нет, Герпес — есть

также я сдавал Анализ секрета простаты №2
он показал: большое количество эпителия, летиновые зёрна — значительное количество, дрожжи, трихомонад -нет, гонококков — нет. Плюс к этому неприятные ощущения в области в области простаты и резкие боли при массаже простаты. Мне был поставлен диагноз простатит. Перед его лечением (массаж, физио-лечение) доктор назначил мне метрогил, тиберал 10 дней (как антибиотики которые в том числе победят трихомониаз если он всётаки есть, он был в курсе того что я лечил его за полгода до этого + помогут при восполении самой предстательной железы) и аминокапроновую кислоту пить конкретно против трихоманиаза — ксати кто знает насколько это помогает? Чесно говоря после антибиотиков стал чувствовать (в той области) значительно лучше массаж простаты после приёма антибиотиков не вызывал резких болезненных ощущений.
Так вот собсвенно вопрос, какие анализы мне сейчас лучше всего как контрольные на хламидиоз и трихомонос сдать?

ДА и самое главное, недавно моя подруга сдала там же ПЦР и ИФА анализы, ПЦР только хламидиоз и трихомонос — оба отрицательно. ИФА:

Трихомонос:
G-слабоположительно-проба 0,451-(критич. 0,325)
Гарданелы
М-отриц-проба 0,057-(критич.0,365)
G-сомнительно-проба 0,413-(критич.0,368)
Уреплазма, Микоплазма -нет, Герпес — есть

Периодически у неё возникают проблемы дрожи, боли — ей поставили диагноз начальный эндомитриоз справа.
Так вот мой основной вопрос, какому анализу ИФА или ПЦР в данном случае больше верить? нужно ли ей лечится или сдавать повторные анализы если да то какие? Можно ли считать, что наличие в результатах ИФА есть остатки от того, что было пол года назад?
Заранее спасибо.

PS Во избежание разночтений, мы сдавали:
РИФ — Реакция иммунофлюорисценции (мазок)
ПЦР — полимеразная цепная реакция (мазок)
ИФА — иммуно-ферментный анализ (кровь)

источник

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее.

Метод ПЦР был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.

Анализ ПЦР в клинике ДИАНА

Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

• гепатит C, B;
• уреаплазмоз половых органов;
• ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
• хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
• микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
• бактериальный вагиноз;
• кандидоз половых органов;
• инфекционный мононуклеоз;
• туберкулез;
• сальмонеллез;
• туберкулез (легочные и внелегочные формы);
• листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
• цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную инфекцию;
• детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
• ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах.

ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

• Универсальность . Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
• Специфичность . ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
• Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
• Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
• Возможность проведения количественного анализа . Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 — 104 КОЕ/тамп. – нет.

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

• Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
• Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
• С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут мазок из влагалища . При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

• За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
• За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
• За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
• Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
• За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.

• За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
• Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
• Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
• Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

• Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
• Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
• Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
• Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
• Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:

• Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
• Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
• Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
• Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
• Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
• Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии;
  соскобы и мазки со слизистых для диагностики ЗППП;
  клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.

При одном взятии материала можно обнаружить сразу нескольких возбудителей, попавших в организм. Такая универсальность избавляет пациента от дополнительных обследований и лишних трат.

Обнаружить и идентифицировать участки генетической информации удается при помощи специальных эталонных маркеров ДНК (праймеров) созданных для каждого известного возбудителя. Эталон позволяет найти «свой» фрагмент среди миллионов других. Если это происходит, запускается реакция полимеразной цепи.

» data-medium-file=»//i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/01/ptsr-analiz.jpg?fit=422%2C300&ssl=1″ data-large-file=»//i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/01/ptsr-analiz.jpg?fit=662%2C471&ssl=1″ />
ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами.

Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

• Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
• Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.

Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:

• Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
• Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
• Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).

Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter

источник