Качественный и количественный анализ инфекций

Полимеразно-цепная реакция считается одним из самых точных и быстрых методов диагностики многих инфекционных заболеваний. Успешно применяется она также в криминологии для упрощения процесса идентификации преступников, с ее помощью с высокой точностью устанавливают отцовство.

Каждый живой организм, в том числе бактерии и вирусы, имеют уникальные гены, входящие в структуру ДНК или РНК в определенной последовательности. Во время исследования методом ПЦР генетический материал многократно копируется под воздействием ДНК-полимеразы и специальных температурных циклов.

Существуют два основных метода полимеразно-цепной реакции:

1. Классический метод — выделение генетического материала возбудителя методом электрофореза;
2. ПЦР в режиме «реального времени».

Методика состоит из трех основных этапов:

• Подготовка исследуемого образца;
• Амплификация ДНК;
• Детекция (идентификация) генетического материала предполагаемого возбудителя.

Для проведения исследования ПЦР-лаборатория должна быть разделена на 3 зоны, каждый этап реакции проводится строго в предназначенном для него помещении. Каждая зона должна быть снабжена необходимым оборудованием, дозаторами, расходным материалом, защитной одеждой, используемыми только в данном помещении.

После регистрации и маркировки образцов, в кабинете пробоподготовки происходит выделение ДНК или РНК возбудителя из исследуемого материала путем воздействия определенной температуры и специальных реагентов. Затем начинается процесс амплификации – создания многочисленный копий уникального фрагмента ДНК. Он состоит из 3 основных этапов:

• Денатурация ДНК – под воздействием высокой температуры (95 градусов) двойная спираль ДНК расплетается на 2 цепочки.
• Отжиг праймеров – к окончаниям цепей ДНК присоединяются специальные синтетические соединения (праймеры), идентичные генетической информации на концах искомых фрагментов нуклеиновых кислот. Температура, нужная для присоединения праймера, индивидуальна для конкретного случая, колеблется в диапазоне от 50 до 65 гр.С.
• При помощи фермента ДНК-полимеразы при 70 – 72 градусов между двумя праймерами достраивается аналогичный участок ДНК (ампликон). В качестве «строительного материала» используются специальные вещества, добавляемые в пробирку.

Циклы амплификации повторяются несколько раз, следовательно, выделяемая ДНК многократно копируется, что упрощает процесс ее идентификации. Идентификация может проводиться визуально после проведения процедуры электрофореза продуктов амплификации в агарозном геле, либо автоматически при использовании методики реал тайм.

При исследовании методом ПЦР в режиме «реального времени» амплификация и детекция происходят одновременно в специальных приборах. Данный метод наиболее предпочтительный, так как исследование проводится в закрытых пробирках, снижается риск контаминации и, следовательно, выдачи ложно-положительных результатов.

• Исследование занимает всего несколько часов, в отличие от длительных классических микробиологических методов;
• Высокая специфичность от 95% до 100%, т.к. искомый фрагмент ДНК уникален для каждого конкретного микроорганизма;
• Высокая чувствительность метода, обнаружить возбудителя можно, даже если в исследуемом образце он представлен всего одной клеткой;
• Идентифицировать возбудителя можно как качественным, так и количественным методом. Это очень важно при выделении условно-патогенных микроорганизмов, которые в небольшом количестве не вызывают заболевания;
• Возможность определить генотип возбудителя (гепатит С, ВИЧ-инфекция). Необходимо это для рационального лечения и прогноза возможных осложнений;
• Возможность выявить генетическую предрасположенность к болезни, тем самым предупредить ее развитие;
• Можно выделить практически любой источник инфекции, также современные методики позволяют выявить совокупную микрофлору в исследуемом образце, например, биоценоз влагалища.

• Возможность получения как ложноположительного, так и ложноотрицательного образца при несоблюдении правил забора образца, ошибок при проведении исследования;
• Высокая стоимость анализа.

Исследовать методом ПЦР можно практически любой образец (кровь, моча, ликвор, соскобы с цервикального канала и уретры, волосяные луковицы, сперма и т.д.). Широко используется данная методика для диагностики ЗППП (гонорея, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, трихомониаз). С ее помощью можно выявить возбудителей туберкулеза, дифтерии, пневмонии, вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции, токсоплазмоза, цитомегаловирусной и герпетической инфекции, сальмонеллеза и др.

Применяется полимеразно-цепная реакция для установления отцовства путем сравнения ДНК родителя и ребенка, выявления генетических аномалий и наследственной предрасположенности организма к различным заболеваниям.

• Кровь рекомендуется сдавать строго натощак.
• Перед взятием мазка из уретры или цервикального канала следует в течение трех дней воздержаться от половой жизни, сдавать анализ необходимо не раньше, чем через месяц после окончания курса антибиотикотерапии, иначе результат может быть ложноположительным. Методом ПЦР выявляется ДНК даже мертвого возбудителя, поэтому проводить исследование лучше после полного обновления клеток.
• Мочу следует собирать в стерильную емкость.

Ответ чаще всего будет готов через пару дней, в зависимости от возможностей лаборатории.

При использовании качественной методики может быть только 2 варианта ответа: положительный или отрицательный. Положительный результат свидетельствует о наличии выделяемого микроорганизма в образце, отрицательный – об отсутствии.

Количественный результат должен оценивать лечащий врач, применяется индивидуальный подход в каждом конкретном случае. Специалист, учитывая полученный ответ, решает вопрос о необходимости лечения, дозировке препаратов, уточняет форму и стадию заболевания.

При определении генетического профиля (предрасположенности к тромбофилии, раку молочной железы) после расшифровки результата врач может оценить степень риска развития заболевания, а также назначить специальную диету, профилактические мероприятия.

Страничка оказалась полезной? Поделитесь ею в своей любимой соцсети!

источник

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови. При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя. Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

• отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
• положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

• если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
• нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
• за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии. Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С). При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР. Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С). Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР). После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые. Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

источник

ДНК ПЦР анализы направлены на выявление патогенных микроорганизмов. Они бывают количественные и качественные.

Если при ПЦР ДНК обнаружена или не выявлена, это качественный тест.

Если указывается ещё и концентрация, это количественная ПЦР. Данный анализ более информативен. Хотя требуется он далеко не всегда.

• Когда необходим количественный ПЦР анализ
• ПЦР на микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллу, кандиду
• Мазок ПЦР количественный на хламидии
• Количественный ПЦР анализ ВПЧ 21 тип
• Количественное определение РНК ВИЧ и необходимость для лечения
• Оценка результативности лечения с помощью ПЦР анализа крови к гепатитам
• Интерпретация количественной ПЦР мазков и крови
• Подготовка к количественному анализу ПЦР мазков и крови
• К какому врачу обратиться для ПЦР анализа

При ПЦР количественное определение требуется во многих случаях. Она дает дополнительные возможности, если сравнивать с качественным анализом.

Если после проведения ПЦР ДНК обнаружено, знать количество микроорганизмов необходимо, чтобы понять:

• требуется ли пациенту лечение (при низких количественных показателях оно может не назначаться);
• насколько быстро идет выздоровление (есть ли вирусологический ответ от лечения);
• стоит ли продолжать терапию этими же препаратами или нужно менять схему;
• болезнь находится под контролем или возникает рецидив, требующий дополнительных терапевтических мероприятий;
• насколько высоким является риск осложнений (например, вероятность диспластических изменений в шейке матки при папилломавирусной инфекции).

Поговорим подробнее, при каких патологиях могут потребоваться количественные ДНК ПЦР анализы.

Существуют микроорганизмы, которые не всегда вызывают патологический процесс в структурах урогенитального тракта. Они могут вызывать воспалительные или другие симптомы только в том случае, когда популяция бактерий значительно увеличится.

Чтобы узнать, увеличилась она или нет, требуются соответствующие анализы. Многие лаборатории предлагают комплексный количественный анализ ПЦР сразу на несколько возбудителей.

Микоплазмы двух видов могут вызывать воспалительные процессы во влагалище. Это микоплазма гениталиум и хоминис. Причем, гениталиум может вызывать воспаление даже в минимальных концентрациях. Этот микроорганизм рассматривается как однозначно патогенный. При его выявлении даже в малых количествах проводится лечение. Целью его считается эрадикация возбудителя. Критерием успешности терапии является отрицательный анализ ПЦР на микоплазму гениталиум.

А вот хоминис – менее опасный вид данных микроорганизмов. Он может обнаруживаться в урогенитальном тракте многих людей. В том числе тех, кто не имеет признаков воспалительного процесса в урогенитальном тракте. В этом случае пороговой считается концентрация бактерий в клиническом материале от 10 4 копий ДНК в мл.

Если ПЦР покажет, что бактерий меньше, лечение может и не назначаться. Но если количество патогенов превышает указанное значение, требуется антибактериальная терапия.

Потому что в больших количествах микоплазмы:

• вызывают воспаление;
• могут провоцировать осложнения;
• передаются при половом акте;
• опасны для беременных.

Гарднереллы – вид транзитных микроорганизмов, которые часто выявляются в урогенитальном тракте женщин. Они не вызывают воспаления. Но в больших количествах провоцируют дисбактериоз. Это заболевание, основным проявлением которого является обильное отделяемое из влагалища с неприятным запахом.

Патология нарушает качество половой жизни. Гарднереллы в больших количествах способны быстро уничтожать лактобактерий. Они вытесняют их. В итоге может оказаться так, что лактобактерии вообще не обнаруживаются во влагалище. Этого не должно случиться, потому что молочнокислые бактерии защищают организм женщины от других микробов. Они делают это за счет продукции молочной кислоты.

Кислая рН влагалища не дает условно-патогенным бактериям чрезмерно развиваться.

Количественная ПЦР ДНК диагностика на гарднереллы показывает, сколько этих микроорганизмов содержится во влагалище. Если их больше 10 4 копий ДНК в мл, требуется антибактериальное лечение. Оно позволяет предотвратить дисбактериоз влагалища или устранить его основные проявления, если они уже присутствуют.

Кандиды – ещё одна группа микроорганизмов, для которых имеет значение количество. Это грибы, которые в норме присутствуют в урогенитальном тракте большинства людей.

Кандидоз является оппортунистической инфекцией. Он развивается, когда в организме ослаблен иммунитет. В этом случае количество кандид резко увеличивается. Появляются красные пятна, белые выделения и другие симптомы, иногда достаточно сильно выраженные.

Само по себе обнаружение кандиды с помощью ПЦР не дает врачу никакой ценной информации. Всем и так понятно, что эти грибы в структурах урогенитального тракта есть. Поэтому качественная ПЦР на кандидоз не проводится.

Клиническое значение имеет только количественный метод ПЦР. При определении кандид в количестве, превышающем пороговое значение, устанавливается диагноз кандидоз. Назначается соответствующее лечение.

Показанием для назначения количественного ПЦР на кандиды является в основном наличие симптомов кандидоза. Анализ также может быть использован в случае обнаружения псевдомицелия при микроскопии мазка из урогенитального тракта. ПЦР позволяет установить вид гриба.

Ведь кандидоз может быть вызван десятками видов микроорганизмов. Чаще всего это кандида альбиканс. Но есть ещё 5-6 видов грибов, которые провоцируют кандидоз достаточно часто. Причем, их наличие усложняет процесс лечения.

Часто такие кандидозы рецидивируют. Они плохо реагируют на традиционно используемые при кандидозе противогрибковые препараты.

Количественная ПЦР на кандидоз используется и после лечения. Она помогает врачу понять, была ли проведенная терапия успешной, и оценить риск рецидива грибкового заболевания в будущем.

Количественная ПЦР на уреаплазмоз тоже проводится достаточно часто. Уреаплазмы рассматриваются как условно-патогенная флора. То есть, они опасны только в больших количествах.

ПЦР количественная на уреаплазмы позволяет решить вопрос о необходимости лечения.

У многих врачей-венерологов целесообразность использования количественной ПЦР на уреаплазмы вызывает вопросы. Этот микроорганизм обладает очень высокой адгезивной способностью. Он крепко прилипает к клеткам, поэтому в клиническом материале может быть гораздо меньше бактерий, чем есть в организме.

Соответственно, количественные показатели могут быть заниженными. Кроме того, они значительно варьируют от анализа к анализу.

Хотя в настоящее время считается, что лечение стоит начинать только при концентрации бактерий от 10 4 копий ДНК в мл, нередко врачи назначают лечение и при меньшем их количестве. Особенно если женщина готовится к беременности.

Есть немало исследований, которые подтверждают: уреаплазма очень опасна для плода. Она вызывает инфицирование околоплодных оболочек.

Уреаплазма способна спровоцировать преждевременные роды. Она вызывает респираторные инфекции у новорожденного плода. Поэтому даже если качественная ПЦР показывает небольшие количества уреаплазм, желательно пролечиться тем женщинам, которые готовятся к беременности.

Не требуется лечение при сочетании таких факторов:

• концентрация уреаплазм ниже пороговой;
• нет симптомов воспаления;
• супружеская пара не планирует беременность.

Тогда лечиться не обязательно. Но такие случаи встречаются редко. Потому что пациенты редко приходят на диагностику венерических заболеваний с профилактической целью. В основном они обращаются после возникновения воспалительных симптомов.

На хламидии чаще проводят тест качественный, а не количественный.

Потому что этот микроорганизм является патогенным.

Одного только факта его обнаружения достаточно, чтобы начать лечение.

Причем, количество копий ДНК не играет существенной роли в определении схемы терапии и дозировок препаратов.

Тем не менее, количественные тесты иногда проводят.

Они дают врачу возможность оценить прогноз заболевания.

Понять, насколько высока вероятность осложнений.

А также спрогнозировать ответ на лечение.

При большой концентрации хламидий в урогенитальном тракте доктор может увеличить курс терапии.

Оценивая данный показатель в динамике, он может понять, работают ли те антибактериальные препараты, которые он назначил.

Такие исследования могут использоваться в диагностике папилломавирусной инфекции.

Почему нужны именно количественные анализы, а не качественные? Они более информативны в плане оценки прогноза заболевания, целесообразности противовирусного лечения и оценки его результативности.

Для первичной диагностики обычно проводят качественную ПЦР. Она помогает установить, какие типы ВПЧ присутствуют в организме. Это могут быть высокоонкогенные, среднеонкогенные или низкоонкогенные типы.

Особую настороженность вызывают вирусы высокой онкогенности. Поэтому не лишним будет знать, в каком количестве они содержатся в урогенитальном тракте.

Особенно важен данный анализ для женщин. Ведь у них ВПЧ является основной причиной рака шейки матки.

В свою очередь карцинома шейки матки – самое частое злокачественное онкологическое заболевание среди молодых женщин.

Проведение количественной ПЦР позволяет установить, прогрессирует или регрессирует патологический процесс. Если количество вирусов увеличивается, это говорит о высоком риске дисплазии шейки матки. А она в дальнейшем переходит в рак.

При длительно сохраняющиеся высокой вирусной нагрузке показано лечение с помощью иммуномодуляторов и противовирусных препаратов общего действия. В процессе лечения проводятся повторные исследования ПЦР.

Врач смотрит, стало вирусов в организме больше или меньше. Если их стало меньше, это хороший прогностический признак. Если же вирусов стало больше, то по результатам количественной ПЦР схему терапии стоит пересмотреть.

Количественная ПЦР имеет важнейшее значение в диагностике и терапии ВИЧ.

В основном первичная диагностика заболевания проводится путем определения уровня антител в крови. Это метод намного дешевле, а результаты можно получить быстрее.

Но в некоторых случаях без ПЦР не обойтись. Метод позволяет обнаружить ДНК провируса или РНК вируса в крови.

В основном используют количественную ПЦР для выявления РНК. Это самый ранний маркер ВИЧ. Анализ крови позволит диагностировать болезнь уже через несколько недель после заражения. А количественная оценка методом ПЦР имеет огромное значение в определении схемы терапии.

С помощью анализа оценивают эффективность лечения. Если вирусная нагрузка снижается до неопределяемой, это говорит о том, что терапия проходит успешно.

Антиретровирусные препараты работают. Но если она начинает возрастать, это свидетельствует о формировании резистентности к препаратам. Подобное нередко происходит через несколько лет после начала лечения.

В таком случае схему лечения приходится менять. Иначе количество иммунных клеток в крови начнет снижаться. Вследствие ухудшения иммунитета начнут присоединяться инфекции и возникать злокачественные новообразования.

Используется также выявление ДНК ВИЧ при помощи ПЦР. Метод более предпочтителен для обследования новорожденных детей. Потому что количество РНК в крови может уменьшаться, если мать получала антиретровирусную терапию. В результате в первые дни жизни ПЦР количественная на РНК вируса может быть ложноотрицательной.

Количественный анализ ПЦР используется при гепатите C для определения уровня виремии.

Метод дает возможность подобрать оптимальную схему терапии. А также он дает возможность оценить, насколько эффективной является проводимая терапия.

Благодаря ПЦР вирус гепатита С определяется уже через 1 неделю с момента заражения. В дальнейшем метод применяется, чтобы понять, было ли специфическое лечение эффективным.

Результаты оцениваются по ряду критериев:

• вирусологический;
• биохимический;
• морфологический.

Вирусологический контроль проводится при помощи ПЦР. Если РНК вируса гепатита С не выявляется, то терапия прошла успешно.

Если результаты остаются отрицательными в течение 6 месяцев, такой вирусологический ответ считается устойчивым.

Появление РНК вируса на фоне прекращения лечения говорит о рецидиве заболевания. В процессе проведения терапии с помощью количественного ПЦР оценивают динамику изменения концентрации вируса.

Оптимальным результатом считается исчезновение РНК в течение не более чем 4 недель противовирусного лечения. Такой вирусологический ответ называют ранним.

ПЦР также позволяет определить тип вируса гепатита. При разных типах назначаются разные схемы лечения. Количественные показатели при вирусном гепатите С оценивают через каждые 3 месяца терапии.

Интерпретацией результатов занимается врач.

Единицей измерения количества патогенных микроорганизмов является концентрация ДНК или РНК в одном миллилитре клинического материала. Она обычно обозначается в 10, которая возведена в степень. Эта степень фактически означает количество нулей, которые следуют после единицы. Например, 10 4 – это 10 000 копий ДНК.

Для разных инфекций нормы отличаются. В каждом случае требуется индивидуальная расшифровка анализа, так как часто их ещё нужно сравнивать с проведенными ранее исследованиями.

Подготовки к сдаче крови не требуется.

А вот к сдаче мазка нужно приготовиться. Есть несколько ограничений, которых следует придерживаться.

Запрещено накануне сдачи анализа:

• вести интимную жизнь – в течение 2 дней;
• принимать антибактериальные препараты (за исключением случаев, когда они назначены врачом) – в течение 2 недель;
• не мочиться – 3 часа;
• женщинам – не спринцеваться и не пользоваться тампонами – 2 дня.

Чтобы сделать качественную ПЦР, обратитесь к доктору-венерологу. Специалисты данного профиля ведут прием в нашем медицинском центре. Они оценят, есть ли у вас показания к назначению данного анализа.

При необходимости вы сможете сдать кровь или мазки в день обращения. Результаты для большинства исследований получите на следующий день.

Для сдачи анализов методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

• ВИЧ
• Гарднереллез
• Кондиломатоз
• Молочница
• Сифилис
• Трихомониаз
• Баланопостит
• Герпес
• Гонорея
• Микоплазмоз
• Уреаплазмоз
• Уретрит
• Хламидиоз
• ЗППП

источник

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) сегодня является одним из самых эффективных диагностических методов.

Он дает наиболее точные и достоверные результаты.

Материалом исследования служат:

С помощью ПЦР осуществляется диагностика даже скрытые инфекции, в частности, передающиеся половым путем.

Суть такого анализа заключается в обнаружении в исследуемом материале генома возбудителя путем многократного синтеза молекул его ДНК.

С помощью ПЦР можно диагностировать бактериальные, вирусные, протозойные и грибковые инфекции.

Максимальная погрешность при таком исследовании не превышает 5%.

Кроме того, его результаты можно получить уже в день сдачи анализов.

Существуют две разновидности анализа методом ПЦР:

Качественный метод выполняется с целью обнаружения в биоматериале возбудителя болезни.

Количественный анализ ПЦР

Полимеразная цепная реакция — метод лабораторной диагностики.

ПЦР тест широко применим в медицине.

Это связано с его высокой точностью.

В основе методики определение ДНК микроорганизмов.

Проводят ПЦР диагностику, как правило, в условиях лаборатории.

Когда необходим количественный анализ ПЦР мазков и крови

Этот метод применяют в урологии, гинекологии, венерологии.

Чаще всего он необходим для постановки диагноза.

При помощи ПЦР тестировании можно обнаружить такие заболевания как:

• Гонорея
• Сифилис
• Уреаплазмоз
• Хламидиоз
• Трихомониаз
• Вирус папилломы человека.

Данный метод используют и при заготовке донорской крови.

Он позволяет избежать риска переливания инфицированной крови.

Количественный анализ ПЦР направлен на определение концентрации возбудителя в организме, т.е. оценку степени «заразности» больного.

Количественный ПЦР является незаменимым методом лабораторной диагностики вирусного гепатита С.

С его помощью определяют содержание в крови больного РНК вируса, выражая его в МЕ (международных единицах) или копий на 1 мл.

В тех случаях, когда гепатит С уже диагностирован, количественный анализ ПЦР выполняют по следующей схеме:

Нет, специальная подготовка в этом случае не нужна.

Единственным условием является воздержание от курения за 30 минут до сдачи крови.

ПЦР количественный: гепатит С

Гепатит С – инфекционное заболевание, поражающее преимущественно печень.

Инфекция проникает через кровь.

Для того чтобы выявить возбудителя этой болезни применяют количественный ПЦР тест.

Он определяет концентрацию возбудителя в крови больного.

Чтобы определить степень заболевания, делают РНК гепатит С количественно.

Чаще всего ПЦР гепатита С делают после того, как обнаружили соответствующие антитела.

После этого тест делают на 4, 12, 24 неделю и далее через год.

Сдать правильно материал для анализа ПЦР это важно.

Тем не менее, нужно уметь правильно расшифровать полученные результаты.

Как интерпретируют результаты количественного анализа ПЦР при диагностике гепатита С и определении эффективности его лечения?

Стоит отметить, что вирус гепатита С обладает чрезвычайной разнородностью, устойчивостью во внешней среде.

При его низкой концентрации в крови передача его вертикальным путем или через половой контакт маловероятна.

Инфицирование и заболевание в таких случаях чаще происходит у людей с ослабленным иммунитетом.

Или сопутствующими инфекционными заболеваниями мочеполовых путей (ВИЧ, половые инфекции).

Bенеролога, пройти количественный анализ ПЦР

Помните! Расшифровать полученные данные должен только врач.

Возможно получение ложного результата.

Это зависит от того как материал транспортировался, рабочее место где делался забор крови для исследования, нарушение технологии выполнения анализа.

Поэтому следует уделить максимум внимания при выборе лаборатории.

Мазок ПЦР количественный на хламидии

Перед тем как сдать анализ ПЦР на эту инфекцию следует знать, как правильно подготовится к анализу.

Внимание! У женщин не берут материал во время менструального цикла.

Мазок следует сдавать только при соблюдении определенных правил:

• Не использовать вагинальные свечи перед исследованием
• Отказаться на время анализа от половых контактов
• За две недели до исследований отметить антибиотики

Мазок у женщин берут из влагалища.

Мужчинам делают соскоб с мочеиспускательного канала.

Забор материала осуществляется специальным стерильным зондом, после чего помещается в стерильную пробирку.

Полученный результат может быть:

• Отрицательный — инфекция в биоматериале отсутствует;
• Положительный – в мазке присутствуют хламидии.

Количественный ПЦР анализ: ВПЧ 21 тип

С помощью такого метода можно сразу определить тип вируса.

Данный вид ВПЧ относится к распространенным.

ВПЧ существует более 100 видов.

Большая часть из них поражает кожные покровы, остальные слизистые оболочки.

Выделяют виды, которые способны вызывать онкологические заболевания, такие как рак шейки матки.

Для анализа делают забор клеток эпителия с шейки матки.

Результаты могут быть следующими:

• Риск не обнаружен 0–3 Lg (HPV/105)
• Возможность появления дисплазии 3–5 Lg (HPV/105)
• Большая вероятность дисплазии 5 и выше Lg (HPV/105)

ПЦР ДНК: обнаружено

Результат ПЦР анализа положительный – в биологическом материале пациента были обнаружены фрагменты ДНК микроорганизма.

Если вы получили такой результат, как можно скорее начните лечение.

Бывают случаи, что результат получается положительным, но при этом человек себя нормально чувствует, и признаков болезни нет.

Это может означать, что заболевание находится на начальной стадии.

В таком случае следует обратиться к врачу и приступить к лечению.

Внимание! Результат анализа не является диагнозом. Схему лечения должен назначать врач.

При необходимости, специалист назначит пройти повторные исследования,

К какому врачу обращаться для сдачи количественного анализа ПЦР

Для того что бы сделать количественный ПЦР анализ, необходимо обратится в клинику.

Современное лабораторное оборудование обеспечивает точность ПЦР анализа.

Сдать мазок можно при посещении врача венеролога.

Врач проведет осмотр и возьмет материал на исследование.

После получения результата специалист поможет вам расшифровать результат и назначит необходимый курс лечения.

Получить исчерпывающую консультацию опытного венеролога, пройти количественный анализ ПЦР, а также курс эффективной терапии вы сможете, обратившись в наш платный КВД.

Помните, что качественная и своевременная диагностика – залог успешности лечения и ваш шанс на выздоровление.

О том как проходит количественный
анализ ПЦР рассказывает
подполковник медицинской службы,
врач Ленкин Сергей Геннадьевич

Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.

При необходимости любого количественного ПЦР анализа, в том числе на гепатит С, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу, урологу в Москве с 15 летним опытом работы.

• кровь
• моча
• сок простаты
• семенная жидкость
• качественный и количественный
• Перед началом его медикаментозного лечения
• Через 1 неделю после начала терапии
• На 4-й неделе лечения
• На 12-й неделе – на этом сроке количественное определение ПЦР позволяет оценить эффективность проводимой терапии заболевания
• На 24-й неделе терапии – заключительное обследование с целью подтверждения выздоровления

• Уровень виремии, или вирусной нагрузки (концентрации вируса в крови) 800 000 МЕ/мл считается высоким.

Получение таких результатов означает острую фазу заболевания или реактивацию вируса.

Такой показатель говорит о высокой степени инфекционности, «заразности» человека. О том, что опасность заразиться вирусом от него в данный момент очень высока.

• Показатель 400 000 МЕ/мл говорит о низком содержании вируса.

Это может наблюдаться при высокой степени резистентности организма.

Вследствие которой размножение и активность вируса подавляются. Или при выздоровлении, благодаря эффективной терапии.

В некоторых случаях в результатах анализа указывают показатель «ниже диапазона измерений».

Это означает, что концентрация вируса в крови ничтожно мала.

Но, все же вирус в организме присутствует, что подтверждает качественный ПЦР.

Запись в бланке с результатами анализа «Не обнаружено» означает, что в крови пациента вируса нет

источник

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это лабораторный метод определения ДНК и РНК. Впервые он был опробован почти полвека назад американцем Кэри Муллисом. Этот сверхчувствительный анализ способен определить носителя генома по одной исходной молекуле, содержащейся в крови, слюне или коже.

Метод ПЦР имеет огромные перспективы, находит применение не только в медицине, но и в генной инженерии, и в криминалистике. С его помощью клонируют и создают новые виды ДНК, определяют степень родства. По кусочку эпителия, найденного на месте преступления, устанавливают преступника.

Почему необходим анализ ПЦР при подозрении на гепатит С, что это такое?

Вирус гепатита С – РНК содержащий вирус, имеет 6 генотипов и до 500 субтипов. Из всех гепатитов этот вирус обладает самой высокой мутационной способностью и преодолевает защитный барьер иммунной системы. Из общего числа заболевших гепатитами, вирус С стал причиной 70% случаев хронической формы и 30% цирроза и рака печени.

Для справки! Диагностика гепатита С, опасного вирусного заболевания печени, стала возможной после внедрения в клиническую практику анализов с помощью ПЦР. До этого времени вирус оставался «невидимым» для исследователей, не реагируя на обычные методы определения инфекции.

Суть способа: часть исследуемого гена с помощью специальных ферментов и условий заставляют размножаться в пробирке. Анализ ПЦР позволяет определить штамм вируса, без которого невозможно провести результативное лечение: каждый генотип по-разному чувствителен к антивирусным препаратам. Применяется два типа ПЦР:

Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.

ПЦР качественный на гепатит С дает ответ: есть ли в крови пациента штамм вируса С и какой именно. Генотипирование необходимо для уточнения диагноза, прогноза заболевания и определения сроков лечения.

По принятой классификации ген обозначается числом, а подтип маленькой латинской буквой.

Специальный препарат, основанный, на натуральных веществах

Не является лекарством. Требуется консультация специалиста.

Первые результаты чувствуются уже через неделю приема

Не является лекарством. Требуется консультация специалиста.

Всего 1 раз в день, по 3 капли

Не является лекарством. Требуется консультация специалиста.

Расшифровка таблицы генотипов вируса С:

• Генотип 1а, 1b, 1с
• Генотип 2а, 2b, 2с, 2 d
• Генотип 3а, 3b, 3с, 3d, 3e, 3f
• Генотип 4а, 4b, 4с, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
• Генотип 5 а
• Генотип 6 а

Самые распространенные генотипы 1,2,3. В России чаще всего встречаются 1а, 1b, 2 и 3 штаммы вируса С.

Генотип вируса 1b труднее других поддается лечению, в 90% переходит в хроническую форму, из которых 30% перерождаются в рак или цирроз печени.

Генотипы 2а и 3а имеют степень хронизации 33-50 %, более отзывчивы на противовирусную терапию.

При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит С, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.

Качественный ПЦР анализ имеет два ответа:

ПЦР отрицательный означает, что возбудитель в образцах крови не обнаружен.
Положительный ответ свидетельствует об обратном: обнаружены РНК того или иного генотипа вируса С.

Вероятность достоверности результата равна 95%. Остальные 5% — это ошибка по вине человека. Такая возможность допускается из-за высоких требований к проведению исследования:

• правил хранения реактивов;
• соответствующей квалификации медперсонала;
• чистоты биоматериала.

Сам набор ПЦР имеет 100% диагностическую точность.

Количественный ПЦР РНК гепатита С позволяет определить вирусную нагрузку на организм больного. С его помощью:

• уточняется стадия заболевания (острая, хроническая);
• определяется эффективность противовирусного лечения;
• выясняется необходимость биопсии печени.

В некоторых случаях больной не ощущает никаких признаков болезни, в то время как методом ПЦР установлено инфицирование ВГС. Это означает, что заболевание находится на ранней стадии развития либо в хронической форме. Для уточнения диагноза необходимы дополнительные исследования, для скорейшего начала противовирусного лечения.

Вирусная нагрузка показывает активность печеночного вируса, насколько активно происходит его размножение.

ПЦР количественный гепатита С измеряется в Международных Единицах на 1 мл или МЕ/мл, что означает, сколько в 1 мл исследуемой крови обнаружено копий рибонуклеиновой кислоты определенного штамма вируса С.

Анализ на вирусную нагрузку позволяет определить наличие вирусных РНК в концентрации 50 МЕ/мл. Вирусная нагрузка в норме – это когда ПЦР не обнаружено ни одной молекулы РНК ВГС.

Таблица вирусной нагрузки:

• низкая – концентрация от 600 МЕ/мл 3*104 МЕ/мл;
• средняя – концентрация от 3*104 МЕ/мл до 8*105МЕмл;
• высокая – уровень более 8*105 МЕ/мл.

Низкая вирусная нагрузка – это сигнал, что терапевтическое лечение подобрано правильно, и прогноз на излечение от гепатита С – благоприятный.

Высокая концентрация вирусных клеток свидетельствует, что болезнь находится в острой фазе. Кровь пациента является опасным источником инфекции.

Вирусная нагрузка, показатели которой находятся на среднем уровне, характеризует либо хроническую стадию ГВС, либо может иметь два тренда развития: к ее повышению или понижению.

Внимание! Количественное тестирование проводится на протяжении всей антивирусной терапии: через 4, 12 и 24 недели, цель которой – снизить вирусную нагрузку.

По ее окончании – через 6 месяцев делается контрольная ПЦР.

Для справки! Пройти диагностику на гепатит С или любое другое инфекционное заболевание можно по направлению врача или самостоятельно.

Поводом для беспокойства должны стать следующие симптомы:

• общая слабость;
• изменение цвета кожи, глазных склер, выделений;
• тошнота;
• снижение аппетита;
• боли в мышцах и суставах;
• тяжесть в правом подреберье;
• повышенный уровень в крови АСТ и АЛТ.

При контакте с инфицированными больными, в предоперационный период, при гемодиализе также рекомендовано обследование.

Государственные клиники делают анализ крови на ПЦР бесплатно, если имеется направление от инфекциониста или гепатолога.

Платные услуги по ПЦР диагностике оказывают во всех крупных российских городах. Стоимость зависит от типа теста, имеющегося оборудования, сроков проведения и других факторов.

Качественный ПЦР анализ в Москве и С-Петербурге обойдется от 600 до 900 руб. В регионах – от 300 до 800 руб.

Определение вирусной нагрузки гепатита С будет стоить 17000-22000 руб. Для прочих видов инфекции цена количественного исследования: 1200-10000 руб.

В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?

1. Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
2. Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
3. Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
4. Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
5. Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.

Недостатки ПЦР являются следствием ее достоинств:

• для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты, в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
• высокие требования к персоналу, осуществляющему забор и анализ биоматериала.

Важно! Оценку полученным результатам должен делать лечащий врач, умеющий отделить подлинный анализ от ложноположительного (когда лечение уже закончено, но в крови остается нежизнеспособный вирус) и ложноотрицательного (когда при клинической картине вирус не обнаружен).

источник

ПЦР — метод полимеразной цепной реакции для обнаружения генетического материала (фрагментов ДНК или РНК) в исследуемом материале. Активно применяется в медицине и науке. Он известен более 30 лет, а сферы его использования постоянно расширяются.

Открытый в 1983 году американским ученым и лауреатом Нобелевской премии Кэри Мюллисом, он стал настоящим прорывом в сфере ранней диагностики инфекционных заболеваний. Дорогостоящий и сложный, однако очень информативный и точный, ПЦР помогает обнаружить в организме человека вирусы и бактерии даже в единичном количестве.

ПЦР относится к молекулярно-генетическим тестам. Его работа основана на определении фрагментов ДНК и РНК возбудителей инфекции по определенной последовательности нуклеотидов в цепочке. Суть метода состоит в активизации репликации генетического материала бактерии или вируса. Чтобы запустить реакцию, достаточно единичных фрагментов ДНК или РНК патогена.

Анализ проводится в лабораторных условиях. С помощью специальных ферментных систем, специфических для искомой инфекции, ускоряется деление генетического материала патогена — каждый раз удваивается. Цепная реакция включает множество циклов. При каждом из них количество фрагментов нуклеотидных цепочек увеличивается в геометрической прогрессии. По окончании теста маркеров возбудителя становится настолько много, что определить их не составляет сложности.

Получается, если изначально в материале был фрагмент генетического материала вируса или бактерии, который было невозможно обнаружить, после ПЦР количество увеличивается в десятки раз и выявить его просто.

Метод ПЦР считается ультрачувствительным. Он отражает наличие инфекции в организме, даже если заражение состоялось недавно, иммунитет не успел на него отреагировать, а численность инфекционных агентов минимальна.

Бактерии или вирусы вносят изменения в ДНК человека, другими словами, «оставляют отпечатки». Реактивы, используемые при ПЦР, отыскивают их и заставляют многократно делиться. Поэтому установить инфицирование можно всегда, даже если заболевание развивается бессимптомно или возбудитель персистирует в латентном режиме.

ПЦР считается очень специфичным анализом. Ферментные системы нацелены на конкретный антиген и активны только против него. Достоверность метода достигает 100%. Если внутри организма нет малейших признаков искомой инфекции, то бишь, конкретной последовательности нуклеотидов (уникальна для каждого живого существа), исследование не даст положительный результат. Исключения есть, но они сведены к минимуму, поэтому ПЦР признан еще и высокоточным анализом.

Возможность сочетания ферментных систем, определения сразу нескольких видов инфекции, а также вероятность ее обнаружения в абсолютно любой биологической жидкости делает исследование универсальным. Наиболее активно ПЦР применяется в гинекологии и урологии, поскольку здесь распространены заболевания вирусной и бактериальной природы, среди которых, сложно диагностируемые и развивающиеся скрыто.

Примером активного применения ПЦР выступает тест на отцовство. Другие сферы медицины его чаще используют при симптомах инфекционных патологий, повышенном риске их хронизации, высокой вероятности заражения больного опасными для жизни вирусами (гепатит, ВИЧ).

Гинекологи, андрологи и урологи назначают ПЦР на ИППП (Инфекции, Передающиеся Половым Путем), для выявления скрытых заболеваний. Кроме того, с его помощью можно найти признаки онкологического процесса, определенные иммуноглобулины. Все сильнее набирает популярность анализ ПЦР на туберкулез, применяется для обнаружения хеликобактер пилори, как основного провокатора гастрита и язвенной болезни желудка (на ПЦР отправляют кал или желудочное содержимое).

Частные лаборатории предоставляют возможность сделать комплексный скрининг. Можно пройти обследование сразу на 6, 12 инфекций.

Таблица — О каких возбудителях информируют комплексные анализы

p, blockquote 14,0,0,0,0 —>

С помощью метода выявляют некоторых паразитов (проводят ПЦР на лямблии, описторхов, аскарид), если анализ кала показывает отрицательный результат, несмотря на наличие симптоматики. С его помощью обнаруживают возбудителя гепатитов А, B, C, D, сифилис, Эпштейна-Барра, цитомегало-, папилломавирус.

Общие правила подготовительного периода перед любым анализом ПЦР включают:

p, blockquote 16,0,0,0,0 —>

• исключение приема антибиотиков за 3 недели до теста;
• исключение половых контактов за 2 суток;
• соблюдение техники сбора материала (при домашней подготовке);
• применение только стерильной аптечной тары для предоставления проб.

Нюансы зависят от того, какой именно биоматериал будет тестировать лаборатория. Должна сдаваться только та биологическая жидкость, которая вероятнее всего содержит наибольшие концентрации возбудителя. Если это моча, кал, мокрота, слюна, сперма, возможен самостоятельный сбор. Другие типы (мазки из цервикального или уретрального канала, ротоглотки, конъюнктивы) берет медицинский персонал в условиях медицинского учреждения.

Забор проводит лаборант одноразовой вакуумной системой или шприцем. Для тестирования достаточно 1‒2 мл. Биоматериал собирают с утра, натощак. Специфических условий подготовки нет, как и потребности снижения физических нагрузок, исключения каких-либо продуктов накануне. Единственное требование — должно пройти достаточно времени после антибиотикотерапии.

Чаще всего изучается при подозрениях на резистентные к лечению инфекции мочевыводящих органов. Биоматериал — утренняя урина, собранная вскоре после пробуждения, перед завтраком. Для доставки пробы используют стерильный контейнер с крышкой, приобретенный в аптеке или выданный лабораторией. Собирают только среднюю порцию (первую и последнюю спускают в унитаз). Сразу закрывают, транспортируют для анализа на протяжении 2 часов.

Накануне не желательно принимать диуретики или увеличивать обычный суточный объем жидкости. Женщинам нельзя спринцеваться за 3 суток. За 2 дня представители обоих полов должны отказаться от секса. Перед анализом нельзя принимать нефропротекторы с растительным составом, уроантисептики. Перед сбором мочи нужно не забыть подмыться, чтобы бактерии с наружных половых органов не попали в биоматериал.

Забор делают в лаборатории или поликлинике. Наружное отверстие уретры очищают от выделений с помощью физраствора. Специальную щетку со щетинистой головкой погружают на 2‒4 см в уретральный канал, делают циркулярное движение, извлекают приспособление и основную контактирующую часть срезают в пробирку со специальным раствором (выступает своеобразной питательной средой).

Непосредственно перед анализом за 3 часа нельзя мочиться. Запрещается проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков или антибактериальных растворов. Нельзя спринцеваться и заниматься сексом за 2 суток до диагностики.

Проводятся в лаборатории. Женщина занимает положение в гинекологическом кресле. Лаборант или врач с помощью физраствора убирает слизь и выделения бартолиновых желез снаружи половых органов. Если необходим мазок из влагалища, специальным зондом со щетинистой головкой делают циркулярное движение в нижней части заднего свода. Рабочую часть устройства срезают в пробирку с раствором. При заборе из цервикального канала зонд погружают вглубь шейки до 1,5 см.

ПЦР влагалищного мазка часто назначают беременным женщинам, при симптомах ИППП или повышенном риске их хронизации, а также при поисках причин бесплодия. Перед анализом нельзя иметь интимные связи, спринцеваться, использовать антисептики для подмываний или свечи с антибактериальным действием.

Берет лаборант или врач. Головкой зонда проводят по задней стенке глотки, миндалинам, небным сводам, которую затем срезают в пробирку. Анализ берут строго натощак. Перед ним нельзя использовать антибактериальные спреи или леденцы.

Для выявления возбудителя туберкулеза анализируют мокроту, которую больной собирает с утра с помощью стерильного контейнера (подходит также для ПЦР слюны). Кал также сдают в специальной емкости, причем нет смысла наполнять ее. Достаточно просто взять небольшую пробу ложкой, которой укомплектован стерильный сосуд.

Забор мазка из конъюнктивы проводит лаборант, снимая образец с поверхности нижнего века. Содержимое желудка получают аспирационным путем, при гастроскопии. На анализ могут отправить массы, или биоптат со стенки органа.

Полимеразная цепная реакция способна отразить не только наличие возбудителя, но также его примерную концентрацию в единице биоматериала (например, 1 мл крови, мочи, слюны). Выявление, а также идентификация бактерий либо вируса называется качественным ПЦР-анализом. Он может дать только 2 варианта ответа — есть возбудитель в организме или нет.

Это уместно для диагностики заболеваний даже на ранних сроках после заражения. С помощью ПЦР можно проверить наличие инфекции в крови в инкубационном периоде развития или во время «серологического окна» (когда иммунитет еще не выработал антитела, а ИФА-тест отражает отрицательный результат, несмотря на высокую вероятность заражения). Нормой по всем возбудителям считается отрицательный результат. Если он положительный — в организме есть инфекция.

Чтобы оценить концентрацию болезнетворных агентов, проводят количественные ПЦР анализы. Они указывают, сколько именно копий РНК или ДНК возбудителя обнаружено в расчете на единицу измерения биоматериала. Результат указывают в международных единицах (МЕ/мл). Количественный тест определяет:

p, blockquote 31,0,0,0,0 —>

• вирусную или бактериологическую нагрузку на организм;
• степень активности инфекции;
• необходимость начала терапии;
• эффективность назначенного лечения.

Качественный и количественный ПЦР одинаково важны при диагностике и лечении ВПЧ, ВИЧ, гепатита С. При перечисленных заболеваниях назначают мощные противовирусные препараты, а контроль изменения концентрации возбудителя позволяет корректировать дозы, снижая риск развития побочных эффектов. Хорошим анализом считается такой, результат которого приближен к минимальному порогу чувствительности теста (10-50 МЕ/мл), однако это не исключает необходимости продолжать терапию.

Информативность ПЦР анализа и его точность актуальны при диагностике многих заболеваний. Однако метод этот сложный, а его выполнение требует строгого соблюдения техники и правил. В противном случае возможно получение не достоверного результата (ложного). Ложноположительные данные получаются при:

p, blockquote 33,0,0,0,0 —>

• попадании в пробу соскоба крови;
• загрязнениями биоматериала примесями эпителия и слизи;
• нарушении стерильности условий проведения анализа.

Ложноотрицательный результат теста возможен при неправильной транспортировке проб в лабораторию (нарушения температурного режима, воздействие внешних условий), применении непригодных для анализа реактивов.

Один из разновидностей ПЦР анализа — ПЦР real-time. Особенностью исследования является более тщательное изучение и дифференциация материала, потенциально относящегося к патологическому. Удобнее объяснить разницу на примерах.

После лечения какой-то инфекции антибиотиками в организме человека еще некоторое время будут находиться остатки патогенов (их клеточные стенки, части РНК или ДНК). Проведение обычной ПЦР сразу после лечения также даст положительный результат, но инфекции как таковой уже нет. Именно поэтому для достоверности анализа рекомендуется соблюдать интервал после терапии антибиотиками минимум в три недели.

Выполнение ПЦР real-time сразу после лечения даже при наличии фрагментов патогенов, но при отсутствии активных форм, даст отрицательный результат. То есть это более чувствительный анализ, который лишен мельчайших недостатков.

Вопрос: Где лучше сдавать анализ, в частной или государственной лаборатории?

Ответ: Проходить исследование следует в крупных и известных медицинских учреждениях. Как правило, они располагают наиболее современным и высокоточным оборудованием, качественными реактивами. Это повышает информативность теста и его точность. Кроме того, частные лаборатории обеспечивают пациентов расходниками, необходимыми для правильной доставки проб.

Вопрос: Сдавать мазок из уретры больно или нет? Все знакомые говорят по-разному.

Ответ: Ощущения сугубо субъективные. Как правило, женщины переносят процедуру легко. Мужчины испытывают дискомфорт, что спровоцировано анатомическими особенностями строения уретры. Задача лаборанта — не допустить попадание крови в образец, поэтому нужно быть готовым к незначительным и кратковременным неприятным ощущениям.

Вопрос: Сколько делается комплексный анализ ПЦР? Можно ли попросить сделать тест срочно?

Ответ: Продолжительность проведения анализа варьируется от 5 до 8 часов. Процесс обработки результатов может занять несколько больше времени. Рассчитывать на результат можно спустя 1‒2 суток. Крупные, оснащенные по последнему слову техники лаборатории могут предоставить протокол исследования через несколько часов. Вопрос срочности следует решать индивидуально.

Вопрос: Можно ли сдавать полимеразную цепную реакцию вместо пробы Манту? Например, собирая ребенка в детский сад?

Ответ: Возможность замены тестов следует обсуждать с руководством заведения. Некоторые детсады и школы действительно разрешают приносить результаты ПЦР на туберкулез родителям, которые не хотят делать своим детям Манту. Однако нужно учитывать, что достоверность анализа относительно микобактерий туберкулеза несколько снижена, что обусловлено различными концентрациями возбудителя в биологических средах организма. Чтобы получить точный результат, следует сдавать на ПЦР мазок из зева, мокроту либо мочу.

Вопрос: Почему ИФА показывает положительный результат, а ПЦР — отрицательный?

Ответ: Иммуноферментный анализ направлен на поиск в крови антител к специфическим антигенам инфекций. Метод отражает не только сам факт заражения, но и реакцию иммунитета на этот процесс. ПЦР ищет непосредственно возбудителя. ИФА будет положительным еще некоторое время после лечения антибиотиками, тогда как ПЦР покажет отсутствие инфекции в крови. Кроме того, на похожие антигены могут вырабатываться сходные антитела, что также обуславливает позитивный результат ИФА при негативном тесте ПЦР. Редко для дополнения теста ИФА приходится сдавать бакпосев.

ПЦР — универсальный, точный, специфичный и информативный способ диагностики инфекционных заболеваний. Его используют для раннего обнаружения опасных бактерий и вирусов в организме. Референтное значение результата анализа — «отрицательный» относительно всех искомых возбудителей. Тест назначают для идентификации провокатора заболевания и правильного подбора терапии. ПЦР применяется и в процессе лечения, для определения вирусной нагрузки.

источник