Методика анализ кала на дисбактериоз

Посев кала на дисбактериоз – бактериологическое исследование фекалий, позволяющее определить состояние кишечной микрофлоры. Это наиболее распространенный и доступный метод диагностики дисбактериоза кишечника у детей и взрослых.

Образец кала, доставленный в лабораторию, разводят физиологическим раствором, обрабатывают на центрифуге и высевают на специальные питательные среды-агары. Затем чашки со средами ставят в термостат, где создаются благоприятные условия для роста и размножения микроорганизмов. Через 5-7 дней оценивают результат:

• определяют видовой состав микроорганизмов, выросших на питательных средах;
• подсчитывают количество колоний бактерий;
• при выявлении патогенной флоры проводят тест на чувствительность к бактериофагам и антибиотикам.

Для получения достоверного результата разработаны рекомендации по подготовке к процедуре, сбору и транспортировке биологического материала.

Подготовку к сдаче анализа начинают за 72 часа:

• исключают из рациона острое, алкогольные напитки;
• по согласованию с врачом отменяют медикаменты, которые могут повлиять на результаты исследования: слабительные (таблетки и свечи), препараты железа и висмута, антибиотики, пробиотики;
• запрещено ставить клизмы;
• рентгенологические исследования кишечника с барием переносят на другое время.

Кал для бактериологического анализа собирают в стерильную ёмкость, которую нужно подготовить заранее:

• приобрести в аптеке специальный пластиковый контейнер с ложечкой для сбора фекалий;
• взять стеклянную баночку объемом 80-100 мл (например, от детского питания), простерилизовать ее в микроволновой печи примерно 3-5 минут, крышку прокипятить;
• в некоторых частных лабораториях выдают набор для анализа на дисбактериоз, в который входит ёмкость с питательной средой-консервантом, ложечка для сбора кала, перчатки.

Кал на дисбактериоз собирают утром после пробуждения. Если не получается сходить в туалет после ночного сна, уточните в лаборатории время приёма анализов. Как правило, это первая половина дня.

1. Подготовьте место для сбора кала: возьмите судно, горшок или подкладную клеёнку, чисто вымойте и вытрите насухо. Запрещено собирать фекалии из унитаза. У маленьких детей допускается использовать пеленку или памперс.
2. Перед дефекацией помочитесь в унитаз. Кал не должен контактировать с мочой.
3. После дефекации возьмите подготовленную заранее тару, наденьте стерильные резиновые перчатки и ложечкой соберите материал из разных участков. Старайтесь, чтобы ложечка не касалась судна. Для проведения исследования требуется не менее 5 г фекалий – это комок размером с грецкий орех, в случае жидкого стула – уровень высотой 1,5-2 см.
4. Закройте крышку тары.
5. Подпишите на баночке свою фамилию, инициалы и дату рождения.

Основные обитатели кишечника являются анаэробами, поэтому погибают под действием кислорода. Для получения достоверного результата собранный кал должен быть доставлен в лабораторию в течение 2 часов. Максимально допустимое время хранения биоматериала при температуре 4-8 °С составляет 6 часов. До отправки в лабораторию поставьте ёмкость в холодильник. Для транспортировки используйте хладагенты.

В кишечнике живёт более 400 видов бактерий. Примерно 20 из них имеют клиническое значение. В бланке результата анализа указывают основные микроорганизмы и их количество на 1 г биоматериала. Единица измерения – КОЕ/г.

Микроорганизмы этой группы составляют до 98% всех кишечных бактерий. Они участвуют в переваривании пищи, синтезе витаминов, сдерживают рост патогенной микрофлоры. Нормальные бактерии входят в состав препаратов-пробиотиков, которые назначают для коррекции дисбактериоза.

• бифидобактерии – 10 8 – 10 10 ;
• лактобактерии – 10 6 – 10 8 ;
• типичные кишечные палочки – 10 6 – 10 8 .

Условно-патогенная флора присутствуют в каловых массах в небольшом количестве. Бактерии расщепляют компоненты пищи, стимулируют работу иммунной системы. Превышение допустимых норм нарушает работу пищеварительного тракта, провоцирует аллергические реакции.

• кишечные палочки лактозонегативные – не более 10 5 ;
• бактерии рода протей – не более 10 2 ;
• энтерококки – 10 6 – 10 7 ;
• дрожжеподобные грибы – не более 10 4 .

Эти микроорганизмы вызывают инфекционные заболевания. У здоровых людей патогенные бактерии в каловых массах отсутствуют.

• сальмонеллы;
• шигеллы;
• золотистый стафилококк;
• синегнойная палочка;
• гемолитические кишечные палочки.

При выявлении патогенного микроорганизма указывают его вид и чувствительность к бактериофагам и антибиотикам.

Чтобы отличить истинный дисбактериоз от кратковременных дисбиотических реакций, посев кала назначают дважды с интервалом в 1 неделю. При стойких изменениях микробиоценоза кишечника результаты обоих анализов будут одинаковыми. Врач сопоставит полученные данные с клиническими проявлениями и определит дальнейшую тактику ведения пациента.

источник

Анализ кала на дисбактериоз назначается обычно в рамках диагностики кишечной патологии.

Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника – синдром, характеризующийся изменением микробного состава толстой кишки. Лабораторную диагностику дисбактериоза начинают с выполнения бактериологического анализа кала. Как правило, лечащий врач, выписывая направление на исследование, рассказывает не только о том, где сдать анализы, но и о том, как правильно подготовиться. Соблюдение правил подготовки и техники сбора во многом влияет на достоверность результата исследования микрофлоры кишечника.

С целью качественного и количественного определения патогенных форм микроорганизмов в 1 г фекалий применяют бак анализ – посев фекалий на питательные среды.

Подозрение на дисбаланс микробной флоры могут вызвать признаки нездоровья, проявляющиеся в течение длительного времени и не объясняющиеся иными причинами.

• снижение аппетита;
• общее недомогание;
• головные боли;
• снижение иммунитета;
• аллергия;
• нарушение нормальной прибавки массы тела у детей.

• нарушения стула, болезненные ощущения при дефекации;
• метеоризм, вздутие живота, урчание;
• схваткообразные боли в животе;
• тошнота, отрыжка, неприятный привкус во рту.

Нарушения стула определяются локализацией дисбиотических изменений: энтеральные поносы – признак дисбактериоза в тонком кишечнике. За счет нарушения всасывания питательных веществ объем каловых масс увеличен, фекалии зловонные, пенистые. Нарушение стула колитического типа свидетельствует о дисбиозе с локализацией в толстом кишечнике. Объем испражнений в этом случае часто скудный, с примесью слизи, прожилками крови.

Нарушение всасывания в кишечнике необходимых питательных веществ в течение длительного времени способно стать причиной гиповитаминоза, белково-энергетической недостаточности, нарушений ионного баланса, недостаточности кальция и имеет следующие проявления:

• перепады настроения, раздражительность, снижение когнитивных способностей;
• сухость и бледность кожи и слизистых оболочек;
• кожный зуд;
• тусклость и ломкость волос, расслаивание ногтей;
• снижение минерализации костной ткани;
• ангулярный стоматит.

За неделю до исследования отменяют прием антибиотиков и других лекарственных средств, оказывающих влияние на микробную флору, а также на параметры кала. Стул, предназначенный для сдачи анализа, должен быть сформирован естественным путем, не следует применять клизму, слабительные препараты или ректальные суппозитории.

Анализ кала на дисбактериоз может выявить лишь его наличие, для определения причин необходимо дополнительное обследование.

Запрещается собирать материал для исследования ранее, чем через два дня после рентгенконтрастного исследования пищеварительного тракта. Накануне сдачи анализа кала на дисбактериоз нужно исключить из рациона продукты, способствующие окрашиванию каловых масс, избыточному образованию газов, возникновению диареи или запора.

В материал для анализа не должна попасть моча или влагалищные выделения, поэтому перед сбором фекалий следует опорожнить мочевой пузырь, затем подмыться водой с мылом без пенящихся добавок или ароматизаторов.

Заранее нужно позаботиться о емкости, из которой будет собираться кал. Это может быть сухое и чистое судно, если такого нет, можно закрепить на поверхности унитаза полиэтиленовую пленку. Сразу после дефекации кал из разных участков нужно собрать в стерильный пластиковый контейнер при помощи специальной лопатки, встроенной в крышку. Для анализа на дисбактериоз понадобится около 10 мл биоматериала. Кал доставляется в лабораторию в течение трех часов с момента сбора анализа. Допускается хранение материала в холодильнике при температуре от +3 до +7 °С в течение шести часов, при более длительном хранении достоверность результатов считается сниженной.

В ходе анализа кала на дисбактериоз определяют концентрацию и соотношение нормальных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

Микробная флора необходима для жизнедеятельности организма. В кишечнике здорового человека в норме содержится 400–500 штаммов разных микроорганизмов. Они обеспечивают нормальное пищеварение, участвуют в синтезе и всасывании витаминов, подавляют деятельность патогенных микробов.

Иногда используется экспресс-методика диагностики дисбактериоза, результаты которой можно получить уже через час, однако при таком тесте оценивается содержание в кале только бифидобактерий и собственного белка.

Нормальная микрофлора кишечника выполняет следующие функции:

• участие в выработке местного иммунитета, осуществление синтеза антител, подавляющих постороннюю микрофлору;
• повышение кислотности среды (снижение уровня pH);
• защита (цитопротекция) эпителия, повышение его устойчивости к канцерогенным и патогенным факторам;
• захват вирусов, предотвращение колонизации организма посторонними микроорганизмами;
• ферментами бактерий осуществляется расщепление пищевых веществ, при этом образуются разные соединения (амины, фенолы, органические кислоты и другие). Под влиянием ферментов также происходит трансформация желчных кислот;
• участие в конечном разложении остатков непереваренной пищи;
• обеспечение организма питательными веществами, синтез низкомолекулярных жирных кислот, являющихся источником энергии для клеток кишечника;
• формирование газового состава, регуляция перистальтики, усиление процессов всасывания в кишечнике;
• синтез витаминов группы В, никотиновой, фолиевой и пантотеновой кислот, витамина К, обеспечение поглощения кальция, магния, железа;
• участие в механизмах регуляции репаративных процессов при обновлении клеток эпителия кишечника;
• синтез ряда аминокислот и белков, обмен жиров, белков, углеродов, желчных и жирных кислот, холестерина;
• утилизация избытков пищи, формирование каловых масс.

У здорового человека в кишечнике поддерживается динамическое равновесие между организмом хозяина, заселяющими его микроорганизмами и окружающей средой. Нарушение качественного и количественного состава микрофлоры вызывает дисбактериоз.

Обычно дисбактериоз является следствием или осложнением заболеваний кишечника патологии или нерациональной антибиотикотерапии.

С целью качественного и количественного определения патогенных форм микроорганизмов в 1 г фекалий применяют бак анализ – посев фекалий на питательные среды. Бактериологический посев применяют для диагностики кишечных инфекций и бактерионосительства. Материал для бакпосева помещают в стерильную емкость с консервантом, затем производится выделение чистой культуры микроорганизма, изучение ее свойств и подсчет количества колониеобразующих единиц (КОЕ).

Сколько делается анализ кала на дисбактериоз? Как правило, время ожидания результата составляет от двух дней до недели. Иногда используется экспресс-методика диагностики дисбактериоза, результаты которой можно получить уже через час, однако при таком тесте оценивается содержание в кале только бифидобактерий и собственного белка.

Расшифровка анализа кала на дисбактериоз проводится лечащим врачом с учетом анамнеза и клинических проявлений заболевания.

Нормы содержания бактерий в 1 г кала представлены в таблице.

источник

Микрофлора кишечника представлена условно патогенными, сапрофитами, патогенными микроорганизмами. При нарушении баланса среди различных видов микробов и возникает дисбактериоз.

Анализ кала на дисбактериоз позволяет выявить, устранить причину заболевания. Выяснить количественное и качественное состояние микрофлоры кишечника можно с помощью следующих исследований:

• копрограммы – общего анализа кала;
• бактериологического исследования;
• хроматомасс-спектрометрии;
• ПЦР – диагностики или полимеразной цепной реакции;
• дыхательного теста.

Рассмотрим по порядку каждый вид исследования по мере убывания популярности, доступности диагностики.

Так называется анализ на дисбактериоз кишечника с расшифровкой. При исследовании определяется физическое, химическое состояние каловых масс, проводится их микроскопическое исследование. К физическим свойствам относятся: цвет кала при дисбактериозе, консистенция, состояние, форма, запах, наличие примесей, непереваренных фрагментов пищи.

Химические исследования отражают наличие или отсутствие скрытой крови, билирубина, стеклобелина, аммиака.

Микроскопический анализ на дисбактериоз дает возможность обнаружить включения, не видные невооруженным глазом – детрит, форменные элементы крови (эритроциты, лейкоциты), макрофаги, простейшие микроорганизмы, яйца глистов.

Копрограмма чаще делается маленьким детям при расстройстве пищеварения. Прежде, чем сдать анализ на дисбактериоз у грудничка, нужно приобрести специальный контейнер в аптеке. Обычно собирается утренняя порция кала. Чтобы получить достоверные анализы, перед сдачей нельзя делать клизмы, принимать лекарственные препараты в любой форме (инъекции, ректальные свечи, таблетки). Кал на дисбактериоз желательно доставить в лабораторию не позднее двух часов после взятия.

Анализ на дисбактериоз кишечника делается для определения вида микроорганизмов в кале. Чаще интересует наличие патогенной микрофлоры. Из сапрофитов (полезных микробов) в организме человека присутствуют бифидобактерии, лактобактерии, эшерихии, энтерококки. Бактероиды появляются у детей не ранее 6 месячного возраста.

Условно патогенными микробами являются стрептококки, кишечная палочка, стафилококки. При определенных условиях их рост может увеличиваться и привести к появлению кишечных расстройств. Патогенные микроорганизмы в норме в кале отсутствуют или имеются в ничтожно малых количествах, быстро подавляются другой микрофлорой. К ним относятся сальмонеллы, дизентерийная палочка (шигеллы), брюшнотифозная, синегнойная палочки.

Как собрать кал на дисбактериоз правильно? Перед исследованием требуется отменить прием лекарств и другие лечебные процедуры. Непосредственно перед сбором материала нужно хорошо подмыться с мылом. Кишечник опорожняется в чистую емкость. Порция для исследования собирается из разных мест, не касаясь посуды.

Материал для бакисследования берется строго в стерильную посуду, незамедлительно доставляется в лабораторию. Иначе часть микроорганизмов может погибнуть, и результаты окажутся недостоверными.

Сотрудники баклабораторий производят посев кала на дисбактериоз на питательную среду для последующего выделения колоний микроорганизмов. Предварительные анализы готовы через сутки, окончательные – через трое.

Анализа кала на дисбактериоз с расшифровкой методом хроматомасс-спектрометрии проводится прибором спектрографом. Суть метода заключается в определении соотношения массы исследуемого органического вещества к заряду ионов.

Во время диагностики производится качественная и количественная идентификация данных. Современные анализаторы подключены к компьютеру. Результаты исследования выводятся на экран и сохраняются базой данных.

Анализа кала на бактериоз инвитро, так можно назвать полимеразную цепную реакцию или ПЦР-диагностику. Высокоинформативный способ применяется для выявления хронических и острых инфекций, наследственных заболеваний.

Возбудителей болезни в биологической пробе определяют по ДНК материалу. В условиях лаборатории участок ДНК многократно увеличивают с помощью ферментов. Используют ту его часть, которая отвечает необходимым условиям исследования. Как сдать анализ на дисбактериоз для ПЦР-диагностики? Так же, как при других методах исследования. Утром в стерильные контейнеры.

Сдавать анализ кала на дисбактериоз для дыхательного водородного теста не требуется. Метод исследования основан на следующем. В кишечнике присутствуют в основном анаэробные микробы, жизнедеятельность которых происходит без доступа воздуха и сопровождается выделением большого количества водорода. Газ присутствует в выдыхаемом воздухе и анализатором определяется его концентрация.

Несведущему человеку сложно понять и оценить любой полученный на руки результат диагностики. Расшифровкой анализа на дисбактериоз и выдачей заключения занимаются специалисты. Интересующую информацию можно получить у лечащего врача.

источник

Современная медицина для исследования дисбактериоза использует взятие кала на бактериальный анализ. Такая процедура называется посевом. Но она не дает полной информации о состояния организма больного. Посев выявляет лишь количество микробов, «засевших» на самом конце толстого кишечника. В результате, микрофлора тонкого кишечника остается без должного внимания исследователя.

Бактериологическое исследование дисбактериоза в состоянии выявить от 14 до 25 видов бактерий. Для сравнения, кишечник наводняет более 400 разновидностей обитателей микрофлоры.

Точную информацию о дисбактериозе по результатам посева можно получить при следующих условиях:

• абсолютная стерильность лабораторного помещения;
• грамотная доставка материала на исследование;
• контроль температуры;
• диагностика через 3 часа после сбора фекалий.

В наши дни подобными «идеалами» обладают не все медицинские лаборатории. Полученные в ходе исследований результаты не отражают реального положения вещей.

Но в то же время у посева имеются свои преимущества по сравнению с другими методами. Исследование микрофлоры на предмет кишечного дисбактериоза методом посева – это наиболее дешевая процедура. Определяется количественные и видовые компоненты микроорганизмов. Срок проведения посева составляет не менее 7 дней.

Исследование бактерий тонкого кишечника осуществляется путем забора биоптата или аспирата. Техническая сторона вопроса гораздо сложнее, поэтому такие методы проводятся за крайним исключением.

ПЦР-диагностика

Современные технологии не стоят на месте – сейчас используется полимеразная цепная реакция (ПРЦ) на дисбактериоз. Универсализм методу придает тот факт, что материал для исследования может быть абсолютно любым.

Диагностика кала на дисбактериоз с помощью ПРЦ подразумевает сбор данных по ДНК или РНК возбудителям. Полученные фрагменты будут относиться к тому или иному виду бактерии. При недостаточной массе инфицированного экспоната, его достраивают до нужных размеров, а затем регистрируют в базе данных.

Положительным моментом указанного лабораторного метода является скорость обработки полученной информации. С помощью ПРЦ можно определить даже самую скрытную бактерию. Вирусы часто меняют место дислокации, и не всегда расположены в просвете кишечника. Точность исследования будет зависеть от степени изученности видов бактерий. Патогены заносят в базу данных, и если образца для сравнения в ней не будет – то результат будет ограничен. Метод ПЦР направлен, в первую очередь, на уже проявивших себя патогенов.

Вторая группа методов исследования болезни получила название косвенные. Это анализы, полученные в ходе химических операций. Методы помогают выявить продукты жизнедеятельности, которые выделяют микроорганизмы кишечника. По итогам исследования, дается заключение о количестве и качестве бактерий в организме человека.

Газовая хроматография

Диагностика предполагает проведение:

1. газо-жидкостной хроматографии – определяет кислоты жировых летучестей;
2. масс-спектрометрии.

Результаты диагностики показывают кишечную среду обитания. Исследователю доступно до 40 различных видов бактерий.

• определение заражения анаэробов – исчезает при наличии кислорода;
• выявление живых и отмерших бифидобактерий кишечника;
• снижение концентрации вирусных клеток организма;
• быстрый сбор анализов – работа проводится не более 3 часов.

Отрицательные стороны химического метода исследования дисбактериоза:

• для полноты картины потребуется проведение нескольких исследований микрофлоры кишечника;
• дорогостоящее оборудование;
• технически сложный метод, требующий специальных знаний.

Следующие методы исследования дисбактериоза не столь популярны. К ним относятся, например, дыхательные тесты. Они показывают расположение патогенов в организме. При этом не требуется прибегать к сдаче кала на анализ.

Дыхательные тесты

Исследование предполагает концентрацию не вдыхаемого, а выдыхаемого человеком воздуха. Разумеется, такой метод не исключает неточностей. Дыхательные анализы рекомендуется проводить лишь для предварительных исследований, но никак не в качестве основного метода.

Диагностика дисбаланса кишечника – это довольно сложный процесс. Внутренний состав кишечника может меняться со страшной силой. Влияние на микрофлору оказывают и климат, и погода, и образ жизни человека. При переходе на другой рацион питания, желудок реагирует с не меньшим значением. Современные методы диагностики не всегда могут определить истинное состояние микрофлоры. Условными данными оперируют даже самые лучшие лаборатории страны. Поэтому незначительные отклонения (климат, погода), так или иначе, влияют на диагностическую информацию.

• при нарушении желудочно-кишечного тракта, а также осложнение болезни запорами, поносом, брожению живота;
• во время аллергии, когда кожа покрывается сыпью, происходит зуд;
• на фоне инфекций, поражающих кишечник;
• при нарушениях в гормональной среде или во время чрезмерного употребления антибиотиков;
• профилактика новорожденных, имеющих группу риска;
• подверженным болезням людям со слабым иммунитетом.

Прерогатива в назначении диагностики дисбактериоза отведена только специалистам: терапевтам, педиатрам, врачам общей практики. При обнаружении гастрита, направление может выписать врач-гастроэнтеролог.

При обнаружении симптомов, прямо или косвенно указывающих на проблемы с кишечником, врач выписывает талончики на прохождение диагностики дисбактериоза. Специалист также посоветует, где сдать анализы.

Перед тем как сдавать анализы на посев, необходимо разузнать нюансы доставки материала в лабораторию. Ниже приведены правила, которые помогут пациенту получить достоверный результат, не допустив ошибок:

1. После сбора кала, не тяните с доставкой материала – его нужно сдать в лабораторию не позднее, чем через 2 часа. При невозможности уложиться в указанное время, емкость с фекалиями можно хранить при температуре от 5 до 8 градусах в течение 4 часов.

1. Кал помещается в стерильную емкость с плотной крышкой. Мини-контейнеры с ложечкой обычно выдаются в больнице. Емкости также можно приобрести в аптеке.

1. Стул, после которого осуществляется забор кала, должен быть естественным, без принуждений. Не стоит использовать слабительные препараты или клизму.

1. В комплекте с мини-контейнером идет небольшая ложечка. Она предназначена для сбора фекалий в саму емкость. При обнаружении в кале частиц слизи, крови и других выделений, необходимо также собрать эти участки в мини-контейнер. Поместив содержимое для исследования в емкость, закройте ее плотной крышкой.

1. Перед тем, как осуществлять дефекацию, нужно сходить по маленькому. Моча не должна попадать в фекалии. Опорожнять кишечник лучше всего в горшок или «утку». Они должны быть стерильными, т.е. прокипяченными. Не рекомендуется проводить дефекацию в унитаз.

1. Если вы придерживайтесь курса приема лекарств – приостановите его. Сдача кала на исследование дисбактериоза предполагает как минимум 10-дневный перерыв курса антибактериальной терапии. Антибиотики также не дадут полной картины диагностики. Поэтому лучше будет прекратить их прием на 12 часов, после чего можно осуществлять забор кала на посев микрофлоры.

Методы исследования на дисбактериоз представлены двумя разновидностями: биохимический вариант и бактериологическая «классика»:

1. Биохимический метод гораздо проще и быстрее. Информативность по окончании исследования довольно высокая. Помимо выявления самого дисбактериоза, биохимический метод определяет инфекционное место. Другими словами, исследование покажет, какой отдел пищеварительной системы подвергается атаке патогенов. Стандартное время получения результата – 1 час после сдачи посева на микрофлору.
2. Бактериологический метод позволяет выяснить количественный состав микроорганизмов в фекалии. Кал помещается в специальный резервуар, где произрастают питательные для бактерий элементы. Достигнув симбиоза с такой средой, микроорганизмы начинают увеличиваться в росте уже спустя 5 суток после начала диагностики. Бактериальные колонии подвергаются тщательному наблюдению. Специалисты лаборатории с помощью микроскопов выясняют тенденцию роста тех или иных видов бактерий. Используя считывающие таблицы, лаборанты подсчитывают массу бактерий в 1 грамме материала.

Новорожденные дети также подвержены дисбактериозу. Нарушения во время кормления и лекарственные препараты роженицы могут сыграть злую шутку с ребенком. У старших детей дисбактериоз порождается переживаниями, смешанным питанием, гормональным сбоем и приемами антибиотиков.

Дети после 1 года могут сдавать анализ на дисбактериоз так же, как и взрослые люди. Новорожденные дети в этом плане несколько ограничены. Поэтому для них существуют определенные правила:

1. Сбор кала на посев должен браться до обеда. Это объясняется спецификой строения организма новорожденного. Процедура совсем не сложная – необходимо снять с малыша подгузник, и подложить клеенку под попку ребенка.

1. Легкие движения в области живота новорожденного помогут ему быстрее опорожнить организм. Массаж проводится в области пупка малыша, по часовой стрелке, плавными движениями ладони взрослого. Ребенок может сгибать ножки в коленях, так что будет несложно немного прижимать их к животику чада. Кожа новорожденного очень нежная, поэтому руки массирующего взрослого должны быть не только сухими, но и теплыми.

1. При невозможности быстрого опорожнения новорожденного, ему необходимо помочь. С помощью газоотводной трубочки нужно простимулировать анальное отверстие малыша. Ребенка следует расположить на бок или на спинку, а затем с предельной аккуратностью ввести в его анус трубочку. Глубина входа должна быть не более 0,5 см. Перед введением инструмента, его кончик смазывается детским кремом или маслом. По истечении 2 минут, стул должен нормализоваться. Поможет также параллельный массаж животика новорожденного.

1. Детские фекалии помещаются в мини-контейнер при помощи встроенной ложечки. Достаточно всего 10 граммов кала, чтобы провести полноценную диагностику на дисбактериоз. Чистота рук и инструментов – залог успеха при сборе материалов на посев.

1. Подписанный мини-контейнер (инициалы ребенка, его возраст и время сбора фекалий) сдается в лабораторию.

1. Время доставки анализов на исследование не должно превышать 4 часов (в крайнем случае). Получив заключение экспертизы, врач проинформирует родителей о результатах диагностики. При выявлении дисбактериоза у новорожденного, специалист назначит соответствующее лечение.

источник

Кишечник человека населяют

3 кг бактерий. Они представляют собой микрофлору, необходимую для нормального пищеварения, но при различных сбоях количество некоторых микроорганизмов может заметно снизиться — возникнет дисбактериоз — нарушение баланса бактерий.

Хотя медики не относят его к самостоятельным заболеваниям, вред от этого не уменьшается. При подозрении на дисбактериоз кишечника назначают специальные анализы кала для установления точного диагноза.

Микроорганизмы, обитающие в ЖКТ, имеют первостепенное значение для жизни человека. Они синтезируют витамины, расщепляют продукты питания и защищают от атак патогенных штаммов.

Иными словами, человек и бактерии находятся в симбиозе. Но при нарушении состава микрофлоры возможно появление метеоризма, диареи, тошноты, не говоря о последствиях недостаточного поступления питательных соединений в ткани.

Цель анализа кала состоит в определении качественного и количественного состава бактерий в кишечнике.

Для этого в медицине обычно применяют 3 метода:

Копрограмму назначают при обращении человека с жалобами на хроническое или острое расстройство стула, боли в животе непонятной природы, резкое снижение веса без видимых причин.

К такому исследованию врачи также прибегают при лечении заболеваний, не связанных с ЖКТ. Особенно это актуально при терапии антибиотиками патологий в разных частях тела (горло, суставы и т.д.).

Копрограмма — это первичное обследование, которое является лишь вспомогательным методом и дает физическую характеристику содержимому кишечника.

Анализ проводят в 2 этапа:

1. Макроскопический:

• цвет кала;
• форма;
• количество;
• запах;
• наличие паразитов;
• наличие гноя, крови и слизи;
• остатки не переваренной пищи.

2. Микроскопический:

• клетки и фрагменты тканей;
• переваренная пища (клетчатка, жир, соли, крахмал и т.д.).

Если копрограмма демонстрирует отклонения от нормы, у врача появляется повод для проведения более тщательного анализа. В лаборатории выполняют посев кала на питательную среду.

Через 4-5 дней бактерии размножатся, что позволит исследовать их колонии под микроскопом. После этого специалист делает заключение о количестве микробов в 1 г кала (КОЕ/г).

Основываясь на полученных данных, врач ставит диагноз. Результаты анализов взрослых и детей зачастую отличаются, поэтому возраст пациента обязательно принимается во внимание.

Но 5-дневное ожидание роста колоний не всегда позволительно, ведь за это время состояние человека может значительно ухудшиться.

Биохимический анализ кала на дисбактериоз дает результат в день сдачи образцов. Суть такого исследования заключается в выявлении соединений, присутствующих в кишечнике.

Особое внимание уделяется спектру жирных кислот, ведь именно они синтезируются бактериями в процессе жизнедеятельности. Еще биохимический анализ называют экспресс-диагностикой.

Метод является очень информативным и простым, он не только демонстрирует дисбаланс микрофлоры, но и устанавливает отдел кишечника, в котором возник сбой.

Врачи гораздо чаще отдают предпочтение данному исследованию в связи с его весомыми преимуществами:

• Скорость. Результаты будут через 1-2 часа.
• Чувствительность. Метод очень точно определяет концентрацию соединений.
• Нетребовательность к свежести образцов. Подойдет даже вчерашний кал.

Достоверность результатов исследования напрямую зависит от правильной подготовки. Дело в том, что многие продукты питания содержат вещества, которые дадут положительную реакцию.

Прежде всего, это мясо. Именно в нем присутствует гемоглобин.

Во-вторых, это железо. Все красные продукты имеют в составе данный элемент. Стоит воздержаться от употребления таких блюд в течение 3 дней до анализа, чтобы в лаборатории случайно не получили ложноположительный результат.

Ограничения распространяются и на сырые овощи и фрукты: в период подготовки нужно кушать только термически обработанные растительные продукты.

К тому же пациенту необходимо прекратить прием медикаментов, которые прямо влияют на кишечную микрофлору:

• антибиотики;
• пробиотики;
• слабительные (официальные и народные);
• ректальные свечи.

Подготовку к анализу кала на дисбактериоз взрослые выполняют самостоятельно. Исследование содержимого детского кишечника ничем не отличается, однако родителям придется проконтролировать соблюдение всех рекомендаций ребенком.

Диета и отмена медикаментов — это первичные условия достоверности результатов анализа. Кроме того, пациенту потребуется собрать кал в соответствие с правилами.

Сдаем кал — 6 правил:

1. Перед контрольной дефекацией вымыть промежность (исключается вероятность попадания застарелых образцов).
2. Запрещено использование любых вспомогательных средств для ускорения процесса дефекации (клизма, слабительное).
3. Заранее подготавливают специальный контейнер с плотной крышкой (нужно приобрести в аптеке).
4. Нельзя допустить попадание жидкости в кал (моча, вода и др.).
5. Взять 3 фрагмента кала (по 1 чайной ложке из разных участков).
6. Если присутствует кровь или слизь, то такие образцы берут в обязательном порядке.

Бактерии кишечника в основном анаэробные. Через 1 час после дефекации они еще будут сохранять свою популяцию в естественном виде, однако постепенно микроорганизмы начнут гибнуть.

Чтобы правильно сдать анализ кала на дисбактериоз, необходимо доставить образцы экскрементов в лабораторию хотя бы в течение 2 часов после опорожнения.

Срочность не столь существенна для биохимического исследования, которое изучает не колонии бактерий, а результат их жизнедеятельности — жирные кислоты. Эти соединения самопроизвольно почти не распадаются, поэтому и сохраняются в неизменном виде достаточно долго.

Врачи разрешают даже заморозить кал и привести его на следующий день. В случае с новорожденными детьми такой вариант иногда самый предпочтительный для родителей.

В кишечнике обитает 100 триллионов бактерий, что в 10 раз больше количества всех клеток организма. Если микробов не будет совсем, то человек попросту скончается.

С другой стороны, смещение баланса в любую сторону приводит к заболеваниям. Расшифровка анализа кала на дисбактериоз заключается в определении численности и типов микробов.

Таблица расшифровки результатов и норм анализа

Подробная расшифровка:

• 95% от всех бактерий, обитающих в кишечнике;
• синтезируют витамины К и В;
• способствуют усвоению витамина D и кальция;
• укрепляют иммунитет.

• поддерживают кислотность;
• синтезируют лактазу и защитные вещества.

• синтезируют витамины К и В;
• способствуют усвоению сахаров;
• производят колицины — белки, убивающие микробов.

• расщепляют жиры;
• выполняют защитную функцию.

• расщепляют углеводы;
• выполняют защитную функцию;
• присутствуют в малых количествах и не всегда.

• участвуют в синтезе жирных кислот;
• выполняют защитную функцию;
• присутствуют не всегда.

• обитают в толстом кишечнике;
• участвуют в нитратном обмене;
• существует множество патогенных штаммов.

• обитают в толстом кишечнике;
• синтезируют кислоты и спирты;
• расщепляют белки.

• поддерживают кислую среду;
• условно-патогенные.

Изменение численности тех или иных микроорганизмов возможно при попадании в кишечник болезнетворных штаммов.

Обычно это происходит при несоблюдении личной гигиены (грязные руки, немытые фрукты и овощи). Лечение антибиотиками — вторая распространенная причина дисбактериоза.

Для нормализации ситуации в ЖКТ врачи дополнительно назначают пробиотики — специальные биологически активные добавки.

К тому же дисбактериоз нередко свидетельствует об иммунном сбое. Лейкоциты контролируют популяцию микробов, численность которой при снижении естественной защиты существенно увеличивается. И зачастую размножаются не полезные бактерии, а патогенные.

Результаты анализа кала на дисбактериоз у детей несколько иные, чем у взрослых. Связано это, в первую очередь, с постепенным заселением кишечника микроорганизмами.

После появления на свет, ребенок питается материнским молоком, которое способствует развитию нормальной микрофлоры. Но в больницах часто случается заражение золотистым стафилококком.

И если у матери отсутствуют антитела к данному микроорганизму, то малыш заработает дисбактериоз.

К тому же некоторые полезные штаммы появляются только в течение 1 года, например бактероиды. Порой в кишечнике ребенка чрезмерно развиваются грибы рода Кандида, которые провоцируют соответствующее заболевание — кандидоз.

Самая распространенная причина дисбактериоза у детей — ранний переход на искусственное вскармливание. Все-таки малышу требуется материнское молоко в первый год жизни.

Анализ кала на дисбактериоз назначают при любых расстройствах пищеварения. Кроме того, врачи следят за состоянием микрофлоры пациента и во время проведения терапии антибиотиками.

Своевременное выявление дисбактериоза и уточнение характера расстройства, даст возможность предпринять правильные шаги и снизить вероятность осложнений.

источник

Организм человека находится в постоянном взаимодействии с окружающей средой. Между тем, из огромного числа микроорганизмов, непрерывно попадающих в пищеварительный тракт человека, только определенные роды, виды микробов нашли в кишечнике человека благоприятные условия существования; в процессе длительной эволюции они закрепились в кишечнике и составили его облигатную микрофлору, выполняющую важные для организма физиологические функции. Нельзя при этом не учесть, что отдельные факторы, такие как характер питания, сезон года, возраст, оказывают некоторое влияние на состав микрофлоры кишечника. С возрастом, например, происходит сдвиг в сторону увеличения грамположительной, гемолитической микрофлоры. Однако колебания, связанные с этими воздействиями, невелики, а способность здорового организма к саморегуляции обеспечивает быстрое восстановление относительного постоянства нормального биоценоза.

Из представителей облигатной микрофлоры кишечника прежде всего следует назвать бифидобактерии (Bifidobacterium) среди анаэробных микробов и кишечную палочку (Escherichia) — среди аэробных.

Основную микрофлору здоровых новорожденных детей, находящихся на естественном вскармливании, составляют бифидобактерии, которые обнаруживаются в больших разведениях фекалий (10 -8 — 10 -11 ). Количество их составляет 85 — 95 % числа всех микробов кишечника. Число кишечных палочек в стуле у этих детей невелико. При переходе на прикорм и более разнообразную пищу увеличивается количество кишечной палочки, ацидофильных микробов, энтерококка. Вместе с тем, в противовес существовавшему ранее представлению о преобладании анаэробных микробов только у детей, находящихся на грудном вскармливании, установлено, что полного вытеснения бифидобактерий не происходит, в норме они продолжают оставаться в толстом кишечнике в значительных количествах в течение всей жизни человека. Основные различия микрофлоры детей раннего возраста и старших контингентов в разных количественных соотношениях бифидобактерий и кишечной палочки.

У детей ясельного возраста аэробная кишечная микрофлора характеризуется еще более высоким содержанием кишечной палочки, энтерококка. У небольшого числа детей этого возраста выделяются лактозодефективные энтеробактерии и стафилококк. Среди аэробных энтеробактерий у здоровых детей, по данным Н.Д. Стерлиговой (1975), в фекалиях обнаруживаются кроме эшерихий и другие условно-патогенные бактерии семейства кишечных. Так, микробы рода Proteus выделяют 6 — 7 % детей, каждый из родов Citrobacter, Enterobacter, Serratia — 1,0 — 1,4 % здоровых детей. В анаэробной микрофлоре, как и у детей раннего возраста, преобладают бифидобактерии.

У здорового взрослого человека, не принимавшего до исследования антибиотиков и химиопрепаратов, основная аэробная микрофлора представлена на 90 — 95 % полноценной в ферментативном отношении кишечной палочкой, которая разлагает в течение 18 — 20 часов лактозу и растет на среде Эндо в виде темно-красных колоний с металлическим блеском. Выделенные из этих колоний культуры расщепляют лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу с образованием кислоты и газа; редко ферментируют сахарозу; образуют индол, сероводород, створаживают молоко, обладают активной подвижностью. Среднее количество кишечной палочки в 1 г фекалий составляет 300 — 400 млн, на средах Эндо и Левина и 800 млн, на 5 % кровяном агаре.

У здоровых взрослых людей в 1,5 % случаев обнаруживается кишечная палочка со сниженными ферментативными свойствами в первой генерации, которая растет на среде Эндо в виде бледно-розовых колоний. При последующем пересеве (вторая генерация) выделенная культура расщепляет лактозу до конца; количество ее в среднем составляет 21 млн/г фекалий. Гемолизирующие эшерихии, как правило, в фекалиях здоровых людей не обнаруживаются.

Лактозонегативные энтеробактерии обнаружены у 5,1 % обследованных здоровых лиц (в среднем 24,9 млн./г). Последующая идентификация выделенных с первичного посева культур как из лактозонегативных, так и лактозоположительных колоний позволяет установить, что у взрослых людей среди представителей аэробной микрофлоры обнаруживаются различные роды условно-патогенных энтеробактерий, например, Citrobacter — у 3 %, Enterobacter — у 1 — 1,5 % и т.д. Однако определить количественное содержание каждого из указанных родов в 1 г фекалий не представляется возможным, так как подавляющее большинство этих родовых групп условно-патогенных энтеробактерий содержат варианты как ферментирующие, так и не ферментирующие лактозу; поэтому в первичном посеве трудно определить процентное содержание микробов каждого из этих родов энтеробактерий.

Энтерококк обнаружен у 20 % взрослых людей при среднем количестве 634 млн/г. Энтерококк представляет собой диплококки удлиненной формы, более полиморфные, чем стрептококк и пневмококк; окрашивается положительно по Граму, неподвижен, желатин не разжижает, молоко не створаживает. Энтерококк в отличие от стрептококка дает в бульоне диффузный рост. От стрептококка его можно дифференцировать по ряду тестов: энтерококк разлагает маннит, растет на средах, содержащих 40 % желчи, в молоке с 0,1 % метиленовой сини редуцирует последнюю, устойчив к воздействию высокой температуры (до 60 °C).

Негемолизирующий и гемолизирующий стафилококк выделяют 2,2 — 1,5 % взрослых людей, при этом средние числовые показатели негемолизующего стафилококка во много раз больше, чем гемолизирующего — 417 млн/г и 90 млн/г соответственно.

Грибы рода Кандида, почти как правило, в посевах фекалий здоровых людей не обнаруживаются.

Молочнокислые микробы представляют сборную группу микроорганизмов, в которую входят ацидофильная и другие молочнокислые палочки, молочнокислые стрептококки, стрептобактерии. Они окрашиваются по Граму положительно, спор не образуют, неподвижны, молоко створаживают. Молочнокислые микробы требуют для культивирования сложных по составу питательных сред.

В анаэробной микрофлоре кишечника здорового человека облигатными являются бифидобактерии. Они обнаружены у 92,7 % взрослых людей. Количественное содержание их значительно: в 96,1 % проб они выделены из фекалий, разведенных до 10 -11 , т.е. в 1 г фекалий они составляют сотни миллиардов микробных тел. Морфологически бифидобактерии имеют разветвления на концах палочек, могут быть в форме римской цифры V или гантелей с колбовидными утолщениями на концах, часто скопления их имеют вид китайских иероглифов. Бифидобактерии окрашиваются по Граму положительно (редко встречаются и грамотрицательные), образуют кислоту без газообразования на средах с лактозой, глюкозой, сахарозой; неподвижны, молоко не створаживают, индол и сероводород не образуют, растут только в анаэробных условиях, спор не образуют.

При посевах фекалий в анаэробных условиях вырастает также значительное количество бесспоровых грамотрицательных палочек, которые объединены в группу бактероидов. Палочки весьма полиморфны, могут иметь и кокковидную форму. Эта группа микробов очень мало изучена. В отношении их нет четкой классификации. О физиологической роли бактероидов для организма человека сведений достаточных нет. Слабая изученность этой группы бактерий объясняется трудностями культивирования — применения сложных питательных сред и условий строгого анаэробиоза.

Физиологическое значение нормобиоценоза велико и многообразно. Кишечная палочка, бифидобактерии характеризуются высокоантагонистическими свойствами, препятствующими развитию патогенных и ряда необычных для нормальной микрофлоры кишечника условно-патогенных микробов; тем самым барьерное действие нормальной микрофлоры кишечника можно рассматривать как один из факторов естественной резистентности организма. Известна также витаминообразующая функция нормальной микрофлоры кишечника — способность синтезировать ряд витаминов, особенно группы B. Нормальная микрофлора кишечника участвует в ферментативных процессах в толстом кишечнике, в частности, в процессе расщепления кишечных ферментов — энтерокиназы и щелочной фосфатазы. Таким образом, нормальная кишечная микрофлора способствует поддержанию постоянства биохимической и биологической среды пищеварительного аппарата, обеспечивает его нормальное функционирование.

Термином «дисбактериоз» кишечника определяют такие ассоциации микроорганизмов, которые качественно или количественно либо одновременно в том и другом направлении отличаются от нормального состава микрофлоры за счет исчезновения или снижения числа облигатных ее представителей, с одной стороны, увеличения числа энтеробактерий, отсутствующих или встречающихся в ничтожных количествах в норме, с другой. В итоге такие микробные ассоциации не в состоянии выполнить физиологические функции, осуществляемые нормальным биоценозом кишечника.

К настоящему времени уже известен ряд условий, при которых развивается дисбактериоз кишечника. Это прежде всего при кишечных инфекционных заболеваниях, в частности при дизентерии; при любых других заболеваниях, изменяющих реактивность организма. Клиническими наблюдениями и прямыми экспериментами на животных установлены нарушения нормальной микрофлоры также под влиянием антибиотиков, химиопрепаратов, лучевых воздействий.

Широкое распространение в последние годы дисбактериоза кишечника определяет его важное значение в клинике кишечных расстройств. А.Ф. Билибин трактует дисбактериоз как состояние срыва адаптации, ведущее к нарушению защитных и компенсаторных механизмов. Надо полагать, это имеет особенное значение в раннем детском возрасте при незрелости специфических и неспецифических факторов резистентности.

Что касается характеристики микробных ассоциаций при дисбактериозе кишечника, то таковые неоднозначны. При одинаковой клинике могут быть разные микробные ассоциации и наоборот. Однако можно полагать, что в любом случае снижение числа облигатной микрофлоры, обладающей высокой антагонистической активностью, создает условия для развития тех родов и видов энтеробактерий, размножение которых в нормальных условиях было подавлено конкуренцией активных симбионтов, либо тех микроорганизмов, которые оказались транзиторно в кишечнике. Чаще всего в этих условиях развиваются микробы, которые обладают высокой резистентностью к антибиотикам и менее требовательны к условиям размножения, а именно: гноеродные микробы, в первую очередь стафилококк, гнилостные (микробы рода Протея и др.); грибы рода Кандида.

У лиц с дисфункцией кишечника на фоне дисбактериоза в микробных ассоциациях могут присутствовать также условно-патогенные микробы семейства кишечных, которые не являются элементами облигатной микрофлоры, вместе с тем обнаруживаются и у здоровых людей. Так, при исследовании 1500 проб фекалий от детей с кишечными расстройствами (Стерлигова, 1975) микробы рода Hafnia были выделены в 10,9 % проб, Aerobacter — в 4,2 %, Citrobacter — в 3,9 %, Klebsiella — в 0,9 %, Arisona — в 0,9 %, Serratia — в 0,5 % проб против 6,6 % — 1,4 % — 1 %, 1,4 % — 0 — 1 % соответственно у здоровых.

Важно при этом подчеркнуть, что при огромном числе накопленных наблюдений о характере микрофлоры при дисбактериозе не описано замещение нормальной микрофлоры одним каким-либо видом (родом) микробов. Как правило, дисбактериоз характеризуется тоже ассоциацией разных представителей энтеробактерий, но по составу отличной от нормобиоценоза. Более того, состав микрофлоры при дисбактериозе гораздо более пестрый и содержит до 5 и более родов, нехарактерных для нормальной микрофлоры. Широкие ассоциации условно-патогенных микробов часто сочетаются с более выраженной клиникой кишечного заболевания.

При вновь сложившихся ассоциациях имеющая место конкуренция в отношении питательного субстрата создает разные условия размножения, а следовательно, и разную численность популяций различных видов микроорганизмов. Снижение, например, кислотности среды в связи с подавлением молочнокислых бактерий создает благоприятные условия для размножения гнилостных бактерий: снижение числа антагонистов (в основном кишечной палочки, бифидобактерий) благоприятствует развитию кокковой микрофлоры и др.

Весьма важно, что между отдельными компонентами ассоциации при дисбактериозе не складываются, как при нормальном биоценозе, определенные стойкие взаимосвязи в отношении окислительно-восстановительного потенциала, взаимного использования продуктов обмена, витаминообразования, антагонистических взаимоотношений. Отсутствие закрепленных стойких условий взаимодействия внутри возникших ассоциаций подтверждается весьма быстрой сменой их состава. При повторных исследованиях даже через короткие промежутки времени характер микробных ассоциаций изменяется. Это является убедительным подтверждением того, что обнаруженный тот или иной вид (род) условно-патогенных микробов является не этиологическим фактором, а элементом дисбактериоза.

Качественные изменения состава микробного пейзажа в кишечнике при дисбактериозе выражаются в изменении ряда свойств кишечной палочки — основного симбионта аэробной микрофлоры. Одним из характерных признаков является снижение ее антагонистических свойств. Кишечная палочка часто утрачивает и ферментативную активность, подвижность. Гемолизирующие эшерихии, выделенные от лиц с дисбактериозом кишечника, обладают, как правило, токсическими (дермонекротическими) свойствами.

Имеющее место при нормальной микрофлоре расщепление поступающих из верхних отделов кишечника ферментов (энтерокиназы, щелочной фосфатазы), с их последующей реабсорбцией, не осуществляется в условиях дисбактериоза. Подтверждением этого является повышенное выделение с фекалиями этих ферментов, в частности энтерокиназы до 600 ед./г, в то время как у здоровых людей энтерокиназа в фекалиях отсутствует, либо обнаруживается в виде следов (до 20 ед./г).

Дисбактериоз сопровождается нарушением содержания в организме витаминов, особенно группы B — тиамина (витамина В₁), рибофлавина (витамина В₂), пиридоксина (витамина В₆) и инозита, что, как известно, отрицательно влияет на течение физиологических процессов и общую реактивность организма. Недостаток витаминов, в частности группы B, при дисбактериозе является одним из факторов, способствующих исчезновению активных симбионтов, нуждающихся в витаминах этой группы, и, с другой стороны, бесконкурентного роста микробов, не нуждающихся в них для своего развития, например стафилококка, микробов рода Протея, грибов рода Кандида.

Таким образом, при дисбактериозе имеет место не только нарушение нормальных соотношений различных морфологических групп энтеробактерий, но с этим связаны и функциональные отклонения.

Что касается количественных сдвигов в анаэробной микрофлоре, то они еще более выражены, чем в аэробной. Так, например, при дисбактериозе у больных хроническим колитом B. bifidum вовсе не обнаруживаются у подавляющего числа обследованных, в то время как резкое снижение кишечной палочки (менее 1 млн в 1 г испражнений) имеет место лишь в 16 % проб.

Нарушение экологических соотношений в кишечнике в сторону высокого содержания микроорганизмов, которые в норме встречаются только спорадически, в небольших количествах, приводит к нарушению уравновешенной системы, что и является патогенетическим фактором определенного числа регистрируемых кишечных заболеваний. Кроме того, организм лишается физиологического барьера в кишечнике как одного из факторов естественной резистентности.

Дисбактериоз может протекать при отсутствии клинической симптоматики (компенсированная форма), так и вызывать дисфункцию кишечника. В первом случае организм сам уравновешивает возникшие нарушения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры и расстройства пищеварительной функции не происходит. Развитие декомпенсированных форм дисбактериоза в большой мере зависит от снижения реактивности организма, что особенно касается грудных детей, а также ослабленных детей старшего возраста и взрослых лиц.

Дисфункция кишечника на фоне дисбактериоза требует применения для восстановления нормального биоценоза кишечника бактериальных препаратов из микробов-антагонистов — представителей нормальной микрофлоры.

Первый отечественный бактерийный препарат колибактерин представляет собой живую культуру высокоактивного штамма — антагониста E. coli M17. В настоящее время имеются бактерийные монопрепараты другого состава — бифидумбактерин, лактобактерин. Бифидумбактерин представляет живую культуру бифидобактерий (штамм I B. bifidum), составляющих основную микрофлору новорожденных детей и постоянного представителя анаэробной микрофлоры детей старшего возраста и взрослых людей. Лактобактерин представляет живые культуры L.B. fermenti и L.B. Plantarum — представителей молочнокислых бактерий, постоянных обитателей кишечника здоровых детей и взрослых.

Исходя из положения, что при дисбактериозе часто нарушается как аэробная, так и анаэробная микрофлора, разработан комплексный биопрепарат бификол, содержащий в своем составе бактерии E. Coli штамм М17 и штамм B. bifidum I.

Все названные препараты эффективны при лечении кишечных заболеваний на фоне дисбактериоза у взрослых и детей. Эффективность особенно демонстративна при лечении больных хроническими кишечными расстройствами (в том числе хроническим постдизентерийным колитом), которые в течение длительного времени безрезультатно лечились антибиотиками и другими препаратами. Перспективность этих препаратов повышается отсутствием побочного действия.

Содержащиеся в биологических препаратах микробы-антагонисты способствуют угнетению или полному вытеснению из кишечника патогенных и условно-патогенных микробных видов, микробных ассоциаций, не закрепленных в процессе эволюции в кишечнике, а следовательно, не связанных с физиологическими функциями пищеварительного тракта.

Учитывая роль дисбактериоза в поддержании длительной дисфункции кишечника, бактериологические исследования фекалий должны быть направлены в настоящее время не только на обнаружение патогенных энтеробактерий (шигелл, сальмонелл), но и на определение состояния микрофлоры кишечника. Ниже приведена общая схема исследования на обоих направлениях (см. приложение).

Как видно из представленной схемы, 1 г нативных фекалий без консерванта растирают в ступке с 9 мл физиологического раствора (10 -1 ). Из этого разведения делают посев на плотные питательные среды, обычно применяемые для выделения патогенных энтеробактерий (среду Плоскирева, среды Плоскирева или Левина с синтомицином или другим антибиотиком). Одновременно делают массивный посев из нативного кала на жидкие среды обогащения (Мюллера, селенитовую, магниевую).

Из основного разведения 1:10 делают дополнительные 100-кратные разведения в физиологическом растворе до 10 -3 — 10 -5 , затем из пробирки, в которой фекалии разведены до 10 -5 , вносят по 0,1 мл на поверхность среды Эндо, Левина, Сабуро, и 0,01 мл на 3 — 5 % кровяной агар. Посев испражнений для обнаружения патогенных грибов можно также проводить на рисовой, картофельной и других применяемых в лаборатории питательных средах. Для получения роста изолированных, доступных для счета, колоний применяют стеклянные бусы.

Стеклянные круглые бусинки (заранее простерилизованные по 10 — 12 штук в пробирке) опускают в чашку с посевным материалом. При легком покачивании чашки с бусами в течение одной минуты материал равномерно распределяется по питательной среде. Посев бусами начинают со среды, на которой посеяно наибольшее разведение материала, т.е. с кровяного агара, а затем бусы переносят на чашки с другими средами.

Для посева на бифидобактерии делают дополнительно еще 2 — 3 разведения до 10 -7 -10 -9 — 10 -11 . В первую пробирку с 9 — 10 мл среды Блаурокк вносят 1 мл из разведения фекалий 10 -7 , во вторую — 0,1 мл из этого же разведения, в третью и четвертую пробирку вносят соответственно по 1,0 и 0,1 мл из разведения 10 -9 , а в пятую и шестую по 1,0 и 0,1 мл из разведения 10 -11 . Все среды, за исключением среды Сабуро, помещают в термостат при температуре 37°.

Через 20 — 22 часа на среде Эндо подсчитывают число и процент лактозонегативных (бесцветных) колоний по отношению ко всему числу выросших колоний. Колонии со слабовыраженными ферментативными свойствами (слабое разложение лактозы — розовые колонии) подсчитывают по отношению к общему числу колоний кишечной палочки. Например: на среде Эндо выросли 50 лактозонегативных колоний при посеве 0,1 мл фекалий из разведения 1:100000. При расчете следует 50 умножить на 10, а затем на 100000 (степень разведения). Следовательно, в 1 г фекалий будет 50000000 лактозонегативных энтеробактерий.

С чашек со средами Эндо, Левина, Плоскирева выделяют не менее 4 — 5 колоний, отличающихся по морфологии, окраске на среды Рессела с мочевиной и солью Мора или на среду Олькеницкого, а также в пробирку с бульоном, под пробку которой подвешена индикаторная бумажка для определения индола. В дальнейшем лактозонегативные культуры изучают прежде всего в отношении принадлежности к патогенным энтеробактериям по действующей инструкции МЗ СССР, 1967 г.

Родовой состав лактозоотрицательных энтеробактерий, не относящихся к патогенным микробам семейства кишечных, может быть определен с помощью тестов, рекомендованных Всесоюзным центром по эшерихиям (1973). Вместе с тем, для выявления дисбактериоза можно не детализировать родовой состав лактозонегативных бактерий, а ограничиться определением на среде Эндо общей суммы лактозонегативных колоний.

Рост микробов рода Протея характеризуется разложением мочевины и окрашиванием среды Рессела в фиолетово-коричневый цвет при индикаторе тимоловый синий + кислый фуксин или оранжевый при индикаторе ВР, на среде Олькеницкого — в оранжевый цвет.

На 3 — 5 % кровяном агаре учитывают процентные соотношения колоний кишечной палочки, обладающих и не обладающих гемолизирующими свойствами; соотношения колоний кишечной палочки и кокковых форм; соотношения гемолизирующих и негемолизирующих кокков. Количество в 1 г фекалий указанных групп микробов учитывают, как это было указано, на среде Эндо (стр. 13).

С 5 % кровяного агара пересевают колонии разного вида на скошенную поверхность слабощелочного агара. После 20 — 22-часовой инкубации в термостате при 37°. проводят микроскопию окрашенных по Граму мазков. Культуры стафилококка проверяют в реакции плазмокоагуляции и в отношении лецитиназной активности на желточно-солевом агаре.

Для определения плазмокоагуляции петлю агаровой культуры стафилококка вносят в пробирку с 1 — 2 мл стерильной кроличьей или человеческой плазмы разведенной, 1:5*. Посевы помещают в термостат и проверяют результат через 30 минут, 2 — 4 и 24 часа. В качестве контроля ставят пробирки с плазмой без добавления культуры и с плазмой, в которую посеян заведомо коагулирующий стафилококк. При свертывании плазма полностью уплотняется или в пробирке плавает сгусток.

* Можно пользоваться сухой плазмой, выпускаемой Минским институтом эпидемиологии и микробиологии.

Для определения лецитиназной активности делают посев секторами на чашку с желточно-солевым агаром (на одну чашку можно посеять 4 — 8 культур). Посев инкубируют 24 — 48 часов при 37°, после чего учитывают результат.

Лецитиназоположительной считают культуру, вокруг которой образуется радужный венчик.

Для дифференциации энтерококка от прочих диплококков и диплострептококков применяют следующие тесты: способность расти и редуцировать метиленовую синьку в молоке, как наиболее надежный тест, рост в бульоне с 40 % желчи, расщепление маннита, терморезистентность (выживание при прогревании при 60° — 30 минут).

С целью обнаружения патогенных грибов посевы на среде Сабуро инкубируют в течение 3 — 5 дней при 28 — 30°, выделяют плотные непрозрачные колонии в пробирки со скошенной поверхностью этой же среды. Посевы снова выдерживают в термостате при той же температуре 3 — 4 суток, после чего проводят микроскопию препарата из живой культуры в капле стерильной водопроводной воды при помощи объектива 40, окуляра 10. К патогенным грибам относят культуры почкующихся клеток при наличии длинных нитей мицелия (псевдомицелий) или более коротких нитей (истинный мицелий).

Для определения анаэробных бифидобактерий посевы на среде Блаурокк выращивают при 37° в течение 48 часов. Из посевов, в которых виден рост в виде помутнения всей среды, в виде отдельных колоний или тяжей, готовят окрашенные по Граму мазки. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах, расположенных в виде римской цифры V, с несколько утолщенными концами или в виде скоплений, напоминающих китайские иероглифы, подтверждает их принадлежность к бифидобактериям. При отсутствии роста через 48 часов посевы оставляют в термостате до 72 часов.

Выделение чистой культуры B. bifidum является весьма трудоемким и практически необязательным, так как определение разведения, в котором обнаруживают B. bifidum, является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного их содержания в фекалиях.

Исследования указанных представителей кишечной микрофлоры не исчерпывает весь биоценоз кишечника, тем не менее позволяет выявить нормальное или нарушенное состояние кишечной микрофлоры.

Для количественного определения содержания кишечной палочки штамма М17 у лиц, получавших колибактерин или бификол, проводят дополнительный посев 0,1 мл из разведения 10 -5 (см. схему) на чашку со средой Эндо, в которой 1 % лактозы заменен 1 % сахарозы**. После 20 — 22-часовой инкубации при 37° на указанной среде определяют процентное соотношение колоний, расщепляющих сахарозу (кишечная палочка М17 сахарозоположительная), к общему числу выросших колоний кишечной палочки. Для окончательного суждения о принадлежности выросших колоний к кишечной палочке штамма М17 необходимо испытать не менее 8 — 10 сахарозоположительных колоний в реакции агглютинации на стекле с сывороткой против кишечной палочки М17***, разведенной в 10 раз. Этот тест является показателем как степени заселения кишечника штаммом М17 при приеме препарата, так и длительности приживления этого штамма после прекращения лечения колибактерином или бификолом.

** Рецепт среды — см. приложение.

*** Сыворотку можно заказать в Московском институте эпидемиологии и микробиологии Минздрава РСФСР.

В процессе лечения кишечная палочка штамма М17 составляет обычно 30 — 50 % по отношению к облигатным кишечным палочкам фекалий. О положительном влиянии примененного препарата на содержание бифидофлоры можно судить по количественному нарастанию таковой в кишечнике.

Существенные сдвиги микрофлоры в направлении нормализации регистрируются через 12 — 15 дней после приема бактерийных препаратов; в отдельных случаях для стойкого восстановления нормального биоценоза необходим более длительный срок — до 2 — 3 месяцев.

Правильная трактовка результата бактериологического исследования имеет исключительно большое значение для эпидемиолога, а также клициниста при решении вопроса о природе кишечного заболевания и соответственно методах лечения, а именно: либо этиотропного характера, либо направленных на нормализацию кишечной микрофлоры.

При выдаче результата исследования необходимо указать наличие или отсутствие в посеве фекалий патогенных энтеробактерий (шигелл, сальмонелл), а также дать описание состава кишечной микрофлоры.

Показателем дисбактериоза являются отклонения от нормальной микрофлоры человека, описанной выше. Дисбактериоз может выражаться высоким удельным весом кишечной палочки со слабовыраженными ферментативными свойствами (> 10 %), лактозонегативных энтеробактерий (> 5 %), наличием гемолизирующих эширихий, микробов рода Протея, грибов рода Кандида, большим процентным содержанием стафилококка. В подавляющем большинстве случаев при дисбактериозе имеет место как ассоциация ряда условно-патогенных микробов, нехарактерных для нормального биоценоза, так и одновременно качественные изменения эшерихий (гемолиз, снижение ферментативной активности, потеря подвижности).

Весьма показательными для нарушенного биоценоза кишечника являются также количественные сдвиги облигатной микрофлоры — отсутствие роста бифидобактерий в минимальном разведении фекалий (10 -7 ) и резкое снижение числа кишечной палочки (менее 1 млн/г).

В процессе лечения любым из названных бактерийных препаратов восстанавливается облигатная как аэробная, так и анаэробная микрофлора, а ассоциации микроорганизмов, характерные для дисбактериоза, исчезают. К концу 2 недели лечения число бифидобактерий достигает высоких цифр (10 -11 ). К этому сроку имеет место нарастание в посевах лактозопозитивных колоний кишечной палочки полноценной в ферментативном отношении, активно подвижной.

С другой стороны, резко снижается в первые две недели лечения число лиц, у которых выделяется кишечная палочка с гемолизирующими свойствами, слабыми ферментативными свойствами, лактозонегативные эшерихии, микробы рода Протея, грибы рода Кандида. Наибольшая стойкость выделения в эти сроки сохраняется у стафилококка как негемолизирующего, так особенно гемолизирующего.

Весьма характерным признаком для суждения о положительном влиянии бактерийного препарата на микрофлору кишечника — это менее пестрый состав ее, отсутствие широких ассоциаций многих родов и видов микробов, отмеченных до лечения.

Образец выдачи результата бактериологического исследования кишечной микрофлоры.

источник