Анализ фенотипирование лимфоцитов для чего

Альтернативные названия: иммунофенотипирование, иммунограмма с определением субпопуляций лейкоцитов, англ.: Immunophenotyping.

Лимфоциты являются важнейшими клетками иммунной системы, они обеспечивают нормальное функционирование всех ее звеньев – клеточного и гуморального иммунитетов. Они обеспечивают защиту организма от любых чужеродных агентов – вирусов, бактерий и других антигенов. Кроме того, они помогаю регулировать состояние собственных клеток организма, уничтожая те из них, которые способны переродится в раковые клетки.

Стандартный анализ крови с подсчетом количества лимфоцитов не позволяет получить полной информации о патологических процессах, протекающих в организме. Оценить статус иммунной системы, определить, нуждается ли она в коррекции, помогает специфический анализ – фенотипирование лимфоцитов. Суть его заключается в выделении среди множества этих клеток определенных подклассов (субпопуляций), ориентированных на узкие задачи. Осуществляется это путем выявления на поверхности лимфоцитов CD-антигенов или CD-маркеров – белковых соединений. Определяющих специализацию лимфоцитов.

• длительно текущие рецидивирующие инфекции;
• приобретенные иммунодефициты, в том числе и СПИД;
• врожденные иммунодефициты;
• всевозможные аллергии;
• заболевания аутоиммунной природы;
• обследование реципиента перед операцией трансплантации;
• обследование доноров органов для определения совместимости трансплантируемого органа;
• подготовка пациентов к обширным операциям;
• послеоперационные осложнения;
• мониторинг лечения пациентов с помощью иммуномодуляторов и иммуносупрессоров;
• мониторинг лечения онкологических пациентов.

Противопоказаний к этому исследованию нет.

Материалом для исследования служит венозная кровь. За 24 часа до взятия крови на анализ рекомендуется отказаться от приема лекарственных препаратов (только по согласованию с лечащим врачом). За 12 часов стоит воздержаться от приема пищи. Кровь берется в объеме 7-10 мл.

В бланке исследования указывается количество лимфоцитов разных фенотипических групп в абсолютных цифрах и их относительное количество (в процентах по отношению к общему числу лимфоцитов). Отмечается зависимость результатов исследования от возраста пациентов – данный факт обязательно должен учитываться при интерпретации. Значение имеют как повышение показателей, так и их снижение. Все результаты должны трактоваться в комплексе.

1. CD3+CD19- — количество увеличивается при инфекционных заболеваниях, во время беременности.
2. CD3+CD4+CD45+ (Т-хелперы) – увеличиваются при аутоиммунных заболеваниях, при гормональном дисбалансе.
3. CD3+CD8+CD45+ (цитотоксические Т-лимфоциты) – количество их повышается в острую фазу аллергических реакций, при вирусных инфекциях.
4. CD3+HLA-DR+CD45+ (Т-лимфоциты активированные) — увеличение отмечается при аутоиммунной патологии, при онкологических заболеваниях, циррозе печени.
5. CD19+CD3- (В-лимфоциты) – преобладают при стрессе, некоторых формах лимфом.
6. СD3-CD16+CD56+ (Т-киллеры) – количество их повышается после перенесенных гепатитов, при онкопатологии, аутоиммунных болезнях.
7. CD3+CD56+CD45+ (Т-естественные или нат уральные клетки) – количество их повышается при длительном существовании очага воспаления в организме, при тяжелых и затяжных воспалительных процессах (флегмоны, эмпиемы, рецидивирующие абсцессы).

К иммунограмме обязательно прилагается заключение врача-иммунолога, так как только он может правильно интерпретировать все показатели. Для лечащего врача значение имеет именно это заключение.

Данные иммунограммы должны сопоставляться с результатами других методов исследований, а также с клинической картиной патологии. Наиболее полную информацию можно получить, если проводить исследование иммунного статуса в динамике – это позволяет оценить иммунный ответ организма пациента на лечение.

Более полно оценить состояние иммунной в дополнение к фенотипированию лимфоцитов помогут анализы на компоненты системы комплемента, исследование крови на антитела и циркулирующие иммунные комплексы.

источник

Диагноз хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) может быть установлен при абсолютном количестве лимфоцитов в крови более 5•10 9 /л, наличии в костно-мозговом пунктате не менее 30 % лимфоцитов и иммунологическом подтверждении клонового В-клеточного характера лимфоцитоза.

В подавляющем большинстве случаев предположение о наличии у больного хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ) возникает в связи с изменениями картины крови: обнаружение абсолютного и относительного лимфоцитоза. Международное рабочее совещание в 1989 г. установило среди критериев для постановки диагноза хронического лимфолейкоза наличие абсолютного лимфоцитоза в крови не менее 10 • 109/л, однако позже это положение было пересмотрено. В настоящее время для предположения о заболевании ХЛЛ считается достаточным наличие абсолютного лимфоцитоза 5•10 9 /л.

Иногда на протяжении 2—3 лет при числе лейкоцитов, лишь незначительно превышающем норму или даже соответствующем нормальному показателю, наблюдается постепенно нарастающий лимфоцитоз — 50—60—70 %. Эти изменения лейкоцитарной формулы еще не являются оснаванием для постановки диагноза хронического лимфолейкоза без дополнительных исследований: пункции костного мозга и иммунологического исследования крови и костно-мозгового пунктата. Тем не менее такой пациент должен быть под пристальным наблюдением врача: обязательны осмотр и анализы крови каждые 3—4 мес, поскольку, как правило, такие изменения крови являются проявлением начала хронического лимфолейкоза.

В крови среди ядерных элементов обнаруживается преобладание зрелых лимфоцитов — клеток малого размера, округлых, с плотным ядром и узким ободком светлой или слегка базофильной цитоплазмы. В мазках крови обычно определяется то или иное количество клеток Гумпрехта—Боткина — полуразрушенных размытых ядер лимфоцитов. Их появление связано с повышенной ломкостью мембраны лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе.

Количество клеток Гумпрехта — Боткина, как правило, больше у больных с высоким лейкоцитозом. Клетки, или, как их нередко называют, тени Гумпрехта — Боткина, образуются при приготовлении мазка, их наличие и количество не имеют прогностического значения.

Количество лейкоцитов при хроническом лимфолейкозе может быть различным, в большинстве случаев при установлении диагноза хронического лимфолейкоза оно составляет 20—50•10 9 /л, но нередко при первом обращении к врачу уже имеется гиперлейкоцитоз (100—500 • 10 9 /л), свидетельствующий о длительном недиагностированном периоде заболевания. Мы наблюдали больного, у которого при первом обращении к врачу по поводу длительно существующих увеличенных лимфатических узлов количество лейкоцитов оказалось 1200•10 9 /л.

При подсчете лейкоцитарной формулы содержание лимфоцитов обычно составляет 50—70 %, при высоком лейкоцитозе иногда достигает 95—99 %. Наряду со зрелыми лимфоцитами в крови обычно в очень небольшом количестве (как правило, не более 1—3 %) удается обнаружить пролимфоциты — более крупные клетки с отчетливой нуклеолой в ядре. Постепенное увеличение содержания пролимфоцитов в течение болезни, так же как их постоянное присутствие в количестве 10 % и более, является плохим прогностическим признаком.

Е. Matutes и соавт. на большом клиническом материале показали, что выживаемость больных хроническим лимфолейкозом прямо коррелирует с числом циркулирующих пролимфоцитов и значительно снижается уже при числе пролимфоцитов более 5 %.

На основании изучения морфологической картины крови почти 550 больных ХЛЛ Е. Matutes и соавт. выделили примерно 15 % больных с необычной морфологией клеток. Они предложили считать таких больных страдающими атипичным ХЛЛ, отметив два его подтипа: один с повышенным более 10 % количеством пролимфоцитов и второй — с лимфоплазмоцитоидной дифференцировкой лимфоцитов и/или наличием лимфоцитов с расщепленным (cleaved) ядром. Во втором случае одновременно имеются обычные лимфоциты, характерные для хронического лимфолейкоза, и переходные формы — более крупные лимфоциты с выраженной базофилией цитоплазмы или с намечающейся расщелиной ядра.

Течение болезни в этом случае обычно не отличается от характерного для типичного хронического лимфолейкоза, однако нередко при обоих указанных вариантах имеется трисомия хромосомы 12. При обоих подтипах: повышенном количестве пролимфоцитов и лимфоплазмоцитоидной морфологии лимфоцитов — течение болезни у больных с трисомией хромосомы 12 более агрессивное.

Костно-мозговой пунктат при хроническом лимфолейкозе обычно гиперклеточный, инфильтрация лимфоцитами чаще всего имеет диффузный характер, хотя иногда встречаются случаи нодулярной инфильтрации. В большинстве случаев процентное содержание лимфоцитов значительно превышает необходимые для установления диагноза 30 %, нередко достигая 90—95 %.

Лимфоциты в костном мозге морфологически не отличаются от лимфоцитов крови, но обычно имеется 3—5 % пролимфоцитов даже в тех случаях, когда они не обнаруживаются в крови.

При морфологическом исследовании лимфатического узла обнаруживают стирание нормального рисунка и мономорфную инфильтрацию лимфоцитами, морфологически сходными с лимфоцитами крови и костного мозга, иногда имеющими несколько большие размеры. В небольшом количестве встречаются пролимфоциты и клетки, названные параиммунобластами: клетки среднего размера с дисперсным хроматином и круглыми или овальными ядрышками. В селезенке преобладает инфильтрация белой пульпы, хотя красная пульпа обычно тоже оказывается в той или иной степени инфильтрированной малыми лимфоцитами.

Несмотря на характерную картину, результаты морфологического исследования не могут считаться достаточными для установления диагноза хронического лимфолейкоза (ХЛЛ), поскольку аналогичная морфологическая картина крови и костного мозга нередко наблюдается при фолликулярной и мантийно-клеточной лимфомах с поражением костного мозга. Согласно современным критериям, диагноз хронического лимфолейкоза может считаться установленным только после иммунологического исследования, подтверждающего диагноз. Патологические лимфоциты при хроническом лимфолейкозе имеют абсолютно характерный иммунофенотип.

Они экспрессируют антигены CD19, CD5, CD23, отмечается слабая экспрессия на поверхности клеток иммуноглобулинов (экспрессируются IgM, нередко одновременно с IgD) с одной L-цепью, определяется слабая экспрессия антигенов CD20 и CD22, у ряда больных экспрессируется молекула FMC-7. Антиген CD79b, или Igb, являющийся частью В-клеточного рецептора, либо не экспрессируется, либо экспрессируется очень слабо в подавляющем большинстве случаев.

Характерный иммунофенотип опухолевых клеток позволяет отличить В-ХЛЛ от других лимфопролиферативных заболеваний.

Е. Matutes и соавт. предложили числовую систему, помогающую при дифференциальной диагностике В-ХЛЛ и других лимфопролиферативных заболеваний. По этой системе каждый иммунологический признак, характерный для В-ХЛЛ, расценивается как 1 балл, его противоположное значение — как 0.

Система выглядит следующим образом: поверхностные иммуноглобулины слабая экспрессия — 1, сильная — 0; CD5+ -1, CD5-0; CD23+ -1, CD23-0; CD22 — слабая экспрессия — 1, сильная — 0; CD79b — отсутствует — 1, экспрессируется — 0; FMC-7— отсутствует — 1, экспрессируется — 0. Оценив по этой системе сумму полученных баллов у 298 больных хроническим лимфолейкозом и 166 больных другими зрелоклеточными лимфопролиферативными заболеваниями, авторы показали, что у 96,8 % больных хроническим лимфолейкозом сумма полученных баллов составляет 3—5, в то время как более чем у 94 % больных другими лимфопролиферативными заболеваниями она равна 1—2 баллам.

Иногда возникают трудности в дифференциальной диагностике хронического лимфолейкоза и так называемого монокло-нового В-лимфоцитоза неопределенного значения (MLUS — monoclonal lymphocytosis of undetermined significance), названного так по аналогии с моноклоновыми гаммапатиями неопределенного значения (MGUS). Термин был впервые введен еще в конце 80-х годов прошлого века для отличия непрогрессирующего моноклонового лимфоцитоза без признаков ХЛЛ от индолентного ХЛЛ с признаками заболевания. В настоящее время чаще употребляется термин CLUS (clonal lymphocytosis of undetermined significance).

При CLUS обычно на протяжении многих лет сохраняются умеренный и стабильный лейкоцитоз и лимфоцитоз (меньше необходимых для диагноза ХЛЛ 5•10 9 /л), нормальные показатели эритро- и тромбоцитопоэза, отсутствует увеличение лимфатических узлов и селезенки.

В наблюдениях С. Wang и соавт. клиническая картина и лабораторные показатели при CLUS оставались неизменными на протяжении 3—10 лет. Клоновая природа лимфоцитоза была подтверждена рестрикцией L-цепи экспрессируемых на поверхности лимфоцитов иммуноглобулинов. Никаких хромосомных аберраций на протяжении всего времени наблюдения выявлено не было. У всех пациентов исследование иммунофенотипа на протяжении всего времени наблюдения обнаруживало экспрессию лимфоцитами антигенов CD19, CD20 и слабую экспрессию поверхностных иммуноглобулинов, однако неизменно выявляло отсутствие экспрессии CD5 и CD23. Таким образом, данные наблюдения не отвечают всем признакам В-ХЛЛ. Однако в большинстве случаев иммунофенотип при CLUS не отличается от типичного иммунофенотипа В-ХЛЛ. A. Rowstron на основании анализа нескольких сотен наблюдений раннего стабильного хронического лимфолейкоза и сравнения их с CLUS указывает, что частота прогрессирования в этих случаях одинакова и не превышает 10 %.

Известно, что истинный хронический лимфолейкоз, имеющий все необходимые для установления диагноза черты, также может годами не проявлять признаков прогрессирования. В подобных случаях имеется характерный для данного заболевания иммунофенотип, а при длительном наблюдении (в одном нашем наблюдении спустя 22 года со времени постановки диагноза) во многих случаях появляются черты прогрессирующего хронического лимфолейкоза. В других наблюдениях клиническая картина сохраняется неизменной на протяжении всей жизни больного.

Мы наблюдали больную в течение 29 лет, которая не получала никакого лечения, поскольку все это время у нее была стабильная гематологическая и клиническая картина: отсутствие увеличенных лимфатических узлов и селезенки, количество лейкоцитов 15—20•10 9 /л, лимфоцитов 65—70 %. Это наблюдение похоже на наблюдения Т. Han и соавт., описавших 10 больных с лейкоцитозом более 10 • 109/л и моноклоновым В-клеточным лимфоцитозом, у которых в течение 6—24 лет не было признаков прогрессирования и которые не нуждались в терапии.

Возможно, эти наблюдения являются отражением возрастного изменения В-клеточного репертуара. Почти 10 лет назад было обнаружено, что у мышей с возрастом постепенно суживается разнообразие клонов В-клеток (В-клеточный репертуар) и одновременно происходит увеличение размеров (амплификация) отдельных клонов. N. Chiorazzi и М. Ferrarini указывают, что у здоровых людей старше 50 лет наличие таких клонов В-лимфоцитов является обычным. Возможно, отдельные клоны, возникшие под влиянием длительной стимуляции определенным антигеном, могут приобретать значительные размеры и определяться при рутинном иммунологическом исследовании.

Обнаруженная недавно в половине исследованных методом FISH случаев CLUS делеция 13ql4, являющаяся самой частой генетической аберрацией при ХЛЛ, подтверждает мнение о том, что CLUS следует расценивать как раннюю стадию хронического лимфолейкоза доброкачественного течения. В то же время P. Ghia и соавт., обследовав 500 здоровых людей старше 65 лет, обнаружили у части из них клоны клеток с иммунофенотипом, характерным для различных лимфопролиферативных заболеваний, иногда у одного и того же больного. Авторы полагают, что это, скорее всего, является не ранней стадией болезни, а отражением постепенно суживающегося с возрастом В-клеточного репертуара.

В 1982 г. описан постоянный поликлоновый В-лимфоцитоз у курящих женщин средних лет. У некоторых из них были частые респираторные заболевания. Это редкий феномен, и со времени первой публикации появилось не более 90 подобных описаний. Исследования с помощью ПЦР показали, что во всех изученных случаях имеется реаранжировка BCL-2/IgH, которая, однако, не всегда сопровождалась повышенной экспрессией BCL-2.

У некоторых курящих женщин с поликлоновым В-лимфоцитозом обнаружены незначительное увеличение размеров селезенки и поликлоновая гамма-патия, которые, как и лимфоцитоз, иногда исчезали после прекращения курения.

Несколько случаев поликлонового В-лимфоцитоза описаны у некурящих. С помощью ПЦР у некоторых пациентов в крови был обнаружен вирус Эпштейна—Барр. Неясно, играет ли этот вирус роль в развитии синдрома поликлонового В-лимфоцитоза.

Очевидно, в настоящее время подобные случаи не являются трудными для дифференциальной диагностики с хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ), поскольку поликлоновый характер лимфоцитоза обнаруживается при иммунофенотипировании. Трудности для трактовки представляет описанный недавно случай поликлонового В-клеточного лимфоцитоза с комплексными хромосомными аберрациями — трисомией хромосом 3, 15 и 18, инверсией хромосомы 18, t(13;14) в отдельных клетках у длительно курящей женщины. Гематологическая картина остается стабильной на протяжении нескольких лет наблюдения, но отмечаются часто повторяющиеся инфекции верхних дыхательных путей. Необходимо длительное наблюдение для выяснения вопроса о том, не являются ли имеющиеся хромосомные аберрации отражением начала лимфопролиферативного заболевания.

При некоторых хронических инфекциях (туберкулез, сифилис), иногда при неинфекционных заболеваниях (тиреотоксикоз, болезнь Аддисона) наблюдается постоянный Т-клеточный лимфоцитоз, чаще всего при нормальном количестве лейкоцитов. Его также нетрудно дифференцировать от хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) на основании данных иммунологического исследования.

источник

Первым исследованием всегда является подсчет лейкоцитарной формулы (см. главу «Гематологические исследования»). Оцениваются как относительные, так и абсолютные значения количества клеток периферической крови.

Определение основных популяций (Т-клетки, В-клетки, натуральные киллеры) и субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-ЦТЛ). Для первичного исследования иммунного статуса и выявления выраженных нарушений иммунной системы ВОЗ рекомендовано определение CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56, соотношение CD4/CD8. Исследование позволяет определить относительное и абсолютное количество основных популяций лимфоцитов: Т-клетки – CD3, В-клетки – CD19, натуральные киллеры (NK) – CD3- CD16++56+, субпопуляции Т лимфоцитов (Т-хелперы CD3+ CD4+, Т-цитотоксические CD3+ CD8+ и их соотношение).

Иммунофенотипирование лимфоцитов проводится c использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным ангинам на клетках иммунной системы, методом проточной лазерной цитофлуорометрии на проточных цитофлуориметрах.

Выбор зоны анализа лимфоцитов производится по дополнительному маркеру CD45, который представлен на поверхности всех лейкоцитов.

Условия взятия и хранения образцов

Венозная кровь, взятая из локтевой вены, утром, строго натощак, в вакуумную систему до указанной на пробирке метки. В качестве антикоагулянта используется К2ЭДТА. После взятия пробирку с образцом медленно переворачивают 8-10 раз для перемешивония крови с антикоагулянтом. Хранение и транспортировка строго при 18–23°С в вертикальном положении не более 24 ч.

Невыполнение этих условий приводит к некорректным результатам.

Т-лимфоциты (CD3+ клетки). Повышенное количество свидетельствует о гиперактивности иммунитета, наблюдается при острых и хронических лимфолейкозах. Увеличение относительного показателя встречается при некоторых вырусных и бактериальных инфекциях в начале заболевания, обострениях хронических заболеваний.

Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета, а именно о недостаточности клеточно-эффекторного звена иммунитета. Выявляется при воспалениях разнообразной этиологии, злокачественных новообразованиях, после травмы, операций, инфаркта, при курении, приеме цитостатиков. Повышение их числа в динамике заболевания – клинически благоприятный признак.

В-лимфоциты (CD19+ клетки) Снижение наблюдается при физиологических и врожденных гипогаммаглобулинемиях и агаммаглобулинемиях, при новообразованиях иммунной системы, лечении иммунодепрессантами, острой вирусной и хронической бактериальной инфекциях, состоянии после удаления селезенки.

Увеличение отмечается при аутоиммунных заболеваниях, хронических заболеваниях печени, циррозе, муковисцедозе, бронхиальной астме, паразитарных и грибковых инфекциях. Характерно в период реконвалесценции после перенесенных острых и хронических вирусных и бактериальных инфекций. Выраженное увеличение наблюдается при хроническом В-лимфолейкозе.

NK-лимфоциты с фенотипом CD3-CD16++56+ Натуральные киллеры (NK-клетки) – популяция больших гранулярных лимфоцитов. Они способны лизировать клетки-мишени, инфицированные вирусами и другими внутриклеточными антигенами, опухолевые клетки, а также другие клетки аллогенного и ксеногенного происхождения.

Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, встречается при вирусных заболеваниях, повышается при злокачественных новообразованиях и лейкозах, в периоде реконвалесценции.

Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах, паразитарных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, облучении, лечении цитостатиками и кортикостероидами, стрессе, дефиците цинка.

Т-лимфоциты хелперы с фенотипом CD3+CD4+ Увеличение абсолютного и относительного количества наблюдается при аутоиммунных заболеваниях, может быть при аллергических реакциях, некоторых инфекционных заболеваниях. Это увеличение свидетельствует о стимуляции иммунной системы на антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов.

Снижение абсолютного и относительного количества Т-клеток свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета, является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции; встречается при хронических заболеваниях (бронхитах, пневмониях и т.д.), солидных опухолях.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD3+ CD8+ Повышение выявляется практически при всех хронических инфекциях, вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Является характерным для ВИЧ-инфекции. Снижение наблюдается при вирусных гепатитах, герпесе, аутоиммунных заболеваниях.

Соотношение CD4+/CD8+ Исследование соотношения CD4+/CD8+ (CD3, CD4, CD8, CD4/CD8) рекомендовано только для мониторинга ВИЧ-инфекции и контроля эффективности АРВ терапии. Позволяет определить абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов, субпопуляций Т-хелперов, ЦТЛ и их соотношение.

Диапазон значений – 1,2–2,6. Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах (синдром Ди-Джоржи, Незелофа, Вискотта-Олдрича), при вирусных и бактериальных инфекциях, хронических процессах, воздействии радиации и токсических химических веществ, множественной миеломе, стрессе, снижается с возрастом, при эндокринных заболеваниях, солидных опухолях. Является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции (менее 0,7).

Увеличение значения более 3 – при аутоиммунных заболеваниях, остром Т-лимфобластном лейкозе, тимоме, хроническом Т-лейкозе.

Изменение соотношения может быть связано с количеством хелперов и ЦТЛ у данного пациента. Например, снижение количества CD4+ Т-клеток при острой пневмонии в начале заболевания ведет к снижению индекса, а ЦТЛ при этом могут не измениться.

Для дополнительного исследования и выявления изменений иммунной системы при патологиях требующих оценки наличия острого или хронического воспалительного процесса и степени его активности, рекомендуется включать подсчет количества активированных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и ТNK–клеток с фенотипом CD3+CD16++56+.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+HLA-DR+ Маркер поздней активации, показатель гиперреактивности иммунитета. По экспрессии данного маркера можно судить о выраженности и силе иммунного ответа. Появляется на Т-лимфоцитах после 3-го дня острого заболевания. При благоприятном течении заболевания снижается до нормы. Увеличение экспрессии на Т-лимфоцитах может быть при многих заболеваниях, связанных с хроническим воспалением. Отмечено его повышение у пациентов с гепатитом С, пневмониями, ВИЧ-инфекцией, солидными опухолями, аутоиммунными заболеваниями.

ТNK-лимфоциты с фенотипом CD3+CD16++CD56+ Т-лимфоциты, несущие на своей поверхности маркеры CD16++ CD 56+. Эти клетки имеют свойства как Т-, так и NK-клеток. Исследование рекомендовано как дополнительный маркер при острых и хронических заболеваниях.

Снижение их в периферической крови может наблюдаться при различных органоспецифических заболеваниях и системных аутоиммунных процессах. Увеличение отмечено при воспалительных заболеваниях разной этиологии, опухолевых процессах.

Исследование ранних и поздних маркеров активации Т-лимфоцитов (CD3+CD25+, CD3-CD56+, CD95, CD8+CD38+) дополнительно назначают для оценки изменений ИС при острых и хронических заболеваниях, для диагностики, прогноза, мониторинга течения заболевания и проводимой терапии.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+CD25+, рецeптор к ИЛ2 CD25+ – маркер ранней активации. О функциональном состоянии Т-лимфоцитов (CD3+) свидетельствует количество экспрессирующих рецепторов к ИЛ2 (CD25+). При гиперактивных синдромах количество этих клеток возрастает (острые и хронические лимфолейкозы, тимома, отторжение трансплантата), кроме того, повышение их может свидетельствовать о ранней стадии воспалительного процесса. В периферической крови их можно выявить в первые три дня болезни. Снижение числа этих клеток может наблюдаться при врожденных иммунодефицитах, аутоиммунных процессах, ВИЧ-инфекции, грибковых и бактериальных инфекциях, ионизирующей радиации, старении, отравлении тяжелыми металлами.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD8+CD38+ Присутствие CD38+ на ЦТЛ лимфоцитах отмечено у пациентов с разными заболеваниями. Информативный показатель при ВИЧ-инфекции, ожоговой болезни. Увеличение числа ЦТЛ с фенотипом CD8+CD38+ наблюдается при хронических воспалительных процессах, онкологических и некоторых эндокринных заболеваниях. При проведении терапии показатель снижается.

Субпопуляция натуральных киллеров с фенотипом CD3- CD56+ Молекула CD56 – адгезивная молекула, широко представленная в нервной ткани. Кроме натуральных киллеров, экспрессируется на многих типах клеток, в том число на Т-лимфоцитах.

Увеличение данного показателя свидетельствуют о расширении активности специфического клона клеток киллеров, которые имеют меньшую цитолитическую активность, чем NK-клетки с фенотипом CD3- CD16+. Количество этой популяции возрастает при гематологических опухолях (ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, плазмоклеточная миелома, апластическая крупноклеточная лимфома), хронических заболеваниях, некоторых вырусных инфекциях.

Снижение отмечается при первичных иммунодефицитах, вирусных инфекциях, системных хронических заболеваниях, стрессе, лечении цитостатиками и кортикостероидами.

Рецептор CD95+ – один из рецепторов апоптоза. Апоптоз – сложный биологический процесс, необходимый для удаления из организма поврежденных, старых и инфицированных клеток. Рецептор CD95 экспрессируется на всех клетках иммунной системы. Он играет важную роль в контроле функционирования иммунной системы, так как является одним из рецепторов апоптоза. Его экспрессия на клетках определяет готовность клеток к апоптозу.

Снижение доли CD95+-лимфоцитов в крови пациентов свидетельствует о нарушении эффективности последнего этапа выбраковки дефектных и инфицированных собственных клеток, что может привести к рецидиву заболевания, хронизации патологического процесса, развитию аутоиммунных заболеваний и повышению вероятности опухолевой трансформации (к примеру, рака шейки матки при папилломотозной инфекции). Определение экспрессии CD95 имеет прогностическое значение при миело- и лимфопролифератиных заболеваниях.

Повышение интенсивности апоптоза наблюдается при вирусных заболеваниях, септических состояниях, при употреблении наркотических средств.

Активированные лимфоциты CD3+CDHLA-DR+, CD8+CD38+, CD3+CD25+, CD95. Тест отражает функциональное состояние Т-лимфоцитов и рекомендован для контроля за течением заболевания и контроля иммунотерапии при воспалительных заболеваниях разной этиологии.

источник

Расшифровка фенотипирования лимфоцитов

Рецептор клеточный (receptor) [лат. receptor — принимающий] — белковые молекулы или молекулярные комплексы, расположенные на поверхности клетки или внутри ее, которые способны специфически связывать другие молекулы, несущие внешние для клетки регуляторные сигналы (напр., гормоны, нейромедиаторы, факторы роста, лимфокины, лекарство и т. п.), или реагировать на физические факторы (напр., свет).

Рецептор – особый маркер, молекула, которая позволяет отличить один лимфоцит от другого. Под микроскопом они все выглядят одинаково, но функции их различны. Лимфоциты облеплены тысячами разных рецепторов, истинная функция многих их них до сих пор не известна. И только лабораторными методами можно дифференцировать один лимфоцит от другого и подсчитать количество отдельных популяций.

В нашем случае речь идет о рецепторах лимфоцитов, по которым можно отнести их к определенному виду. При исследовании клеточного иммунитета определяют ко-рецепторы, которые дополняют основные рецепторы, и служат для усиления межклеточного взаимодействия и более точного распознавания антигена. Эти маркеры не ключевые, они не имеют решающего значения в распознавании и иммунном ответе, а используются лишь для идентификации. Уникальный для каждого вида лимфоцита ко-рецептор и есть та визитная карточка, по которой отличают, например, Т-Хелпер от Т-Киллера.

Знаки «+» и «–» здесь не для сложения и вычитания, а для маркировки лимфоцитов. В данном случае они обозначают наличие рецептора на поверхности. Знак плюс «+» показывает, что рецептор на поверхности присутствует, знак «-», что этого рецептора нет или он слабо выражен. Знаки ставятся после кластера дифференцировки CD, служащего для обозначения рецептора, которому присвоен определенный порядковый номер. Например, полное обозначение Т-хелпера CD3+CD4+CD8-CD45+ где

CD3+ рецептор для всех Т-лимфоцитов
CD4+ рецептор Т-хелпера
CD8- знак «-» означает что этого рецептора нет (в данном случае это рецептор Т-цитотоксического лимфоцита)
CD45+ общий антиген для всех лейкоцитов

Примечание. Например, Т-хелпер может обозначаться разными способами в разных лабораториях.

Все это будет один и тот же Т-хелпер. Только в первом случае, анализ будет количественно более точный из-за дополнительных поясняющих рецепторов. Такую запись используют не для красоты, в идеале это должно означать, что во время анализа применяли дополнительные моноклональные антитела для идентификации. Дело в том, что многие маркеры могут одновременно присутствовать на разных типах лейкоцитов, поэтому для более точного результата и разделения применяют фенотитирование несколькими антигенами одновременно.

Так, если ранее для определения Т-цитотоксических лимфоцитов считалось достаточным использовать только один маркер – CD8, то согласно современным представлениям необходимо одновременное исследование четырех маркеров: CD8, CD4, CD3 и CD45. Реализация такого подхода возможна только при использовании многоцветного цитофлюориметрического анализа.
https://www.ramld.ru/userfiles/file/Laboratory medicine 12/HaydukovLM12.pdf

Из-за изменчивости рецепторов на разных стадиях созревания, или при определенных условиях, или месте расположения выделяют 3 формы их экспрессии. Записывается это в таком виде — hi, mid, low(или bright, mid, dim), что в переводе на русский язык означает высокую, среднюю и низкую экспрессию и плотность рецепторов. Экспрессирует – это значит выбрасывает и выставляет на свою мембрану рецепторы изнутри клетки. Встречается такое обозначение не часто в нашем случае. Например, в отношении натуральных киллеров можно столкнуться с такой записью:

CD16brightCD56dim (CD16+CD56-) – популяция, которая составляет 90% и содержаться в периферической крови, в красной пульпе селезенки. Она имеет высокую плотность рецепторов CD16 и низкую CD56.

CD16dimCD56bright (CD16-CD56+) — локализуются в печени, эндометрии, в децидуальной оболочке, в периферической крови их количество минимально — не более 10%. У этих NK-клеток наоборот высокая плотность CD56 и низкая CD16.

Все лимфоциты можно разделить на 3 основные группы:

1) Т-лимфоциты CD3+CD19-CD45+ делятся на:

* Т-хелперы CD3+CD4+CD8-CD45+
— Т-хелперы наивные CD4+CD45RA+CD45R0-CD45+
— Т-хелперы активированные/памяти CD4+CD45R0+CD45RA±CD45+

* Т-цитотоксические CD3+CD8+CD4-CD45+
* Т-регуляторные CD4+CD25brightCD127negCD45+
* Гамма-дельта Т-клетки CD3+γδТcR+αβТсR-CD45+
* T-NK-клетками CD3+CD16+CD56+CD45+ (особая популяция, которую можно одновременно отнести и к Т и NK-клеткам)

2) В-лимфоциты CD3-CD19+CD45+ делятся на:

* B-1 клетки CD19+CD5+CD27-CD45+
* B-2 клетки CD19+CD5-CD27-CD45+ (обычные, знакомые всем В-лимфоциты)
* В-клетки памяти CD19+CD5-CD27+CD45+

3) NK-лимфоциты CD3-CD16+CD56+CD45+ делятся на:

* NK-клетки цитолитические CD3-CD16+CD56dimCD45+
* NK-клетки цитокин-продуцирующиеCD3-CD16-CD56brightCD45+

Возможные формы записи натуральных киллеров:

CD3-CD16+CD56+CD45+ киллеры с обоими рецепторами CD16 и CD56 сразу
CD3-CD16+CD56-CD45+ цитолитические киллеры с рецептором CD16
CD3-CD16-CD56+CD45+ цитокин-продуцирующиекиллеры с рецептором CD56

Или так, по отдельности:
CD3-CD16+CD45+
CD3-CD56+CD45+

Или вот так вместе:
CD3-(CD16+CD56)+

Разницы нет. Но общая норма NK-клеток – это сумма обоих рецепторов CD16 и CD56.

Внимание! Не путать NK-лимфоциты с T-NK-клетками, фенотип которых CD3+CD16+CD56+. Это особая популяция, которая несет одновременно и рецептор CD3 Т-клеток и рецепторы CD16/56 натуральных киллеров. У истинных NK-клеток CD3 рецептор стоит со знаком минус «-», это значит что эти клетки его не имеют.

Повторюсь, что далеко не во всех лабораториях в анализах клеточного иммунитета расписывают полный набор всех поверхностных антигенов. В большинстве случаев ограничиваются записью в таком виде CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ и т. д. Значит и проверка шла по одному рецептору. Хотя, использование CD45 и для локализации всей популяции лимфоцитов и др. антигенов является более корректным.

В обычном устаревшем классическом варианте фенотипирование выглядит так:

1) Т-лимфоциты CD3+ делятся на:
* Т-хелперы CD3+CD4+
* Т-киллеры CD3+CD8+
2) В-лимфоциты CD19+
3) NK-лимфоциты CD16+CD56+

источник

Одним из методов клинической диагностики является исследование крови способом иммунофенотипирования лимфоцитов. В его основе – реакция между антителами и антигенами, которая используется для определения типов клеток крови, взятых из образцов биологического материала – крови, лимфатических узлов или костного мозга.

Анализ проводится с использованием специальных маркеров или меток, которые присоединяются к антигенам клеток. С помощью лабораторного оборудования отслеживают маркеры, производят подсчет клеток крови. Знание количества каждой из них позволяет квалифицировать опухолевые заболевания, подтвердить диагноз пациенту с определением конкретного его типа, например: достоверно установить вид лимфомы, лейкоза. Такая точная диагностика позволяет сделать выбор наиболее эффективной схемы лечения.

Иммунофенотипирование – это исследование лимфоцитов, которое помогает увидеть клетки крови, распознать их принадлежность к определенному виду. Исследование проводят с использованием современного диагностического оборудования – цитофлюориметров или особых микроскопов, способных опознавать люминесцирующие составляющие, которые помогают различать разновидности люминесцирующих кровяных телец, вести точный их подсчет в каждой пробе. Оборудование позволяет опознать каждую из меток. Маркирование клеток – это добавление в пробу антикоагулянта (реагент К2ЭДТА).

Забор образца для анализа производится из вены в области локтевого сустава. Для точного результата пациент должен соблюсти условия – проба берется натощак в утреннее время. В некоторых случаях допускается легкий прием пищи за 4 часа до процедуры, пациенту можно выпить небольшое количество обычной воды. Занятия спортом накануне диагностики или прием алкоголя запрещен, нарушение запрета приводит к искаженным результатам анализа. Повышенная психоэмоциональная нагрузка недопустима.

Для взятия крови специалист использует вакуумную пробирку. Ее применение позволяет достичь точного результата исследования, снизить болевые ощущения, точно произвести соотношение биологического материала и реагента.

После того, как образец поместили в пробирку, лаборант перемещает взятую пробу с антикоагулянтом, для этого требуется 10 раз медленно перевернуть емкость.

Для хранения и транспортировки материала для анализа требуется соблюдение условий: температурного режима при хранении образца от 18 до 23°С, сохранения положения пробирки – вертикально. Срок ожидания результатов не превышает 24 часов от взятия пробы. Время проведения исследования – 4 часа.

Сбор биоматериала для анализа

В ходе проведения исследования специалисты клинической лаборатории отслеживают показатели в периферической крови пациента, возможные поражения. На бланк анализа заносят показатели:

1. Абсолютное количество лимфоцитов, имеющих здоровое округлое ядро без патологий.
2. Содержание Т-клеточных лимфоцитов – ядро этого вида кровяных телец образуется и созревает в тимусе или вилочковой железе. Обеспечивает иммунную реакцию организма в определенных условиях, осуществляет контроль над гуморальным ответом организма – работой В-лимфоцитов, которые образовывают антитела. Обозначают ядро Т-клеточного лимфоцита как CD3+.
3. Количественное значение Т-хеплеров (ядро обозначается CD3+CD4+) – разновидности Т-лимфоцитов, оптимальное количество которых в крови способствуют усилению иммунного ответа организма на поражение чужеродным антигеном, их 2 типа. Т-клеточный хелпер первого типа является «защитником» от опухолевых новообразований, вирусных агентов, участвует в защитных воспалительных реакциях. Второй Т-клеточный тип обеспечивает взаимосвязь с гуморальным иммунитетом, участвует в выработке иммуноглобулина Е – веществе, воздействующим на агрессивные аллергены внешней среды, смягчает поражение ими.
4. Количество Т-цитотоксических лимфоцитов, ядро которых принято обозначать как CD3+CD8+. Такие лимфоциты распознают поражение клеток собственного организма и проводят их лизис или растворение. Таким способом организм борется с опухолевыми тканями, с поражением бактериями, которые паразитируют на клеточном уровне. Ядро Т-цитотоксического лимфоцита – важный компонент иммунитета, направленного на уничтожение вирусов.
5. В-лимфоциты, обозначаемые символами СD19+, вырабатывают активные вещества (антитела), действие которых направлено на поддержание гуморального иммунитета.
6. Количество ЕК-клеток, их ядро обозначается как CD3-CD16+CD56+. Их называют естественными, или натуральными, киллерами. Такое название определяет их неиммунная цитологическая активность, которая направлена на клетки-мишени, имеющие неопластические изменения.
7. Т-ЕК (ЕКТ) – клетки, ядро которых имеет естественную киллерную активность, защищают от поражения клеток, имеющих качества и признаки Т-лимфоцитов.
8. Иммунорегуляторный индекс, который показывает соотношение Т-хелперов и Т-цитотоксических клеток в крови, обозначается в анализе в виде соотношения CD3+CD4+/CD3+CD8+.

Фенотипирование видов лимфоцитов назначают для диагностики ряда заболеваний. Иммунологи назначают исследование, если имеются основания заподозрить одни из них или при наличии «ярких» признаков других. Например: расшифровка количества лимфоцитов с определенным фенотипом понадобится при:

• инфекционных заболеваниях, поражении хронического характера или если болезнь имеет затяжной характер;
• аллергических реакциях организма;
• проявлении устойчивых признаков и симптомов, указывающих на иммунодефицит врожденного или приобретенного свойства;
• подозрении на опухолевые образования доброкачественной или злокачественной природы;
• заболеваниях аутоиммунного типа, спровоцированных расстройством защитной системы, поражением собственного организма;

Диагностика периферической крови требуется в других случаях. Ее назначат перед серьезным оперативным вмешательством, которое требуется больному в плановом порядке. При иммунофенотипировании врач узнает все процессы иммунного характера, происходящие у конкретного больного, что позволяет скорректировать защитные процессы, избежать клеточного поражения, и нормализовать их работу. Большое значение для врача имеют показатели различных видов кровяных телец, Т-клеточный состав крови в послеоперационный период, особенно в случаях с развитием патологических процессов.

Метод применяют и для оценки состояния человека, которому требуется трансплантация органов или проведена операция – анализ на иммунофенотипирование проведут на подготовительном этапе и во время послеоперационного восстановления, чтобы предупредить поражение и отторжение органа. Направление на анализ получают пациенты, лимфоциты которых могут изменить качественный и количественный состав из-за лечения заболеваний медикаментами определенных групп – иммуномодуляторами, иммунодепрессантами или цитостатиками.

Нормы и референсные значения содержания в крови частиц определенного вида зависят от возраста пациента. Врачи для оценки показателей используют специальные таблицы, в которых указаны оптимальные значения, пределы отклонений.

Результат анализа покажет отклонение от нормы по количеству Т-клеточных лимфоцитов. Повышение их количества свидетельствует об иммунном воспалении, поражении или гиперактивности защитных процессов пациента. Такое превышение нормы вызывают заболевания – лимфолейкоз (острая и хроническая стадии), ряд вирусных и бактериальных инфекций в начале развития болезни. Увеличение Т-лимфоцитов возможно при изменении характера заболевания, переход его в хроническую форму.

Если у обследуемого абсолютное число Т-клеточных лимфоцитов снижено, говорят о развитии иммунологического паралича. Он сопровождает воспалительный процессы, может указывать на развитие злокачественных опухолевых новообразований. Такой показатель выявляется, если больная сердечная мышца – миокард, при некоторых сложных травмах, его снижение вызывает курение.

Увеличение числа В-лимфоцитов сигнализирует о поражении организма воспалительным процессом, развивающимся в острой или хронической стадии. Его природа – аллергического, аутоиммунного или инфекционного характера. Эти лимфоциты увеличиваются из-за В-лимфолейкоза, бронхиальной астмы, муковисцидоза, больной печени и при хронических патологиях. Увеличенные показатели по В-лимфоцитам в анализе отражают восстановление после инфекций, перенесенных в острой и тяжелой форме.

Если число В-лимфоцитов не соответствует нижним пределам нормы, при проведении дополнительной диагностики врач подтвердит пациенту развитие опухолевых новообразований, острые вирусные инфекции или инфекции бактериального типа, развитие очагов воспаления в организме больного.

Повышенному уровню естественных киллеров способствуют патологические процессы, связанные с:

• запуском онкологических процессов;
• тяжелым течением воспалительного процесса, воспалительные заболевания в хронической стадии;
• с избыточной выработкой антигенов, борющихся с бактериальным или вирусным процессом.

Содержание в клетках крови естественных киллеров может быть снижено из-за повышения уровня в крови Т-лимфоцитов и связано с процессами, вызывающими такое повышение.

Если значение показателя CD8+ – в превышающих норму цифрах, закономерно заподозрить опухолевое заболевание, вирусный процесс в активной стадии (при развитии вирусной, грибковой или внутриклеточной инфекции, заболеваний подобного типа).

Сниженные значения Т-цитотоксических лимфоцитов в результатах анализа предупреждают о процессах, развивающихся на фоне аутоиммунных болезней. Такой процесс подтверждает атаку аллергенов, развитие аллергии на момент обследования.

Как действует ядро зрелого Т-цитотоксического лимфоцита

Повышение содержание Т-хеплеров свидетельствует об остром воспалительном процессе в активной стадии. Иммунное воспаление отражает увеличение Т-хеплеров первого типа, рост показателя по второму типу определяет наличие воспалительного процесса аллергической природы. Обострение аутоиммунной патологии определяется, если Т-хеплеры обоих типов увеличены.

Снижение Т-хелперов происходит из-за состояния иммунологического паралича, выявляет иммунодефицит вторичного типа у больного.

Количество Т-ЕК клеток повышается, увеличиваясь по отношению к референсным значениям их содержания в крови по причине:

• наличия хронических воспалительных процессов с длительным периодом воздействия на иммунную систему;
• воспалительных процессов, сопровождаемых тяжелым протеканием, осложнениями при лечении;
• сохранение инфекции в активном состоянии в клетках организма на протяжении значительного периода времени.

Сниженные лимфоциты такого вида не отображают значимые процессы, не являются важными для диагностики.

Использование метода иммунофенотипирования лимфоцитов позволяет проводить диагностику патологий, заподозрить развитие опасных, опухолевых болезней. Метод является безопасным для обследуемого, не требует значительных финансовых затрат.

источник

• О Центре
  • Дирекция
  • История
  • Все руководители Центра
    • Богданов А. А. (Малиновский)
    • Богомолец А. А.
    • Багдасаров (Багдасарян) А. А.
    • Киселёв А. Е.
    • Гаврилов О. К.
    • Федотенков А. Г.
    • Воробьёв А. И.
    • Савченко В. Г.
  • Наши награды
  • Выдающиеся гематологи и трансфузиологии, работавшие в Центре
  • Официальная информация
  • Печатные издания Центра
    • «Гематология и трансфузиология»
  • Нормативные документы
  • Политика конфиденциальности
  • Вакансии
• Наука
  • Подразделения
  • Клинические апробации
  • Результаты научной деятельности
    • Темы НИР
    • Результаты НИР
    • Патенты и авторские свидетельства
    • Гранты и договоры
    • Информационно-аналитическая система результатов научной деятельности
  • Научные мероприятия, конференции, конгрессы
    • Конференции
    • Конгрессы
  • Диссертационные советы
    • Диссертационные советы на базе ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
    • Нормативные документы
    • Объявления о защите
    • Документы для защиты
  • Правила публикаций и электронные журналы
    • Правила для авторов публикаций
      • Правила «Издательского дома «Практика»
      • Правила издательства «Медицина»
      • Правила издательства «Медиа Сфера»
    • Электронные журналы
  • Аттестация научных работников
  • Конкурсы на замещение должностей научных сотрудников
• Клиника
  • Подразделения
  • Практикующему врачу
    • Клинические рекомендации
    • Российский реестр лекарственных препаратов, применяемых у больных с нарушениями порфиринового обмена
      • О реестре
    • Порядки оказания медицинской помощи
    • Стандарты медицинской помощи
  • Пациенту
    • Правила записи на прием
    • Сведения о медицинских работниках
    • Порядок получения помощи пациентам с нарушениями свертывания крови
    • Высокотехнологичная медицинская помощь
    • Порядок получения талона-направления на высокотехнологичную медицинскую помощь
    • Правила и сроки госпитализации
    • Правила посещения пациентов стационара
    • Прайс. Платные медицинские услуги
    • Правила пересылки биоматериалов для лабораторных исследований
    • Расписание работы патологоанатомического отделения
    • Правила подготовки к диагностическим исследованиям
    • Пациентам «листа ожидания» почечного трансплантата
    • Часто задаваемые вопросы
    • Территориальная программа государственных гарантий бесплатного оказания гражданам медицинской помощи
    • Правила внутреннего распорядка для пациентов и посетителей
    • Страховые компании, с которыми работает Центр
    • Оценка качества оказания медицинских услуг
    • Гематологический глоссарий
• Трансфузиология и донорство крови
  • Подразделения
  • Современная научно-практическая деятельность в трансфузиологии
  • Отзывы доноров и пациентов
  • Донору
    • Зачем сдавать кровь
    • Кто может стать донором
    • Противопоказания к донорству
    • Как стать донором
      • Процесс сдачи крови
      • Почетный донор России
      • Льготы для доноров
    • Виды донорства
      • Донорство цельной крови
      • Донорство плазмы
      • Донорство тромбоцитов
      • Донорство гемопоэтических стволовых клеток
    • Что должен знать донор?
      • Питание донора
      • Периодичность донации
      • Безопасность донации
      • Карантинизация плазмы
    • Справка о количестве кроводач, плазмодач
    • Адресное донорство
    • Использование донорской крови
    • Часто задаваемые вопросы
    • Словарь донора
    • Кодекс донора
    • Новости для доноров
    • Контакты
• Телемедицина
• Образование
  • Сведения об образовательной организации
  • Аспирантура
  • Ординатура
  • Приемная комиссия
    • Приемная комиссия 2016
    • Приемная комиссия 2017
    • Приемная комиссия 2018
    • Приемная комиссия 2019
  • Нормативные документы
  • Электронная информационно-образовательная среда
    • Информационно-библиотечные ресурсы
    • Образовательный портал аспирантуры и ординатуры
    • Портал инновационного дополнительного образования
    • Образовательные мероприятия
  • Дополнительное образование
    • Непрерывное медицинское образование
    • Дополнительное профессиональное образование
• Научно-производственная деятельность
  • Подразделения
  • Научная деятельность по разработке лекарственных препаратов
  • Производимые лекарственные препараты
    • Информация по лекарственному препарату Агемфил A, фактор свертывания VIII
    • Информация по лекарственному препарату Агемфил B, фактор свертывания IX
• Проекты документов для обсуждения
  • Проект
  • Обсуждение в ФГБУ НМИЦ гематологии
• Новости
• Отзывы
• СМИ о нас
• Межрегиональное взаимодействие

Заведующий лабораторией — Гальцева Ирина Владимировна (на фото справа).

Лаборатория была организована 1 марта 2013 г.

Иммунофенотипирование клеток, осуществляемое с помощью проточной цитофлуориметрии, широко применяется в клинико-диагностических и научных исследованиях. Отличительной чертой данного анализа является возможность определения фенотипа единичных клеток. Метод основан на применении моноклональных антител к антигенам дифференцировки, сочетание которых позволяет выявлять разнообразные клеточные популяции. Совокупность антигенов на поверхности клетки называется иммунофенотипом. Проточная цитофлуориметрия за последние 20 лет стала неотъемлемым исследованием в диагностике различных гематологических заболеваний, в частности лимфом, лейкозов, плазмоклеточных неопластических заболеваний, пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ) и др. На основании данных об иммунофенотипе и анализе большого количества клеток проточная цитофлуориметрия позволяет находить крайне редко встречающиеся клеточные субпопуляции.

Коллектив лаборатории. Гальцева Ирина Владимировна (сидит) — заведующий лабораторией. Стоят: Капранов Н. М., Давыдова Ю. О.

Сотрудники лаборатории являются высококвалифицированными специалистами в области проточной цитофлуориметрии, прошли обучение не только в клинических центрах России, но и в зарубежных университетах и имеют сертификаты по основам проточной цитометрии. Прошли обучение в международной школе цитометрии в г. Женева (Швейцария) и получили сертификат, подтверждающий адекватность анализа и разрешающий проводить исследование ПНГ-клона (Россия, Америка). Также получили практический опыт работы по диагностике и анализу острых лейкозов и лимфом в Гентском университете в Бельгии. Сотрудники лаборатории регулярно посещают международные конференции и обмениваются знаниями с зарубежными и российскими коллегами.

Лаборатория тесно сотрудничает с научно-клиническими подразделениями НМИЦ гематологии. Основным направлением работы лаборатории является стандартизация и применение метода проточной цитофлуориметрии для диагностики минимальной остаточной болезни (МОБ) при таких заболеваниях, как множественная миелома, острые лимфобластные и миелобластные лейкозы.

В лаборатории осуществляют подсчёт гемопоэтических CD34-позитивных стволовых клеток на рутинной основе в образцах периферической крови, костного мозга и продуктах лейкоцитафереза согласно международному протоколу ISHAGE (International Society of Hematotherapy and Graft Engineering).

Врач КЛД Давыдова Юлия Олеговна.

Диагностика плазмоклеточных неоплазий и поиск МОБ при множественной миеломе проводится согласно последним мировым рекомендациям по стандартизации исследований, опубликованным в 2016 году (Stetler—Stevenson, Paiva, Rawstron). Мониторинг МОБ при острых В- и Т-линейных лимфобластных лейкозах проводится в рамках протоколов ОЛЛ-2009 и ОЛЛ-2016. Проводится оптимизация и отработка методики поиска МОБ при острых миелобластных лейкозах. Впервые в России в лаборатории начато применение и интеграция иммунофенотипического исследования в схему диагностики миелодиспластических синдромов. Данный анализ проводится в соответствии с европейскими рекомендациями сообщества LeukemiaNet.

Медицинский физик Капранов Николай Михайлович.

В лаборатории проводятся многочисленные исследования, которые ложатся в основу диссертационных работ врачей-гематологов и трансфузиологов. С участием сотрудников лаборатории опубликовано большое количество печатных работ и стендовые доклады на международных симпозиумах. В сферу научных интересов входят исследования субпопуляционого состава крови и костного мозга у больных после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток, в частности Т-регуляторных клеток; изучение циркулирующих эндотелиальных клеток у больных после трансплантации; исследование экспрессии ангиотензин-превращающего фермента на мобилизованных стволовых клетках крови; изучение динамики ПНГ-клона у больных апластической анемией; проводится изучение элементов иммунологического синапса при лимфомах; фиксированных антитромбоцитарных антител у больных с множественными трансфузиями. На базе лаборатории проведено исследование активационных маркеров тромбоцитов в заготовленных при различных условиях тромбоконцентратах доноров, оценивается динамика изменения количества циркулирующих CD34+ клеток в периферической крови у пациентов после проведения спленэктомии, оцениваются различные свойства мультипотентных мезенхимных стромальных клеток, использующихся для профилактики реакции трансплантат против хозяина после трансплантации аллогенных стволовых клеток, оценивается динамика изменения субпопуляционного состава лимфоцитов крови у больных острыми В-лимфобластными лейкозами, получающих таргетную терапию и пациентов после выполнения трансплантации аллогенной почки.

Давыдова Юлия Олеговна — врач клинической лабораторной диагностики.

Капранов Николай Михайлович — медицинский физик.

источник

В данном варианте исследования, помимо оценки основных субпопуляций лимфоцитов (см. Иммунологическое обследование первичное), уровня циркулирующих иммунных комплексов, основных классов иммуноглобулинов периферической крови, упор делается на расширенный анализ NK-клеток (Natural killers – «натуральные киллеры»), а также оценку активированных Т-лимфоцитов (CD3 + HLA-DR + CD45 + ) и активированных цитотоксических лимфоцитов (CD8 + HLA-DR + CD45 + ), отвечающих за противовирусный иммунитет. Анализ вышеперечисленных популяций клеток поможет понять, адекватно ли иммунная система реагирует на вирусную инфекцию и нуждается ли пациент в иммуностимулирующей терапии.

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

Набор тестов:

Иммунограмма, иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии.

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.

Проточная цитометрия, иммунотурбидиметрия, ИФА..

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
• Полностью исключить прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием (по согласованию с врачом).
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

В современном понимании иммунный статус человека – это совокупность лабораторных показателей, характеризующих ко­личественную и функциональную активность клеток иммунной системы в данный момент времени. Оценка иммунного статуса проводится с помощью иммунологического лабораторного обследования – иммунограммы. Иммунограмма крови не отража­ет избирательно состояние патологически измененного органа или системы, но позволяет оценить иммунную систему в целом (сум­марный эффект изменения активности иммунной системы в ответ на чужеродный антиген).

Определение клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлюориметрии.

Иммунофенотипирование – это характеристика клеток, полученная при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития.

CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно меченные моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии рассчитать содержание лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлюориметрии лежит фотометрическое и флюоресцентное измерение отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов –

• Т-лимфоциты (CD3 +CD19 — ),
• Т-хелперы/индукторы (CD3 +CD4 + CD45 + ),
• Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3 +CD8 + CD45 + ),
• истинные натуральные «киллеры» (NK-клетки) (CD3 —CD56 +CD45 + ),
• В-лимфоциты (CD19 +CD3 — ), –

но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

• Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3 +CD56 +CD45 + ),
• NK-клетки цитолитические (CD3 —CD16 +(orhigh)CD56dimCD45 + ),
• NK-клетки цитокинпродуцирующие (CD3 —CD16 -(orlow)CD56brightCD45 + ),
• NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3 — СD8 + CD45 + ),
• активированные В-лимфоциты (CD3 —CD25 + CD45 + ),
• активированные Т-лимфоциты (CD3 +HLA—DR + CD45 + ) и активированные цитотоксические лимфоциты (CD8 +HLA—DR + CD45 + ),
• В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3 —HLA—DR + CD45 + ),
• активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3 +CD25 + CD45 + ),
• регуляторные Т-хелперные клетки (CD4 +CD25brightCD127negCD45 + ), выполняющие иммуносупрессорную функцию.

Такое всестороннее изучение клеточного состава лимфоцитов в совокупности с результатами других тестов, входящих в состав исследования, позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений. Они про­водятся для уточнения степени и глубины поражения иммунной системы и подбора препарата для проведения последующей адек­ватной иммунокорригирующей терапии, оценки эффективности проводимого лечения, определения прогноза течения заболевания.

Когда назначается исследование?

Исследование рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска с инфекционным иммунопатологическим синдромом:

• частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов: гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, вирусные пневмонии с тенденцией к рецидивированию;
• урогенитальные инфекции;
• рецидивирующий герпес различной локализации;
• гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
• длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
• генерализованные инфекции: сепсис, гнойные менингиты и т.д.

Уровень различных клеточных популяций лимфоцитов может повышаться или понижаться при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

источник