С развитием таких смежных наук, как генетика, молекулярная биология, химия, а также ростом технического прогресса, современная медицина может похвастаться инновационными методами диагностики самых разных заболеваний человека. Они отличаются высокой точностью результатов и безопасностью проведения. Одним из таких способов выявления проблем со здоровьем является иммуноферментный анализ. Он приобрел широкую популярность в последнее десятилетие и завоевал репутацию высокоэффективного, надежного и безопасного для пациента метода обнаружения заболеваний еще до появления внешних симптомов. Мы доступно объясним, что представляет собой такой вид диагностики, каков принцип его действия, отметим достоинства, сориентируем в стоимости такого анализа.
Для того чтобы понять, как, благодаря иммуноферментному анализу, лаборанты диагностируют различные заболевания, необходимо разобраться в физиологическом процессе, который происходит в организме во время заражения инфекциями. Когда патогенный микроорганизм попадает в кровоток, иммунная система человека демонстрирует защитную реакцию в виде выделения определенных веществ – антител. Они связываются с клеткой и анализируют, является ли она частью организма или внедрилась извне. Если иммунная система определила, что клетка чужеродная, то количество антител начинает увеличиваться с целью борьбы с патогенным микроорганизмом.
Антитела бывают разных видов, имеют свои особенности. Одни вещества появляются непосредственно в период инфицирования, другие остаются в течение всей жизни в организме человека и именно благодаря им вырабатывается стойкий иммунитет к конкретному заболеванию. Рзделяют белковые структуры на такие виды: A, D, E, M, G. В медицине антитела называют иммуноглобулинами. Поэтому принято обозначать показатели этих веществ латинскими буквами Ig.
Иммуноферментный анализ (ИФА) основан именно на данных медицинских знаний. С помощью специальных антигенов в лабораторных условиях можно определить наличие или отсутствие тех или иных антител в биологическом материале. По результатам такого анализа врач может поставить диагноз, а также определить не только наличие патологии, но и давность ее происхождения, выявить уровень опасности для пациента. При иммуноферментном анализе чаще других исследуют наличие антител групп M и G.
На самом деле иммуноферментный анализ не является инновацией современного общества. Его изобрели еще в 80-х годах. Но для проведения таких исследований требовалась громоздкая дорогостоящая аппаратура. Поэтому использовали такой метод только в специально оснащенных научных лабораториях: его применяли для типирования клеток и тканей. А вот широкого распространения в диагностической медицине он тогда не получил, использовать его было технически сложно и крайне затратно. Лишь с развитием техники и изобретением биополимерных материалов ИФА усовершенствовали. После чего метод стал популяризироваться и завоевывать доверие в медицинских кругах.
Как уже было сказано выше, данный метод подразумевает обнаружение в биоматериале — крови, околоплодных водах, стекловидном теле или спинномозговой жидкости — определенных групп иммуноглобулинов.
Различают исследования без нанесения антигена на поверхность и твердофазный иммуноферментный анализ, который предполагает проведение реакции в специальных лунках. Последний метод имеет большую чувствительность и надежность, поэтому именно таким образом проводят анализ в медицинских лабораториях для обнаружения заболеваний человека.
В зависимости от предполагаемого заболевания, из набора для иммуноферментного анализа используют необходимый антиген, который во время химической реакции при наличии инфекции свяжется с патогенной флорой. Этот процесс называется проведением иммунной реакции.
Затем для того, чтобы визуально определить результат исследования, проводят ферментативную фазу ИФА. Она предполагает окрашивание материала с помощью специальных реагентов. В данном исследовании применяют такие ферменты, как щелочная фосфатаза, пероксидаза и авидин. В зависимости от получившегося цвета в процессе проведения химических реакций и определяют результат иммуноферментного анализа.
Анализ ферментативной фазы диагностики проводится с помощью метода, который имеет название «колориметрия». Дело в том, что не только цвет материала дает информацию об инфекции, но и получившаяся в результате химических реакций плотность окраса. Именно этот показатель определяет концентрацию патогенного микроорганизма. Если по старинке используют ручной метод диагностики, то для определения указанных показателей выстраивают специальный калибровочный график.
В современных лабораториях сегодня редко применяют ручной метод. Для проведения анализа ИФА используют специальный аппарат – колориметр, в котором вручную задаются лишь параметры исследования, а затем всю работу, включая построение графика, прибор проводит автоматически.
Различают прямой и непрямой методы иммуноферментного анализа. Первый вид занимает меньше времени, так как имеет лишь 3 стадии выполнения. Сперва к антигенам исследуемого материала, помещенным в специальные лунки, добавляют специфические антитела. Затем удаляют избыточное их количество и проводят ферментативную фазу анализа, получая таким образом результат.
Непрямой метод применяется намного чаще, так как имеет более высокую чувствительность по сравнению с прямым способом диагностики. При его проведении используется двойное исследование. А именно — сначала антиген связывают с немеченым антителом, а затем с меченым. Такой процесс занимает больше времени, но и результат является наиболее точным.
Наборы для иммуноферментного анализа выпускают разные производители, в самых разных комплектациях. В России признанной является компания «Союз медико-биологический». Данный производитель выпускает наборы реагентов для исследования методом ИФА практически всех распространенных в наших широтах инфекций, поддающихся анализу таким способом. Кроме непосредственно самих реагентов в комплекты входят дополнительные материалы, что обеспечивает безопасность, удобство и быстроту выполнения анализа. Кроме того, химические субстанции окрашены в разные цвета, что снижает вероятность ошибки в выборе реагента лаборантом.
Отличаются химико-биологические наборы относительной доступностью, что прямо влияет на распространение и доступность иммуноферментного анализа для населения.
Несомненно, иммуноферментный анализ имеет ряд преимуществ по сравнению с другими диагностическими методиками:
- С его помощью можно определить даже незначительное наличие патогенных организмов, что говорит о высокой чувствительности теста.
- Возможность обнаружения заболевания на самых ранних стадиях, что значительно повышает шанс на благополучное излечение.
- Простота и удобство взятия биологического материала. Такой анализ проводят как в частных лабораториях, так и в государственных. При необходимости материал может взять медсестра у пациента дома.
- Для анализа требуется совсем незначительный объем биоматериала.
- Быстрое получение результата. Современное медицинское оборудование позволяет выполнить анализ в течение суток.
- Возможность обнаружения скрытых бессимптомных форм инфекции.
- Доступность исследования.
- При необходимости возможно проведение массовых обследований данным методом.
- Существует возможность отслеживания протекания заболевания и эффективности назначенного лечения, так как можно проводить анализ методом ИФА многократно абсолютно безопасно для пациента.
- Автоматизация этапов проведения анализа, что исключает человеческий фактор и повышает достоверность результатов.
- Реагенты для проведения ИФА хранятся достаточно долго – около года.
- Проведение анализа возможно при колебаниях температуры окружающей среды.
Антитела группы М вырабатываются иммунной системой сразу после обнаружения чужеродного антигена. Следовательно, если иммуноферментный анализ завершился обнаружением таких веществ в биоматериале, то это свидетельствует об острой стадии протекания заболевания, первичном инфицировании. Иммуноглобулины группы М могут находиться в организме до месяца в зависимости от вида заражения. Затем их количество уменьшается до полного исчезновения.
На смену иммуноглобулинам группы М появляются белковые структуры вида G. Эти вещества вырабатывают стойкий, в большинстве случаев пожизненный иммунитет к заболеванию. Определение белковой структуры IgG в исследуемом материале указывает на то, что организм ранее встречался с возбудителем и имеет защитную реакцию от повторного заражения.
Иммуноферментный анализ крови применяют для определения разных инфекционных заболеваний, гормональных состояний, делают аллергопробы. А именно:
- определяют уровень гормонов щитовидной железы;
- показатели репродуктивной гормональной панели;
- онкомаркеры;
- обнаруживают возбудителей инфекционных заболеваний, таких как цитомегаловирус, гепатит, токсоплазма, краснуха, корь, туберкулез, хламидия, сифилис, микоплазма, уреплазма, кандида, лямблии и даже ВИЧ;
- диагностируют аутоиммунные заболевания. В том числе часто используют для исследования гормонов щитовидной железы иммуноферментный анализ: ТТГ, ТГ, Т3 и Т4.
Кроме диагностических целей, метод иммуноферментного анализа применяют в научно-исследовательской медицинской деятельности.
В большинстве случаев для анализа рекомендуется забор венозной крови. После обработки и подготовки материала для исследования проводят иммуноферментный анализ сыворотки крови или плазмы.
Особого внимания требует исследование гормональной панели, так как в данном случае крайне важно учитывать особенности забора материала. Например, диагностика большинства гормонов репродуктивной системы женщины требует взятия венозной крови в определенные дни менструального цикла. На ряд других гормонов действуют внешние факторы: сезонность, время суток, психологическое состояние пациента и многое другое. Не учитывая специфические факторы, можно получить ложный результат, что приведет к обострению заболевания или неправильно назначенному лечению.
В некоторых, чаще осложненных случаях, для анализа могут понадобиться спинномозговая жидкость, стекловидное тело или околоплодные воды беременной женщины. Процедуры по забору этих биологических материалов несут определенный риск, имеют противопоказания и восстановительный период. Поэтому следует проводить только по показаниям врача и под его профессиональным наблюдением такой иммуноферментный анализ. Расшифровка в таком случае требует специальных медицинских знаний и может занять некоторое время.
Иммуноферментный анализ следует проводить, придерживаясь всех рекомендаций, так как на результаты исследования влияют внешние факторы. Например, важно сдавать венозную кровь натощак утром (до 11 часов). За 2 недели до предполагаемого забора материала нужно прекратить прием каких-либо лекарственных препаратов, особенно гормональных. Несколько дней перед исследованием следует воздержаться от употребления алкоголя и жирной пищи, а также исключить физическую нагрузку, переживания и стрессы.
Расшифровка результатов иммуноферментного анализа требует специальных знаний об особенностях белковых структур (антител), о которых было рассказано выше (IgG и IgM). В соответствии с этими данными анализируют показатели исследований. В таблице описаны варианты, которые могут быть получены при проведении анализа:
| Иммуноглобулины M | Иммуноглобулины G | Предполагаемая расшифровка |
| отрицательно | отрицательно | Организм никогда не сталкивался с данной инфекцией. Нет ни возбудителя, ни антител к нему. |
| отрицательно | положительно | Организм выработал стойкий иммунитет к инфекции. |
| положительно | отрицательно | Острая форма инфицирования. |
| положительно | положительно | Вероятнее всего первичное заражение, но требуются дополнительные диагностические исследования. |
Анализируя представленную таблицу, можно сделать вывод, что в большинстве случаев для подтверждения диагноза потребуются дополнительные исследования. Не может дать однозначного ответа один лишь иммуноферментный анализ. Норма в данном случае не имеет четких границ: обнаруженные белки группы G указывают лишь на то, что организм ранее подвергался инфицированию определяемым возбудителем. Но этот же результат может говорить и о наличии острой фазы — важно сопоставить множество факторов и показателей для того, чтобы поставить правильный диагноз.
ИФА является точным на 90%. Все же существуют факторы риска, которые влияют на искажение результата диагностики: неисправность аппаратуры, неправильный забор материала, его хранение и транспортировка, неучет иных внешних факторов.
Не рекомендуется проводить диагностику после переливания крови, гемолиза, хирургических вмешательств, взятия биопсии или пункции биологического материала — это также может повлиять на результаты показателей.
Стоимость диагностического исследования имеет большой диапазон и зависит от вида анализа и определяемого антигена, так как исходя из этих факторов рассчитывается стоимость реагентных наборов и определяется сложность проведения анализа. Но в большинстве случае является доступным многим пациентам иммуноферментный анализ. Цена его составляет от 300 р. до 2000 р.
ИФА – доступный, быстрый и высокоэффективный метод диагностики большого перечня заболеваний. Но расшифровкой результатов и постановкой диагноза имеет право заниматься только квалифицированный медицинский работник.
источник
ИФА анализ — что это такое, расшифровка иммуноферментного анализа крови на паразитов, сифилис, ВИЧ, туберкулез. Норма в таблице, результаты
Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.
Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.
ИФА анализ — это такое лабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.
Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.
ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.
Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.
Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.
Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.
Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:
| Кол-во в организме | Функции | Период полураспада (дней) | Значение | |
| G | 70% | Формируют пассивный иммунитет у новорожденного; необходимы для иммунного ответа улучшают фагоцитоз, | 21-24 | обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях |
| М | 5-10% | нужны для активации фагоцитоза, способны связать 5 молекул антигена, | 5 | Обеспечивает первичную иммунную реакцию |
| А | 10-15 | Нейтрализуют токсины и вирусы нужны для формирования раннего иммунитета Образование местного иммунитета | 4-5 | Защита слизистых оболочек |
| Е | 0,2% | вызывают аллергию и анафилаксию активируют тканевые базофилы | 2 | Защита от паразитов |
| D | 0,2% | задействованы в выработке лимфоцитов, необходим как мембранный рецептор для антигенов; | 3 | Их роль малоизучена |
Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.
ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.
Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:
- вирусный гепатит;
- ВИЧ-инфекция;
- цитомегаловирус,
- вирус Эпштейна-Барр,
- вирус герпеса,
- корь
- краснуха,
- туберкулез,
- сальмонеллёз,
- дизентерия,
- клещевой энцефалит,
- бактерии хеликобактер,
- боррелиоз,
- столбняк,
- сифилис,
- дифтерия,
- лептоспироз,
- хламидиоза,
- уреаплазмоз,
- микоплазмоз,
- коклюш.
Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:
- плоскими червями
- аскаридами
- гистолическими амебами,
- печеночными тремадами,
- лямблиями,
- токсоплазмами,
- трихинеллами,
- двуусткой,
- цестодозами.
ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.
При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:
- за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
- не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
- стараться не допускать стрессов,
Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.
Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.
Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.
В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.
Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.
Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки.
Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.
Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С.
После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.
Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:
- Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
- Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
- Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.
В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.
Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.
При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.
Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.
После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей.
При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.
Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.
Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.
Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.
Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.
На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.
Возможны различные интерпретации результатов:
- IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
- IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
- IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
- IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
- IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
- IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.
Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:
- вирусный гепатит;
- цитомегаловирус;
- герпес;
- ветряная оспа;
- хламидиозом;
- стафилококковая или стрептококковая инфекция.
Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:
| Название гормона | Пол | Норма | |
| 1 | тиреоглобулин | м/ж | До 70 МЕ/мл |
| 2 | тироксин | м/ж | 64-146 нмоль/л |
| 3 | трийодтиронин | м/ж | 1,8-2,8 нмоль/л |
| 4 | Свободный тироксин | м/ж | 11-25 пмоль/л |
| 5 | Свободный трийодритонин | м/ж | 4,49-9,3 пмоль/л |
| 6 | Тестостерон, дегидротестостерон | Ж | 0,5-10 мЕд/л |
ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.
ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.
Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:
- иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
- IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
- IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.
В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.
Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).
В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).
При получении положительных проб далее следует:
- если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
- повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
- при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.
Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга.
ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.
ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.
| Цитомегаловирус | IgM обнаруживаются через 30-45 дней после заражения, либо во время реактивации инфекции в течение 4-6 месяцев | источник Иммуноферментный анализ крови является распространенным методом выявления различных патологий. Результат анализа крови, расшифровка ИФА которого была интерпретирована врачом лабораторной диагностики, является достоверным в большинстве случаев. ИФА — современный диагностический метод, который применяется для диагностики инфекций, гормональных и иммунных нарушений, онкологических заболеваний в лабораторных условиях. Метод позволяет выявить антитела к инфекции уже на ранних сроках заболевания. Данный метод относится к непрямым диагностическим методам, так как он выявляет иммунный ответ организма. Среди преимуществ ИФА в сравнении с другими методами диагностики можно выделить высокий уровень технологичности, что уменьшает вероятность ошибок. Метод является высокочувствительным и применяется для диагностики заболеваний как у детей, так и у взрослых. Существует обширное количество различных модификаций ИФА.
Метод ИФА основывается на специфичности иммунохимических реакций, а также физико-химических закономерностях реакций комплексов антиген-антитело. Реакции производятся с участием специфических ферментов, которые являются метками для определения антител. В результате иммунохимической реакции строго определенные антитела связываются с соответствующими антигенами. Исследование крови методом иммуноферментного анализа почти исключает возможность получения ложноположительного результата. О положительном или отрицательном результате специалисты лабораторной диагностики судят исходя из того, произошло ли окрашивание раствора в ходе ферментативной индикации комплекса антиген-антитело. Если раствор окрасился, то произошло взаимодействие антигена с антителом, результат ИФА положителен. Исследование методом иммуноферментного анализа позволяет:
Анализ крови методом ИФА позволяет определить наличие следующих инфекций:
Метод применяется для выявления антигенов возбудителей ряда инфекций, а также для выявления антител различных классов. Большую популярность метод ИФА получил для выявления сифилиса, ВИЧ, вирусных гепатитов. Определять наличие и уровень антител в сыворотке крови с целью первичной диагностики ИППП не рекомендуется. В данном случае наличие антител в крови может быть лишь признаком того, что организм пациента контактировал с возбудителем инфекции в прошлом. Диагностика различных аутоиммунных заболеваний методом ИФА производится посредством исследования:
Специфические иммунные комплексы характерны для определенных аутоиммунных заболеваний. Например, антитела двуспиральной ДНК являются характерными для такого заболевания, как системная красная волчанка.
ПСА свидетельствует о наличии аденомы простаты и рака простаты. СА-125 — это онкомаркер злокачественной опухоли яичника. Значение повышается и при раковых опухолях матки, молочных желез, эндометрия. Чтобы обеспечить максимальную точность результатов, нужно следовать определенным правилам подготовки к исследованию. Анализ для лабораторной диагностики методом ИФА, как правило, сдается утром из локтевой вены. Сдавать кровь необходимо строго натощак. Кроме этого простого предписания, следует выполнять следующие рекомендации по подготовке:
Кроме того, за несколько дней до сдачи анализа рекомендуется придерживаться диеты. При этом из рациона исключить жирные продукты, жареную пищу. Перед анализом на вирусные гепатиты из рациона исключить не только жирное и жареное, но и цитрусовые, а также оранжевые овощи. Следует отметить, что на результаты определенного спектра гормональных исследований влияет такой фактор, как фаза менструального цикла. Необходимость сдавать анализ в ту или иную фазу менструального цикла следует заранее обговорить с лечащим врачом. В противном случае можно получить неожиданные показатели. Так, например, нормальный уровень лютеинизирующего полового гормона у женщин варьируется в зависимости от дня цикла:
Анализ позволяет установить наличие в организме антител различных классов. Существуют антитела 3 классов: Выработка этих антител происходит на различных стадиях заболевания. Самыми первыми после заражения в организме начинают вырабатываться антитела IgM. Их наличие является показателем болезни в любом случае. В организме здорового человека этот класс антител отсутствует.
Иммуноглобулины класса G, присутствующие в крови, говорят о том, что человек либо уже перенес заболевание, либо является носителем инфекции. Эти антитела начинают вырабатываться после антител класса М, при большинстве заболеваний на 3-4 неделю после заражения. Их присутствие в организме возможно в течение нескольких лет. А при некоторых болезнях (например, сифилисе) IgG присутствуют в крови пожизненно. Если в организме присутствуют IgA, необходимо как можно интенсивнее бороться с инфекцией. Антитела этого класса появляются лишь в случае хронического инфекционного заболевания. Исчезновение IgA говорит об уничтожении инфекции. Если анализ ИФА производится в детском возрасте до 1,5 лет, должна учитываться следующая особенность: кровь ребенка содержит IgG матери к различным инфекциям. Это совсем не означает, что ребенок болен. В таком случае это скорее норма. Наличие IgM является свидетельством внутриутробной инфекции либо инфекции, приобретенной уже после рождения. IgM матери не могут проникнуть в организм ребенка через плаценту. В таблице представлены возможные комбинации наличия или отсутствия в организме антител 3 классов и их интерпретации.
При расшифровке анализов (+) свидетельствует о положительном результате, а (-) говорит об обратном, то есть об отрицательном. Результат, показывающий наличие или отсутствие какого-либо вещества в организме, называется качественным. Он может быть дополнен количественным. Количественный результат отображает количественное содержание различных веществ в организме. Стоит отметить, что тест-системы имеют собственные, определенные изготовителем, референтные значения, которые характеризуют показатели. Превышения референтных значений, как правило, означают наличие тех или иных патологий в организме исследуемого. После получения результатов ИФА расшифровку полученных значений должен производить лечащий врач. Только он сможет произвести правильную оценку полученных результатов и определить стадию заболевания. источник Высокоточные методы анализа — неотъемлемая часть современной медицины и, в частности, диагностики. Доступные в наше время методы диагностики дают возможность своевременно выявить не только сам факт наличия, но и количество паразитов в организме пациента.
Сейчас, как правило, пациентам предлагается пройти всего один тест — иммуноферментный анализ. Иммуноферментный анализ — узкоспециализированный вид анализа, который проводится в условиях лаборатории. Анализ основан на реакции организма, обычно называемой «антиген-антитело». Метод анализа, основанный на данном показателе, даёт точность в 99%. Это самый точный из известных сейчас методов. В практике почти не было случаев, когда такой анализ выдавал ложные результаты. Этот метод позволяет выявить:
Достоверность результатов теста зависит от нескольких факторов:
Иммуноферментный анализ широко используется в диагностике самых разных заболеваний. Главная его ценность в том, что он позволяет с высокой точностью выявлять болезни, протекающие бессимптомно. Как известно, такие болезни нередко бывает проблематично обнаружить на ранней стадии и, соответственно, вовремя начать лечить. Какие заболевания диагностируют при помощи иммуноферментного анализа:
Данная процедура помогает выявить:
Собственно, процедура ИФА складывается из двух частей:
Суть принципа «антиген-антитело» заключается в том, что возбудитель заболевания или инородное тело, то есть антиген, поступает в организм постепенно вместе с источником заражения. Этот процесс вызывает так называемый иммунный ответ, предназначенный для защиты организма от инородных элементов. Проявления такой защиты зависят от самого антигена и от симптомов вызванной им болезни. Данная схема и получила название «антиген-антитело». Для большей достоверности диагностики вся процедура иммуноферментного анализа проводится только в лабораториях и медицинских центрах. С пробой крови взаимодействуют различные антигены и антитела. С целью выявления как вида, так и количества паразитов в организме пациента применяется иммуноглобулин классов «А» и «Е», который реагирует на паразитарные инвазии. Такой анализ должен выявить: Иммунная реакция показывает биологические связи в молекулах клеток микробов, на наличие которых и проводится анализ. Иммунная реакция как таковая — это только один из компонентов комплексной программы ИФА, второй же компонент — это ферментная реакция. Узнавание антигена происходит в процессе контакта клетки иммунной системы (иммуноцита) с чужеродной клеткой. Индивидуальные особенности антигенов служат для иммунной системы средством распознавания «свой-чужой». Фактически, антитело:
Передача полученной информации об антигене происходит на клеточном уровне. Связь разрушается, если клетка иммунная, если же нет — организм запускает естественную защитную реакцию. Современной науке известны 5 классов антител, иначе называемых иммуноглобулинами или белковыми структурами. Для обозначения антител используются латинские буквы: A, D, E, G и M. В результатах анализов эти обозначения выглядят так: В первую очередь необходимо подготовить специальные планшеты из полистирола, которые содержат 96 лунок. Перед анализом стенки каждой ячейки обрабатывают адсорбирующим антигеном. В обработанные ячейки капают сыворотку крови. Гомологичные антитела и антигены реагируют друг с другом, образуя прочные связи. Не прикрепившиеся тельца вымываются. Затем в лунки добавляются антитела иммуноглобулинов вместе с помеченными особым образом ферментными элементами. Реагенты помечаются для облегчения идентификации антител в анализируемой сыворотке. Хромогенный элемент, который ускоряет реакцию и подкрашивает лунки, добавляется после промывания. Интенсивность окраски по сравнению с изучаемым ферментом показывает примерное процентное содержание антигена в пробе крови. Затем лаборант использует оптическую жидкость, чтобы:
Для анализа на глистные инвазии используется особый вариант системы тестирования, со своим набором показателей нормы и отклонений от неё. Забор сыворотки крови для иммуноферментного анализа проводится только в условиях лаборатории. Берут кровь из вены, удаляют оттуда элементы, способные повлиять на процесс анализа и точность его результатов. Сдают анализ утром на голодный желудок. Качество и количество антител говорит о присутствии чужеродных элементов в организме пациента, в том числе болезнетворных микроорганизмов. Эти же признаки указывают на то, что в организме начался воспалительный процесс. Пример расшифровки результатов ИФА:
Сам по себе количественный анализ, проведённый данным методом, ещё не даёт возможность точно диагностировать болезнь, назначить курс лечения и определить дозировку препаратов. У всех методик тестирования, даже самых передовых и высокоточных, к сожалению, кроме преимуществ, есть и свои недостатки. Преимущества иммуноферментного анализа:
Чувствительность метода диагностики — это высокая вероятность обнаружить искомое, даже если его концентрация в исследуемом материале крайне мала. Специфичность методики означает:
Возможные недостатки данного метода анализа:
В процедуре ИФА напрямую используется способность антител находить антиген, образуя связи с метками. Данный способ анализа считают промышленным, время ожидания результата составляет не более часа. Особая метка-субстрат проявляется после ферментации. Уровень антител соответствует доле антигенов в исследуемом биоматериале. Существует также дуоденальный (иначе — непрямой) метод исследования на паразитарные инвазии, который широко применяется, несмотря на высокую точность ИФА. Дуоденальный (непрямой) иммуноферментный анализ проводится в 2 этапа:
Таким образом достигается двойной контроль антигенов и антител, увеличивающий достоверность анализа. При непрямом ИФА в лаборатории антиген фиксируют на поверхности лунки, он образует связи с немеченной частью антител. Достоинства дуоденального метода:
Однако, данный способ занимает много времени и предполагает некоторое количество дополнительных действий. Тем не менее, точность исследования настолько высока, что она оправдывает этот недостаток. По этой причине большинство врачей рекомендуют именно дуоденальный метод анализа. При наличии всего необходимого инструментария и расходных материалов можно будет получить результат уже через 2 дня после сдачи. Если в лаборатории есть услуга экспресс-анализа, то обработать пробу могут всего за 3-5 часов.
Где можно сдать ИФА:
Расценки на иммуноферментный анализ напрямую зависят от уровня цен в конкретной клинике, в среднем его цена составляет не менее 4000 рублей. Сведения, полученные в результате этого исследования, могут стать полезным вкладом в медицинскую науку, однако, пациенту следует помнить, что, поскольку стоимость иммуноферментного анализа так высока, разумнее будет доверить эту процедуру надёжной проверенной временем клинике. К сожалению, государственные медицинские учреждения не всегда бывают оборудованы по последнему слову науки. Необходимых приспособлений для качественного забора биоматериала и его обработки в районной поликлинике может и не быть. Итак, чем полезен для пациента иммуноферментный анализ крови:
Иммуноферментный анализ демонстрирует не только качественный, но и количественный фактор, то есть не только указывает на сам факт наличия гельминтов в организме пациента, но и даёт возможность оценить их число. источник
Иммуноферментный анализ крови – это лабораторное иммунологическое исследование крови, при котором происходят качественные и количественные измерения антител (антигенов), а также гормонов. Этот метод предоставляет до 90% точности при установлении диагноза заболевания. Медицинские лаборатории используют несколько вариантов его проведения, что влияет на срок готовности результатов. Но в среднем выдача результатов исследования происходит в период 1-10 дней после сдачи крови. При данном виде анализа крови устанавливаются антитела разных видов – это иммуноглобулины класса M, A, G (JgM, JgA, JgG). Их накопление происходит в различные временные промежутки. Первыми начинают проявляться иммуноглобулины класса М (пятый день после начала болезни). Такие иммуноглобулины задерживаются в организме пять-шесть недель, после чего начинают исчезать из крови организма. Именно в данный период времени выявляются антитела класса М. Вторыми проявляются иммуноглобулины класса G (через три-четыре недели). Они задерживаются в организме несколько месяцев или лет. Во время проведения иммуноферментного анализа крови и расшифровки его результата можно обнаружить возрастание антител класса G. Это свидетельствует о наличии инфекции или реинфекции. Антитела класса А проявляются в крови на протяжении двух-четырех недель. Но всего лишь 20% из них присутствуют в сыворотке крови. Остальные же входят в состав секрета слизистых оболочек. Иммуноглобулины класса А начинают исчезать в промежутке времени от двух недель до двух месяцев. Данный процесс является свидетельством уничтожения инфекции в организме. Если после выздоровления человека проводился повторный иммуноферментный анализ крови и расшифровка результата показала наличие антител класса А – это свидетельство хронической инфекции. Расшифровка результатов анализа может принимать такие значения:
В расшифровке (+) является положительным результатом, а (–) – отрицательным результатом. Помимо уточнения классов антител в расшифровке встречаются количественные их показатели. Но обширное их объяснение может предоставить только лечащий врач.
Иммуноферментный анализ сыворотки крови основан на взаимодействии антигена с антителом, причем один из них содержит в своей структуре фермент. При взаимодействии двух компонентов содержимое пробирки должно менять свой цвет. Результаты сравниваются со стандартной цветовой шкалой, и далее устанавливается антиген, который присутствует в материале. Другими словами принцип иммуноферментного анализа сыворотки крови можно объяснить так:
Иммуноферментный анализ сыворотки крови считается достоверным. Но в тех случаях, когда произошло неправильное взятие крови для анализа, или была нарушена техника проведения исследования, или же имеются у человека скрытые системные заболевания, результаты иммуноферментного анализа сыворотки крови могут оказаться ложными. Иммуноферментный анализ сыворотки крови исследует практически все гормоны щитовидной железы, онкомаркеры и различные виды инфекций. К гормонам щитовидной железы относятся тиреоглобулин (ТГ), тироксин (Т4), трийодтиронин (Т3), свободный тироксин (Т4), свободный трийодтиронин (Т3). Иммуноферментный анализ крови в норме считается, если присущи такие допустимые нормы гормонов щитовидной железы:
В случае исследования половых гормонов иммуноферментный анализ крови в нормедля женщин считается, если в организме выделяется лютеинизирующий гормон (ЛГ) в таких пределах:
В норме для мужчин принимается, если половой гормон вырабатывается в пределах 0,5-10 мЕд/л. При исследовании хронического гонадотропина (ХГ) референсные значения зависят от пола человека.
Иммуноферментный анализ крови исследует множество онкологических показателей. К ним можно отнести наличие пролактина, эстрадиола, прогестерона, тестостерона, стероид связывающего глобулина (ССГ) и других маркеров. Но интерпретация результата анализа и норм этих показателей должна проводиться только лечащим врачом. Кроме того, данный метод диагностирует инфекционные (например, краснуха, корь, туберкулез, герпес, сифилис, гепатит, псевдотуберкулез) и аутоиммунные заболевания разного вида, а также устанавливает иммунный статус человека. Но все показатели и полученные результаты должны расшифровываться квалифицированным специалистом. источник |
Методика иммуноферментного анализа применяется в различных отраслях медицины. Но в большинстве случаев данным методом диагностируют широкий круг инфекционных заболеваний, таких как вирус иммунодефицита человека, гепатит, герпес и прочих инфекций половых органов. Также иммуноферментный анализ применяют для выявления онкомаркеров различного происхождения, определения гормонов и при диагностике репродуктивной функции организма. Материалом для иммуноферментного исследования является кровь человека.
Сыворотка крови – это прозрачная жидкость с желтым оттенком. После свертывания крови она отделяется от кровяного сгустка. Не содержит фибрина и форменных элементов.