Меню Рубрики

Анализ на смешанную культуру лимфоцитов

СКЛ — смешанная культура лимфоцитов — MLC — mixed lymphocyte culture. Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.

Лимфоцит — центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.

Артикул Наименование услуги Стоимость
Оценка риска проблем фертильности по комплексному иммунологическому обследованию супружеской пары
3736 Программа 1: Оценка риска проблем фертильности по комплексному иммунологическому обследованию супружеской пары (первичная консультация акушера-гинеколога,гинеколога-эндокринолога,СКЛ,повторная консультация акушера-гинеколога,гинеколога-эндокринолога) 12 000 р.
3737 Программа 2: Оценка риска проблем фертильности по комплексному иммунологическому обследованию супружеской пары (СКЛ, повторная консультация акушера-гинеколога,гинеколога-эндокринолога ) 11 000 р.

Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина — «кирпичика» ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.

Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что «в бой» вступают клетки всех участников смешанной культуры.

Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.

Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.

Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.

Дело в том, что сохранение беременности — активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.

Использование СКЛ, которое было начато в нашем центре с весны 2000 г., позволило значительно улучшить качество лечение пациенток с бесплодием, невынашиванием беременности и неудачными попытками IVF.

источник

Иммунодиагностика бесплодия методом СКЛ

Диагностика заключается в определении реактивности лимфоцитов матери на антигены партнера методом смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ).

СКЛ проводится на 16-22 день МЦ (предварительная запись по тел.: 59-39-57).

Каждый четверг в 13:00 врач акушер – гинеколог (эндокринолог) высшей категории Квашнина Светлана Анатольевна проводит бесплатные консультации по методу СКЛ. (предварительная запись по тел.: 59-39-57).

Показания для проведения диагностики:

— Первичное и вторичное бесплодие

— Привычное невынашивание беременности

— HLA – совместимость супругов

Результат исследования – в течение 7-10 дней.

Механизм проведения исследования:

Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.

Лимфоцит — центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.

Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам).

Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина — «кирпичика» ДНК.

На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов. Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что «в бой» вступают клетки всех участников смешанной культуры. Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.

Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры. Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.

Дело в том, что сохранение беременности — активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.

СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа коррекции. Поэтому при обнаружении «плохой» конфигурации цифр в СКЛ, часто приходится ее повторять уже после лечебных воздействий.

источник

  • Онлайн-игра «Empire»Преврати свой маленький замок в могущественную крепость и стань правителем величайшего королевства в игре Goodgame Empire. Строй свою собственную империю, расширяй ее и защищай от других игроков. Б
  • ОткрыткиПерерожденный каталог открыток на все случаи жизни
  • Я — фотографПлагин для публикации фотографий в дневнике пользователя. Минимальные системные требования: Internet Explorer 6, Fire Fox 1.5, Opera 9.5, Safari 3.1.1 со включенным JavaScript. Возможно это будет рабо
  • Шарики
  • ТоррНАДО — торрент-трекер для блоговТоррНАДО — торрент-трекер для блогов


СКЛ — смешанная культура лимфоцитов
MLC — mixed lymphocyte culture

Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.

Лимфоцит — центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.

Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина — «кирпичика» ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.

Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что «в бой» вступают клетки всех участников смешанной культуры.

Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.

Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.

Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.

Дело в том, что сохранение беременности — активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.

СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа коррекции.

Поэтому при обнаружении «плохой» конфигурации цифр в СКЛ, часто приходится ее повторять уже после лечебных воздействий.

Вопрос:
Подскажите, пожалуйста, можно ли сдать кровь на СКЛ после (через 4-5 дней) прохождения пациенткой курса внутривенного вливания иммуноглобулинов (для супрессии ВПГ-2; 3 капельницы по 25 мл через день)? Не повлияют ли иммуноглобулины на достоверность анализа СКЛ?

Отвечает Кухорева Татьяна Александровна
акушерско-гинекологическая клиника «Центр иммунологии и репродукции»:
Проведение курса терапии иммуноглобулинами может повлиять на результаты СКЛ. Поскольку иммуноглобулин воздействует на активность лимфоцитов, а в реакции СКЛ исследуется именно эта активность (в спонтанном состоянии, после смешивания с культурой лимфоцитов мужа, пула донорских клеток).
Желательно проводить исследование до использования иммуноглобулина либо через несколько недель (4-5) после терапии.
На результаты теста также могут влиять простудные заболевания, проведений вакцинаций, менструация.

Вопрос:
По результатам анализа интенсивность ответа в СКЛ снижена. В программе ЭКО на 14 ДПП ХГЧ был 11. Что делать?

Отвечает Айрапетов Давид Юрьевич
акушерско-гинекологическая клиника «Центр иммунологии и репродукции»:
Дело в том, что ребенок является наполовину чужеродным для организма матери. Эта является нормальным физиологическим явлением, запускающим иммунологические реакции, направленные на сохранение беременности. Должны формироваться иммунные специальные защитные белки, которые оберегают плодное яйцо. Несовместимость супругов по HLA-антигенам и отличие зародыша от материнского организма является важным моментом, необходимым для сохранения и вынашивания беременности. Сходство супругов по антигенам тканевой совместимости приводит к похожести зародыша на организм матери, что становится причиной недостаточной антигенной стимуляции иммунной системы женщины, и необходимые для сохранения беременности реакции не запускаются. Беременность воспринимается, как чужеродные клетки. В таком случае происходит самопроизвольное прерывание беременности. Для диагностики таких факторов невынашивания беременности проводится обследование на HLA-гены II класса (HLA-DRB1, DQA1 и DQB1-типирование), а также смешанная культура лимфоцитов. Слабое различие лимфоцитов супругов в СКЛ (смешанная культура лимфоцитов) и совпадение по HLA является показанием для проведения лимфоцитотерапии. Все это делается для того, чтобы повысить эффективность узнавания антигенов мужа в процессе формирования плаценты, что позволяет вовремя запустить механизмы сохранения беременности.

источник

СКЛ = смешанная культура лимфоцитов = MLC = mixed lymphocyte culture.Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.Лимфоцит — центральная клетка иммунной системы.Что такое СКЛ?И. И. Гузов, к. м. н., гл. врач Центра иммунологии и репродукции СКЛ = смешанная культура лимфоцитов = MLC = mixed lymphocyte culture.Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.Лимфоцит — центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина — «кирпичика» ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что «в бой» вступают клетки всех участников смешанной культуры.Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.Дело в том, что сохранение беременности — активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа коррекции.Поэтому при обнаружении «плохой» конфигурации цифр в СКЛ, часто приходится ее повторять уже после лечебных воздействий.Использование СКЛ, которое было начато в нашем центре с весны 2000 г., позволило значительно улучшить качество лечение пациенток с бесплодием, невынашиванием беременности и неудачными попытками IVF.

Читайте также:  Агрегация и адгезия тромбоцитов анализ

Первые сообщения о смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ) появились в 1964 г. в связи с феноменом бластрансформации. Изучение СКЛ основано на том же принципе, что и реакции бласттрансформации лимфоцитов (см. раздел «Реакция бласттрансформации лимфоцитов »). Сила реакции зависит от степени различия между антигенами гистосовместимости. HLA-A, -В-В- и -С-антигены на поверхности лимфоцитов соответствуют HLA-D-антигенам, которые могут быть выявлены только при помощи СКЛ. В то же время DR-антигены (D-related) могут быть обнаружены при помощи антисывороток (см. раздел «Комплементзависимая цитотоксичность. Типирование по HLA-DR.»). Гипотеза о том, что анти-DR-сыворотки позволяют осуществлять тонкое типирование всего локуса D, кажется в настоящее время менее вероятной, чем гипотеза о существовании двух различных локусов.

Хромосома 6 человека с HLA-комплексом и близко расположенными локусами (GLO; PGM 3).

В настоящее время точно установлено существование 12 антигенов DW и 10 антигенов OR. LD — 2 = минорный D-локус, существование которого можно предположить на основании рекомбинационного анализа

Даже для Iа-антигенов человека в настоящее время обсуждается трехлокусная модель, так что термин «DR» не следует более применять в качестве синонима понятия «человеческие молекулы II класса».

Для оценки реактивности (индивидуума) в отношении аллогенного раздражителя готовят так называемую одностороннюю СКЛ, при которой для стимуляции используют инактивированные клетки. Следует заметить, что даже инактивированные стимулирующие клетки (см. ниже) обладают способностью выделять митогенные факторы, а также до некоторой степени усиливать синтез ДНК и биосинтез иммуноглобулинов. Это может стать скрытым источником ошибок. На мышиной модели хорошо изучены взаимодействия, возникающие в ходе аллогенной реакции.

Механизм индукции аллогенной реакции для получения эффекта зависимого от клеток лимфоцитолиза (модификация описана в соответствующей работе)

MF — макрофаг; T lNDH -индуктор хелперных клеток; Т н — Т-хелпер; рТ с — предшественник цитотоксической клетки; Т с — цитотоксическая клетка; треугольник- DR-антиген; прямоугольник — HLA-A/B-антигены

Правда, до настоящего времени остается неясным, какие типы клеток участвуют в пролиферативном ответе. Исследование первичной реакции лимфоцитов на аллогенные клетки используется в следующих случаях:

Проверка СКЛ-реактивности в качестве критерия оценки клеточного иммунитета;

Выяснение взаимозависимости между HLA-D-антигенами и предрасположенностью к определенным заболеваниям;

Выбор пары донор — реципиент.

В основе почти всех методов клеточных взаимодействий, используемых клинической иммуногенетикой, лежит феномен бластооб- разования в смешанной культуре лимфоцитов, открытый канадской исследовательницей Барбарой Бейн . Реакция смешанной культуры лимфоцитов (mixed lymphocyte culture — MLC) позволила осуществить тонкое дифференцированное изучение комплекса HLA и, в частности, одной из его субъединиц — локуса HLA-D. Ряд других методов клеточных взаимодействий — клеточно-опосредованный лимфолизис (Cell-mediated Lympholysis — CML), тест примирования лимфоцитов (Primed Lymphocyte Typing) — основывается на методе MLC или содержит его как составную часть.

Принцип метода изображен на рис. 10, из которого видно, что две популяции различающихся генетически лимфоцитов взаимодействуют между собой в культуре in vitro. Одна из популяций обрабатывается митомицином С или облучается, в результате чего теряет способность к бластообразованию и включению тимидина (3 НТ), однако, не теряя антигенных свойств, сохраняет способность к стимуляции (стимуляторы; S-популяция).

Клетки, отвечающие на стимуляцию (респондеры, R-популяция), через несколько дней трансформируются в бласты и включают тимидин, добавляемый в культуру. Интенсивность реакции измеряется с помощью радиационной метки по включению 3 Н-тимидина.

Известны несколько вариантов реакции смешанной культуры лимфоцитов, из которых здесь предлагаются два: традиционный и микровариант, реализуемый в планшетах Cook (рис. 11).

Рис. 11. Оборудование для микровариантов MLC и CML. 1 — планшет круглодонный е 96 лунками; 2-автоматическая пипетка («Pipetman») с программой для разных объемов; 3 — автоматическая пипетка («Sigma») для определенного объема; 4 — наконечник для пипетки одноразового использования; 5 — ламинарный бокс

Традиционный вариант MLC (модификация Ф. С. Барановой):

Лимфоциты выделяют на фиколл-урографиновом градиенте, как описано выше. Первую отмывку производят в PBS (NaCl — 8,0 г, Na 2 HP0 4 — 1,15 г, KH 2 PO 4 — 0,2 г, KC1 — 0,2 г на 1л H 2 O); две последующие производят в среде 199 с 5%-АВ-сыворотки (пул от 15 доноров);

Отвечающие клетки ресуспендируют в среде 199 с 10% сывороткой АВ и доводят концентрацию клеток до 0,6 x 10 6 в 1 мл;

Выделенные таким же образом стимулирующие клетки в концентрации 5 — 10 6 в 1 мл обрабатывают митомицином С (60 γ/мл) фирмы «Serva» и инкубируют 40 мин при 37°С в водяной бане. После инкубации клетки отмывают 3 раза средой 199 с 5% сывороткой АВ, ресуспендируют в среде 199 с 10% сывороткой АВ, доводя концентрацию до 0,6 x 10 6 в 1 мл;

0,5 мл отвечающих клеток и 0,5 мл стимулирующих клеток смешивают в центрифужной пробирке, прибавляют 0,04 мл 10 мл р-ра Hepes («Serva») и инкубируют 144 ч; опыт ставят в трех параллелях (триплет);

За 24 ч до окончания инкубации в пробирки добавляют 3 Н-тимидин 1μCi (3,7×10 4 БК), на пробу удельной активности 5mСi/мМоль (18,5×10 7 БК/мМоль) и продолжают инкубацию;

По окончании инкубации клетки переносят на миллипоровые фильтры (0,6 — 0,9 микрон), промывают физиологическим раствором (37°С) и охлажденным 5% раствором трихлоруксусной кислоты (4°С). Фильтры сушат и помещают во флаконы с 5 мл сцинтилляционной жидкостью (5 г РРО и 0,5 г РОРОР — на 1 л толуола) * . Активность включения 3 Н-тимидина замеряют на β-счетчике; результат выражают в абсолютных включениях радиоактивной метки в 1 мин или в индексе стимуляции (ИС) по формуле:

* (РРО — 2,5-фенол-оксазол; РОРОР — (1,4-ди-2-15-фенолоксазолитбензол). )

Среднее значение СРМ в трех опытных образцах

ИС = Среднее значение СРМ в трех контрольных образцах/Контрольными образцами служат спонтанные культуры отвечающих клеток.

Микровариант MLC в планшетах Cook . На 8-м Уоркшопе выработаны требования, стандартизирующие микровариант MLC, в соответствии с которыми он излагается ниже :

Лимфоциты выделяют в градиенте изопак-фиколла и ресуспендируют в среде RPMJ-1640 * , доводя концентрацию до 5х10 5 в 1 мл;

* (Можно использовать среду 199, смешанную с человеческой сывороткой группы АВ (5% сыворотки, взятой от нескольких индивидов). )

Клетки-стимуляторы обрабатывают митомицином С или обучением;

5×10 4 репондеров и столько же стимуляторов помещают с помощью микропипетки типа Pipetman в каждую лунку круглодонного микропланшета Cook;

Планшеты инкубируют в термостате с автоматической подачей 5% CO 2 в течение 120 ч; затем в каждую лунку вносят lμmCi 3 Н-тимидина при специфической активности тимидина 6 Ci/мМоль; все манипуляции проводят пипеткой Pipetman;

Через 16 ч после внесения тимидина культуры из каждой лунки автоматической пипеткой переносят на миллипоровые фильтры и промывают физиологическим раствором, а затем 5% трихлоруксусной кислотой; удобно использовать специальные «харвестеры» для переноса культуры на миллипоровые фильтры;

Активность включения тимидина определяют, как описано выше.

CML используется в иммуногенетических исследованиях сравнительно недавно (с 1972 г.), однако в последнее время становится все более популярной техникой, позволяя детально изучить роль эфферентного звена трансплантационного иммунитета и завоевывая признание как информативный метод иммунологического мониторинга. Принцип метода изображен на рис. 12. В основе метода лежит техника, предложенная J. Lightbody (1971), которая вкратце сводится к следующему.

1. CML начинается с обычного HLC-теста, в котором происходит распознавание отвечающими клетками «стимуляторов», сенсибилизация отвечающих клеток и формирование сенсибилизированных киллеров.

2. Вторая фаза, в которой сенсибилизированные киллеры смешиваются с меченными 51 Сr клетками-мишенями, состоит в деструкции последних эффекторными клетками-киллерами; клетки- мишени могут иметь генотип такой же, как «стимуляторы» в первой фазе MLC, а могут быть клетками «третьего» партнера», наделенными общими со «стимуляторами» антигенными детерминантами или без них.

3. Количество радиоактивного хрома, высвобождающегося из разрушенных клеток-мишеней и выходящего в культуральную среду, служит мерой интенсивности киллер-эффекта.


Рис. 12. Принцип клеточно-опосредованного лимфолизиса (CML). I ряд — сенсибилизация отвечающих клеток, образование киллеров; II ряд — взаимодействие киллеров с мишенью; III ряд — разрушение клетки-мишени; выход 51 Cr культуральную среду

Здесь описано три варианта CML: традиционный вариант в модификации Л. П. Алексеева (1979), микровариант в планшетах Cook, прямая CML (Direct-CML -D-CML.

Традиционный вариант [Алексеев Л. П., 1979].

Метод разделен на несколько этапов.

Периферические лимфоциты обеих популяций (R-клетки и S-клетки) выделяют обычным путем, в градиенте плотности отмывают трижды в среде 199 с 5% АВ-сывороткой (10 мин, 150 g);

1×10 6 R-клеток (0,8 мл) смешивают в центрифужных пробирках с 2×10 6 S-клеток (0,2 мл), обработанных митомицином С, и инкубируют 144 ч при 37°С;

Клетки центрифугируют при 150 g в течение 10 мин, а осадок ресуспендируют в среде 199 с добавлением 20% телячьей сыворотки (среда 199 + т. е.), доведя концентрацию до 1×10 6 в 1 мл;

Одну из проб оставляют для исследования уровня MLC, остальные используют как готовые киллеры.

Выделенные обычным путем лимфоциты ресуспендируют в среде 199 с 20% АВ-сывороткой и инкубируют с фитогемагглютинином (0,003 мг/мл Wellcome) в течение 72 ч при 37°С; концентрация клеток 1×10 6 в 1 мл;

Клетки центрифугируют 10 мин при 150 g, осадок ресуспендируют в среде 199 с 5% АВ-сывороткой и доводят концентрацию клеток до 2×10 4 в 1 мл;

К взвеси добавляют 51 Cr 100 μCi/мл (3,7×10 6 БК/мл) и инкубируют 40 мин при 37°С;

Клетки трижды отмывают в среде 199 с добавкой 5% АВ-сыворотки (150 g, 10 мин) и осадок ресуспендируют в среде 199 с 5% АВ-сывороткой,. доведя концентрацию до 2×10 4 в 1 мл.

5×10 5 киллеров (0,5 мл) смешивают с 1×10 4 мишеней (0,5 мл), инкубируют 4 ч (37°С) и центрифугируют при 150 g 10 мин;

Суспернатант отсасывают и на?-счетчике подсчитывают импульсацию, вызываемую 51 Cr; подсчет ведут в 0,5 мл супернатанта;

Уровень цитолиза подсчитывают по следующей формуле:

экепер. выход 51 Cr — спонтанный выход 51 Cr/максим, выход 51 Cr — спонтанный выход 41 Cr × 100.

Спонтанный выход хрома измеряется на мишенях, инкубированных 4 ч (37°С) без клеток-киллеров; максимальный выход хрома — на мишенях, полностью разрушенных замораживанием-оттаиванием; все пробы осуществляются в триплетах.

Микровариант CML в планшетах [по Mawas С., 1976]:

Фаза получения киллеров осуществляется как MLC в круглодонных планшетах, но смешивают в равных количествах R- и S-клетки по 2×10 5 па каждую лунку и инкубируют при 37°С;

Через 5 сут клетки собирают пастеровской пипеткой в пробирку, подсчитывают с трипаном голубым число живых и доводят концентрацию до 10×10 6 в 1 мл;

Клетки-мишени в течение 3 дней культивируют с ФГА;

В день постановки реакции клетки-мишени отмывают (300 g) и ресуспендируют в культуральной среде, распределяя по 1 мл в пробирки и доводя до 1×10 6 в 1 мл;

Добавляют в каждую пробирку с клетками-мишенями по 200 μCi 51 Cr(7,4×10 6 БК) и инкубируют 1 ч при 37°С; отмывают клетки 3 раза; осадок ресуспендируют и доводят до концентрации 1×10 в 1 мл (живых);

Тест реализуется в круглодонных микропланшетах; для этого распределяют в каждую лунку 0,7 — 1×10 6 клеток-киллеров (0,1 мл) и 1×10 4 клеток-мишеней (0,1 мл); общий объем суспензии в каждой лунке 0,2 мл, добавляют в каждую лунку по 0,05 мл среды и инкубируют (37°С) 4 ч;

Читайте также:  Агрегация тромбоцитов анализ подготовка к

Планшеты центрифугируют при 800 g на центрифуге Beckman в течение 10 мин; супернатант из каждой лунки переносят в пробирки и подсчитывают на γ-счетчике;

Фазу получения киллеров (MLC) проводят на среде RPMJ-1640 с добавлением 20% человеческой плазмы; для фазы киллинга употребляют среду MEM с добавлением 20% человеческой плазмы, предварительно прогретой.

Прямая CML (D-CML). Прямая CML является техникой, созданной специально для клинических целей, нашедшей использование при иммунологическом мониторинге. Схема этой реакции изображена на рис. 13.

Основное отличие от традиционной CML состоит в том, что стадия образования киллеров (фаза сенсибилизации) протекает не in vitro, a in vivo, т. е. в организме человека, сенсибилизированного пересадкой аллогенного органа или ткани. Вследствие воздействия аллогенной ткани лимфоциты реципиента сенсибилизированы к тканевым антигенам донора и не нуждаются в специальной обработке in vitro, продолжительность теста значительно сокращается во времени, так как предварительно следует подготовить только мишени.

В качестве мишеней используют лимфоциты, полученные из периферической крови или, чаще, из селезенки донора (см. 2.1.2) и замороженные любым из описанных выше способов (см. 2.1.3).

2.2.3. Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (Antibody-dependent-cell mediated Cytotoxicity — ADCC)

Этот тип клеточных реакций сходен по механизмам действия с описанной выше CML. Принцип реакции изображен на рис. 14. Компонентами реакции являются клетки-мишени (донорские клетки или аллогенные лимфоциты), сыворотка (аллогенная или реципиента), предположительно содержащая антитела, направленные к детерминантам клеток-мишеней, и клетки-эффекторы (лимфоциты реципиента или аллогенные лимфоциты).

Клетками-эффекторами в данном типе взаимодействия служат так называемые К-клетки, находящиеся в периферической крови. В отличие от клеток-киллеров в CML они осуществляют цитотоксический эффект без предварительной сенсибилизации, однако проявление цитотоксического действия К-клеток возможно только через посредство антител, направленных к детерминантам клеток-мишеней . Специфический лизис измеряется по высвобождению 51 Cr, если исследуемая сыворотка содержит антитела к детерминантам мишеней.

Детерминантами-мишенями в ADCC могут быть практически специфичности всех HLA-локусов, включая HLA-D, HLA-DR, а также детерминанты, лежащие вне HLA-системы .

Наибольшее распространение эта сложная реакция получила в иммунологическом мониторинге для выявления В-клеточных антител. В связи с этим было предложено несколько модификаций, предусматривающих обогащение суспензии клеток-мишеней В-лимфоцитами, адсорбцию сывороток на тромбоцитах и т. д.

Помимо всего, учитывается ряд других особенностей реагирования в данной системе. Исследуемая сыворотка должна быть декомплементирована, так как в противном случае реакция может пойти по типу антитело-опосредованной комплементзависимой цитотоксичности. Предполагается также, что клетки-эффекторы могут вызвать определенную деструкцию мишеней по типу CML.

В конечном итоге весь набор проб в тесте антителозависимок клеточно-опосредованной лимфоцитотоксичности следующий:

Мишени + эффекторы + испытуемая сыворотка (опытная проба);

Мишени (контрольная проба, т. е. спонтанное высвобождение 51 Cr);

Мишени + эффекторы (контрольная проба на активность эффекторов);

Мишени + испытуемая сыворотка (сывороточный контроль).

Лимфоциты выделяют обычным образом и ресуспендируют в RPMI-1640 + 10% эмбриональной телячьей сыворотки; обрабатывают суспензию карбонильным железом для удаления моноцитов; добавляют аммония хлорид или H 2 O для лизиса оставшихся эритроцитов;

В суспензию клеток-мишеней добавляют 51 Cr в форме р-ра Na 2 CrO 4 100 — 200µCi мл (3,7×10 6 — 7,4×106 БК/мл) и инкубируют 40 — 60 мин;

Клетки трижды отмывают в RPMI +0,1% HSA, ресуспендируют в той же среде и доводят до 2×10 8 в 1 мл; 50 µl суспензии меченых клеток помещают в пробирку и в дальнейшем подсчитывают изотопную активность на γ-счетчике для выявления полного изотопного «усвоения»; остальное раскапывают в лунки планшета по 50 µl суспензии (1×10 5 клеток на лунку);

Суспензия клеток-эффекторов доводится до 2×10 7 кл в 1 мл и в. каждую лунку помещают 50 µl суспензии (или 100 µl), соотношение эффекторов и мишеней 10:1 (или 20:1);

Инкубация продолжается 4 ч во влажной атмосфере термостата с 5% CO 2 (длительность инкубации может быть продолжена до 8 ч);

Приготовляют в пробирках несколько разведений испытуемой сыворотки (1:25; 1:100) и добавляют в лунки до 50 µl каждого разведения: и неразведенную сыворотку; окончательная постановка теста выглядит, как показано в табл. 23.

Постановка ADCC. Все варианты проб, µl

* (Вместо испытуемой сыворотки закапывают пул АВ-сывороток. )

** (Вместо испытуемой сыворотки закапывают моноспецифическую HLA-сыворотку, направленную против мишеней (не эффекторов). )

Инкубация панелей продолжается 4 ч во влажной атмосфере с 4% CO 2 ; длительность инкубации может быть продолжена до 8 ч;

После инкубации половину объема из каждой лунки (100 μl) осторожно отсасывают автоматической пипеткой и помещают в пробирки для подсчета импульсации 51 Cr; активность подсчитывают на γ-счетчике;

% высвобождения 51 Cr = 2 × А оп — фоновая активность/В — фоновая активность × 100;

% цитотоксичности = А оп — А сп /100 — А сп × 100, где А оп — % высвобождения 51 Cr в опытных пробах; А сп — % спонтанного высвобождения; В — полное усвоение изотопа.

Как положительный результат рассматривается 5% и выше цитотоксичность после 4 ч инкубации.

СКЛ (смешанная культура лимфоцитов) — это тест, позволяющий определить степень распознавания иммунными системами супругов антигенов тканевой совместимости друг друга.

Один из видов клеток крови, лимфоциты — являются основой иммунной системы. При этом среди клеток лейкоцитов существует некая иерархия, есть главные клетки, есть подчиненные, из которых каждая выполняет свою функцию.

При встрече лимфоцита с любыми чужеродными для организма объектами (клетками другого организма, вирусами, бактериями, и т. д.), то развивается иммунный ответ. Степень силы иммунного ответа будет зависеть от сходства структуры антигенов тканевой совместимости (HLA- антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов-потомков одной клетки, при этом это клетки, строго специализированные к конкретным чужеродным факторам, на которые необходим ответ. Иначе говоря, реакция иммунных клеток на что-то выражается том, что они начинают делиться. Деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем интенсивнее делятся клетки, тем их больше, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Интенсивность образования ДНК можно выявить путем включения в культуру клеток радиоактивного нуклеотида одного из «кирпичиков» ДНК, тимидина. Именно так и производится оценка смешанной культуры лимфоцитов.

Технически это можно сделать так. У обоих супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты, которые затем помещают в благоприятную для деления питательную среду. При смешении лимфоцитов разных людей, они начинают друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность образования ДНК в смешанной культуре разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек на другого конкретного человека, потому что «воевать» начинают клетки всех тех людей, лимфоциты которых помещены в среду.

Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным их деление. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В таком случае вся активность клеток в культуре будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и лишенных способности активно действовать клеток, можно получить необходимую информацию о степени иммунологического сходства супругов.

Анализ предполагает исследование 12-ти различных культур, оценка реакции в которых проводится на 3-и и 5-е сутки.

В результате получают 24 цифры, дающие информацию о реакции конкретной женщины на антигены тканевой совместимости мужа в процессе имплантации и во время беременности.

Не только иммунное отторжение, но и иммунная защита беременности — активный процесс. Для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно правильное иммунологическое распознавание ДНК мужа, содержащихся в зародыше. Если это распознавание вялое, медленное, происходит слишком поздно, тогда зародыш атакуется естественными клетками-киллерами матери и погибает.

Анализ СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа исправления ситуации. Поэтому после иммунизации анализ на СКЛ приходится повторять.

СКЛ — смешанная культура лимфоцитов — MLC — mixed lymphocyte culture. Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.

Лимфоцит — центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.

Артикул Наименование услуги Стоимость
Оценка риска проблем фертильности по комплексному иммунологическому обследованию супружеской пары
3736 Программа 1: Оценка риска проблем фертильности по комплексному иммунологическому обследованию супружеской пары (первичная консультация акушера-гинеколога,гинеколога-эндокринолога,СКЛ,повторная консультация акушера-гинеколога,гинеколога-эндокринолога) 12 000 р.
3737 Программа 2: Оценка риска проблем фертильности по комплексному иммунологическому обследованию супружеской пары (СКЛ, повторная консультация акушера-гинеколога,гинеколога-эндокринолога) 11 000 р.

Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина — «кирпичика» ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.

Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что «в бой» вступают клетки всех участников смешанной культуры.

Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.

Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.

Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.

Дело в том, что сохранение беременности — активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.

Использование СКЛ, которое было начато в нашем центре с весны 2000 г., позволило значительно улучшить качество лечение пациенток с бесплодием, невынашиванием беременности и неудачными попытками IVF.

источник

Привет всем снова! Новая (очередная) репродуктолог посоветовала сделать иммуно-лимфоцитотерапию лимфоцитами мужа в центре Кулакова. Сейчас читаю, что эта процедура будет бесполезной, если есть хорошее распознавание лимфоцитов: «При хорошем распозн.

Девы. кто сдавал такой анализ — смешанная культура лимфоцитов? Где сдавали? Сколько стоит? Имеет ли смысл? Спасибо.

Девочки, доброе утро. Нужно сдать уровень блокирующих антител в смешанной культуре лимфоцитов супругов? Это СКЛ? Или уровень антиотцовских антилейкоцитарных антител (далают на опарина, сказали, что блокирующие не далают.) Правильно ли я понимаю, можно сдать СКЛ- и там покажет есть ли блокирующие компоненты или нет? и где лучше сдать?

Девочки,у кого плохой анализ по скл?какие у вас были решения этой проблемы?отзовитесь пожалуйста!

Девочки, кто делал литы в Кулаково на Опарина как там называется анализ СКЛ (смешанная культура лимфоцитов)? Заранее спасибо

Очень сложная и неоднозначная тема, знаю! Не могу успокоиться. В анамнезе 3 ЗБ. Текст под кат.

Выкидыши можно предотвратить (АФС, HLA-типирование, клетки -киллеры, ЛИТ, иммуноглобулин, дефекты генов системы свертывания)

копировала с другого сайта у пользователя Натли, что удалось найти по иммуноглобулину:

Привет! Вот сдали с мужем анализ СКЛ (смешанная культура лимфоцитов). Помогите разобраться, ничего в этом не понимаю ссылка Заранее всем спасибо!

Возможно и Вам будет интересно: этот список составила девушка после четырех пролетных протоколов. После того, как она сделала полное обследование, выявила причину неудач, подлечились с мужем — пятый получился удачным!

Девочки,нашла статью на одном из сайтов,может,кому интересно будет- Начну с того, очень сочувствую девочкам, прошедшим через неудачные протоколы и дабы помочь им преодолеть эти неудачи, попытаюсь систематизировать процедуры и анализы, которые необходимо провести, для следующего, удачного и беременного ЭКО. Осведомлен- значит вооружен, чтобы не рвать волосы на голове от отчаянья, а прийти к врачу со списком вопросов надо знать что делать дальше. Итак: Если вы не забеременеете после первой попытки ЭКО, конечно, вы будете очень расстроены и разочарованы. Однако помните.

Про HLA-типирование мы узнали прошлым летом. После 3-й ЗБ нас направили на этот анализ. Мы сдали его, а потом началось самое «смешное» — никто не знает что с ним дальше делать. На тест нас направила врач моей ЖК, со словами «его (анализ) требуют в центрах планирования семьи». По сложившимся тогда обстоятельствам, муж уехал и дальше обследование я продолжила самостоятельно. В результате теста у нас обнаружили то ли 3, то ли 4 совместимых гена. Врач ЖК — «Да, не хороший результат»;.

Читайте также:  6000 эритроцитов в анализе по нечипоренко

Причины неудач ЭКО Цикл ЭКО включает в себя несколько этапов, и каждый из них должен быть успешно преодолен для перехода на следующую ступень: — должен начаться рост и развитие хотя бы одного фолликула — фолликулы должны созреть — не должно произойти преждевременной овуляции до пункции фолликулов — во время пункции яйцеклетки должны быть успешно извлечены из фолликулов — сперматозоиды должны оплодотворить хотя бы одну яйцеклетку — оплодотворенная яйцеклетка должна начать делиться и развиваться — эмбрион должен имплантироваться в матку. В.

Увы, в последнее время очень часто поднимается вопрос: «Что же спросить у врача после пролета». Была тут полезная статья, думаю, сейчас она многим прогидится. Поэтому освежаю и дублирую: (оооочень много под катом) ..Начну с того, очень сочувствую девочкам, прошедшим через неудачные протоколы и дабы помочь им преодолеть эти неудачи, попытаюсь систематизировать процедуры и анализы, которые необходимо провести, для следующего, удачного и беременного ЭКО. Осведомлен- значит вооружен, чтобы не рвать волосы на голове от отчаянья, а прийти к врачу со списком.

Пишу для себя, может кому тоже не дай Бог пригодится. Вам было сделано несколько пересадок эмбрионов, но ни одна попыток ЭКО не завершилась беременностью? Не отчаивайтесь! У вас ещё есть надежда. Причины неудач ЭКО преодолимы, и беременность после неудачного ЭКО вполне реальна. Сколько попыток ЭКО понадобится именно в Вашем случае, зависит от очень многих факторов. Одна неудачная попытка ЭКО — не окончательный приговор. Если первое ЭКО неудачное, это вовсе не значит, что следующий цикл после неудачного ЭКО не получит желанный.

Способность к имплантации является одной из основных интегральных характеристик оценки качества эмбрионов в программе ЭКО. Показано, что наибольшая частота наступления имплантации и беременности наблюдается при переносе эмбрионов с ранним наступлением первого деления и быстрыми темпами дробления; имеющих более 7 бластомеров одинаковой формы и равного размера и наличием не более 15% цитоплазматических фрагментов на 3-й день наблюдения. Одним из важнейших критериев отбора эмбрионов для последующего переноса в полость матки является их способность к формированию бластоцисты. Перенос эмбриона в стадии бластоцисты позволяет.

Причины неудачного ЭКО — лучше знать, чем недознать Вам было сделано несколько пересадок эмбрионов, но ни одна попыток ЭКО не завершилась беременностью? Не отчаивайтесь! У вас ещё есть надежда. Причины неудач ЭКО преодолимы, и беременность после неудачного ЭКО вполне реальна. Сколько попыток ЭКО понадобится именно в Вашем случае, зависит от очень многих факторов. Одна неудачная попытка ЭКО — не окончательный приговор. Если первое ЭКО неудачное, это вовсе не значит, что следующий цикл после неудачного ЭКО не получит желанный результат -.

Девочки, вот что нашла http://www.baby.ru/community/view/172789/forum/post/137662559/ «эко.что нашла про пролеты и что делать дальше» У нас вроде здесь такой инфо нет( если есть- удалю). Думаю, очень полезно будет почитать. Начну с того, очень сочувствую девочкам, прошедшим через неудачные протоколы и дабы помочь им преодолеть эти неудачи, попытаюсь систематизировать процедуры и анализы, которые необходимо провести, для следующего, удачного и беременного ЭКО. Осведомлен- значит вооружен, чтобы не рвать волосы на голове от отчаянья, а прийти к врачу со списком вопросов надо знать что.

Про HLA-типирование мы узнали прошлым летом. После 3-й ЗБ нас направили на этот анализ. Мы сдали его, а потом началось самое «смешное» — никто не знает что с ним дальше делать. На тест нас направила врач моей ЖК, со словами «его (анализ) требуют в центрах планирования семьи». По сложившимся тогда обстоятельствам, муж уехал и дальше обследование я продолжила самостоятельно. В результате теста у нас обнаружили то ли 3, то ли 4 совместимых гена. Врач ЖК — «Да, не хороший результат»;.

Когда беременность не наступает.

Дорогие мои привет! Не писала очень давно. Сегодня у меня должен был быть перенос, но его отменили. Я заболела и похоже что гриппом. Сложно конечно было принять решение. Но вместе с мужем решили так. Думала, что наконец-то сегдня встречусь со своими детишками, но лучше так чем перенос и неудача. Короче я болею. Но есть и хорошие новости. В среду я была на консультации у Гузова. Хотя мне сказали, что в феврале запись будет только на март, но потом позвонили и.

Вам было сделано несколько пересадок эмбрионов, но ни одна попыток ЭКО не завершилась беременностью? Не отчаивайтесь! У вас ещё есть надежда. Причины неудач ЭКО преодолимы, и беременность после неудачного ЭКО вполне реальна. Сколько попыток ЭКО понадобится именно в Вашем случае, зависит от очень многих факторов. Одна неудачная попытка ЭКО — не окончательный приговор. Если первое ЭКО неудачное, это вовсе не значит, что следующий цикл после неудачного ЭКО не получит желанный результат — беременность. После неудачного ЭКО самое главное — определить.

Когда беременность не наступает. Девочки, в свое время я много времени посвятила изучению проблемы отсутствия у меня беременности. В поиске информации наткнулась на полезную информацию (это форум, редактировать особо некогда, поэтому лишнюю инфу пропускайте мимо ушей). Может, кому-то пригодится, как пригодилось мне:) Хотя информации уже более 9 лет, и медицина во многих аспектах продвинулась вперед, но азы остались прежними. Автор: Радуга 10.11.2006, 16:28 Для начала хотела бы вставить картинку с изображением как происходит зачатие. что откуда берется и куда попадает.

Когда беременность не наступает. Девочки, в свое время я много времени посвятила изучению проблемы отсутствия у меня беременности. В поиске информации наткнулась на полезную информацию (это форум, редактировать особо некогда, поэтому лишнюю инфу пропускайте мимо ушей). Может, кому-то пригодится, как пригодилось мне:) Хотя информации уже более 9 лет, и медицина во многих аспектах продвинулась вперед, но азы остались прежними. Автор: Радуга 10.11.2006, 16:28 Для начала хотела бы вставить картинку с изображением как происходит зачатие. что откуда берется и куда попадает.

http://www.lvrach.ru/2010/10/15435048 Проблема атопического дерматита (АД) приобретает в последние годы все большее медико-социальное значение, так как распространенность заболевания неуклонно растет. По современным представлениям АД — мультифакториальное заболевание, развитие которого тесно связано с генетическими дефектами иммунного ответа и отрицательными влияниями неблагоприятных воздействий внешней среды. Установлено, что действие этих факторов определяет темпы развития АД, особенно у детей раннего возраста. Значимым фактором риска АД является патология органов желудочно-кишечного тракта, особенно дисбиоз кишечника, который выявляется у 89–94,1% детей, больных АД [2, 3, 11]. Несомненно, кишечная.

Начну с того, очень сочувствую девочкам, прошедшим через неудачные протоколы и дабы помочь им преодолеть эти неудачи, попытаюсь систематизировать процедуры и анализы, которые необходимо провести, для следующего, удачного и беременного ЭКО.Осведомлен- значит вооружен, чтобы не рвать волосы на голове от отчаянья, а прийти к врачу со списком вопросов надо знать что делать дальше. Итак: Если вы не забеременеете после первой попытки ЭКО, конечно, вы будете очень расстроены и разочарованы. Однако помните, что это еще не конец пути — это только его начало! После неудачного цикла ЭКО вы встретитесь с врачом и проанализируете, какие выводы можно сделать.

Женщине: Гормональное обследование. (ЛГ, ФСГ, пролактин, эстрадиол, прогестерон, тестостерон, 17-ОН прогестерон, ДЭА — сульфат, SHBG транспортный белок, белок, связывающий половые гормоны (SHBG, ГПСГ), АСАТ, андростендион, андростандиол-глюкуронид) Исследование количественного содержания гормонов крови. Гормоны контролируют основные процессы жизнедеятельности организма на всех этапах его развития с момента зарождения. С помощью анализа на гормоны можно посмотреть функциональное состояние гипофиза, щитовидной железы, молчных желез, надпочечников, яичников, выявить заболевания у плода во время беременности, выяснить характер бесплодия, нарушенния менструального цикла. Анализы на инфекции: обычный мазок, ПЦР.

Причины неудачного ЭКО — лучше знать, чем недознать

1. БИОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КРОВИ Отражает состояние всех обменных процессов в организме человека (белковый обмен, углеводный, жировой обмен, электролитный обмен). Каждый вид обмена веществ зависит от работы определенных органов или даже систем органов. Другими словами, биохимический состав крови отражает работу конкретных органов и систем органов. Например, уровень глюкозы может указать на функциональное состояние поджелудочной железы, печени, гипофиза, надпочечников, жировой ткани и др. Уровень белка крови на состояние печени, почек, желудочно-кишечного тракта и др. Уровень билирубина, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатаз указывает на функциональные.

Решила сделать общий пост сданных анализов, может кому пригодится или может кто-то захочет что-то еще посоветовать). Цветом выделены анализы, где были выявлены «отклонения».

Посмотрите пожалуйста, полный ли этот список? Может кому-то, что-то еще назначали? Хочу все проверить, прежде чем принимать решение, что делать дальше. Особенно интересуют анализы, чтобы исключить невынашивание!! Вот список. То, что вычеркнуто, я сдала уже.

Постаралась собрать в один пост все, что нашла про обследования после зб. У меня, к сожалению, уже третья зб, НО серьезно искать причину я настроилась только сейчас (после первой все врачи говорили «первый раз такое часто бывает», после второй — я полностью доверилась врачу по невынашиванию, при этом сама особо не вникала в анализы и назначения. За это, видимо, и поплатилась третьим разом. Поэтому, если кому-то будет полезен этот совет — надо сразу не полагаться на врачей полностью, а разбираться.

Девочки смотрите какyю информацию я нашла про дополнительные обследования , может комy пригодится. Много текста: Дополнительные анализы после неудачных попыток в ЭКО Перечень дополнительных анализов: 1. Проверяемся на АФС — антифосфолипидный синдром (развернутый анализ): а.) АТ к кардиолипину IgG, IgM б.) АТ к бета2-гликопротеину IgG, IgM в.) АТ к протромбину IgG,IgM, IgA г.) АТ к фосфатидилсерину IgG,IgM д.) АТ к фосфатидилинозитолу IgG,IgM е.) АТ к фосфатидиловой кислоте IgG,IgM ж.) АТ к аннексину IgG,IgM АФС — системное аутоиммунное заболевание, характеризующееся состоянием.

Собрала информацию, делюсь… Женщине: Гормональное обследование. (ЛГ, ФСГ, пролактин, эстрадиол, прогестерон, тестостерон, 17-ОН прогестерон, ДЭА — сульфат, SHBG транспортный белок, белок, связывающий половые гормоны (SHBG, ГПСГ), АСАТ, андростендион, андростандиол-глюкуронид) Исследование количественного содержания гормонов крови. Гормоны контролируют основные процессы жизнедеятельности организма на всех этапах его развития с момента зарождения. С помощью анализа на гормоны можно посмотреть функциональное состояние гипофиза, щитовидной железы, молчных желез, надпочечников, яичников, выявить заболевания у плода во время беременности, выяснить характер бесплодия, нарушенния менструального цикла. Анализы на инфекции.

Всех приветствую. Главный пост тут. ЦЕЛИАКИЯ По-гречески koiliakos — кишечный, страдающий расстройством кишечника; синоним: болезнь Ги — Гертера — Гейбнера, кишечный инфантилизм, целиакическое спру, идиопатическая стеаторея, глютеновая энтеропатия. Это заболевание желудочно-кишечного тракта, характеризующиеся нарушением процессов всасывания в кишечнике в результате непереносимости белка клейковины злаковых (глиадина) и приводящее к истощению. Также целиакию называют «Великим мимом», который подражает множеству заболеваний. Глютен имеет большое значение в хлебопекарной промышленности, его содержание в муке является фактором, определяющим такие характеристики теста, как эластичность и упругость при.

Девочки, для тех,кто хочет знать больше, кто хочет узнать истину женских проблем, физиологические нормы и многое другое. Продолжение следует. Автор: Вихляева Е.М. Руководство по эндокринной гинекологии Список сокращений АВР- активированное время рекальцификации аГнРГ- агонисты гонадотропин-рилизинг гормона АТС- адреногенитальный синдром АД- артериальное давление АКТГ- адренокортикотропный гормон АР- андрогеновые рецепторы АЧТВ- активированное частичное тромбопластиновое время БАТ- биологически активные точки ВНАСГ- врожденные нарушения анатомического строения гениталий ВВПО- воспаление внутренних половых органов Г- гестринон ГАМК- у-аминомасляная кислота ГЛ- гонадолиберин ГнРГ- гонадотропин-рилизинг гормон ГР- глюкокортикоидные рецепторы.

Существует такие причины выкидышей: Инфекции Анатомические отклонения от нормы Низкий уровень прогестерона Хромосомные нарушения Иммунные механизмы Подробнее о некоторых из них: Иммунная система состоит из белых кровяных телец, лейкоцитов, которые создают различные антитела. Некоторые из них защищают нас, а некоторые наносят вред. Для репродуктивной системы важны: 1. Антифосфолипидные тела 2. Антинуклеарные антитела 3. Антитероидные антитела 4. Природные клетки-киллеры и Цитотоксические (смертельные для живых клеток) В-клетки 5. Блокирующие антитела 1. Антифосфолипидные антитела (АФС). Молекулы фосфолипида — компоненты клеточной мембраны. Они имеют.

Девочки смотрите какyю информацию я нашла про дополнительные обследования , может комy пригодится. У какой-то доброй девочки скопировала. какая Она молодец . Информация полезная. прям для меня. Много текста: Перечень дополнительных анализов: 1. Проверяемся на АФС — антифосфолипидный синдром (развернутый анализ): а.) АТ к кардиолипину IgG, IgM б.) АТ к бета2-гликопротеину IgG, IgM в.) АТ к протромбину IgG,IgM, IgA г.) АТ к фосфатидилсерину IgG,IgM д.) АТ к фосфатидилинозитолу IgG,IgM е.) АТ к фосфатидиловой кислоте IgG,IgM ж.) АТ к аннексину IgG,IgM.

Мне 26. Мужу 30. Проблем по гинекологии до беременностей не было.

источник